近年来，饲料原料被霉菌毒素污染的现象较为普遍，对养殖业的经济效益带来了巨大损失^[1]。作为饼粕类饲料原料，花生粕含有蛋白质、维生素、矿物质(如磷、铁、钙)等营养素，蛋白质含量高(约50％)、适口性好，但是氨基酸含量不平衡、黄曲霉毒素B₁(aflatoxin B₁，AFB₁)污染严重影响了其在饲料中的大量使用^[2]。AFB₁的毒性较强，1993年被世界卫生组织(WTO)列为一级致癌物质。AFB₁具有强烈的肝毒性和致癌性，对家禽消化机能和免疫系统产生不良影响，导致免疫力、繁殖能力、饲料转化率降低、实质器官损伤、生长受阻等，而肉仔鸡是敏感动物之一^{[3, 4, 5]}。当前对霉菌毒素防控的措施主要有天然吸附和生物降解2种方法，其中天然吸附成本较低^[6]。蒙脱石属于天然硅铝酸盐类，具有较大的比表面积和吸附力，对霉菌毒素有较好的吸附力；改性铝硅酸盐矿物的选择性吸附力更好、脱毒效果更好^[7]。目前许多试验都是采用试剂级的霉菌毒素纯品作为试验材料，研究不同类型蒙脱石对霉菌毒素的吸附作用及其对家禽的影响，而以生产中普遍存在的自然霉变原料为材料的研究较少。因此，本试验以自然霉变的花生粕为AFB₁来源，研究天然和改性蒙脱石的吸附效果，评价其对肉仔鸡生长性能和免疫机能的影响。

天然和改性蒙脱石产品均为市售产品，编号分别为SDNZ和SDAD。经过X射线衍射(XRD)检测，2种蒙脱石的理化性质如表 1所示。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 蒙脱石的理化性质 Table 1 Physical and chemical properties of montmorillonite 项目 Items 蒙脱石含量 Montmorillonite content/% 吸蓝量 Ethylene blue adsorbed/% pH 层间距 Spacing of layers/nm SDNZ 89.5 40.3 7.49 1.01 SDAD 91.0 43.9 9.37 1.51

表1 蒙脱石的理化性质 Table 1 Physical and chemical properties of montmorillonite

AFB₁源自霉变花生粕(含AFB₁ 1 284.21 μg/kg)，正对照组、负对照组、天然和改性蒙脱石组前期、后期饲粮中AFB₁含量分别为0.57、112.51、110.92和113.62 μg/kg，0.60、154.04、153.86和155.50 μg/kg。AFB₁含量采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测。我国《饲料卫生标准》(GB 13078—2001)规定，肉仔鸡饲粮中AFB₁含量前期≤10.0 μg/kg、后期≤20.0 μg/kg。

参照《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004)配制玉米-豆粕型饲粮(表 2)，冷压制粒，其中正对照组饲粮为玉米-豆粕型，负对照组和试验组饲粮用自然霉变的花生粕替代部分豆粕。

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 2 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis) % 项目 Items 1~21日龄 1 to 21 days of age 22~42日龄 22 to 42 days of age 对照组 Control group 试验组 Experimental group 对照组 Control group 试验组 Experimental group 原料 Ingredients 玉米 Corn 55.200 54.550 59.188 60.912 豆粕 Soybean meal 36.992 29.200 31.900 19.800 自然霉变花生粕 Naturally mouldy peanut meal 8.800 12.000 豆油 Soybean oil 3.705 3.050 5.150 3.100 磷酸氢钙 CaHPO4 1.955 1.965 1.698 1.715 石粉 Limestone 1.190 1.220 1.095 1.160 食盐 NaCl 0.350 0.350 0.350 0.350 DL-蛋氨酸 DL-Met 0.268 0.288 0.248 0.272 L-赖氨酸盐酸盐 L-Lys·HCl 0.020 0.192 0.034 0.273 苏氨酸 Thr 0.065 0.017 0.098 维生素预混料 Vitamin premix1) 0.020 0.020 0.020 0.020 矿物质预混料 Mineral premix2) 0.200 0.200 0.200 0.200 氯化胆碱 Choline chloride 0.100 0.100 0.100 0.100 合计 Total 100.000 100.000 100.000 100.000 营养水平 Nutrient levels3) 代谢能 ME/(MJ/kg) 12.56 12.56 13.19 13.19 粗蛋白质 CP 22.00 22.00 20.00 20.00 钙 Ca 1.00 1.00 0.90 0.90 总磷 TP 0.70 0.70 0.64 有效磷 AP 0.45 0.45 0.40 0.40 赖氨酸 Lys 1.15 1.15 1.05 1.05 蛋氨酸 Met 0.62 0.63 0.50 0.51 蛋氨酸+半胱氨酸 Met+Cys 0.91 0.91 0.76 0.76 苏氨酸 Thr 0.81 0.81 0.72 0.72 色氨酸 Try 0.24 0.24 0.21 0.21 1)维生素预混料为每千克饲粮提供 Vitamin premix provided the following per kg of diets: VA 12 500 IU，VD3 2 500 IU, VE 15 IU, VK3 2.65 mg, VB1 2 mg, VB2 6 mg, VB12 0.025 mg, 生物素 biotin 0.35 mg, 叶酸 folic acid 1.25 mg，泛酸钙 calcium pantothenate 12 mg, 烟酸 niacin 50 mg。 2)矿物质预混料为每千克饲粮提供 Mineral premix provided the following per kg of diets: Cu (as copper sulfate) 8 mg, Zn (as zinc sulfate) 75 mg, Fe (as ferrous sulfate) 80 mg, Mn (as manganese sulfate) 80 mg, I (as potassium iodide) 0.35 mg, Se (as sodium selenite) 0.15 mg. 3)营养水平均为计算值。Nutrient levels were all calculated values.

表2 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 2 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis)

试验选用288只1日龄爱拔益加(AA)肉仔鸡健康公雏，随机分为4组，每组6个重复，每个重复12只鸡。鉴于生产中花生粕易被黄曲霉毒素污染的现状，寻找完全不含AFB₁的花生粕原料不易实现，本试验设计正对照组为玉米-豆粕型基础饲粮，负对照组饲粮用自然霉变的花生粕替代部分豆粕，前期、后期饲粮分别含花生粕8.8%和12.0%；2个试验组饲粮为负对照组饲粮中分别添加2.0 g/kg的天然或改性蒙脱石。试验期42 d。

肉鸡饲养在同一鸡舍内，采用3层笼养，24 h光照，自由饮水、常规免疫，每天2次饲喂。

分别于1、21和42日龄早晨空腹称重。前1天22：00禁食，自由饮水，于次日08：00以重复为单位称重，统计各重复试验鸡1~21日龄和22~42日龄耗料量，计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。

分别于21和42日龄，每重复选取1只体重接近该重复平均值的肉仔鸡，翅静脉采血，屠宰，分离胸肌和腿肌并称重，计算全净膛率、胸肌率、腿肌率和腹脂率。计算公式如下：

分别于21和42日龄，每重复选取1只体重接近该重复平均值的肉仔鸡，屠宰，摘取胸腺、脾脏和法氏囊，称重并计算各器官指数。计算公式如下：

分别于21和42日龄，每重复选取1只体重接近该重复平均值的肉仔鸡，翅静脉采血，抗凝管存放，3 000 r/min离心10 min，取上清液分装，-20 ℃保存。血浆总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)和球蛋白(GLB)含量采用全自动生化分析仪测定，试剂盒购自上海科华生物工程股份有限公司。

数据经Excel前处理后，采用SPSS 19.0进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，用Duncan氏法进行多重比较，以P＜0.05为差异显著水平，结果以平均值±标准差表示。

由表 3可知，1~21日龄：与正对照组相比，霉变花生粕显著降低了肉仔鸡体重、ADG和ADFI(P＜0.05)，负对照组和天然蒙脱石组F/G显著提高(P＜0.05)；与负对照组相比，饲粮中添加蒙脱石使得肉仔鸡体重显著提高(P＜0.05)，改性蒙脱石组ADG显著提高(P＜0.05)，F/G呈降低趋势，其中改性蒙脱石组F/G显著降低(P＜0.05)；与天然蒙脱石组相比，改性蒙脱石组ADG显著提高(P＜0.05)，其他指标差异不显著(P＞0.05)。

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 肉仔鸡生长性能 Table 3 Growth performance of broilers 项目 Items 正对照组 Positive control group 负对照组 Negative control group 天然蒙脱石组 Natural montmorillonite group 改性蒙脱石组 Modified montmorillonite group 1~21日龄 1 to 21 days of age 体重 BW/g 851.67±24.87a 750.44±27.12c 810.00±28.03b 829.93±16.88ab 平均日增重 ADG/g 38.28±2.73a 34.04±2.86b 35.68±2.22b 37.96±1.01a 平均日采食量 ADFI/g 53.44±1.55a 49.77±1.29b 50.73±1.53b 51.46±1.47b 料重比 F/G 1.32±0.06c 1.47±0.09a 1.43±0.05ab 1.37±0.08b 22~42日龄 22 to 42 days of age 体重 BW/g 2 576.29±50.73a 2 433.92±81.98b 2 523.67±74.57a 2 537.56±84.81a 平均日增重 ADG/g 106.17±1.37a 96.95±1.70c 101.64±1.45b 104.27±1.69a 平均日采食量 ADFI/g 184.20±2.55a 177.74±2.93b 181.79±2.29a 182.83±2.92a 料重比 F/G 1.81±0.02b 1.85±0.01a 1.84±0.01a 1.82±0.02b 1~42日龄 1 to 42 days of age 平均日增重 ADG/g 62.36±1.93a 57.20±1.73c 59.04±1.87b 61.12±1.81ab 平均日采食量 ADFI/g 103.58±1.27a 97.06±1.27c 101.15±1.72b 103.09±1.65ab 料重比 F/G 1.65±0.02c 1.72±0.02a 1.69±0.02b 1.68±0.02b 同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)，相同或无字母表示差异不显著(P＞0.05)。下表同。 In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

表3 肉仔鸡生长性能 Table 3 Growth performance of broilers

22~42日龄：与正对照组相比，负对照组肉仔鸡体重、ADG和ADFI均显著降低(P＜0.05)，F/G显著提高(P＜0.05)；与负对照组相比，天然和改性 蒙脱石组体重、ADG和ADFI均显著提高(P＜0.05)，改性蒙脱石组F/G显著降低(P＜0.05)；与天然蒙脱石组相比，改性蒙脱石组ADG显著提高(P＜0.05)，F/G显著降低(P＜0.05)。

1~42日龄：与正对照组相比，霉变花生粕显著降低了肉仔鸡ADG和ADFI(P＜0.05)，使F/G显著升高(P＜0.05)；与负对照组相比，天然和改性蒙脱石组ADG和ADFI均显著提高(P＜0.05)，F/G显著降低(P＜0.05)；改性蒙脱石组与天然蒙脱石组相比，各指标无显著差异(P＞0.05)。

由表 4可知，各组肉仔鸡21日龄胴体组成无显著差异(P＞0.05)。42日龄，与正对照组相比，霉变花生粕显著降低了肉仔鸡的胸肌率和腿肌率(P＜0.05)，对全净膛率和腹脂率无显著影响(P＞0.05)；与负对照组相比，天然和改性蒙脱石组的胸肌率和腿肌率显著提高(P＜0.05)；2种蒙脱石组之间各指标无显著差异(P＞0.05)。

表4

Table 4

表4(Table 4)

表4 肉仔鸡胴体组成 Table 4 Carcass composition of broilers % 项目 Items 正对照组 Positive control group 负对照组 Negative control group 天然蒙脱石组 Natural montmorillonite group 改性蒙脱石组 Modified montmorillonite group 21日龄 21 days of age 全净膛率 Dressing percentage 70.78±1.38 67.59±1.64 68.52±1.46 69.62±2.78 胸肌率 Breast muscle percentage 24.44±0.66 23.80±0.81 24.01±1.15 24.33±0.64 腿肌率 Leg muscle percentage 12.77±0.73 12.11±0.46 12.54±0.38 12.43±0.76 腹脂率 Abdominal fat percentage 0.81±0.08 0.70±0.07 0.77±0.06 0.78±0.07 42日龄 42 days of age 全净膛率 Dressing percentage 72.06±1.64 70.77±1.69 71.50±1.01 71.90±0.92 胸肌率 Breast muscle percentage 28.18±1.35a 18.87±1.64b 26.43±3.04a 28.06±1.11a 腿肌率 Leg muscle percentage 21.57±0.64a 16.09±0.54c 20.27±0.95b 20.77±1.24ab 腹脂率 Abdominal fat percentage 1.89±0.05 1.85±0.09 1.78±0.09 1.71±0.06

表4 肉仔鸡胴体组成 Table 4 Carcass composition of broilers

由表 5可知，21日龄，与正对照组相比，霉变花生粕显著提高了肉仔鸡的胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数(P＜0.05)；与负对照组相比，天然和改性蒙脱石组胸腺指数和法氏囊指数显著降低(P＜0.05)，改性蒙脱石组脾脏指数显著降低(P＜0.05)；与天然蒙脱石组相比，改性蒙脱石组胸腺指数显著降低(P＜0.05)，脾脏指数和法氏囊指数无显著差异(P＞0.05)。

表5

Table 5

表5(Table 5)

表5 肉仔鸡免疫器官指数 Table 5 Immune organ indices of broilers % 项目 Items 正对照组 Positive control group 负对照组 Negative control group 天然蒙脱石组 Natural montmorillonite group 改性蒙脱石组 Modified montmorillonite group 21日龄 21 days of age 胸腺指数 Thymus index 1.40±0.07d 2.37±0.04a 2.21±0.05b 1.75±0.01c 脾脏指数 Spleen index 0.58±0.04c 0.71±0.03a 0.66±0.08ab 0.62±0.03bc 法氏囊指数 Bursa of Fabricius index 1.07±0.08b 1.30±0.07a 1.13±0.06b 1.15±0.04b 42日龄 42 days of age 胸腺指数 Thymus index 0.94±0.14d 2.87±0.13a 1.71±0.22b 1.45±0.23c 脾脏指数 Spleen index 1.64±0.04c 1.88±0.07a 1.74±0.05b 1.68±0.06c 法氏囊指数 Bursa of Fabricius index 0.58±0.01c 0.85±0.04a 0.69±0.06b 0.66±0.08b

表5 肉仔鸡免疫器官指数 Table 5 Immune organ indices of broilers

42日龄，与正对照组相比，负对照组肉仔鸡的胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数显著提高(P＜0.05)；与负对照组相比，天然和改性蒙脱石组胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数均显著降低(P＜0.05)；与天然蒙脱石组相比，改性蒙脱石组的胸腺指数和脾脏指数显著降低(P＜0.05)，法氏囊指数无显著差异(P＞0.05)。

由表 6可知，21日龄，负对照组肉仔鸡血浆TP、ALB和GLB含量显著低于其他各组(P＜0.05)；与负对照组相比，天然蒙脱石组血浆ALB和GLB含量显著升高(P＜0.05)，TP含量无显著差异(P＞0.05)，改性蒙脱石组血浆TP、ALB和GLB含量显著升高(P＜0.05)；与天然蒙脱石组相比，改性蒙脱石组血浆TP和ALB含量显著提高(P＜0.05)，GLB含量无显著差异(P＞0.05)。

表6

Table 6

表6(Table 6)

表6 肉仔鸡血浆蛋白含量 Table 6 Plasma protein contents of broilers mg/mL 项目 Items 正对照组 Positive control group 负对照组 Negative control group 天然蒙脱石组 Natural montmorillonite group 改性蒙脱石组 Modified montmorillonite group 21日龄 21 days of age 总蛋白 TP 30.79±1.48a 27.13±1.12b 28.65±1.31b 30.42±2.07a 白蛋白 ALB 15.76±0.44a 13.32±0.70c 14.30±0.48b 15.31±0.44a 球蛋白 GLB 15.37±0.32a 13.64±0.45c 14.37±0.23b 14.83±0.32b 42日龄 42 days of age 总蛋白 TP 41.66±0.84a 37.16±0.86d 38.57±0.50c 39.98±0.55b 白蛋白 ALB 19.49±0.73a 14.97±0.80d 16.35±0.43c 17.36±0.60b 球蛋白 GLB 23.74±0.74a 20.87±0.76c 22.22±0.64b 21.68±0.70bc

表6 肉仔鸡血浆蛋白含量 Table 6 Plasma protein contents of broilers

42日龄，与正对照组相比，霉变花生粕显著降低了肉仔鸡血浆TP、ALB和GLB含量(P＜0.05)；与负对照组相比，天然蒙脱石组血浆TP和ALB含量显著升高(P＜0.05)，GLB含量无显著差异(P＞0.05)，改性蒙脱石组血浆TP、ALB和GLB含量显著升高(P＜0.05)；与天然蒙脱石组相比，改性蒙脱石组血浆TP和ALB含量显著提高(P＜0.05)，GLB含量无显著差异(P＞0.05)。

霉变花生粕能够降低家禽的采食量、日增重和饲料转化率。100 μg/kg AFB₁可使黄羽肉鸡ADG降低5.09%，F/G升高4.42%，ADFI下降0.85%^[8]；100.0和150.0 μg/kg AFB₁可降低体重，极显著降低ADG和ADFI，提高F/G^[9]；用霉变稻米(含AFB₁)饲喂，肉鸭ADG和ADFI显著降低，F/G显著提高^[10]；自然霉变玉米能显著降低肉鸭体重、ADG和ADFI，提高F/G，增加死亡率^[11]。本试验用霉变花生粕替代豆粕，肉仔鸡ADG和ADFI显著降低、F/G显著提高，与上述研 究结果一致。可见，自然霉变的原料与添加AFB₁均能影响肉仔鸡生长性能。因为霉菌毒素之间有协同效应，一般认为，自然霉变饲料的中毒症状比添加单一毒素的毒性效应更大^[12]。

免疫器官指数是评价家禽免疫力的重要指标。本研究表明，霉变花生粕对肉仔鸡免疫功能的影响，体现为胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数增大。何健等^[13]报道，分别用0、50%和100%的霉变玉米替代正常玉米，随着替代比例的增加，肉鸭14和35日龄脾脏指数和法氏囊指数显著提高。用8%的霉变棉籽粕替代正常的棉籽粕，肉鸭35日龄胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数显著提高^[14]。

本研究表明，霉变花生粕降低了肉鸡血浆中TP、ALB和GLB的含量。AFB₁污染的饲粮同样能使肉鸭血清蛋白(TP、ALB和GLB)含量显著降低^[15]；霉变玉米显著降低14和35日龄肉鸭血清TP、ALB和GLB含量^[16]；2 500 μg/kg黄曲霉毒素(含83.06%AFB₁)可显著减少肉仔鸡血清TP和ALB含量^[17]。家禽采食受AFB₁污染的饲粮，脾脏指数、胸腺指数和法氏囊指数升高，血浆蛋白(TP、ALB和GLB)含量降低，这可能是AFB₁使肉仔鸡胸腺、脾脏和法氏囊等免疫器官受损伤，导致机体免疫球蛋白合成降低；也可能是黄曲霉毒素与核酸结合，抑制了蛋白质的合成，从而引起肉仔鸡免疫器官发育不完全，抑制机体免疫因子的产生，最终影响了家禽的免疫功能。

用蒙脱石来降低黄曲霉毒素给家禽养殖带来的危害在生产中已得到应用。蒙脱石是一种硅铝酸盐类，因具有不饱和负电荷及阳离子交换能力，可以捕获、吸附和固定毒素，降低肠道对毒素的吸收，降低毒害作用^[18]。在被AFB₁污染的饲粮中添加3.0 g/kg的钠基改性蒙脱石，能显著缓解黄曲霉毒素对肉仔鸡生长性能、免疫器官指数以及血清生化指标的影响^[19]；在被黄曲霉毒素污染的饲粮中添加5.0 g/kg的蒙脱石，可使肉仔鸡的死亡率降低37.5%、体增重提高28.8%^[20]；在霉变的饲粮中添加2.0 g/kg的蒙脱石，显著提高了肉鸭ADG、ADFI及血浆蛋白含量，显著抑制免疫器官指数的升高^[14]；在被3 000 μg/kg AFB₁污染的饲粮中分别添加2.5和5.0 g/kg钙基蒙脱石，肉仔鸡42日龄体重分别增加了13.3%和22.7%、ADFI分别增加了9.7%和24.7%、饲料转化率提高了53.0%和66.5%^[21]；在被2 500 μg/kg AFB₁污染的饲粮中添加膨润土，能缓解由AFB₁对肉仔鸡生长性能和血浆ALB的负面影响^[17]。本研究表明，2.0 g/kg的天然或改性蒙脱石均可有效缓解饲量中霉变花生粕对肉仔鸡造成的生长抑制和免疫器官肿大现象，该结果与前人的研究相一致。

蒙脱石边面中的Si-OH和Al-OH作为氢键供氢体，AFB₁分子结构中的2个羰基作为氢键受氢体，两者在空间上可能存在互补关系，因而可以形成双氢键，使蒙脱石能对AFB₁产生选择性吸附。有研究认为，天然和改性蒙脱石对AFB₁的吸附量无明显的差别，但是由于蒙脱石经改性处理后，部分改性剂分子带正电荷的一端可吸附在蒙脱石外表面或进入蒙脱石层间，羟基端留在蒙脱石边缘，增加了蒙脱石边缘氢键供氢体，增加了它们之间形成双氢键机会，加固了AFB₁的吸附稳定性，使得AFB₁解析率降低^{[22, 23]}。在雄性肉仔鸡饲粮中分别添加1.5 g/kg蒙脱石和载铜蒙脱石，发现添加载铜蒙脱石能够增加肉仔鸡的ADG，降低肠道大肠杆菌的数量，而单独添加天然蒙脱石则效果不明显^[24]；还有研究表明，改性蒙脱石对玉米赤霉烯酮的吸附率达到92.44%、解吸率5.31%，说明改性蒙脱石对玉米赤霉烯酮具有较高的吸附脱毒率，吸附玉米赤霉烯酮后所形成的复合物稳定性较好^[25]。本研究表明，2.0 g/kg的天然和改性蒙脱石，都可有效缓解霉变花生粕对肉仔鸡生长性能和免疫指标的影响，且改性蒙脱石的效果优于天然蒙脱石。

霉变花生粕显著降低了肉仔鸡生长性能和免疫功能，添加蒙脱石可有效缓解AFB₁对肉仔鸡的不利影响，而且改性蒙脱石对AFB₁的吸附效果要优于天然蒙脱石。