2. 新疆伊犁哈萨克自治州昭苏县 畜牧兽医局, 昭苏 835600;
3. 伊犁哈萨克自治州昭苏马场, 昭苏 835500
2. Animal Husbandry and Veterinary Bureau of Zhaosu County, Yili Kazak Autonomous, Zhaosu 835600, China;
3. Yili Kazak Autonomous Prefecture of Zhaosu Racecourse, Zhaosu 835500, China
钙(calcium,Ca)和磷(phosphorus,P)是机体重要的常量矿物元素,在维持机体正常生命活动和健康过程中发挥着重要的作用。妊娠后期和泌乳期是机体对钙、磷需要量最大的生理阶段。奶牛缺乏钙、磷可引起机体代谢紊乱,导致奶牛出现产后瘫痪等营养性疾病,同时可使乳脂率下降、饲料利用率降低等[1]。研究发现,奶牛在分娩后0~2 h和8~35 h内补饲2次钙丸可明显提高产奶量[2]。泌乳早期奶牛的干物质采食量和产奶量在饲粮磷水平为0.40%~0.42%时达到最大值,且不会随着饲粮磷水平的增加而增加[3]。饲粮磷水平对奶牛乳成分的影响还没有统一的结论,有研究发现增加饲粮磷水平可增加乳蛋白率和乳脂率,而另一些研究却得出了相悖的结果[4]。饲粮钙、磷水平对泌乳期伊犁马的产奶量和乳成分有何影响还不清楚。此外,有研究发现,当人每天补充1 250 mg钙8周后,血液中总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和载脂蛋白B的含量显著降低[5];学龄前儿童每日摄入的钙越多体脂含量越低[6]。由此可见,饲粮中的钙具有调节机体脂类代谢的作用。饲粮钙、磷水平是否影响马乳脂中脂肪酸的组成还未见报道。鉴于此,本研究拟探讨不同钙、磷水平饲粮对泌乳期伊犁马产奶量、乳成分、乳脂脂肪酸组成及马驹生长发育、血浆生理生化指标的影响,为进一步研究伊犁马钙、磷营养提供参考。
1 材料与方法 1.1 试验动物与饲粮选取无亲缘关系、年龄在11~14周岁、体重为(371±21) kg的处于第2月泌乳月末的伊犁马25匹,根据母马体重和马驹体重随机分为5个组,每组5匹马。试验为期90 d,其中预试期12 d,每个泌乳月最后12 d为采样期。每30 d为1个试验周期。参照NRC(2007)[7]标准,按照成熟体重为400 kg泌乳马的标准配制5种不同钙、磷水平的饲粮。根据泌乳母马的营养需要特点,第3泌乳月精料饲喂量为2 700 g/d,从第4泌乳月开始,粗饲料饲喂量保持不变,精料饲喂量减少500 g/d左右至第5泌乳月结束,以控制母马营养摄入水平。泌乳期母马饲粮组成及营养水平见表 1,马驹补充精料采用靳伟星等[8]报道的配方配制。
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表 1 泌乳期母马饲粮组成及营养水平(饲喂基础) Table 1 Composition and nutrient levels of diets for mares during lactation period (as-fed basis) |
试验母马采取分栏单独饲养,每天饲喂精料2次,即在11:30和20:00各饲喂1/2。将苜蓿干草和小麦秸秆等量混合,采用混合机混合30 min以制备饲粮粗饲料。粗饲料每天饲喂4次,即在09:30、13:30和18:00各饲喂3.00 kg,02:00饲喂5.00 kg。试验期间自由饮水。马驹在母马预试期期间自由摄取母乳,自由饮水和活动,每天每匹马驹分别在10:00和18:00时采用料兜补饲0.30 kg精料。
1.3 样品采集 1.3.1 母马乳样的采集在试验期挤奶时,马驹栓系隔离以避免马驹摄取母乳。每日饲喂后1.5 h开始,每隔2 h由技术熟练的固定人员通过手工挤奶1次,每次挤尽为止。每天挤奶4次,每次以电子天平记录挤奶量。每个挤奶周期为连续采样2 d后停止2 d,共3个挤奶周期。每次所挤马乳经2层纱布过滤去除杂质后,准确取50 mL放入-20 ℃冰箱冷冻保存。同一匹马3个挤奶周期的不同取样时间点所取样本混合为1个样品用于测定乳成分和乳脂脂肪酸组成。母马日产奶量根据靳伟星等[8]的方法计算。
1.3.2 马驹血样的采集在每期试验结束后的第2天晨饲前将马匹固定,采用肝素钠抗凝真空采血管从颈静脉采集空腹血液10 mL,上下颠倒数次,于3 500 r/min离心10 min分离血浆,并置-20 ℃冷冻保存待测。
1.4 测定指标 1.4.1 乳成分的测定取50 mL乳样,充分摇匀后采用Foss 4000乳 成分测定仪测定乳蛋白率、乳脂率、乳总固形物含量和乳糖率;采用Foss 5000体细胞计数仪测定体细胞数。
1.4.2 乳脂脂肪酸组成的测定利用配置有SP2560(100 m×0.25 mm×0.20 μm)色谱柱的气相色谱仪采用面积归一法测定马乳乳脂中各脂肪酸组分的相对百分含量。
粗脂肪的提取:取1 mL马乳,加入2 mL正己烷/异丙醇(体积比为3∶2),剧烈振荡2 min,加入1 mL 66.70 g/L的Na2SO4溶液,剧烈振荡2 min后于3 000 r/min离心10 min。
皂化与酯化:向上述正己烷相中加入1 mL 2%的NaOH甲醇溶液,于50 ℃皂化15 min,冷却后加入1 mL 10%的HCl甲醇溶液,于80 ℃酯化1 h。
分析试液的制备:待上述反应液冷却后加入去离子水3 mL、正己烷3 mL,振荡混匀后,静置20 min,取上清液以正己烷定容至10 mL,加入约0.5 g无水Na2SO4振荡30 s,静置10~20 min,取1 mL用于分析。
气相色谱的分析条件:进样口温度250 ℃,柱流量1.5 mL/min,进样量1.0 μL,分流比10∶1;柱箱温度100 ℃,保留5 min,以6 ℃升温至150 ℃后再以2 ℃升温至240 ℃,并保留8 min;氢火焰离子化检测器(FID)温度260 ℃,尾吹流量20 mL/min,空气流量400 mL/min,氢气流量30 mL/min。
1.4.3 马驹体重和体尺指标的测定分别在试验前(2月龄末)、3月龄末、4月龄末和5月龄末测定马驹的体重、体长、体高、胸围和管围[9]。
1.4.4 马驹血浆生理生化指标的测定血浆中钙含量采用甲基香酚蓝比色法于610 nm处测定,血浆中磷含量采用钼蓝比色法于340 nm处测定,血浆中甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)、降钙素(calcitonin,CT)、骨钙素(bone gla protein,BGP)等钙离子(Ca2+)代谢相关激素的含量均采用放射免疫法测定。指标测定所用所试剂盒均由北京华英生物技术研究所提供。
1.5 数据处理与统计分析数据采用Excel 2010进行整理。采用SPSS 18.0统计软件中的多因素单响应变量方差分析进行统计分析,数据模型为Xij=μ+αi+βj+αi×βj+εij,其中Xij为观察值,μ为总体均值,αi(i=1,2,3,4,5)为饲粮效应,βj(j=1,2,3)为母马泌乳月份(或马驹月龄)效应,αi×βj为饲粮与母马泌乳月份(或马驹月龄)的互作效应,εij为误差。当因素水平达到显著后采用Duncan氏法对组间进行多重比较。数据均以平均值±标准差(X±SD)表示,差异显著水平为P≤0.05,有差异显著趋势为0.05<P≤0.10。
2 结果与分析 2.1 不同钙、磷水平饲粮对泌乳期伊犁马产奶量及 乳成分的影响由表 2可知,不同钙、磷水平饲粮对母马泌乳期每次平均挤奶量、估计日产奶量和乳中钙含量均有显著影响(P<0.05),对乳脂率、乳蛋白率、乳糖率和乳总固形物含量均无显著影响(P>0.05),饲粮与母马泌乳月份对上述各指标均无显著的互作效应(P>0.05)。Ⅲ组每次平均挤奶量最高,分别比Ⅰ和Ⅳ组提高了20.65%(P<0.05)和15.22%(P<0.05);估计日产奶量与每次平均挤奶量变化规律相同。随着饲粮钙、磷水平的增加,乳中钙含量并未呈现线性增加,相反,Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组乳中钙含量显著低于Ⅰ组(P<0.05),分别降低15.38%、21.54%和16.92%。乳中磷含量有随着饲粮磷水平的增加而增加的趋势(P<0.10)。泌乳月份对乳中各成分有显著影响(P<0.05)。随着泌乳月份的增加,每次平均挤奶量、估计日产奶量、乳中体细胞数、乳中钙和磷含量均有不同程度降低,而乳成分中其他指标随泌乳月份的增加则有不同程度增加。
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表 2 不同钙、磷水平饲粮对泌乳期伊犁马产奶量及乳成分的影响 Table 2 Effects of different levels of calcium and phosphorus diets on milk yield and milk composition of Yili mares during lactation period |
由表 3可知,在马乳乳脂中共检测出27种脂肪酸,其中癸酸(C10∶0)、月桂酸(C12∶0)、肉豆蔻酸(C14∶0)、棕榈油酸(C16∶1)和α-亚麻酸(C18∶3n3)5种脂肪酸含量超过5%;棕榈酸(C16∶0)、油酸(C18∶1n9c)和亚油酸(C18∶2n6c)3种脂肪酸含量超过10%。不同钙、磷水平饲粮对乳脂中肉豆蔻脑酸(C14∶1)、棕榈油酸、亚油酸、花生酸(C20∶0)、顺-11-二十碳烯酸(C20∶1)和α-亚麻酸含量均有显著影响(P<0.05),而对丁酸(C4∶0)等21种脂肪酸含量均无显著影响(P>0.05)。随着饲粮钙、磷水平的增加,乳脂中肉豆蔻脑酸和棕榈油酸含量逐渐降低并在Ⅲ组达到最低值,之后再逐渐升高。饲粮Ⅰ组乳中亚油酸的含量显著高于其他各组(P<0.05),而花生酸和顺-11-二十碳烯酸含量显著低于其他各组(P<0.05)。Ⅴ组乳脂中α-亚麻酸的含量显著低于Ⅰ 和Ⅲ组(P<0.05)。随着饲粮钙、磷水平的增加,乳脂中饱和脂肪酸含量增加,而不饱和脂肪酸含量降低;Ⅲ组乳脂中单不饱和脂肪酸含量和Ⅴ组乳脂中多不饱和脂肪酸含量显著低于其他各组(P<0.05)。从泌乳月份来看,随着泌乳月份的增加,乳脂中丁酸、癸酸、十一烷酸(C11∶0)、月桂酸、十三烷酸(C13∶0)、顺-8,11,14-二十碳三烯酸(C20∶3n6)和二十四烷酸(C24∶0)的含量均不同程度下降,肉豆蔻酸、肉豆蔻脑酸、十五烷酸(C15∶0)和棕榈酸的含量则呈现先降低后升高的现象,而油酸和α-亚麻酸的含量则有先升高再降低的变化规律。乳脂中亚油酸含量则随着泌乳月份的增加不断增加,顺-11-二十碳烯酸含量也以第3泌乳月最低。饲粮和泌乳月份对乳脂中亚油酸、顺-11,14-二十碳二烯酸(C20∶2)、二十四烷酸和神经酸(C24∶1)的含量均有显著的互作效应(P<0.05)。
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表 3 不同钙、磷水平饲粮对泌乳期伊犁马乳脂脂肪酸组成的影响 Table 3 Effects of different levels of calcium and phosphorus diets on fatty acid composition in milk fat of Yili mares during lactation period |
由表 4可知,母马饲喂不同钙、磷水平饲粮对马驹体重、体长、体高和管围均无显著影响(P> 0.05),而除Ⅲ组外增加饲粮钙、磷水平显著降低 胸围(P<0.05)。随着月龄的增加,马驹各生长发育指标均显著增加(P<0.05)。饲粮与马驹月龄对马驹各生长发育指标均无显著的互作效应(P>0.05)。
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表 4 伊犁马泌乳期饲喂不同钙、磷水平饲粮对马驹生长发育的影响 Table 4 Effects of Yili mares fed different levels of calcium and phosphorus diets during lactation period on growth and development of foals |
由表 5可知,母马饲喂不同钙、磷水平饲粮对马驹血浆钙、磷、PTH和BGP含量均无显著影响(P>0.05),对血浆CT含量有显著影响(P<0.05),Ⅰ组马驹血浆CT含量分别较Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组增加34.24%、24.89%和23.64%(P<0.05)。月龄对马驹各血浆生理生化指标均有显著影响(P<0.05),其中血浆钙、磷、CT和BGP含量随月龄的增加均呈现先升高再降低的变化规律,在4月龄时最高;而血浆PTH含量则随月龄的增加先降低后升高,在4月龄时最低。此外,饲粮与马驹月龄对血浆钙、PTH和CT含量有显著的互作效应(P<0.05)。
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表 5 伊犁马泌乳期饲喂不同钙、磷水平饲粮对马驹血浆生理生化指标的影响 Table 5 Effects of Yili mares fed different levels of calcium and phosphorus diets during lactation period on plasma physiological-biochemical indices of foals |
家畜产奶量及乳成分受品种、遗传、生理、饲养管理、饲粮和环境等因素的影响,在遗传、生理和环境因素相同的条件下,饲养管理或饲粮对产奶量、乳成分起着主导作用[10-11]。钙和磷广泛分布于骨骼、肌肉和牙齿中。钙与神经传导、细胞通透性、酶活性和血液凝固等生理过程有关;磷则在骨骼形成、生物能量和微生物消化等过程中起重要作用。家畜在分娩后通过饲粮、机体骨钙和肾小球对钙的重吸收来维持血钙和乳钙的恒定。当钙源不足时,会导致血钙降低而影响产奶量[2]。给处于泌乳高峰期的奶牛连续3 d补充8.5 g/d离子钙,产奶量可提高1.6 kg/d,并明显延长奶牛产奶高峰期[12]。给产奶量高于平均水平105%的奶牛在分娩后0~2 h和8~35 h内补饲2次钙丸,产奶量增加7.2%~7.7%[2]。Lopez等[13]报道,给荷斯坦奶牛饲喂含磷为0.37%或0.57%饲粮并观察165 d,结果发现饲粮磷水平对产奶量、乳脂率及乳蛋白率等乳成分均无显著影响。赵恒聚等[14]也发现,给奶牛饲喂磷水平为0.32%、0.44%和0.56%的饲粮对奶牛的产奶量无显著影响。这表明,额外添加钙有助于提高奶牛的产奶量,而磷的作用并不明显。饲粮钙、磷水平对马的产奶量及乳成分有何影响还未见报道。研究发现,母马在分娩前3天和分娩后2天之间时,血液中PTH含量升高而总钙和离子钙含量下降,因此在马泌乳期间有必要提高钙的供应水平[7]。成熟体重为400~500 kg的母马处于第2泌乳月时,钙、磷的需要量分别为47.1~58.9 g/d和30.5~38.1 g/d[7]。在本研究中,处于第2泌乳月的伊犁马钙、磷饲喂水平分别为45.0~58.9 g/d和30.0~38.0 g/d,结果发现饲粮钙、磷水平分别为51.96和34.01 g/d时产奶量最高,进一步增加饲粮钙、磷水平对产奶量并无益处。生理阶段是影响马产奶量的另一个重要因素。与奶牛泌乳期不同,马的泌乳期约为180 d;而新疆伊犁马马驹通常在5月龄时断奶,马驹断奶后母马的产奶量急剧下降并进入干奶期。姚新奎[15]的研究表明,随着泌乳期的延长,新吉马产奶量先高后低,产驹后30 d时产奶量最高,为19.13 kg/d,110 d时为14.05 kg/d,其后急剧下降,150 d时为10.51 kg/d;伊犁马在泌乳前110 d相对平稳,产驹后60 d时产奶量最高,为12.78 kg/d,110 d时为10.75 kg/d,到140 d时仅为7.51 kg/d;而卢西塔诺(Lusitano)马在产后第31天达到泌乳高峰,为14.0 kg/d,之后开始逐渐下降,到180 d时产奶量下降到7.57 kg/d[11]。在本研究中,伊犁马第3泌乳月末的估计产奶量为10.99 kg/d,之后不断下降,到第5泌乳月末时为8.54 kg/d。由此可见,适宜的饲粮钙、磷水平有增加产奶量的作用,但随着泌乳期的延长,产奶量逐步下降;泌乳阶段不同,马的产奶性能也存在明显差异。
有关饲粮钙、磷水平对马乳成分影响的报道较少,崔政安[16]的研究表明不同钙、磷水平饲粮对泌乳水牛的乳成分影响不显著,这与本研究的结果相似。张巧娥等[17]对产奶量与乳成分进行回归分析表明,产奶量与乳脂率、体细胞数和干物质含量呈显著的负相关。对马的研究则表明产奶量与乳脂率存在极强的正相关关系,与乳蛋白率无相关关系,与乳总固形物含量存在极强的负相关关系[15]。但在本研究中并未发现产奶量与乳成分间存在显著的相关关系,这可能与试验时间仅局限于第3至第5泌乳月有关。
3.2 不同钙、磷水平饲粮对泌乳期伊犁马乳脂脂肪酸组成的影响饲粮中Ca2+对脂肪的消化和代谢具有重要影响。Ca2+可在消化道与脂类形成皂钙而影响脂类的吸收;同时Ca2+还可与胆酸结合,增加胆酸的排泄并减少胆固醇的形成[5]。在大鼠中的研究表明,饲粮中高水平的Ca2+可使体脂分解增加5.2倍[18]。究其原因是由于低Ca2+饲粮导致Ca2+代谢相关激素[PTH和1,25-(OH)2-维生素D]合成增加,使Ca2+向细胞流入,导致脂肪细胞内Ca2+含量升高,提高脂肪酸合成酶的表达和活性,进而增加脂类贮存;而高Ca2+饲粮抑制细胞对Ca2+代谢相关激素的反应。增加膳食Ca2+水平会通过降低细胞内Ca2+含量,增加脂解并减少甘油三酯的累积[19]。有关饲粮钙水平对马乳脂率有何影响还未见报道。在本研究中,不同饲粮组间乳脂率并无显著变化,这可能与机体在短期内维持乳成分相对稳定的机制有关。从第3泌乳月到第5泌乳月,饲粮钙水平逐渐降低,而乳脂率则持续增加。这一现象可能与产奶量降低和低Ca2+引发脂质合成增加有关。饲粮钙、磷水平对乳脂脂肪酸组成有何影响还未见报道。在本研究中,不同钙、磷水平饲粮对乳脂中肉豆蔻脑酸、棕榈油酸、亚油酸、花生酸、顺-11-二十碳烯酸、α-亚麻酸以及饱和脂肪酸、不饱和脂肪的含量均有显著影响。这是否是由于饲粮Ca2+改变机体脂质代谢的结果还不清楚,有待进一步研究。
3.3 伊犁马泌乳期饲喂不同钙、磷水平饲粮对马驹生长发育和血浆生理生化指标的影响体重和体尺是反映动物生长发育的重要指标,马驹一般在6月龄时断奶,从出生到6月龄是马驹一生中生长发育最快的阶段,体重和体尺占生后总生长量的50%以上[9]。当给处于泌乳后期的伊犁母马饲喂粗蛋白质和消化能水平较高的饲粮后可明显提高马驹体长发育速度,母马产奶量增加可能是提高马驹生长发育的重要原因[20]。在本试验中,各组马驹补饲的精料相同,补饲量也相同,因此,马驹的生长发育与母马的产奶量有关。虽然各组间母马的产奶量存在显著差异,但各组马驹除胸围外,其他生长发育指标均无显著差异。这可能与样本量较小有关。研究发现,关中母驴在胎儿期和生后期生长发育都很快,其中胸围的生长强度比体高、管围大[21]。这表明,胸围的生长更易受摄入营养水平的影响。
血清中钙、磷代谢受PTH、CT和1,25-(OH)2-维生素D三者共同调节,以维持相对恒定的水平。当膳食中Ca2+水平降低时,机体增加PTH和1,25-(OH)2-维生素D的释放而减少CT的释放[19]。在本研究中,各组马驹血浆中钙和磷含量虽然无显著差异,但Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组母马其乳中钙含量显著低于Ⅰ组母马,致使马驹从母乳中获得的钙偏低,这可能是导致Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组马驹血浆中CT含量显著低于Ⅰ组的原因。
4 结 论增加饲粮钙、磷水平可提高伊犁马的产奶量,但使乳中钙含量降低;饲粮钙、磷水平不影响乳成分,但增加乳脂中饱和脂肪酸的含量,减少不饱和脂肪酸的含量;由于乳中钙含量降低,导致马驹胸围发育较慢,血浆CT含量下降。
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侯文通, 卢文龙. 关中驴生长发育的初步研究[J]. 畜牧兽医杂志, 1983 (1) :26 –33.
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