2. 湖南天心黄鸡育种有限公司, 长沙 410143
2. Hunan Tanxin Breeding of Yellow Broilers Limited Liability Company, Changsha 410143, China
霉菌毒素是霉菌生长繁殖过程中产生的次级代谢产物，具有很强的毒性，不仅影响动物生产性能，还会危害人类健康。商品饲料及其原料很容易受到霉菌毒素污染，联合国粮农组织调查表明，全世界每年大约有25%的谷物不同程度上受到霉菌毒素污染[1]，其对畜牧业、饲料加工企业的危害越来越受到人们重视，霉菌毒素不仅影响畜禽的生产性能，还会危害其机体抗氧化及免疫功能。当前，在饲料中添加霉菌毒素吸附剂是全球控制霉菌毒素污染采取的主要措施之一，天然硅铝酸盐(HSCAS)是常见的一类吸附剂，其对黄曲霉毒素(aflatoxin，AF)、玉米赤霉烯酮(zearalenone，ZEN)具有很好的吸附作用。Phillips等[2]试验表明，饲粮中添加0.5%的HSCAS能够减轻黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1，AFB1)对来航鸡和肉仔鸡的毒害作用；Afriyie-Gyawu等[3]研究发现，蒙脱黏土和锂蒙脱石均可以有效吸附霉变饲料中的ZEN，但此类吸附剂对呕吐毒素(deoxynivalenol, DON)、T-2毒素等吸附能力不强。许多研究人员对HSCAS类吸附剂进行改性，并探讨了改性后其对畜禽生产性能的影响。马玉龙等[4]的研究表明，纳米载铜蒙脱石可显著提高肉鸡的平均日增重(average daily gain，ADG)，降低料重比(feed to gain，F/G)；杨荣芳等[5]研究表明, 纳米载铜蒙脱石可显著提高仔猪平均日采食量(average daily feed intake，ADFI)，增加肥育猪ADG，显著降低猪各生产阶段的F/G；史明雷等[6]的研究表明，载铜硅酸盐纳米微粒(copper-loaded silicate nanoparticles，CSN)有降低肉鸡F/G的趋势；而夏明亮等[7]研究指出，添加0.5%的铜改性蒙脱石后肉鸡F/G升高。可见，有关改性后HSCAS对畜禽生产影响的研究结果并不一致，有待进一步探讨。目前，HSCAS类吸附剂在猪、肉鸡和奶牛上的应用研究较多，而在产蛋鸡及蛋用禽生产中的应用研究还很少，且尚未有关于其对畜禽产品中微量元素含量影响的研究报道。本试验在产蛋鸡饲粮中添加2种改性HSCAS类吸附剂，探讨其对产蛋鸡生产性能、蛋黄中微量元素含量、血清抗氧化和生化指标的影响，为霉菌毒素吸附剂的进一步研究及其在蛋用禽生产中的应用提供参考。
1 材料与方法 1.1 试验材料试验所用2种霉菌毒素吸附剂分别为命名为CZ和SF，均为市售产品。CZ主要成分为钙质蒙脱石，SF主要成分为钠质蒙脱石。
1.2 试验设计与饲养管理试验于2015年6月12日至2015年7月26日在湖南天心黄鸡育种有限公司进行，选取216只38周龄、体重相近、健康和采食正常的罗曼蛋鸡，随机分成3个组，每组6个重复，每个重复12只。对照组饲喂基础饲粮，试验组(CZ组、SF组)分别在基础饲粮中添加0.5 g/kg的CZ和SF。预试期各组统一饲喂基础饲粮，每天对鸡群进行观察，并及时调整鸡群，使各组产蛋鸡的饲料消耗量、产蛋率和蛋重差异不显著(P＞0.05)。预试期10 d，正试期35 d。基础饲粮组成及营养水平见表 1。
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表 1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) |
试验产蛋鸡采用上、中、下3层阶梯式笼养，每笼3只，每4笼1个重复，每日喂料2次(09:00、15:00)，收蛋2次(11:30、16:30)。各组饲养管理条件相同，鸡舍温度为26~32 ℃，相对湿度为75%~85%，自由采食、饮水，每日光照时间为16 h，自然光照和人工光照相结合，每日清扫鸡舍1次、每周对鸡舍带鸡喷雾消毒1次。
1.3 测定指标与方法 1.3.1 饲粮中霉菌毒素含量的检测试验第1天和第35天分别检测了饲粮中常见霉菌毒素的含量(表 2)。其中，第1天饲粮中DON含量超标(限量标准为1 000 μg/kg)。采用高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)，使用液相层析串联质谱仪(Agilent G6410 Ttiple Quad LC/MS)测定饲粮中AF、ZEN、DON、T-2毒素、伏马菌素(fumonisin，FB)和赭曲霉毒素(ochratoxin，OT)含量。饲粮中霉菌毒素含量的检测步骤为：样品萃取、萃液过滤、毒素纯化、定量分析。AF、ZEN、DON、T-2毒素、FB和OT的最低检测限分别为1.0、4.5、4.5、2.0、3.5、1.0 μg/kg。
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表 2 饲粮中霉菌毒素含量实测值 Table 2 The measured values of mycotoxin content in diets |
正式饲养期内，每日记录各组(以重复为单位)日采食量、产蛋数、蛋重、软破壳蛋数及存活鸡数，并计算统计试验期内的平均日采食量、产蛋率、平均蛋重、料蛋比、日产蛋量及死淘率。
1.3.3 蛋黄中微量元素含量试验第14天和第35天，分别从每组选取12个鸡蛋置于4 ℃冰箱保存，参照GB/T 5009.90—2003、GB/T 9695.20—2008、张星海等[8]火焰原子吸收光谱法测定蛋黄中铁(Fe)、锌(Zn)、铜(Cu)、镁(Mg)、锰(Mn)含量。蛋黄预处理采用湿消化法：取1.0~1.5 g均匀蛋黄样于锥形瓶，加入15 mL混酸(HNO3∶HClO4=9∶1，体积比)，盖上培养皿，消化过夜。第2天将锥形瓶至于加热板加热消化至溶液澄清、透明，体积约为2 mL，取下冷却。消化过程中如果酸过少要补加混酸，防止碳化。加5 mL浓盐酸，过滤，定容至100 mL容量瓶。在测定微量元素含量前，按照火焰原子吸收仪器(SP-AA3800)操作先进行标准液配制和操作，用于绘制标准曲线。测Mn、Mg含量时加入1~2 mL 10%的氯化锶溶液以消除干扰。
1.3.4 血清抗氧化和生化指标试验第14天和第35天，分别从每个重复随机选取2只产蛋鸡静脉采血5 mL，倾斜采血管，静置30 min后，于3 000 r/min离心10 min，吸取上清液1.0~1.5 mL，注入1.5 mL离心管中，标记组别日期，置于-20 ℃冰箱保存，用于测定血清抗氧化和生化指标。血清中的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性及总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量使用南京建成生物工程研究所的试剂盒测定。采用迈瑞BS-200全自动生化分析仪、迈瑞生物公司生产的配套试剂盒进行血清生化指标检测，检测第35天产蛋鸡血清中碱性磷酸酶(ALP)活性和甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、葡萄糖(Glu)、尿酸(UA)、钙(Ca)、磷(P)、Fe含量。
1.4 数据统计与分析应用SAS 9.2软件进行单因素方差分析，然后通过Duncan氏法进行多重比较。试验结果采用“平均值±标准差(mean±SD)”表示，用P<0.05表示差异显著，0.05<P<0.10表示有提高或降低趋势。
2 结 果 2.1 霉菌毒素吸附剂对产蛋鸡生产性能的影响由表 3可知，饲粮中添加霉菌毒素吸附剂对产蛋鸡平均蛋重、料蛋比、ADFI和死淘率均无显著影响(P>0.05)。与对照组相比，试验3~5周，CZ组产蛋率提高了10.21%(P<0.05)，日产蛋量提高了11.43%(P<0.05)，料蛋比有降低的趋势，但差异不显著(P=0.079)；SF组产蛋率提高了4.05%(P>0.05)；试验1~5周，CZ组产蛋率提高了7.37%(P>0.05)，日产蛋量有提高的趋势，但差异不显著(P=0.097)。
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表 3 霉菌毒素吸附剂对产蛋鸡生产性能的影响 Table 3 Effects of mycotoxin adsorbents on performance of laying hens |
由表 4可知，试验第14天，与对照组相比，CZ组蛋黄Zn含量提高了24.07%(P<0.05)，蛋黄Mn含量有提高的趋势，但差异不显著(P=0.093)，蛋黄Mg含量降低了33.50%(P<0.05)，蛋黄Mg含量较SF组降低了28.00%(P<0.05)；SF组蛋黄Zn含量提高了8.04%(P>0.05)，蛋黄Fe含量降低了9.44%(P<0.05)。
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表 4 霉菌毒素吸附剂对产蛋鸡蛋黄中微量元素含量的影响(湿重) Table 4 Effects of mycotoxin adsorbents on yolk trace elements content of laying hens (wet weight) |
试验第35天，与对照组相比，SF组蛋黄Zn含量降低了21.17%(P<0.05)，较CZ组降低了21.13%(P<0.05)；蛋黄Fe、Cu、Mg、Mn含量均无 显著差异(P>0.05)。
2.3 霉菌毒素吸附剂对产蛋鸡血清抗氧化指标的影响由表 5可知，与对照组相比，试验第14天，CZ组和SF组产蛋鸡血清T-AOC分别提高了100.00%(P<0.05)、84.04%(P<0.05)，血清GSH-Px活性分别提高了13.03%(P>0.05)、8.37%(P>0.05)。
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表 5 霉菌毒素吸附剂对产蛋鸡血清抗氧化性的影响 Table 5 Effects of mycotoxin adsorbents on serum antioxidant indices of laying hens |
试验第35天，与对照组相比，CZ组和SF组产蛋鸡血清T-AOC分别提高了39.06%(P>0.05)、47.92%(P>0.05)，SF组血清T-SOD活性提高了64.01%(P<0.05)。
2.4 霉菌毒素吸附剂对产蛋鸡血清生化指标的影响由表 6可知，与对照组相比，CZ组血清ALP活性、Glu含量分别降低了45.07%(P<0.05)、18.21%(P<0.05)，血清Ca、Fe含量分别提高了17.71%(P>0.05)、35.29%(P>0.05)；SF组血清 TC含量降低了27.78%(P<0.05)，相对于CZ组降低了28.06%(P<0.05)；CZ组和SF组血清UA含量分别降低了22.56%、26.25%，均差异不显著(P>0.05)，血清TG、P含量无显著差异(P>0.05)。
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表 6 霉菌毒素吸附剂对产蛋鸡血清生化指标的影响 Table 6 Effects of mycotoxin adsorbents on serum biochemical indices of laying hens |
目前，关于HSCAS类吸附剂对家禽影响的研究，大部分的结论表明其能提高家禽的生产性能。史明雷等[6]的研究表明，CSN具有降低黄羽肉鸡1~50日龄F/G的趋势；Incharoen等[9]报道，天然沸石能促进肉仔鸡肠道发育的完整性，提高饲料报酬。但也有研究报道，添加0.2%、0.5%的季铵盐改性蒙脱石对肉鸡F/G无影响；添加0.5%的铜改性蒙脱石F/G升高[8]。可见，HSCAS类吸附剂的不同改性处理，其对畜禽生产性能的影响不一致。CSN孔径和比表面积大且容易分散，对阳离子有极强的吸附力[10]，能够杀灭肠道有害菌，有利于养分吸收[6]；锌离子(Zn2+)有抑菌、杀菌作用，载锌纳米蒙脱石不仅具有吸附和离子交换作用，还具备层间抑菌、杀菌功能，能促进养分消化和吸收[11]。李俊营等[11]的研究表明，饲粮中添加1.5 g/kg的载锌纳米蒙脱石，产蛋鸡产蛋率提高了8.54%，料蛋比降低了2.19%。Berto等[12]报道，天然沸石有提高产蛋鸡ADFI和饲料转化率的趋势。张军民等[13]研究表明，饲粮中添加0.2%的HSCAS，产蛋鸡产蛋率显著提高11.22%。本试验也得出，饲粮中添加钙质蒙脱石产蛋鸡产蛋率显著提高了10.21%，日产蛋量显著提高了11.43%，料蛋比有降低趋势，与以上研究结论基本一致。HSCAS类吸附剂含有多种矿物元素，在畜禽体内被吸收利用，促进机体代谢；且具有较大的比表面积和吸附能力，使饲料在消化道内的停留时间延长，提高机体合成代谢及蛋白质等养分的吸收率[14]；此外，也能吸附畜禽肠道内有害物质，改善机体消化道内微生态环境及机能[2]。综上所述，饲粮中添加霉菌毒素吸附剂一定程度上可减轻霉菌毒素对畜禽生产性能的负面影响，提高生产效益。
3.2 霉菌毒素吸附剂对产蛋鸡蛋黄中微量元素含量的影响目前，有关霉菌毒素吸附剂对禽蛋中微量元素含量影响的研究非常少。本研究表明，2种HSCAS类吸附剂对蛋鸡蛋黄中Cu、Mn的含量无显著影响；钙质蒙脱石组(CZ组)第14天蛋黄Zn含量显著提高；钠质蒙脱石组(SF组)第14天蛋黄Fe含量显著降低，第35天蛋黄Zn含量显著降低。造成以上结果差异的原因可能是2种吸附剂的物理特性不同，因钠离子(Na+)的水合性很高，相比钙质蒙脱石，钠质蒙脱石与水接触后更容易被水膨胀，吸水膨胀过程中可能会吸去部分养分，此外，膨胀后蒙脱石的吸附效果可能也会受到影响，综合本试验的结果也可以得出，钙质蒙脱石的脱毒效果更好。吸附剂在吸附饲料中霉菌毒素的同时还可能吸附矿物质、维生素等营养成分，进而降低饲料利用率[14-19]；但作者认为，吸附剂也可能吸附肠道中病原微生物，改善肠道环境，有利于饲料营养成分的吸收，或许也能促进矿物质、维生素等在畜禽产品中沉积。本试验结果提示，吸附剂可提高鸡蛋蛋黄中部分微量元素的含量，但还有待进一步研究或延长试验期来验证。今后，需要开展吸附剂对畜禽矿物元素、维生素等代谢影响的研究，探讨其对畜禽产品中营养成分的影响，对科学评价吸附剂的脱毒效果以及进一步开展研究具有重要意义。
3.3 霉菌毒素吸附剂对产蛋鸡血清抗氧化指标的影响氧化损害是霉菌毒素危害动物健康的毒性机理之一。GSH-Px、SOD和MDA是反映机体抗氧化能力的重要指标。Abel等[20]指出，AFB1能够诱导细胞产生自由基，对机体造成氧化损害；Kouadio等[21]报道，ZEN和DON会阻断鞘磷脂代谢，使细胞产生大量MDA，引起脂质过氧化。许多研究人员探讨了吸附剂缓解霉菌毒素对动物机体造成氧化损害的效果，吕明斌等[22]的研究表明，霉变玉米中添加1 g/kg的HSCAS类吸附剂降低了肉鸡血清中GSH-Px活性，而添加2 g/kg的HSCAS其活性提高；Jiang等[23]和蔡娟等[24]分别报道，酵母细胞壁、蒙脱石可提高肉仔鸡、产蛋鸡血清中SOD活性；张瑞星等[25]报道，饲粮中添加复合型毒素吸附剂可提高肉鸡血清中SOD活性和T-AOC，显著降低MDA含量。本研究发现，饲粮中添加0.5 g/kg的2种HSCAS类吸附剂产蛋鸡血清中GSH-Px、T-SOD活性和T-AOC均得到提高，其中第14天，各试验组血清T-AOC显著提高，第35天血清T-SOD活性显著提高；同时也发现试验组产蛋鸡血清中MDA含量略有降低，本试验结果与以上研究人员的结论基本一致。由此可见，吸附剂能够提高产蛋鸡血清抗氧化酶活性，降低自由基含量，扭转霉菌毒素造成的氧化损害。
3.4 霉菌毒素吸附剂对产蛋鸡血清生化指标的影响ALP是反映机体肝脏功能好坏的重要指标，温子瑜等[26]报道，HSCAS与酵母细胞壁的混合物可以降低肉鸭血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶和ALP活性，一定程度上缓解毒素对肉鸭肝脏的毒害作用；本试验中各试验组血清ALP活性均有降低，其中CZ组较对照组显著降低了45.07%。血脂主要包括胆固醇和TG，血清TC和TG含量反映了机体脂质代谢水平，本试验中CZ组产蛋鸡血清TG和TC含量略有提高，与张勇等[14]的研究结论基本一致；而SF组血清TC、TG含量均降低，可能是其含有的干酵母细胞等成分促进了肠道蠕动，改善肠道环境，进而促进脂肪的新陈代谢，减少脂肪积存。由此可见，不同吸附剂因其成分不同对产蛋鸡脂类代谢的影响也不一致。
UA是禽类氨基酸氨基排泄的主要形式，能够反映体内蛋白质代谢情况，本试验中各试验组产蛋鸡血清UA含量均有降低，与付双喜等[27]的报道一致，说明吸附剂可以减少含氮物质的排出，提高饲粮粗蛋白质的利用率。Glu是反映体内能量代谢的重要指标，本试验中各试验组血清Glu含量较对照组均有降低，CZ组显著降低了18.21%，血清生化指标为禁食12 h后采集测定，表明霉菌毒素吸附剂降低了产蛋鸡空腹时血清Glu含量，提示其可能影响机体糖类代谢；另外，畜禽应激时会使体内储存的糖原分解，大大提高血清Glu的含量，表明霉菌毒素吸附剂可能增强机体的抗应激能力。产蛋鸡对Ca等矿物元素需求较大，除用于调节正常的机体代谢外，还是形成蛋壳的主要原料，蛋壳形成过程中若饲粮中的Ca不能满足时，将动用部分血清Ca作为补充；本试验中各试验组血清Ca、Fe含量较对照组均有提高，CZ组血清Ca、Fe含量分别提高了17.71%、35.29%。HSCAS类吸附剂含有多种矿物元素，也能改善肠道环境，一定程度上提高了Ca、Fe等的利用率，提高了血清Ca、Fe含量，有益于机体矿物质代谢。
4 结 论① 饲粮中添加0.5 g/kg CZ可提高罗曼蛋鸡产蛋性能，有降低F/G的趋势；饲粮中添加0.5 g/kg SF对产蛋鸡生产性能无显著影响。
② CZ有促进鸡蛋蛋黄中Zn、Mn沉积的可能，而SF可能会减少蛋黄中Fe、Zn的沉积。
③ 2种吸附剂均能一定程度上增强机体的抗氧化功能，提高机体代谢水平。
④ 综合来看，吸附剂CZ减轻霉菌毒素对产蛋鸡造成负面影响的效果更好。
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付双喜, 冯定远, 苗朝华, 等. 霉菌毒素吸附剂对肉鸡血液生化指标的影响[J]. 中国家禽, 2005 , 27 (11) :30 –31.
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