2. 莆田市优利可农牧发展有限公司, 莆田 351100
2. Putian Youlike Agriculture and Animal Husbandry Developing Co., Ltd., Putian 351100, China
断奶仔猪由于受到断奶应激，往往表现出食欲差、生长速度缓慢、饲料利用率低和腹泻等症状，而在仔猪饲粮中添加中药多糖可以有效提高仔猪的生长性能[1]和免疫功能[2]，降低腹泻率[3-4]。太子参(Radix pseudostellariae)为石竹科植物孩儿参[Pseudostellaria heterophylla (Miq.) Pax ex Pax et Hoffm]的干燥块根，太子参多糖具有抗应激和增强免疫等功效[5]。太子参主要分布在华东、华中、华北和西北等地，福建、山东、江苏和安徽等省有种植[6]，尤以福建省柘荣县种植的太子参质量好且数量多，其太子参产量占全国的60%以上，年产太子参4 900多t[7]，但多数太子参茎叶被遗弃或焚烧，造成极大的浪费和污染。有报道认为，太子参茎叶饲喂仔猪可以提高仔猪的抗应激能力和抗氧化功能[8]；研究也表明，太子参茎叶中的多糖含量可达5%~10%[9]；但太子参茎叶多糖在断奶仔猪中的应用鲜见报道。本研究在断奶仔猪基础饲粮中添加太子参茎叶多糖，通过检测试验猪的生长性能和血清抗氧化指标、免疫指标及生化指标，探讨太子参茎叶多糖对断奶仔猪的保健作用及可能的作用机理，为其在断奶仔猪中的应用提供科学依据，同时亦为太子参茎叶的进一步深入开发提供数据借鉴。
1 材料与方法 1.1 试验材料太子参茎叶多糖为粉末状，购于陕西藤迈生物科技有限公司，以葡萄糖为标准品，苯酚-硫酸法[10]测得多糖含量为70%。
1.2 主要仪器RT-9900半自动生化分析仪(深圳雷杜生命科学有限公司)；VIS-7200型可见分光光度计(上海美普达仪器有限公司)；OLYMPUS AU2700型全自动化学免疫分析仪(OLYMPUS公司)：Sk-1快速混匀器(金坛市科析仪器有限公司)；HH-2数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)。
1.3 试验动物与试验设计选取胎次、体重相近的25日龄断奶仔猪120头，随机分成4个组，分别为：对照组，饲喂基础饲粮；Ⅰ组，饲喂基础饲粮+500 mg/kg太子参茎叶多糖；Ⅱ组，饲喂基础饲粮+1 000 mg/kg太子参茎叶多糖；Ⅲ组，饲喂基础饲粮+1 500 mg/kg太子参茎叶多糖。每组3个重复，每个重复10头猪。试验期间所有仔猪自由采食干粉料，自由饮水，预试期饲喂基础饲粮，按照猪场常规管理程序进行驱虫与免疫防疫。试验预试期5 d，正试期30 d。基础饲粮组成及营养水平见表 1。
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表 1 基础饲粮组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (DM basis) |
试验结束时，每个重复随机选取3头体重接近平均体重的仔猪，前腔静脉采血4~5 mL，3 000 r/min离心10 min，收集血清，Eppendorf管分装，-20 ℃保存，待测。
1.5 测定指标及方法 1.5.1 生长性能试验仔猪在试验开始和结束时分别逐只空腹称重，用于计算平均日增重(ADG)；试验期间记录各组试验仔猪的日采食量，用于计算各组的平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。试验期间每天观察仔猪的精神状态、排粪情况，记录腹泻仔猪数，用于计算试验仔猪的腹泻率，计算公式：
腹泻率(% )＝100×[(每天腹泻头数×腹泻天数)/(试验仔猪头数×试验天数)]。
1.5.2 血清抗氧化指标血清超氧化物歧化酶(SOD)活性采用黄嘌呤氧化酶法测定，丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸法测定，总抗氧化能力(T-AOC)采用Fe3+还原法测定，过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性采用比色法测定。指标测定所用试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，测定仪器为VIS-7200型可见光分光光度计，具体操作步骤按试剂盒说明书进行。
1.5.3 血清免疫指标血清免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、补体3(C3)和补体4(C4)含量均采用免疫比浊法测定，试剂盒均购自浙江伊利康生物技术有限公司，测定仪器为RT-9900半自动生化分析仪，具体操作步骤按试剂盒说明书进行。
1.5.4 血清生化指标血清甘油三酯(TG)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酐(CREA)、尿素氮(UN)含量和碱性磷酸酶(ALP)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性由福州市空军医院检验科协助检测，试剂盒均购自北京利德曼生化股份有限公司，测定仪器为OLYMPUS AU2700型全自动化学免疫分析仪。
1.6 数据统计分析试验数据用“平均值±标准差”表示，采用SPSS 17.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，LSD法进行多重比较，P＜0.05为差异显著，P＜0.01为差异极显著。
2 结 果 2.1 太子参茎叶多糖对断奶仔猪生长性能的影响由表 2可知，与对照组相比，Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组断奶仔猪的ADG分别升高了14.40%(P＜0.01)、18.54%(P＜0.01)和6.18%(P>0.05)；Ⅱ组的ADG显著高于III组(P＜0.05)。与对照组相比，Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组的腹泻率分别降低了58.89%(P＜0.01)、64.72%(P＜0.01)和55.97%(P＜0.01)；但Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组间的腹泻率差异不显著(P>0.05)。Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组的ADFI和F/G差异不显著(P>0.05)。
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表 2 太子参茎叶多糖对断奶仔猪生长性能的影响 Table 2 Effects of Radix pseudostellariae stem and leaf polysaccharide on growth performance of weaned piglets |
由表 3可知，与对照组相比，Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组断奶仔猪的血清SOD活性分别升高了9.41%(P>0.05)、18.68%(P＜0.01)和14.12%(P＜0.05)；但Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组的血清SOD活性差异不显著(P>0.05)。Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组的血清MDA含量、CAT和GSH-Px活性以及T-AOC差异不显著(P>0.05)。
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表 3 太子参茎叶多糖对断奶仔猪血清抗氧化指标的影响 Table 3 Effects of Radix pseudostellariae stem and leaf polysaccharide on serum antioxidant indexes of weaned piglets |
由表 4可知，与对照组相比，Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组断奶仔猪的血清IgA含量分别升高了41.92%(P＜0.01)、60.40%(P＜0.01)和58.04%(P＜0.01)；血清IgG含量分别升高了8.17%(P>0.05)、9.57%(P＜0.05)和10.55%(P＜0.05)；血清IgM含量分别升高了17.53%(P＜0.05)、19.36%(P＜0.05)和21.39%(P＜0.05)；血清C3含量分别升高了26.61%(P＜0.01)、38.89%(P＜0.01)和33.78%(P＜0.01)；血清C4含量分别升高了37.72%(P＜0.01)、53.96%(P＜0.01)和56.91%(P＜0.01)。Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组的血清免疫指标差异均不显著(P>0.05)。
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表 4 太子参茎叶多糖对断奶仔猪血清免疫指标的影响 Table 4 Effects of Radix pseudostellariae stem and leaf polysaccharide on serum immune indexes of weaned piglets |
由表 5可知，与对照组相比，Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组断奶仔猪的血清TG含量分别降低了22.06%(P＜0.01)、33.82%(P＜0.01)和30.88%(P＜0.01)；血清UN含量分别降低了18.21%(P＜0.05)、19.20%(P＜0.01)和22.84%(P＜0.01)；血清ALB含量分别升高了2.10%(P>0.05)、13.14%(P＜0.01)和11.07%(P＜0.01)。Ⅰ组血清ALB含量显著低于Ⅱ和Ⅲ组(P＜0.05)。Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组的血清TP、CREA含量及ALP、AST、ALT活性无显著差异(P>0.05)。
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表 5 太子参茎叶多糖对断奶仔猪血清生化指标的影响 Table 5 Effects of Radix pseudostellariae stem and leaf polysaccharide on serum biochemical indexes of weaned piglets |
仔猪饲粮中添加中药多糖能有效刺激胃肠道，促进消化腺酶的分泌和饲粮养分的吸收，提高仔猪的ADG，有利于仔猪的健康生长[11]。薛凌峰[4]研究表明，仔猪饲粮中添加香菇多糖能够增加采食量和ADG，改善仔猪的生长性能；杨侃侃等[3]研究表明，饲粮中添加适宜水平的刺五加多糖能够促进断奶仔猪对养分的消化，显著增加ADG，提高仔猪的生长性能。饲粮中添加中药多糖还可有效减少腹泻率，改善仔猪的生长性能[12]。彭慧珍[13]研究报道，饲粮中添加适宜的白术粗多糖能显著降低仔猪的腹泻率，使仔猪的生长性能得到改善；Zhao等[14]研究表明，仔猪饲粮中添加桑叶多糖能够促进肠道健康，有效降低仔猪的腹泻率，提高仔猪的生长性能。本试验结果显示，饲粮中添加太子参茎叶多糖能够升高仔猪的ADFI和ADG，显著降低仔猪的腹泻率，说明太子参茎叶 多糖与上述多糖有类似功能，能够促进养分的消化，提高仔猪的ADG，降低腹泻率，提高仔猪的生长性能。但太子参茎叶多糖的添加量与仔猪的生长性能并不呈剂量依赖关系，原因可能是太子参茎叶多糖味微苦，在饲粮中大剂量添加可能会使饲粮的适口性降低，导致仔猪的采食量下降。亦有文献报道[15]多糖添加剂量过大反而会造成断奶仔猪对营养物质的消化率降低，这可能是由于多糖能结合大量的水，导致消化道中食糜黏度增加，降低了饲粮营养物质与酶的相互作用，减缓了营养成分从饲粮中溶出的速度，使饲粮的利用率下降。
3.2 太子参茎叶多糖对断奶仔猪血清抗氧化指标的 影响机体在代谢过程中会产生自由基，自由基具有极强的氧化能力，使生物膜中的不饱和脂类发生过氧化，形成脂质过氧化物，其最终产物便是MDA[16]。因此MDA的含量可以反映体内的氧化作用，间接地反映细胞的损伤程度。动物体内存在一套完整的抗氧化系统，包括酶类和非酶类清除机制。酶类系统主要包括SOD、GSH-Px、CAT等。SOD是机体内重要的抗氧化酶之一，在清除自由基和防止生物分子损伤等方面具有十分重要的作用[17]。中药多糖通过作用于细胞特定抗体，活化抗氧化转录因子，激活抗氧化信号通路，上调抗氧化酶的表达，以中和过量的自由基来达到抗氧化的目的[18]。熟地黄多糖[19]、党参多糖[20]等均可提高仔猪机体抗氧化酶的活性，抑制脂质过氧化反应以增强抗氧化功能。本试验结果表明，饲粮中添加太子参茎叶多糖可提高断奶仔猪的血清SOD活性，降低MDA含量，提示太子参茎叶多糖可能与上述多糖有类似功能，通过提高仔猪机体的抗氧化酶活性来增强抗氧化功能，减轻自由基对机体的损伤。本试验中其他血清抗氧化指标如CAT、GSH-Px活性和T-AOC无显著变化，这可能是由于机体的抗氧化系统中存在着某种平衡调节机制，即SOD、CAT和GSH-Px活性以及T-AOC在某种状况下并非同时增加，而是一种机制激活时，另一种可能处于抑制状态[19]，具体抗氧化调节机理有待进一步深入研究。
3.3 太子参茎叶多糖对断奶仔猪血清免疫指标的影响血清免疫球蛋白是体液免疫系统的重要组成成分[21]。IgG有抗菌、抗病毒和抗毒素作用，它能中和毒素使其失去毒性；IgM是机体初次接触抗原物质产生的抗体，也有抗菌、抗病毒和中和毒素的功能；IgA对机体呼吸道、消化道等局部黏膜免疫起着“屏障”功能[22]，也是黏膜免疫的主要抗体[23]。中草药多糖可解除环磷酰胺对抗体形成的细胞抑制作用，增强B细胞的功能，对淋巴细胞有较强的活化作用，能提高机体免疫球蛋白含量[24]。研究报道，刺五加多糖[3]和朴菇多糖[25]等均可不同程度地提高仔猪血清免疫球蛋白的含量，增强机体的体液免疫功能。本试验结果显示，饲粮中添加太子参茎叶多糖可提高断奶仔猪的血清IgA、IgG和IgM含量，说明太子参茎叶多糖与上述多糖有类似功能，可能通过增加淋巴细胞数量，提高淋巴细胞转化率，增加免疫球蛋白含量，最终增强仔猪的体液免疫功能。活化的补体在宿主免疫中发挥着免疫调节及预防外来病原微生物入侵的作用[26-27]，C3、C4主要参与免疫和非免疫途径的激活作用，吸引吞噬细胞以及参与对异物的排斥反应。此外，补体还能加快免疫应答。本试验结果显示，饲粮中添加太子参茎叶多糖可极显著提高断奶仔猪的血清C3、C4含量，说明太子参茎叶多糖可以使仔猪免疫和非免疫途径的激活能力得到加强，增强仔猪机体的免疫功能。金线莲多糖[28]、芪苓制剂多糖[29]等中药多糖可极显著提高正常小鼠和免疫抑制小鼠的血清C3、C4含量，与本试验结果相一致。
3.4 太子参茎叶多糖对断奶仔猪血清生化指标的影响血清TG含量在一定程度上可以反映仔猪体内脂肪代谢状况，TG含量过高提示脂肪代谢障碍。本试验中，Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组断奶仔猪的血清TG含量极显著低于对照组，表明太子参茎叶多糖能够促进仔猪脂肪代谢，使更多的脂肪氧化，提供机体合成蛋白质所需的能量，促进仔猪的生长。血清TP和ALB含量直接反映了机体蛋白质的吸收、合成及分解状况，同时也反映了机体的免疫机能状态[30]。血清UN含量反映了氨基酸合成蛋白质效率的高低，UN含量的降低反映了动物蛋白质合成、代谢增强，反之，则减弱[30]。薛凌峰[4]报道，仔猪饲粮中添加香菇多糖有提高血清TP、ALB、球蛋白含量和降低血清UN含量的趋势。彭慧珍[13]报道，饲粮中添加白术粗多糖提高了血清TP和ALB含量，降低了血清UN含量，促进了仔猪蛋白质的合成。本试验结果显示，饲粮中添加太子参茎叶多糖可提高仔猪血清TP、ALB含量，降低UN含量，表明太子参茎叶多糖可以促进机体蛋白质的合成，从而促进仔猪的生长。
血液中的ALP主要来源于肝脏，当肝细胞变性、坏死，细胞膜破裂或通透性升高时，ALP流入血液中，使血清ALP活性升高，ALP活性可反映肝细胞变性、坏死程度[19]。ALT和AST是广泛存在于动物线粒体中的重要的氨基酸转氨酶，其活性的变化也是反映肝细胞和心脏细胞损伤的主要敏感指标[31]。CREA主要由肌肉代谢的肌酸产生，通过肾脏排泄到体外，是反映肾脏损伤的主要敏感指标[32]。本试验结果显示，饲粮中添加太子参茎叶多糖对断奶仔猪的血清AST、ALT和ALP活性及CREA含量均无显著影响，说明断奶仔猪饲粮中添加太子参茎叶多糖是安全的。
4 结 论饲粮中添加太子参茎叶多糖可有效提高断奶仔猪的ADG，降低腹泻率，提高免疫功能，改善机体的抗氧化性能和血清生化指标。在本试验条件下，太子参茎叶多糖在断奶仔猪饲粮中的适宜添加量为1 000 mg/kg。
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