当今的养殖中，高度的母猪选育提高了其繁殖性能，窝产仔数也随之提高，所以哺乳母猪的生产性能和泌乳量也必须不断提高才能满足仔猪的生长需求[1]。哺乳仔猪的主要营养以及早期的免疫防护均来源于母乳，因此通过母乳来调节早期仔猪的生长以达到最佳的生产性能显得尤为重要[2]。大豆异黄酮(soybean isoflavone，SI)，又称植物雌激素，是黄酮类化合物，是大豆生长中形成的一类次级代谢产物，是一种生物活性物质。黄芪多糖(Astragalus polysaccharide，APS)由己糖醛酸、葡萄糖、果糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸等组成，具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗应激、抗氧化等作用。SI和APS均为植物提取物，具有多种生物活性，不但可以提高动物机体免疫，还可提高其繁殖性能，促进动物乳腺发育，增加泌乳，同时具有无毒无残留的特点，作为新一代饲料添加剂符合安全生产的需要[3-4]。Britt等[5]研究表明，在饲粮中添加适宜水平的SI后，不仅可以增加雌鼠子宫、卵泡的重量，还升高了卵泡刺激素和促性腺激素的水平。黄玉章等[6]研究报道，在罗非鱼的基础饲粮中添加APS可提高其肠绒毛长度、肌层厚度和隐窝深度，肠道黏液细胞和上皮内淋巴细胞的数量均有所增加。有关SI与APS的单独研究已经很多，但二者同用的效果研究并没有报道。因此，本试验研究SI和APS联合应用于哺乳母猪，检测其是否能进一步改善哺乳母猪的整体生产性能，并以哺乳母猪生产性能、血清生化和免疫指标以及乳成分的变化为检测指标，以期为SI和APS在哺乳母猪的实际生产中应用提供理论依据。
1 材料与方法 1.1 试验材料SI：纯度为40.35%，化学物质登录号(CAS)为574-12-9，购自陕西浩洋生物科技有限公司。APS：纯度为55%，CAS为9005-38-3，购自陕西浩洋生物科技有限公司。哺乳母猪：“长×大”二元杂交母猪，由哈尔滨大东北牧业集团提供。酶联免疫试剂盒：总蛋白、白蛋白、尿素氮、葡萄糖、甘油三酯、免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、白细胞介素-2试剂盒均购自上海哈灵生物科技有限公司。
1.2 试验设计与饲养管理选用遗传背景相近、健康状况良好且相近、分娩日期接近的2胎“长×大”二元杂交母猪72头，随机分成4组，每组6个重复，每个重复3头母猪。对照组饲喂不添加SI和APS的基础饲粮，试验组在基础饲粮的上基础分别添加100、200和300 mg/kg的SI和APS混合物(SI : APS=1 : 5，依据SI和APS各自在母猪生产中的最适添加量配制)。试验猪均在同一个猪舍内进行饲养，4个组管理条件相同，哺乳母猪自由采食，充足饮水，正常免疫程序进行免疫接种，仔猪在带有保温箱的高床产房饲养。母猪分娩后开始饲喂相应饲粮，试验期为21 d，仔猪在21日龄时断奶。
1.3 试验饲粮饲粮配制符合2011年农业部公布的《猪饲养标准》，基础饲粮组成及营养水平见表 1。
1.4 检测指标 1.4.1 生产性能的测定从试验当天开始每天观察记录母猪的采食量，计算其平均日采食量；称量记录仔猪初生窝重，计算仔猪在第1、21天时的平均个体重，计算个体平均日增重；21 d泌乳总量：按仔猪每增重1 kg约需要猪乳3 kg计算；每天观察仔猪粪便的形态和死亡情况，以计算仔猪腹泻率和死亡率。计算公式如下：
腹泻率(%)=[(腹泻头数×腹泻天数)/(试验猪头数×试验天数)]×100；死亡率(%)=(死亡头数/试验猪头数)×100。
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表 1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) |
于试验结束后第2天07：00开始，每头母猪耳缘静脉采血10 mL，置于促凝真空管中，静置15 min后，3 000 r/min离心30 min，离心结束后取上层血清，-20 ℃条件下保存待测。采用酶联免疫法测定血清总蛋白、白蛋白、尿素氮、葡萄糖、甘油三酯、免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、白细胞介素-2含量。所有操作均按照试剂盒说明进行。
1.4.3 乳成分的测定于分娩后第11天在母猪乳房的前、中、后3个部分采集奶样共30 mL，混匀后置于-20 ℃储存待测。采用红外乳成分分析仪(Milko-Scan 134 A/B，丹麦Foss公司)分别测定并计算第11天的乳糖率、乳脂率、乳蛋白含量。
1.5 数据处理试验数据用SPSS 20.0统计软件中的单因素方差分析(one-way ANOVA)进行单因素方差分析，并用Duncan氏法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P＜0.05为差异显著，P＜0.01为差异极显著。
2 结果 2.1 SI和APS对哺乳母猪生产性能的影响由表 2可知，100、200 mg/kg水平组的哺乳母猪平均日采食量均显著高于对照组(P＜0.05) 。各组间的仔猪平均日增重差异均不显著(P>0.05) 。200 mg/kg水平组21 d泌乳总量显著高于对照组(P＜0.05) ，100、300 mg/kg水平组高于对照组但差异不显著(P>0.05) 。各组间仔猪腹泻率和仔猪死亡率差异不显著(P>0.05) 。
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表 2 SI和APS对哺乳母猪生产性能的影响 Table 2 Effects of SI and APS on production performance of lactating sows |
由表 3可知，200 mg/kg水平组的血清总蛋白含量显著高于对照组(P＜0.05) ，100、300 mg/kg水平组血清总蛋白含量虽高于对照组但差异不显著(P>0.05) 。各组间血清白蛋白含量差异不显著(P>0.05) 。各试验组血清尿素氮含量均显著低于对照组(P＜0.05) ，并随着SI和APS添加水平的增加呈现下降趋势。各组间血清葡萄糖含量差异均不显著(P>0.05) 。100、200 mg/kg水平组的血清甘油三酯含量相等且显著低于对照组(P＜0.05) ，300 mg/kg水平组也低于对照组，但差异不显著(P>0.05) 。各试验组的血清免疫球蛋白G含量均显著高于对照组(P＜0.05) ，以200 mg/kg水平组最高。200、300 mg/kg水平组的血清免疫球蛋白A含量均显著高于对照组(P＜0.05) ，100 mg/kg水平组血清免疫球蛋白A含量高于对照组但差异不显著(P>0.05) 。各试验组白细胞介素-2含量均显著高于对照组(P＜0.05) ，以200 mg/kg水平组最高。
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表 3 SI和APS对哺乳母猪血液生化和免疫指标的影响 Table 3 Effects of SI and APS on serum biochemical and immune indexes of lactating sows |
由表 4可知，各试验组的乳脂率均显著高于对照组(P＜0.05) ，200、300 mg/kg水平组均显著高于100 mg/kg水平组(P＜0.05) ，并且随着SI和APS添加水平的增加呈上升趋势。300 mg/kg水平组的乳糖率显著高于对照组与另外2个试验组(P＜0.05) ，100、200 mg/kg水平组高于对照组但差异不显著(P>0.05) 。各试验组的乳蛋白含量均显著高于对照组(P＜0.05) ，200、300 mg/kg水平组乳蛋白含量显著高于100 mg/kg水平组(P＜0.05) ，并且随着SI和APS添加水平的增加呈上升趋势。
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表 4 SI和APS对哺乳母猪乳成分的影响 Table 4 Effects of SI and APS on milk composition of lactating sows |
本试验结果表明，饲粮中添加SI和APS可显著提高哺乳母猪的采食量和泌乳量。SI能影响哺乳母猪性腺轴，并且可以促进其睾酮、催乳素的生成和释放作用增强，提高泌乳量，减少仔猪死亡率[7]；APS与其他制剂联合使用，在改善生产性能方面表现协同作用，苓路等[8]研究表明，给仔猪饲喂APS和益生菌，仔猪成活率提高了20.0%，平均日增重提高了8.57%，腹泻率降低了20.1%。本试验中，APS和SI联用对哺乳母猪的生产性能和对仔猪的平均日增重有提高作用，仔猪腹泻率和仔猪死亡率均有降低的趋势。
本试验结果还表明，SI和APS的添加水平不宜过高，在本试验中200 mg/kg为最佳添加水平，而添加300 mg/kg一定程度上会降低哺乳母猪生产性能。Takashima-Sasaki等[9]研究发现，给妊娠大鼠饲饲喂过高水平的SI，SI会和雌激素受体β结合，可以降低大鼠的生产性能，甚至导致后代的死亡。SI具有抗雌激素和弱雌激素的作用，在内源性雌激素水平比较低的情况下，结合到雌激素受体上，表现为雌激素样作用；在内源性雌激素水平较高的情况下，则与雌激素受体竞争性结合，使性激素的生物活性降低，表现为抗雌激素样的作用[10-11]。另外，侯晓礁等[12]在妊娠后期母猪中添加300 g/t的APS粉，能有效提高母猪生产性能。本试验中300 mg/kg水平组有降低生产性能的趋势，可能是因为SI与APS混合物中SI的比例过大的原因。所以为提高哺乳母猪生产性能应在饲粮中添加适当水平的SI和APS。
3.2 SI和APS对哺乳母猪血清生化和免疫指标的影响血清生化指标是反映动物机体代谢的主要指标。本试验结果表明，SI和APS可使哺乳母猪血清总蛋白含量显著提高，总蛋白可为机体进一步合成体蛋白质提供有利的内环境，从而促进蛋白质合成和动物生长[13]。本试验结果表明，0~200 mg/kg的SI和APS的添加水平下，哺乳母猪血清中白蛋白含量有上升趋势，但添加水平过高会呈现下降趋势。
动物机体内蛋白质代谢和氨基酸之间的平衡状况可以通过血清尿素氮的含量较准确地反映出，血清尿素氮含量最低时氨基酸之间平衡且满足代谢需要[14-15]。本试验中各试验组的血清尿素氮含量均显著低于对照组，并且随着SI和APS的添加水平的增加呈现下降趋势。有研究报道，APS、SI具有降低血糖和双向调节血糖的作用，能降低试验性DM大鼠的血糖水平，增强胰岛素水平，减轻内皮细胞损伤和功能障碍[16]。廖苇萍等[17]通过对SI和APS对糖尿病大鼠糖代谢的影响研究中发现，SI和APS可以降低血清葡萄糖含量，改善血管内功能。本试验结果表明，SI和APS可以显著降低哺乳母猪血清葡萄糖含量，与上述报道相似。甘油三酯是体脂的主要组成成分，其含量过高时容易导致脂血症[18]，本试验中添加SI和APS可显著降低母猪血清中甘油三酯含量，其中200 mg/kg水平时效果最显著。
Lamm[19]研究报道，免疫球蛋白A可捕获进入到黏膜内层的病原体，其原因是通过中和黏膜上皮内病原体而起作用，在黏膜结缔组织中形成免疫复合物，然后由上皮细胞排入腔内。免疫球蛋白G是血清中的主要免疫球蛋白，其抗体能够阻止相应抗原穿透黏膜进入组织中。本试验结果表明，在哺乳母猪饲粮中添加SI和APS可以显著提高血清中免疫球蛋白G、免疫球蛋白A的含量，从而提高机体免疫力。白细胞介素-2可以促进T、B淋巴细胞和自然杀伤(NK)细胞等细胞增殖与分化，促进干扰素、肿瘤坏死因子等细胞因子分泌，可提高机体细胞免疫和体液免疫功能[20]。本试验中，试验组的血清白细胞介素-2含量均显著高于对照组，说明SI和APS可显著提高机体的免疫应答能力，使得机体保持健康状态。
3.3 SI和APS对哺乳母猪乳成分的影响本试验结果表明，各试验组乳脂率和乳蛋白含量均显著高于对照组，并且随着SI和APS添加水平的增加呈增长趋势。同时，试验组的乳糖率也随着SI和APS添加水平的增加呈增长趋势，但只有300 mg/kg水平组显著高于对照组。母猪的泌乳量是影响仔猪生长最为主要的原因，母乳是哺乳仔猪能量和蛋白质的直接来源，母乳成分变化直接影响哺乳仔猪的生长发育状况[21]。李方方等[5]研究发现，饲粮中随着SI添加水平的增加，乳脂率、乳糖率呈增长趋势，乳蛋白含量也均高于对照组，本试验与此结果相似。据报道，SI和APS可以通过调节相关激素水平来影响产奶量，APS通过生长激素和胰岛素样生长因子-1轴影响乳腺细胞的增长，雌二醇能促进小鼠和奶牛乳腺离体培养组织合成乳清蛋白，另外雌二醇还可提高性激素结合蛋白、转铁蛋白在血液中的含量，这些反应又都是SI导致[22-23]。
4 结论饲粮中添加SI和APS能改善哺乳母猪的生产性能、血清生化和免疫性能以及乳成分。在本试验条件下，SI和APS混合物的适宜添加水平为200 mg/kg。
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