2. 东北农业大学动物科技学院, 哈尔滨 150030
2. College of Animal Science and Technology, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China
最早开始研究通风对于家禽的影响要追溯到20世纪60年代[1-2]。在20世纪末,通风已经在家禽生产中得到广泛的应用[3]。诸多试验证实了风速可以提高家禽生产性能[4-6]。风速同样影响家禽的生理指标。Furlan等[7]在研究不同风速和处理时间对36~42日龄肉鸡体表温度和直肠温度的影响时发现,处理时间显著影响肉鸡腿部皮温和体温,且处理前10 min下降最快;4.5 m/s以下的风速不会影响头部和背部温度。而Yahav等[8]在研究不同模式温度(恒温20 ℃;变温35/25 ℃、30/20 ℃)和风速(0.8~3.0 m/s)对火鸡影响时发现,其体温均维持在正常温度范围,这可能跟火鸡较强的耐热力和不同的处理方式有关。在Yahav等[4]另一项研究中,在高温环境下[(35±1.0) ℃,相对湿度(RH)(60±2.5)%],最适宜的风速为2.0 m/s,此时体温最低,过高(3.0 m/s)或过低(0.8 m/s)都会升高体温。
国内开展风速对家禽体热调节等方面的研究较晚。目前仅有陶秀萍[9]对温湿风进行了初步的研究,并得出了肉鸡温湿风指数模型,探究了风速对肉鸡生理生化的影响。不过其研究的试验条件为高温(35、38和41 ℃)和低风(0、0.7和1.2 m/s),并没有探究偏热温度(26~32 ℃)和较高风速(2.0 m/s)对肉鸡的影响。而风速对于家禽免疫功能等方面的研究也尚未见报道。
“偏热环境”尚无确切的定义,本课题组通过对肉仔鸡生长性能、生理、行为、体热调节、肠道菌群等方面初步的研究发现[10-14],其具备以下特点:环境温度尚未达到传统意义上热应激范围,一般认为是26~32 ℃,此时机体的某些生理机能等受到一定程度影响,但还未造成较深的机体损伤。且随着偏热温度的增加,不利影响也在进一步加重。在夏季实际生产中,往往会发生温度骤然上升,超过舒适温度区,此时风机开始工作,根据上升的幅度进行逐级调节,偏热温度和风速调节会同时存在,并对家禽的生产和生理等各方面产生影响。
因此,本试验拟以肉仔鸡为试验动物,探究风速和偏热处理对其生理、内分泌和免疫指标的影响,以期为实际生产中环境调控、精细化和舒适化养殖提供理论依据。
1 材料与方法 1.1 试验动物选取体重相近、健康的42日龄爱拔益加肉仔鸡公鸡150羽,体重为(2 706±88) g,随机分为15个处理,每个处理10羽,每羽作为1个重复。处理前所有试验鸡在环控舱(21 ℃+60% RH)中饲养。
饲养管理:试验在中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室昌平试验基地人工气候试验舱内进行,温度、湿度自动控制(精度:±1 ℃、±7%),光照时间为24 h。所用饲粮参照NRC (1994)配制(表 1)。试验期间,肉仔鸡自由采食与饮水。
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表 1 基础饲粮组成及营养水平(饲喂基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (as-fed basis) |
每次试验处理前从环控舱中随机挑选10羽,放置在另一环控舱--本实验室研发的纵向通风试验舱(可实现0~3 m/s内的任意风速值,其中在0~2 m/s内精确度达到±0.10 m/s,在2~3 m/s内精度达到±0.15 m/s)中,有效饲养面积为1 m2,每次处理分6 h适应期(自由采食与饮水)和6 h试验期(禁食禁水)。适应期温湿度与试验前一致。试验期将环控舱的温湿度调至试验要求(RH保持不变),风速的试验要求由纵向通风试验舱实现。
试验采用3×5因子设计,试验温度分3个水平:26、29和32 ℃;风速分为5个水平:0、0.5、1.0、1.5和2.0 m/s。具体试验处理如表 2所示。
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表 2 试验处理 Table 2 Treatments of the experiment |
以上处理为连续进行,每个处理用时12 h,15个处理共计7.5 d完成。各处理条件在1 h内实现,第2~6小时分别采集数据。采用德图多功能测量仪(Testo 435-2)和德图热敏风速探头(测量范围:0~20.00 m/s,-20~70 ℃,0~100% RH;测量精度:0.03 m/s,±0.3 ℃,±2% RH;分辨率:0.01 m/s,0.1 ℃,0.1% RH)对试验期间温湿风进行监测。
1.2.2 样品采集与测定 1.2.2.1 生理指标体核温度(core body temperature,Tc):适应期开始时每处理随机选取5羽肉仔鸡,饲喂微型温度数据记录仪DS1922L (分辨率0.062 5 ℃,精度±0.05 ℃),在体内适应6 h。试验期开始,待达到处理条件后,每隔5 min记录1次(试验前用软件进行设置),即连续记录试验期第2~3小时内的数据。试验结束后处死取出记录仪,用软件导出所记录的数据。
呼吸频率(respiratory frequency,Fr):采用Canon EOS 550D摄像模式进行拍摄,后期人工数出数据并记录。在试验期第3~4小时内,每隔10 min采集1次,每次测量每只鸡1 min的呼吸次数,共采集6次,每次随机选取其中5只鸡。注:29 ℃+0.5 m/s处理时,相机存储卡损坏,仅记录部分数据,因此结果作为参考。
皮肤温度(skin temperature,Ts):采集时间为试验期第3~4小时内。使用热红外成像仪(InfReC H2640,热分辨率0.03 ℃、精度±1%)对肉仔鸡头部的侧面和小腿垂直拍摄,拍摄距离为0.5 m,每隔3 min拍摄1次,连续拍摄1 h,每只鸡拍摄20次。通过软件分析,记录每张照片中鸡头部侧面脸耳叶、鸡冠和小腿平均皮温[耳叶皮温(earlobe skin temperature,Tes);鸡冠皮温(comb skin temperature,Tcs);小腿皮温(shank skin temperature,Tss)],取20个数据的平均值进行统计。其中每个处理中5只鸡作为1个拍摄循环。红外拍摄见图 1。
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图 1 使用红外成像仪对肉仔鸡头部平均皮温的采集 Figure 1 Collection of head's average skin temperature of broiler chicken by infrared thermal imager |
试验期第4~5小时,随机选取每个处理中5只鸡进行翅静脉采血,3 000 r/min离心10 min取上清液,迅速放入液氮中冷冻,后放入-80 ℃冰箱进行保存。检测指标为血清三碘甲腺原氨酸(3, 5, 3′-triiodothyronine, T3)、甲状腺素(又称四碘甲腺原氨酸,3, 5, 3′, 5′-tetraiodothyronine, T4)和皮质酮(cortisol, CORT)。以上检测所用试剂盒购于南京建成生物工程研究所,采用酶联免疫吸附(ELISA)测定法,具体操作按照使用说明书,所用酶标仪为美国宝特公司生产,型号为Power Wave XS2。
1.2.2.3 免疫指标血清蛋白、溶菌酶和细胞因子:总蛋白含量测定采用考马斯亮蓝法,白蛋白含量测定采用溴甲酚绿比色法,两者差值为球蛋白含量。血清溶菌酶采用光学法测定。细胞因子测定采用ELISA法。以上测定的试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
1.3 数据处理与统计采用SAS 9.2统计软件中一般线性模型(GLM)对试验结果进行双因素方差分析,采用Duncan氏法进行多重比较检验,试验数据用平均值和标准误表示,P < 0.05为差异显著。
2 结果与分析 2.1 风速和偏热处理对肉仔鸡生理指标的影响由表 3可知,温度和风速的交互作用显著影响Tc、Fr、Tes、Tcs和Tss (P < 0.05)。在26 ℃偏热温度下,与0风速相比,风速要达到1.0 m/s才会显著降低Tc (P < 0.05),2.0 m/s高风速下呼吸率才会显著下降(P < 0.05),1.5 m/s及以上风速下肉仔鸡Tes显著降低(P < 0.05),1.0 m/s及以上风速下肉仔鸡Tcs和Tss显著降低(P < 0.05)。29 ℃偏热温度下,与0风速相比,1.0 m/s及以上风速使得肉仔鸡Tc、Tes、Tcs和Tss显著降低(P < 0.05)。32 ℃偏热温度下,与0风速相比,1.0 m/s及以上风速使肉仔鸡Tc和Fr显著降低(P < 0.05),除0.5 m/s风速使肉仔鸡Tes显著升高(P < 0.05)外,0.5 m/s及以上风速使肉仔鸡Tes、Tcs和Tss显著降低(P < 0.05)。另,29 ℃+0.5 m/s处理下,由于相机存储卡损坏,数据不全,导致肉仔鸡Fr偏低,试验数据仅作为参考。
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表 3 风速和偏热处理对肉仔鸡生理指标的影响 Table 3 Effects of air velocity and moderate ambient temperatures on physiological indices of broilers |
由表 4可知,温度和风速的交互作用显著影响肉仔鸡血清T3和CORT含量(P < 0.05)。温度显著影响肉仔鸡血清CORT含量(P < 0.05)。相比于26和29 ℃,32 ℃偏热处理下,血清CORT含量显著升高(P < 0.05)。
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表 4 风速和偏热处理对肉仔鸡内分泌指标的影响 Table 4 Effects of air velocity and moderate ambient temperatures on endocrine indices of broilers |
由表 5、表 6可知,温度和风速及两者交互作用对肉仔鸡血清总蛋白、白蛋白和球蛋白及溶菌酶含量无显著影响(P > 0.05)。风速显著影响肉仔鸡血清白细胞介素(IL)-1β的含量(P < 0.05),与0风速相比,高风(2.0和1.5 m/s)下血清IL-1β含量显著降低(P < 0.05)。温度和温度于风速两者交互作用对肉仔鸡血清IL-1β、IL-6含量无显著影响(P > 0.05)。
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表 5 风速和偏热处理对肉仔鸡血清总蛋白、白蛋白和球蛋白含量的影响 Table 5 Effects of air velocity and moderate ambient temperatures on contents of total protein, albumin and globulin in serum of broilers |
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表 6 风速和偏热处理对肉仔鸡血清溶菌酶、IL-1β和IL-6含量的影响 Table 6 Effects of air velocity and moderate ambient temperatures on contents of lysozyme, IL-1β and IL-6 in serum of broilers |
肉仔鸡Tc、Ts和Fr是评价高温环境对生理机能影响最为基础和常见的指标,能够直观准确地反映机体的热生理状态和舒适程度,尤其在评价热应激对肉仔鸡体热平衡时,是重要的生理指标。
前人大多单独考虑温度和风速各自对于家禽生理功能的影响。诸多研究表明高温会升高家禽的Tc、Fr和Ts。Lacey等[15]和Yanagi等[16]先后研究了急性热应激处理对肉鸡Tc的影响,发现高温会显著升高Tc,而且温度越高,Tc上升的程度越高。当环境温度过高时,家禽的Fr升高,体内过多的热量会通过蒸发(潜热)散热来维持机体热平衡。有研究表明急性高温热应激会加快家禽的Fr[17]。有报道称,35 ℃的急性高温会使得鸡的Fr从19次/min迅速升至188次/min[18]。研究表明,环境温度的升高会引起肉仔鸡身体不同部位Ts的上升,如鸡冠、面部、脖、翅、腿、趾和脚蹼具有不同程度地升高[19]。进一步地研究发现,裸露无羽区Ts的变化比覆羽区更加敏感[20],主要集中在头部和腿脚部。同时张少帅等[11]研究发现,相对于21 ℃,偏热处理(26和31 ℃)下,肉仔鸡脸部及小腿的Ts显著升高。不同的风速同时影响家禽的Tc、Fr和Ts。然而Furlan等[7]的结论不一样,报道称29 ℃下,低于4.5 m/s的风速不会影响头部温度,2.0 m/s风速时,腿部温度才开始下降。Yahav等[4]研究指出,肉鸡在高温环境下[(35±1.0) ℃,(60±2.5)% RH)],最适宜的风速为2.0 m/s,此时体温最低。
本试验结合温度和风速2个因素,分析了两者对于家禽Tc、Fr和Ts的影响。结果发现,较高偏热和无风(32 ℃+0风速)或较高偏热和低风(32 ℃+0.5 m/s风速)下肉仔鸡Tc、Ts、Fr较高。而较低偏热温度(26 ℃)下,肉仔鸡对于风速的敏感性较小,风速要达到1.0 m/s才会显著降低Tc,2.0 m/s高风速下Fr才会显著下降。此时风速产生的“风冷效应”并不明显。考虑到生产成本的问题,并不建议在较低偏热温度下开启风机。而随着偏热温度的增加,风速对于肉仔鸡的影响逐渐增大。29 ℃偏热温度、1.0 m/s风速下,肉仔鸡Tc显著降低;32 ℃偏热温度、1.0 m/s风速下,肉仔鸡Tc和Fr显著降低。而Ts对于风速的的敏感性要高一些,在26和29 ℃偏热温度、1.0 m/s风速下,肉仔鸡Tes、Tcs和Tss显著降低;随着偏热温度的上升,32 ℃偏热温度、0.5 m/s风速下,肉仔鸡Tcs和Tss显著降低。偏热温度越高,较小的风速便会影响Ts。
出现以上结果可能跟肉仔鸡内部体温调节机制有关。一般情况下,当温度高于舒适区时,家禽首先做出反应的是皮肤(最先感知外界温度的变化),表皮血流量增大,将机体内部的热量向表皮扩散,此时Ts会显著上升;其次,机体会通过行为进行调节,伸展,俯卧,扩大散热面,减少活动量,同时Fr会快速上升,潜热散热的比重会增加;最后,若环境温度持续升高,机体无法通过行为和物理调节散失过多的热量,就会引起Tc的升高。本试验选取了鸡冠、耳叶和小腿3个敏感部位进行测量,其中鸡冠血管分布较为密集,血流量大,对于热量的变化较为敏感;耳叶,俗称耳垂,是靠近体温调节中枢较近的生理区域,与头部温度有着密切联系,一定程度上可以反映机体温度;小腿的表面积较大,是热量快速交换的重要场所。风速带来的“风冷效应”会随着风速的增加而增大,对流散热也随之上升,裸露皮肤表面的热量被带走,因此Ts会随着风速的增加而降低。
同时试验结果表明,在26和32 ℃偏热温度、0.5 m/s风速下,机体的Tc和Fr要显著高于无风和其他风速。这似乎与传统的风速散热理论相违背。这可能是由于机体呼吸机制和体温调节机制的反应有一定滞后性,偏热伴随着较低风速对机体施加的热负荷量要大于“风冷效应”。我们猜想,环境因素所表征的热负荷[21]与风速的降温效果之间存在一个平衡点:在平衡点以下,风冷效应低于热负荷量,机体为了散发过多的热量Fr加快,但是代谢率也会增加,体温反而会升高;随着风速的增加,风冷效应高于热负荷量,此时机体过多的热量会通过对流的方式散发,呼吸率下降,体温也随之下降。这一猜想是否正确,能否揭示其中内在的机制还有待进一步的研究验证。然而通过对行为学和粪便代谢组学等非侵入、无干扰指标的研究可能会给出一定的答案和解释。观察Tc变化发现,在各偏热处理下,1.5和2.0 m/s风速Tc最小,且2个风速间差异不显著,而综合考虑经济效益的话,1.5 m/s风速可能是偏热环境下(26~32 ℃)的适宜风速。
3.2 风速和偏热处理对肉仔鸡内分泌指标的影响T3、T4和CORT是反映家禽热应激状态的常用的内分泌指标。T3和T4是由甲状腺分泌,CORT是由肾上腺分泌,以上激素均参与蛋白质、脂肪和糖类的代谢过程,调节机体进行产热。本试验发现,温度和风速的交互作用显著影响肉仔鸡血清T3和CORT含量,在各个偏热温度下,风速对上述指标的影响并没有呈现一定的规律性,说明偏热和风速对内分泌指标影响的复杂性。不过我们可以看出大致的趋势,较高偏热会降低T3含量,升高CORT含量,使得应激程度加重。32 ℃+0风速处理下肉仔鸡血清中T3含量较低,机体受应激程度较大,而26 ℃高风速(1.5~2.0 m/s)下T3含量较高,说明较低偏热和高风处理下肉仔鸡的应激状况较小。有研究表明高温热应激(>32 ℃)下,血清T3、T4和CORT的分泌会受到不同程度影响。有报道称,35 ℃高温下鸡血液T3含量显著降低[22];还有研究发现,随着时间和温度的持续和上升,血清中T3和T4含量逐渐下降[23];刘思当等[24]研究发现,33 ℃高温处理下肉鸡血清CORT含量显著升高。本试验结果说明偏热和风速处理下,糖皮质和肾上腺激素的分泌已经受到影响,较高偏热(32 ℃)和无风情况下,机体能量代谢受到影响。
3.3 风速和偏热处理对肉仔鸡免疫指标的影响动物机体的免疫反应主要是通过识别和排除抗原性异物,使得体内外环境的保持稳定状态[25]。家禽的免疫系统包括3个层面,分别是免疫器官、免疫细胞和免疫分子,共同组成了免疫应答的物质基础。良好的免疫功能是机体健康的前提和保障。有关风速对于家禽免疫功能等方面的研究未见报道。
本试验初步探索了风速对肉仔鸡免疫性能的影响,发现偏热处理2 h和风速(0~2.0 m/s)对血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、溶菌酶和IL-6含量并无显著影响,仅有高风(2.0和1.5 m/s)比起无风会显著降低血清IL-1β的含量。Ostrowski-Meissner等[26]在研究短期热应激对肉鸡生理生化指标时发现,42 ℃急性处理15 min会降低血液中总蛋白含量。这可能与温度处理的强度有关,说明偏热处理并不显著影响肉仔鸡血液中蛋白的含量。另一方面,处理时间的长短也是影响因素之一。刘思当等[24]对肉仔鸡施加高温高湿处理(32.5~34.5 ℃,80%~90% RH)并在6 h和1、2、3、5、7、10、14、17 d进行连续观察,结果发现随着热应激时间的增加血清中总蛋白、白蛋白和球蛋白含量逐渐下降。本试验处理时间为2 h,可能还未对机体的免疫性能产生影响。仅有高风(2.0和1.5 m/s)会显著降低血清IL-1β的含量,说明偏热处理下较高风速肉仔鸡的炎症反应较轻。而风速对于肉仔鸡其他免疫指标的影响并不明显,并没有发挥出较大的作用。一方面可能是上述免疫指标对于风速并不敏感所致,另一方面可能是处理的时间和强度并没有引起上述免疫指标的变化。
4 结论①风速和偏热处理的交互作用显著影响肉仔鸡Tc、Ts、Fr以及血清T3和CORT含量。
②偏热处理、低风速(0.5 m/s)下,肉仔鸡热负荷会加重,风速对肉仔鸡免疫指标影响较小,最适风速为1.5 m/s。
③偏热处理下风速不同程度影响肉仔鸡生理、内分泌和免疫指标。
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