拟穴青蟹 (Scylla paramamosain) 属梭子蟹科 (Portunidae)，暖水广盐性海水肉食蟹类，是分布在我国东南沿海青蟹属 (Scylla) 的优势种^[1]。拟穴青蟹有个体大、生长周期短、适应性强、营养价值高等特点^[2]，是全世界6 000种蟹类中为数不多的养殖蟹种^[3]，具有重要的经济价值。随着拟穴青蟹人工育苗技术的突破、养殖技术的改进和多种养蟹形式的开发，拟穴青蟹养殖规模逐年扩大，产量不断提高^[4]，成为我国养殖产量最高的海水蟹类。

拟穴青蟹养殖业的蓬勃发展促进了其营养生理研究及配合饲料研发工作。配合饲料中，蛋白质是决定水产动物生长、发育最关键的营养物质，但同时也是饲料成本最高的部分。在饲料中添加适宜水平的脂肪、糖类等非蛋白质营养素，不仅能够节约饲料蛋白质、降低水体污染，还能提高饲料利用效率^[5-7]。脂肪是蟹类的能量物质，同时提供蟹类生长发育所需的必需脂肪酸。饲料中脂肪含量缺乏或不足，饲料蛋白质将作为能源物质被分解，同时可能并发必需脂肪酸缺乏症^[8]；脂肪含量过高则会降低养殖动物的摄食量，使蛋白质及其他营养素摄入减少，从而影响动物的正常生长^[9]。糖类作为饲料中价格最低廉的原料，饲料中添加适宜水平的糖类，有助于缓解饲料价格的压力，同时有节约蛋白质的作用，然而水产动物对糖类的利用能力较低，摄入过多的糖类，会导致生长率下降、死亡率增加^[10]。研究表明，脂肪代谢与肝脏的含糖量有关，而肝脏的含糖量又与饲料糖水平有关。饲料中糖类充足，有足够的肝糖可供利用，脂肪分解减少，酮体产生也相应减少；肝糖不足时，脂肪分解增加，产生的酮体相应增多，超过一定限度就会导致酮体症，进而影响水产动物的正常生长^[10]。饲料中适宜的脂肪和糖水平能产生一定的协同作用^[11]，因此，确定饲料中适宜的糖脂比对水产动物配合饲料的研发有重要意义。本研究在前人已有研究的基础上，通过研究饲料糖脂比对拟穴青蟹仔蟹生长性能、体组成和消化酶活性的影响，确定拟穴青蟹仔蟹饲料适宜的糖脂比，为拟穴青蟹高效环保配合饲料的研发提供理论数据参考。

1 材料与方法 1.1 试验饲料配方与制作

分别测定各饲料原料中糖、脂肪、蛋白质、水分、总能等指标，作为饲料配方依据。以鱼粉、酪蛋白为蛋白质源，鱼油为脂肪源，糊化玉米淀粉为糖源，配制不同糖脂比的等氮 (约44%) 等能 (约19.5 MJ/kg) 饲料，试验饲料组成及营养水平见表 1，饲料糖脂比实测值分别为0.54、0.88、1.39、2.08和3.50。饲料制作过程为：各固体饲料原料用粉碎机粉碎过100目筛后，按照饲料组成表设定的添加量，从低到高依次称量并混合拌匀，再按比例加入鱼油，手工将油脂搓开并混合均匀，加入适量水揉成面团后制成直径2 mm的颗粒饲料^[12]，装袋密封保存于-20 ℃冰箱备用。

1.2 试验设计与饲养管理

养殖试验于2015年8月在广西海洋研究所海水增养殖试验基地进行。试验用拟穴青蟹取自广西海洋研究所自主研发培育的同一批人工孵化的仔蟹Ⅰ期苗种。正式试验前，用商用虾料 (北海恒兴特种饲料有限公司) 投喂仔蟹驯养7 d。结束后，挑选体格健壮、大小规格相近、初始体重为 (41.4±0.3) mg的拟穴青蟹仔蟹1 500只，随机分成5个饲料糖脂比试验组。试验期3周。饲养试验在直径20 cm、高25 cm的塑料水桶内进行，水桶底部铺一层约0.5 cm厚的薄沙，并将水桶放置在阴凉处避免阳光直射。因青蟹性凶好斗，为避免相互残食，每个水桶饲养青蟹1只，每个饲料组设300个重复，每100个重复作为1个样品组用于统计和指标测定。每天投喂2次，时间分别为07：00和18：00，以略有剩饵为准，投喂前先吸出剩饵。隔天换水，每次换水量约1/2，每周彻底清理水桶1次。试验期间，水温26~31 ℃，盐度20‰~25‰，溶氧＞5.0 mg/L。

1.3 样品收集与分析

3周的养殖试验结束后，收集水桶内的拟穴青蟹，记录存活数并进行称重，将每个样品组的仔蟹分装成2管，一管15只，剩余的仔蟹作为另一管，保存于-20 ℃冰箱，分别用于消化酶活性和体组成的测定。生长性能的相关计算公式如下：

式中：W₀和W_t分别为仔蟹的初始平均体重 (initial average body weight，IABW) 和终末平均体重 (final average body weight，FABW)；N_o和N_t分别为仔蟹初始和终末的数量；t为试验天数。

消化酶活性测定：酶液用仔蟹整体匀浆法获得，取冷冻的拟穴青蟹仔蟹15只，在冰盘上用手术剪剪碎后转移至玻璃匀浆器，按质量体积比1 : 2的比例加入磷酸缓冲液 (pH=7) 进行匀浆，匀浆液于4 ℃、3 000 r/min离心10 min，取上清液作为待测酶液。蛋白酶活性采用Folin-酚法测定；脂肪酶、淀粉酶和蛋白酶活性均采用南京建成生物工程研究所研制的试剂盒测定。

饲料和仔蟹体组成成分测定：水分含量采用恒温干燥法，105 ℃烘干至恒重；粗蛋白质含量采用凯氏定氮法 (Kjeltec-8400，瑞典)；粗脂肪含量采用索氏抽提法 (Soxtec-2050，瑞典)；粗灰分含量采用马弗炉550 ℃灰化12 h测定；可消化糖含量采用3, 5-二硝基水杨酸法^[13]；能值测定使用PARR-6400氧氮仪热量计。

1.4 统计分析

数据结果均用“平均值±标准误”表示，采用SPSS 19.0软件对数据进行分析，先检验所有数据的方差齐次性，再进行单因素方差分析，显著性水平为0.05，若差异达到显著则进行Tukey’s多重比较。

2 结果 2.1 饲料糖脂比对拟穴青蟹仔蟹生长性能的影响

由表 2可见，饲料糖脂比对拟穴青蟹仔蟹的FABW、SR、WGR以及SGR均有显著影响 (P < 0.05)，且都随着饲料糖脂比的增大呈先升高后降低的趋势。糖脂比1.39和2.08试验组的FABW、WGR和SGR均显著高于糖脂比0.54和3.50试验组 (P < 0.05)；各试验组的SR在83.96%~92.59%内，糖脂比1.39试验组SR最高，显著高于糖脂比0.54和3.50试验组 (P < 0.05)。通过对WGR (y) 和饲料糖脂比 (x) 进行回归分析，得到二次曲线回归方程 (图 1)：y=-45.565x²+160.03x+62.752(R²=0.996)，由此可知，当WGR达到最大值时对应的饲料糖脂比为2.07。

2.2 饲料糖脂比对拟穴青蟹仔蟹体组成的影响

由表 3可见，饲料糖脂比对拟穴青蟹仔蟹的水分、粗蛋白质和粗灰分含量没有显著影响 (P>0.05)，对粗脂肪含量有显著影响 (P < 0.05)。糖脂比0.54试验组的粗脂肪含量最高，显著高于糖脂比2.08和3.50试验组 (P < 0.05)。

2.3 不饲料糖脂比对拟穴青蟹仔蟹消化酶活性的影响

由表 4可见，饲料糖脂比对拟穴青蟹仔蟹的淀粉酶活性没有显著影响 (P>0.05)，对蛋白酶和脂肪酶活性有显著影响 (P < 0.05)。随着饲料糖脂比的增大，蛋白酶活性呈先增大后减小的趋势，糖脂比1.39试验组的蛋白酶活性最高，显著于其他试验组 (P < 0.05)；脂肪酶活性则随着糖脂比的增大而呈降低的趋势，糖脂比0.54和0.88试验组的脂肪酶活性显著高于糖脂比2.08和3.50试验组 (P < 0.05)。

3 讨论 3.1 饲料糖脂比对拟穴青蟹仔蟹生长性能的影响

脂类是虾蟹等甲壳动物生长过程中必需的营养素之一。脂类是组织细胞的组成成分，为维持生物膜完整性及其复杂功能提供物质和能量基础^[14]，同时它还承担着脂溶性维生素的吸收、运输和存储功能^[15]。虾蟹对糖类的需求和利用能力相对较低，但糖类是最廉价的能源，它在节约饲料蛋白质、降低饲料成本方面有重要的现实意义。

本研究中，饲料糖脂比对拟穴青蟹仔蟹的SR有显著影响，随着饲料糖脂比的增大呈先升高后降低的趋势，这一结果与Johnston等^[16]对新西兰岩龙虾 (Jasus edwardsii) 饲料适宜糖脂比的研究结果一致。然而饲料糖脂比对红螯螯虾 (Cherax quadricarinatus)^[17]、暗纹东方鲀 (Takifugu obscurus)^[18]、方格星虫 (Sipunculus nudus)^[19]等水产动物的SR没有显著影响，这说明了不同水产动物对饲料糖脂比变化的敏感程度和适应力不同。拟穴青蟹仔蟹的WGR和SGR随饲料糖脂比的增大呈先增大后减小的趋势，糖脂比1.39和2.08试验组的WGR和SGR较其他各组高，饲料糖脂比高于2.08或者低于1.39，仔蟹均表现出较低的生长率。Catacutan^[20]的研究结果表明，饲料脂肪含量在6%~12%时能满足 (9.15±0.46) g青蟹仔蟹的生长需求；艾春香^[21]研究得出，饲料脂肪含量在6%~10%时能满足Ⅴ期青蟹溞状幼体到成蟹生长和蜕皮的脂质需求。因此，低糖脂比饲料的脂肪含量高、糖含量低，饲料脂肪水平超过了仔蟹生长对脂质的最大需求，而食物热量过剩会降低水产动物的摄食量，致使蛋白质及其他必需营养素摄入不足，从而表现为生长率下降^[22]。饲料脂肪水平过高还会引起肝脏脂肪沉积、体内脂肪含量过高、抗病能力下降、代谢紊乱等^[23]。相反，高糖脂比饲料的脂肪含量低、糖含量高。一般来说，水产动物对糖的利用能力较低，且饲料中淀粉含量越高饲料糖的消化率越低^[10]，因此饲料利用率降低可能是导致高糖脂比试验组仔蟹生长率降低的原因。王菲等^[24]研究了饲料糖脂比 (2.3~12.1) 对建鲤 (Cyprinus carpio var. jian) 生长性能的影响，结果表明当饲料糖脂比从2.3升高到7.7时，WGR显著升高，而当糖脂比进一步升高时，WGR呈下降趋势，二次回归方程得出其适宜糖脂比为8.14。张琴等^[19]研究了饲料糖脂比对方格星虫稚虫的影响，表明稚虫WGR随饲料糖脂比的增大先升高后降低，经回归分析得到方格星虫稚虫的WGR在糖脂比为2.42时达到最大。Li等^[25]对团头鲂 (Megalobrama amblycephala) 的适宜饲料糖脂比进行了研究，结果表明其WGR随饲料糖脂比的升高先升高后降低，适宜糖脂比为3.58，对应的糖和脂肪含量分别为29.17%和8.14%。以上水产动物摄食不同糖脂比饲料的WGR变化规律与本研究结果一致，本研究中拟穴青蟹仔蟹饲料糖脂比的拟合结果表明其适宜糖脂比为2.07。

3.2 饲料糖脂比对拟穴青蟹仔蟹体组成的影响

饲料糖脂比对拟穴青蟹仔蟹的水分、粗蛋白质和粗灰分含量没有产生显著影响，但是对其粗脂肪含量有显著影响。随着饲料糖脂比的增大，仔蟹粗脂肪含量呈降低趋势，即仔蟹粗脂肪含量与饲料脂肪水平呈正相关。这说明饲料脂肪含量越高，沉积在仔蟹体内的脂肪越多。在革胡子鲶 (Clarias gariepinus)^[26]、印度囊鳃鲶 (Heteropneustes fossilis)^[27]、方格星虫^[19]、长吻鮠 (Leiocassis longirostris)^[28]、建鲤^[24]、红螯螯虾^[17]等不同种类水产动物的研究中也得到了类似结果。另外，研究表明用不同糖水平的等氮等脂饲料饲喂凡纳滨对虾、方格星虫等水产动物，其体脂含量显著上升后趋于稳定^[29-30]，说明在脂肪含量一定的条件下，提高饲料糖水平机体脂肪含量会有一定程度增加，但继续增加饲料糖水平，糖的消化率降低，体脂含量不再增加。本研究中随着饲料糖脂比的增大，饲料脂肪含量降低、糖含量增加，由于水产动物对糖的利用能力较差，仔蟹生长所需要的能量可能不足，造成部分体脂分解用以提供所需能量，这可能进一步降低了高糖脂比试验组仔蟹的脂肪含量。

3.3 不饲料糖脂比对拟穴青蟹仔蟹消化酶活性的影响

消化酶的作用是将摄入的食物分解为动物体能够吸收的小分子物质，因此消化酶活性的高低一定程度上反映了对食物的消化利用能力。从本研究结果看，饲料糖脂比对仔蟹的淀粉酶活性没有显著影响，对蛋白酶和脂肪酶活性的影响显著。随着饲料糖脂比的增大仔蟹蛋白酶活性先升高后降低，说明饲料蛋白质含量相同的前提下添加的糖或脂肪水平超过一定范围会降低拟穴青蟹仔蟹的蛋白酶活性。糖脂比1.39试验组的蛋白酶活性最高，对应的生长效果也最好，这可能是因为饲料糖脂比水平适宜时，仔蟹处于最佳的生长状态，其蛋白酶活性保持在较高的水平。另有研究表明，饲料适宜的脂肪水平有助于提高水产动物的蛋白酶活性，而当脂肪含量超过一定水平，会显著降低蛋白酶活性^[31-33]。Zhu等^[17]对红螯螯虾适宜糖脂比的研究中也有类似结果，饲料糖脂比在2.18~3.60内，红螯螯虾的胃蛋白酶活性最高，当糖脂低于2.18或高于3.60，其蛋白酶活性显著降低。拟穴青蟹仔蟹的脂肪酶活性随着饲料糖脂比的增大而降低，即仔蟹脂肪酶活性与饲料脂肪添加水平呈正相关。研究已表明饲料脂肪水平显著影响水产动物的脂肪酶活性，动物能够通过提高脂肪酶的活性来适应饲料中不断升高的脂肪水平，从而提高脂肪的消化率^[33-34]。同时，这也验证了在一定范围内，饲料脂肪水平越高，其脂肪酶活性越大，沉积在体内的脂肪含量也就越多。在建鲤^[24]和方格星虫^[19]的研究中也得到了类似的结果。

4 结论

①饲料糖脂比对拟穴青蟹仔蟹的SR、FABW、WGR以及SGR都有显著影响，还对仔蟹的粗脂肪含量、蛋白酶和脂肪酶活性有显著影响。

②在本试验条件下，饲料适宜的糖脂比可提高拟穴青蟹仔蟹的成活率和生长性能。以增重率为评价指标，经回归分析得出拟穴青蟹仔蟹的适宜糖脂比为2.07。