维生素E (VE) 和微量元素硒 (Se) 是鸡必需的2种微量营养素。维生素E有缓解家禽应激、改善生长性能和提高繁殖性能等作用[1-3]。Se是动物机体内多种硒蛋白质的功能成分，能够清理体内氧化物质，具有抗氧化和提高机体免疫功能等作用[4-5]。种鸡缺乏这2种微量营养素的其中1种，均会引起严重的机体应激反应[6]。目前有关种母鸡饲粮中维生素E和Se需要量的研究并不多。NRC (1994) 提出产蛋种母鸡饲粮维生素E和Se的最低需要量分别为10 IU/kg和0.05 mg/kg；张大为[6]提出产蛋种母鸡饲粮维生素E水平达到4 mg/kg即可满足正常生产和繁殖性能的需要，饲粮添加0.35 mg/kg有机硒可提高产蛋量；《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004) 以种鸡周龄为划分依据，推荐开产前1~6周龄、开产前7~18周龄、开产期 (19周龄至开产) 和产蛋期种鸡饲粮维生素E需要量分别为18、9、9和27 IU/kg，Se需要量均为0.27 mg/kg。不同品种、年龄阶段和饲养条件的种鸡对饲粮维生素E和Se的需要量存在一定的差异。多年来，本研究室一直对黄羽肉种鸡的营养需要进行着研究，目前已经开展了对蛋白质和能量[7]、钙[8]、磷[9]、锌[10]、赖氨酸[11]、蛋氨酸[12]、异亮氨酸[13]、维生素A[14]等需要量的研究。鉴此，本试验在前期研究的基础上，对黄羽肉种鸡产蛋期维生素E和Se的需要量进行研究，填补黄羽肉种鸡维生素E和Se需要量研究的空白，为黄羽肉种鸡营养标准的制定和实际生产提供科学依据。
1 材料与方法 1.1 试验动物与试验设计试验采用3×3双因子设计，设3个维生素E添加水平 (0、20、40 IU/kg) 和3个Se添加水平 (0、0.15、0.30 mg/kg)。选用32周龄快大型岭南黄羽肉鸡父母代种母鸡864只，根据产蛋率和体重一致性原则随机分成9个组，分别为VE0Se0组、VE0Se0.15组、VE0Se0.30组、VE20Se0组、VE20Se0.15组、VE20Se0.30组、VE40Se0组、VE40Se0.15组和VE40Se0.30组，每组6个重复，每个重复16只鸡。
1.2 试验饲粮试验采用玉米-豆粕型基础饲粮，各组饲粮中维生素E和Se水平按照试验设计确定，其他营养成分均参考《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004)，参照《中国饲料成分及营养价值表》(第26版) 和实测值设计饲粮配方。基础饲粮组成及营养水平见表 1，基础饲粮含3.19 mg/kg维生素E、0.12 mg/kg Se。饲粮配制时，维生素E和Se按照不同添加水平等量替代预混料中的载体玉米芯粉，除维生素E和Se水平外，各组饲粮营养水平均相同。酵母硒由安琪酵母股份有限公司友情提供，Se含量为2 000 mg/kg。维生素E为维生素E乙酸酯，有效含量为50%。
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表 1 基础饲粮组成及营养水平 (饲喂基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (as-fed basis) |
试验鸡饲养于广东省农业科学院畜牧研究所动物营养研究室种鸡试验舍内，3层阶梯式笼养，每笼2只。试验鸡每天定量饲喂1次，每只每天的饲喂量为130 g，乳头式饮水器供试验鸡自由饮水。试验期间，每天光照恒定16 h，保持自然通风和栏舍清洁卫生。每天记录06:00、12:00和18:00的最高温度和最低温度、湿度及天气情况。每天观察试验鸡的健康状况，记录淘汰和死亡情况。试验鸡只按照常规饲养管理规程和免疫程序进行饲养和免疫。预试期7 d，正试期8周。正式试验开始前一直用符合《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004) 营养水平的饲粮饲喂试验鸡。试验最后2周给种母鸡进行人工授精，输精时间为16:00，输精量为30 μL/只，每2天输1次精，种公鸡与种母鸡的比例为1 : 30。
1.4 测定指标与方法 1.4.1 产蛋性能试验开始和结束前1天20:00对试验鸡断料、供水，次日08:00以重复为单位称重，并统计试验期试验鸡的体增重和料蛋比。
料蛋比 (%)=(试验期采食量/试验期产蛋量)×100。
试验期间，每天记录各重复鸡的产蛋数、日产蛋重、破蛋数和不合格蛋数；其中，不合格蛋包括破损蛋、软壳蛋、沙壳蛋、畸形蛋、双黄蛋和蛋中蛋等。产蛋性能的计算公式如下：
产蛋率 (%)=(产蛋数/试验鸡只存栏数)×100；
平均日产蛋量 (g)=产蛋率×平均蛋重；
平均蛋重 (g)=总蛋重/总产蛋数；
破蛋率 (%)=(破损蛋数/产蛋数)×100；
不合格蛋率 (%)=(不合格蛋数/产蛋数)×100。
1.4.2 蛋品质试验第4周和第8周末时，分别从每个重复中随机选取蛋样4枚，进行蛋品质检测。蛋壳厚度采用千分尺测量去壳膜后的蛋壳钝端、中端和尖端3个点厚度，取其平均值；然后剖离鸡蛋内容物，用吸水纸拭去蛋壳上黏附的蛋清，对蛋壳进行称重。用多功能蛋品质测定仪 (以色列ORKA公司) 测定蛋白高度和蛋黄颜色，用蛋黄分离器分离出完整蛋黄，对蛋黄进行称重。哈氏单位计算公式为：
哈氏单位=100×lg (H-1.7W0.37+7.6)。
式中：H为蛋白高度 (mm)；W为蛋重 (g)。
1.4.3 孵化性能试验第7周开始分别从每个重复中分批次收取种蛋50枚进行孵化，记录各重复的光蛋数、出苗数、健雏数和雏鸡出壳重。孵化性能的计算公式如下：
受精率 (%)=[(入孵蛋数-光蛋数)/入孵蛋数]×100；
孵化率 (%)=(出苗数/入孵蛋数)×100；
弱雏率 (%)=(弱雏数/入孵蛋数)×100。
1.4.4 血浆生化指标结合试验期各重复试验鸡的产蛋水平，于试验结束时每重复选取2只接近平均产蛋率的试验鸡，翅静脉采血6 mL，分离血浆，于-20 ℃冰箱保存。采用Beckman全自动生化分析仪 (CX5，Beckman仪器公司，美国) 及相应分析试剂盒测定血浆丙二醛 (MDA) 含量和总超氧化物歧化酶 (T-SOD) 活性，具体检测方法参照试剂盒说明书进行，检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
1.4.5 蛋中维生素E和Se的含量试验结束后，继续饲喂试验饲粮1 d，VE0Se0组、VE40Se0组、VE0Se0.30组和VE40Se0.30每个重复收集1枚蛋，用于检测蛋中维生素E和Se的含量。利用氢化物-原子荧光光谱法 (GB 5009—2010) 测定饲粮和蛋中的Se含量，利用高效液相色谱法 (GB 5009—2003) 测定饲粮和蛋中的维生素E含量。
1.5 数据统计分析试验数据采用SPSS 17.0软件中的GLM程序进行双因素方差分析，方差分析有显著效应时再进行Duncan氏多重比较分析。统计模型中包括维生素E水平、Se水平、维生素E与Se水平的交互作用。各组试验数据均以“平均值±标准误 (mean±SE)”表示，并以P＜0.05为差异显著性判定标准。
2 结果 2.1 饲粮维生素E和Se添加水平对黄羽肉种鸡产蛋性能的影响由表 2可见，饲粮中维生素E和Se添加水平对黄羽肉种鸡的体增重、平均日产蛋量、料蛋比、平均蛋重、产蛋率、破蛋率和不合格蛋率均无显著影响 (P > 0.05)；饲粮中维生素E和Se添加水平对产蛋性能无显著交互作用 (P > 0.05)。
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表 2 饲粮维生素E和Se添加水平对黄羽肉种鸡产蛋性能的影响 Table 2 Effects of dietary vitamin E and Se levels on laying performance of yellow-feathered broiler breeders |
由表 3和表 4可见，在试验第4周和第8周末，饲粮中维生素E和Se添加水平对黄羽肉种鸡的蛋长径、蛋短径、蛋白高度、蛋黄颜色、哈氏单位、蛋黄重、蛋壳重和蛋壳厚度均无显著影响 (P > 0.05)；饲粮中维生素E和Se添加水平对蛋品质无显著交互作用 (P > 0.05)。
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表 3 饲粮维生素E和Se添加水平对黄羽肉种鸡蛋品质的影响 (第4周末) Table 3 Effects of dietary vitamin E and Se levels on egg quality of yellow-feathered broiler breeders at the end of the 4th week |
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表 4 饲粮维生素E和Se添加水平对黄羽肉种鸡蛋品质的影响 (第8周末) Table 4 Effects of dietary vitamin E and Se levels on egg quality of yellow-feathered broiler breeders at the end of the 8th week |
由表 5可见，饲粮中维生素E和Se添加水平对黄羽肉种鸡健雏出壳重、孵化率、弱雏率和受精率均无显著影响 (P > 0.05)；饲粮中维生素E和Se添加水平对种蛋孵化性能无显著交互作用 (P > 0.05)。
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表 5 饲粮维生素E和Se添加水平对黄羽肉种鸡种蛋孵化性能的影响 Table 5 Effects of dietary vitamin E and Se levels on egg hatching performance of yellow-feathered broiler breeders |
由表 6可见，饲粮中维生素E添加水平对黄羽肉种鸡血浆MDA含量有显著影响 (P < 0.05)；随饲粮中维生素E添加水平的升高血浆MDA含量呈降低趋势，其中维生素E添加水平为40 IU/kg时血浆MDA含量显著低于0 IU/kg时 (P < 0.05)。饲粮中维生素E和Se添加水平对黄羽肉种鸡血浆MDA含量有显著交互作用 (P < 0.05)，其中VE40Se0组的血浆MDA含量显著低于VE0Se0.15和VE0Se0.30组 (P < 0.05)。
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表 6 饲粮维生素E和Se添加水平对黄羽肉种鸡血浆生化指标的影响 Table 6 Effects of dietary vitamin E and Se levels on biochemical parameters in plasma of yellow-feathered broiler breeders |
由表 7可见，随饲粮中维生素E和Se添加水平的升高，黄羽肉种鸡蛋中维生素E和Se含量显著增加 (P < 0.05)；饲粮中维生素E和Se添加水平对蛋中维生素E和Se含量有显著交互作用 (P < 0.05)。
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表 7 饲粮维生素E和Se添加水平对黄羽肉种鸡蛋中维生素E和Se含量的影响 Table 7 Effects of dietary vitamin E and Se levels on vitamin E and Se contents in egg of yellow-feathered broiler breeders |
蔡娟等[15]发现，海兰褐蛋鸡饲喂不同水平酵母硒饲粮对产蛋率、平均蛋重和料蛋比均无显著影响。研究也发现，北京油鸡和罗曼粉杂交产蛋母鸡饲喂0.3~5.0 mg/kg酵母硒饲粮对产蛋性能无显著影响[16]。在大恒种鸡和来航鸡的研究中也发现饲粮中Se水平对种鸡产蛋性能无显著影响[17-18]。以上研究结果说明饲粮中Se水平对种鸡的产蛋性能无显著影响，与本试验结果相一致。呙于明等[19]研究发现，饲粮中添加不同水平的维生素E (4、14和24 mg/kg) 对产蛋种母鸡的产蛋性能无显著影响。张宏馨等[20]研究发现，给海兰褐种母鸡饲喂0~320 IU/kg维生素E饲粮，发现160和320 IU/kg维生素E可显著提高产蛋率，而0~80 IU/kg维生素E对产蛋性能无显著影响。以上研究结果说明，高剂量维生素E对母鸡的产蛋率有提高作用，但低剂量维生素E对母鸡的产蛋性能无显著影响。本试验结果显示，饲粮中添加不同水平的维生素E对黄羽肉种鸡的产蛋性能无显著影响，分析原因可能是本试验中维生素E的添加水平相近于《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004) 的推荐水平 (27 IU/kg)，未表现出高剂量维生素E对产蛋性能的提高作用。
3.2 饲粮维生素E和Se添加水平对黄羽肉种鸡蛋品质和蛋中维生素E和Se沉积量的影响本试验结果显示，饲粮添加不同水平维生素E和Se对黄羽肉种鸡的蛋品质无显著影响，但对蛋中维生素E和Se的沉积量有显著影响，随饲粮中维生素E和Se添加水平的升高，蛋中维生素E和Se含量显著增加。谭芳等[21]研究发现，饲粮中添加1.0~2.0 mg/kg Se和83.32~166.64 IU/kg维生素E对蛋鸡的蛋重无显著影响，但是显著增加了Se和维生素E在蛋中的沉积量。研究也发现，蛋鸡饲粮中添加不同水平的酵母硒对蛋品质无显著影响，但显著提高了蛋黄中Se含量[22-25]。研究认为，饲粮中添加不同水平的维生素E对种鸡的蛋黄颜色、哈氏单位、蛋壳厚度和蛋壳重均无显著影响，但能增加蛋黄中维生素E的沉积量[26-27]。本试验结果提示，提高饲粮维生素E和Se添加水平可以提高蛋中维生素E和Se的含量。
3.3 饲粮维生素E和Se添加水平对黄羽肉种鸡种蛋孵化性能的影响研究发现，饲粮中添加0、20、40、80和160 IU/kg维生素E对蛋鸡的孵化率、受精率和后代鸡的出壳重无显著影响，当维生素E添加水平达到320 IU/kg时，可显著提高种蛋受精率和孵化率[20]；肉种母鸡饲粮中添加100 IU/kg维生素E能够提高雏鸡出壳重[28]。Wahyuni等[29]报道，饲粮中添加维生素E可以提高母鸡种蛋的孵化率。但有研究认为，种鸡饲粮中添加30 mg/kg维生素E能够提高种蛋受精率，但是对孵化率和雏鸡出壳重并无显著影响[30]。以上研究结果说明，维生素E在高剂量添加时能够提高种蛋的孵化性能，而本试验中维生素E的添加水平并不高，所以对种蛋的孵化性能无显著影响，这一点与产蛋性能的结果相似。本试验中，饲粮添加不同水平Se对种蛋的孵化性能无显著影响。张福平等[31]研究发现，贵州黄母鸡饲粮中添加0.5 mg/kg有机硒对受精率和孵化率无显著影响。但有研究报道认为，饲粮中添加总Se量达到0.9~1.3 mg/kg可显著提高种蛋的受精率和出雏率[32]。还有研究发现，当饲粮中蛋氨酸硒的添加水平超过0.25 mg/kg时，种蛋的孵化性能随蛋氨酸硒添加水平的增加而降低[17]。综合以上研究报道结果，Se对于种蛋孵化性能影响的研究结果并不一致，可能与种鸡的品种、周龄、饲养条件和Se的来源不同有关。
3.4 饲粮维生素E和Se添加水平对黄羽肉种鸡血浆生化指标的影响维生素E能够增强体内抗氧化酶的活性，保护细胞膜免受自由基的损伤从而有效提高家禽机体的抗氧化功能[33-34]。Se不仅能够作为抗氧化酶系的组成成分，提高谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px) 和过氧化氢酶 (CAT) 的活性从而发挥抗氧化作用，同时可以通过直接清除血液中的自由基来抵抗自由基对机体的损伤作用[35-37]。本试验结果显示，饲粮中维生素E添加水平对黄羽肉种鸡血浆MDA含量有显著影响，随饲粮维生素E添加水平的升高血浆MDA含量呈降低趋势，且饲粮中维生素E和Se添加水平对血浆MDA含量有显著交互作用。研究报道，饲粮中添加维生素E能够提高机体T-SOD和GSH-Px的活性，降低MDA的含量[38-39]。还有研究则认为在冷应激或者免疫应激状态下，饲粮中添加维生素E缓解应激作用显著[6, 40]。本试验结果提示，提高饲粮中维生素E添加水平能够降低血浆MDA含量，从而缓解黄羽肉种鸡的氧化应激。
3.5 黄羽肉种鸡维生素E和Se需要量探讨本试验结果显示，饲粮中添加0、20、40 IU/kg维生素E对黄羽肉种鸡的产蛋性能、蛋品质和种蛋孵化性能均无显著影响，说明饲粮中不添加维生素E对黄羽肉种鸡的产蛋性能、蛋品质和种蛋孵化性能并无负面影响。目前有关维生素E在种鸡或者蛋鸡上的研究，大多为过量添加维生素E会影响产蛋性能和孵化性能，而完全不添加维生素E的研究报道则较少。张宏馨等[20]研究发现，饲粮中添加0、20、40、80、160和320 mg/kg维生素E，其中0、20、40 mg/kg维生素E对产蛋性能无显著影响，0~160 mg/kg维生素E对孵化性能无显著影响。韩慕俊[41]研究认为，蛋鸡饲粮中维生素E的需要量在无应激因素存在时是很低的，若免疫应激的强度不大且持续时间不长，只能导致一段时间内采食量的下降，对产蛋性能无显著影响。分析原因为：1) 维生素E是脂溶性维生素，而脂溶性维生素可在体内大量贮存，且脂溶性维生素排泄的速度缓慢。在本试验开始前，试验用黄羽肉种鸡饲喂的饲粮符合《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004) 营养需要，维生素E充足且在体内有一定的贮存量。2) 维生素E的主要作用是抗氧化和促进生殖器官发育，随着种鸡年龄的增长，机体自身的抵抗力增加，生殖器官也发育成熟，种鸡通过维生素E增加机体免疫力而提高产蛋性能的作用减弱。研究结果也显示，只有在种鸡或蛋鸡处于应激状态下，维生素E缓解应激的作用才显著[42-43]。
本试验饲粮中添加0、0.15、0.30 mg/kg Se对黄羽肉种鸡的产蛋性能、蛋品质和种蛋孵化性能均无显著影响，说明饲粮中不添加Se对黄羽肉种鸡的产蛋性能、蛋品质和种蛋孵化性能并无负面影响。美国NRC (1994) 确定肉种母鸡的Se最低需要量为0.05 mg/kg，而本试验基础饲粮中Se含量为0.12 mg/kg，说明用非缺Se地区生产出的饲料原料配制而成的饲粮中Se含量已经达到黄羽肉种鸡的需求量。在实际养殖生产中，Se缺乏症也主要发生在肉鸡生长过程中，对于开产种鸡Se缺乏症少有发现，所以种鸡处于正常的生理状态下，普通的玉米-豆粕型饲粮 (非缺Se地区饲料原料) 中Se含量已经可以满足需求量。
饲粮中微量元素主要由原料中的微量元素和添加的微量元素2部分组成，但是实际生产中往往忽略了原料中的微量元素，从而引起了微量元素的过量添加，既造成微量元素的浪费和饲粮成本的增加，同时还给环境带来了污染。目前已有许多研究开始关注微量元素的过量添加问题和基础饲粮中微量元素的含量[44-46]。本试验基础饲粮中含维生素E 3.19 mg/kg、Se 0.12 mg/kg，与其他添加维生素E和Se的试验组相比，产蛋性能、蛋品质和种蛋孵化性能均无显著差异。因此，在无任何应激因素刺激和不使用Se缺乏地区饲料原料的情况下，玉米-豆粕型基础饲粮中的维生素E和Se含量已经能满足黄羽肉种鸡的需要量。
4 结论综合所有试验结果，维生素E可以提高黄羽肉种鸡的抗氧化水平，饲粮中维生素E和Se添加水平可以显著影响蛋中维生素E和Se的含量；在无任何应激因素刺激和不使用Se缺乏地区饲料原料的情况下，黄羽肉种鸡的玉米-豆粕型饲粮可以不用额外添加维生素E和Se。
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