核黄素是合成黄素单核苷酸(FMN)和黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)的重要前体物质。作为很多黄素蛋白的辅酶，FMN和FAD参与生物体内多个代谢过程，如脂肪酸氧化、三羧酸循环、线粒体呼吸链电子传递和氨基酸降解等[1-2]。NRC(1994) 肉鸭饲养标准中，1~3周龄肉鸭核黄素的推荐量为4 mg/kg，但该推荐量仅参考了20世纪早期的2篇文献[3-4]。唐静等[5]研究了生长前期(1~21日龄)北京鸭的核黄素需要量，结果表明，以平均日增重、平均日采食量、料重比、血浆核黄素含量、肝脏核黄素含量为衡量指标，采用折线模型估测1~21日龄北京鸭核黄素需要量为3.19~5.20 mg/kg。然而, 生长后期北京鸭核黄素的需要量目前还没有文献报道，有待进一步研究。因此，本试验拟研究饲粮核黄素水平对15~42日龄雄性北京鸭生长性能和血浆生化指标的影响，以确定其核黄素的需要量，旨在为肉鸭生产实践和饲养标准的制定提供一定的理论依据。
1 材料与方法 1.1 基础饲粮基础饲粮参考NRC(1994) 肉鸭饲养标准配制，其组成及营养水平见表 1。采用高效液相色谱法[6]测得试验鸭基础饲粮中核黄素含量为1.38 mg/kg。
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表 1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis) |
试验采用单因子完全随机试验设计，选取300只1日龄健康的雄性北京鸭，采用基础饲粮饲养至14日龄。于15日龄时选取其中的288只试验鸭，按照体重一致的原则随机分为6个组，每组6个重复，每个重复8只鸭。对照组饲喂基础饲粮(核黄素水平为1.38 mg/kg)，试验组分别饲喂在基础饲粮中添加1.00、2.00、3.00、4.00和5.00 mg/kg核黄素的试验饲粮(核黄素水平分别为2.38、3.38、4.38、5.38、6.38 mg/kg)。试验期为28 d。
采用网上平养，自由采食和饮水，试验期间鸭舍温度由33 ℃按阶段逐步降为22 ℃，采用人工补光制度，24 h光照，其他按常规饲养管理进行。
1.3 测定指标 1.3.1 生长性能试验鸭在42日龄时，进行个体空腹称重，以重复为单位记录耗料量，然后计算平均日增重、平均日采食量和料重比。
1.3.2 血浆生化指标试验鸭在42日龄时，以重复为单位抽取接近平均体重的试验鸭2只，活体进行心脏采血10 mL，放置于经抗凝处理的采血管中，4 ℃、3 000 r/min离心10 min制备血浆，-20 ℃冷冻保存备用。血浆中的核黄素含量采用高效液相色谱法[7]测定。采用日立721型全自动生化仪测定血浆中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性和甘油三酯、总胆固醇含量。
1.4 数据分析全部试验数据用“平均值±标准差”的形式表示，采用SAS 9.0统计软件进行方差分析和回归分析，运用Duncan氏法进行多重比较，显著水平为P＜0.05。采用折线模型拟合北京鸭对核黄素梯度水平的反应。折线模型如下：
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式中：y为平均日增重、平均日采食量、料重比或血浆中核黄素含量；x为各组饲粮中对应的核黄素水平(mg/kg)；r为核黄素需要量；l为北京鸭对饲粮的反应(当x=r时，即拐点时)；u为曲线的陡度。
2 结果 2.1 饲粮核黄素水平对15~42日龄北京鸭生长性能的影响由表 2可以看出，饲粮核黄素水平对15~42日龄北京鸭体重、平均日增重、平均日采食量和料重比均有显著的影响(P＜0.05)。与对照组相比，饲粮中添加核黄素显著提高了15~42日龄北京鸭的平均日增重和平均日采食量(P＜0.05)。
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表 2 核黄素对15~42日龄北京鸭生长性能的影响 Table 2 Effects of dietary riboflavin level on growth performance of Pekin ducks from 15 to 42 days of age |
由表 3可以看出，饲粮核黄素水平对北京鸭血浆AST活性和总胆固醇含量没有显著的影响(P＞0.05)，但对血浆ALT活性和核黄素、甘油三酯含量有显著的影响(P＜0.05)。与对照组相比，饲粮中添加核黄素显著提高了北京鸭血浆核黄素含量(P＜0.05)，随着饲粮核黄素水平的提高，血浆核黄素含量逐渐提高，当饲粮核黄素水平提高至4.38 mg/kg时，血浆核黄素含量趋于稳定。与对照组相比，饲粮中添加核黄素显著降低了北京鸭血浆ALT活性和甘油三酯含量(P＜0.05)。
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表 3 饲粮核黄素水平对42日龄北京鸭血浆生化指标的影响 Table 3 Effects of dietary riboflavin levels on plasma biochemical indices of 42-day-old Pekin ducks |
采用折线模型估测15~42日龄雄性北京鸭核黄素的需要量, 结果见表 4。以平均日增重、平均日采食量、料重比和血浆核黄素含量为评价指标，经模型估测，15~42日龄雄性北京鸭核黄素的需要量分别为2.33、2.36、2.24和2.66 mg/kg。
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表 4 利用折线模型估测15~42日龄北京鸭核黄素需要量 Table 4 Evaluation of riboflavin requirement of Pekin ducks from 15 to 42 days of age by broken line models |
核黄素是合成FMN和FAD的重要前体物质。作为很多黄素蛋白的辅酶，FMN和FAD参与生物体内多个代谢过程，如脂肪酸氧化、三羧酸循环、线粒体呼吸链电子传递和氨基酸降解等[1-2]。国内外多数研究表明，饲粮中缺乏核黄素，家禽生长受阻、饲料利用率降低，饲粮添加核黄素可显著提高家禽生长性能[8-11]。本试验中，核黄素缺乏(1.38 mg/kg)显著抑制了生长后期北京鸭生长性能，显著了降低平均日增重和平均日采食量，增加了料重比。而饲粮中添加核黄素能显著提高平均日增重和平均日采食量，并降低料重比，这与前人在生长前期北京鸭上的试验结果[5]是一致的。在生长前期北京鸭试验中，唐静等[5]报道饲喂基础饲粮(核黄素含量为1.20 mg/kg)的试验鸭表现为死亡率高、脖子紧缩、部分瘫痪在地、羽毛粗乱、腹泻，而本试验中并没有观察到这些现象，这可能是由于生长后期北京鸭核黄素需要量低于生长前期。
3.2 饲粮核黄素水平对北京鸭血浆生化指标的影响血浆核黄素含量是反映机体核黄素营养状况的敏感指标[5, 12-15]。徐琪寿等[12]的研究表明，饲喂核黄素缺乏的饲粮4周后，大鼠血浆核黄素含量仅为对照组的8.1%。饲喂核黄素缺乏的饲粮3周后，21日龄北京鸭核黄素含量仅为对照组的15%[16]。本试验中，15日龄北京鸭饲喂核黄素缺乏的饲粮4周后，42日龄北京鸭血浆核黄素含量降为对照组的15.3%，说明血浆核黄素含量能够敏感地反映北京鸭核黄素的营养状况，这与前人的研究结果[12, 16]一致。饲粮中核黄素水平达到4.38 mg/kg时，血浆中核黄素含量达到稳定水平，不再随饲粮核黄素水平升高而升高，这与前人的研究结果[5, 10]一致。
国内外很多研究证实了核黄素具有抗氧化功能[10-11, 17-18]。核黄素缺乏时细胞膜功能和流动性改变，抗氧化能力降低[18]。血浆中ALT和AST活性是反映肝功能的敏感指标，其活性与肝脏受损程度呈正相关[19]。本试验表明，饲粮中不添加核黄素导致生长后期北京鸭血浆ALT活性显著提高，表明细胞膜受到损伤，可能是由于饲粮中核黄素不足导致机体细胞膜发生脂质过氧化，进而导致细胞膜通透性增强。
大鼠上的研究显示，饲粮核黄素缺乏可导致脂肪肝[20]。本试验中，饲粮核黄素缺乏导致生长后期北京鸭血浆甘油三酯含量显著提高，原因可能与脂酰辅酶A脱氢酶(依赖FAD)活性降低进而阻碍脂肪酸β氧化有关[21]。
3.3 15~42日龄北京鸭核黄素需要量的确定NRC(1994) 肉鸭饲养标准中，1~3周龄肉鸭核黄素的推荐量为4 mg/kg，但该推荐量仅参考了20世纪早期的2篇文献[3-4]，而生长后期肉鸭核黄素的需要量还没有文献报道。因此，本试验旨在探究生长后期北京鸭核黄素的需要量，为肉鸭核黄素饲养标准的制定提供参考。目前折线模型已普遍用于估测动物核黄素的需要量[5, 22-24]。唐静等[5]研究了生长前期北京鸭核黄素的需要量，以平均日增重、平均日采食量、料重比、血浆核黄素含量及肝脏核黄素含量为评价指标，采用折线模型估测生长前期雄性北京鸭核黄素需要量分别为3.31、3.24、5.20、3.82和3.91 mg/kg。故本试验也采用折线模型估测了生长后期雄性北京鸭核黄素需要量，以平均日增重、平均日采食量、料重比和血浆核黄素含量为评价指标，估测核黄素的需要量分别为2.33、2.36、2.24和2.66 mg/kg。由此可见，生长后期北京鸭核黄素需要量低于生长前期。这与Heuser等[25]的研究结果是一致的，该研究发现2~8周龄白来航鸡核黄素需要量随着日龄的增加逐渐降低。本试验用折线模型估测的需要量低于NRC(1994) 对2~7周龄北京鸭核黄素的推荐量(4 mg/kg)。
4 结论本试验条件下，饲粮中添加核黄素可显著提高15~42日龄北京鸭生长性能和血浆核黄素含量。以平均日增重、平均日采食量、料重比和血浆核黄素含量为评价指标，采用折线模型估测15~42日龄雄性北京鸭核黄素需要量为2.24~2.66 mg/kg。
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