磷脂影响日本沼虾对饲料中脂肪的需要量

引用本文

王志, 崔广同, 蔡春芳, 任胜杰, 邱小亮, 丁惠明, 张卫业, 叶元土. 磷脂影响日本沼虾对饲料中脂肪的需要量[J]. 动物营养学报, 2018, 30(6): 2235-2244. 复制到剪切板

WANG Zhi, CUI Guangtong, CAI Chunfang, REN Shengjie, QIU Xiaoliang, DING Huiming, ZHANG Weiye, YE Yuantu. Phospholipid Affects Dietary Lipid Requirement of Oriental River Prawn (Macrobrachium nipponensis)[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2018, 30(6): 2235-2244. 复制到剪切板

磷脂影响日本沼虾对饲料中脂肪的需要量

王志¹, 崔广同¹, 蔡春芳¹, 任胜杰¹, 邱小亮¹, 丁惠明², 张卫业², 叶元土¹

1. 苏州大学基础医学与生物科学学院, 江苏省水产动物与营养重点实验室, 苏州 215123;
2. 苏州市阳澄湖国家现代农业示范区发展有限公司, 苏州 215123

收稿日期: 2017-11-27

基金项目: 江苏省农业科技自主创新资金项目[CX（15）1012-6]

作者简介: 王志(1991-), 男, 安徽亳州人, 硕士研究生, 研究方向为水生生物学。E-mail:1054303791@qq.com

通信作者: 蔡春芳, 教授, 博士生导师, E-mail:caicf@suda.edu.cn.

摘要: 本试验旨在探讨饲料中磷脂对日本沼虾（Macrobrachium nipponense）脂肪需要量的影响。选取初始体重为（0.075±0.001）g的日本沼虾为试验对象，在室内养殖缸中进行为期8周的生长试验。将鱼油和豆油等比例混合均匀，再与大豆磷脂分别按2:1和1:2混合，使得大豆磷脂分别占脂类混合物的33.3%（低磷脂组）和66.7%（高磷脂组）。将2种脂类混合物分别按3%（低脂肪组）、6%（中脂肪组）、9%（高脂肪组）的比例添加到饲料中，配制出6种等氮等能的试验饲料。根据试验饲料中脂类混合物添加量和大豆磷脂添加量，将6种试验饲料分别命名为L3P1、L3P2、L6P2、L6P4、L9P3、L9P6，实测试验饲料中脂肪水平分别为7%、7%、10%、10%、13%、13%。每种试验饲料投喂4缸试验虾，每缸放养150尾。结果表明：6组日本沼虾的成活率在47.8%~66.9%，以L6P4组成活率最高，其次是L3P2组，以L9P3组最低。高脂肪组的终末体重、增重率、特定生长率和成活率显著低于中、低脂肪组（P < 0.05），饲料系数显著高于中、低脂肪组（P < 0.05）。高磷脂组终末体重、增重率、特定生长率和成活率显著高于低磷脂组（P < 0.05），饲料系数显著低于低磷脂组（P < 0.05）。脂类混合物添加量和大豆磷脂比例对各生长性能指标均有显著的交互作用（P < 0.05）。虾体粗脂肪含量随着饲料脂肪水平的升高而显著升高（P < 0.05），但高磷脂组虾体粗脂肪含量显著低于低磷脂组（P < 0.05）。高脂肪组肝胰腺类胰蛋白酶和脂肪酶活性显著低于中、低脂肪组（P < 0.05）；高磷脂组肝胰腺脂肪酶活性显著高于低磷脂组（P < 0.05）。脂类混合物添加量和大豆磷脂比例对肝胰腺脂肪酶活性有显著的交互作用（P < 0.05）。脂类混合物添加量对肝胰腺超氧化物歧化酶（SOD）活性和总抗氧化能力（T-AOC）有显著影响（P < 0.05），而大豆磷脂比例对二者无显著影响（P>0.05），但脂类混合物添加量和大豆磷脂比例对肝胰腺T-AOC有显著的交互作用（P < 0.05）。上述结果提示，日本沼虾饲料中磷脂应与脂肪保持一定的比例。根据本试验结果，饲料中脂肪水平为10%、大豆磷脂添加量为4%时对日本沼虾比较适宜。

关键词: 日本沼虾磷脂脂肪生长性能消化酶抗氧化能力

Phospholipid Affects Dietary Lipid Requirement of Oriental River Prawn (Macrobrachium nipponensis)

WANG Zhi¹, CUI Guangtong¹, CAI Chunfang¹, REN Shengjie¹, QIU Xiaoliang¹, DING Huiming², ZHANG Weiye², YE Yuantu¹

1. Key Laboratory of Aquatic Nutrition of Jiangsu Province, School of Biology and Basic Medical Sciences, Soochow University, Suzhou 215123, China;
2. Suzhou Yangchenghu National Modern Agricultural Industrial Park Co., Ltd., Suzhou 215123, China

Corresponding author: CAI Chunfang, professor, E-mail:caicf@suda.edu.cn.

Abstract: This experiment was carried out to investigate the effects of dietary phospholipid on the requirement of lipid for oriental river prawn (Macrobrachium nipponensis). The oriental river prawns with the initial body weight of (0.075±0.001) g were fed in indoor tanks and fed experimental diets for 56 days. Fish oil and soybean oil was mixed with the equal proportion first. Next, soybean phospholipid was mixed into the mixture of fish oil and soybean oil at the ratio of 33% (low-phospholipid group) and 67% (high-phospholipid group), respectively, then each lipid mixture was supplemented into diet at 3% (low-lipid group), 6% (middle-lipid group) and 9% (high-lipid group), respectively, to formulate six isonitrogenous and isoenergetic diets, which were named as L3P1, L3P2, L6P2, L6P4, L9P3 and L9P6 according to the additions of lipid mixture and soybean phospholipid, and the measured lipid level in those diets was 7%, 7%, 10%, 10%, 13% and 13%, respectively. Each diet was fed 4 tanks and each tank cultured 150 shrimps. The results showed that the survival rate of shrimps in six groups ranged from 47.8% to 66.9%. Among them, the survival rate of shrimps in L6P4 group was the highest, followed by L3P2 group, and the lowest in L9P3 group. The final body weight, weight gain rate, specific growth rate and survival rate in the high-lipid group were significantly lower than those in the middle-and low-lipid groups (P < 0.05), and the feed conversion ratio was significantly higher than that in the middle-and low-lipid groups (P < 0.05). The final body weight, weight gain rate, specific growth rate and survival rate in the high-phospholipid group were significantly higher than those in the low-phospholipid group (P < 0.05), and the feed conversion ratio was significantly lower than that in the low-phospholipid group (P < 0.05). The addition of lipid mixture and the proportion of soybean phospholipid had significant interactions in growth performance indexes of shrimps (P < 0.05). Body ether extract content was significantly increased with dietary lipid level increasing (P < 0.05), however, the body ether extract content of shrimps in the high-phospholipid group was significantly lower than that in the low-phospholipid group (P < 0.05). The activities of trypsin and lipase in hepatopancreas of shrimps in high-lipid group was significantly lower than that in middle-and low-lipid groups (P < 0.05); the activity of lipase in hepatopancreas of shrimps in high-phospholipid group was significantly higher than that in low-phospholipid group (P < 0.05), and a significant interaction between the addition of lipid mixture and the proportion of soybean phospholipid was detected (P < 0.05). The activities of superoxide dismutase (SOD) and total antioxidant capacity (T-AOC) in hepatopancreas of shrimps were influenced by the addition of lipid mixture (P < 0.05), but the proportion of soybean phospholipid had no significant effects on them (P>0.05). However, the addition of lipid mixture and proportion of soybean phospholipid had a significant interaction in hepatopancreas T-AOC (P < 0.05). These results indicate that phospholipid should be kept in a proper proportion with lipid in the diet, and it is relative optimal when the dietary lipid level is 10% and the phospholipid addition is 4% for oriental river prawn.

Key words: oriental river prawn (Macrobrachium nipponensis) phospholipid lipid growth performance digestive enzymes antioxidant capacity

日本沼虾(Macrobrachium nipponense)，俗称青虾，具有营养价值高、食性杂、生长快、繁殖力强等特点，是我国淡水养殖虾类的重要品种，仅2016年的产量就达27.26万t，同比上年增长2.8%^[1]。

关于日本沼虾营养需求的研究已有不少报道，已知日本沼虾对蛋白质的需要量在38.0%~41.5%^[2-3]，对脂肪的需要量在6%~12%^[4-5]，对维生素E的需要量在66.07~212.68 mg/kg^[6]，对维生素B₆的需要量为80 mg/kg^[7]。然而，关于饲料磷脂水平对日本沼虾影响的研究相对较少，相关研究也是多关注在不同脂肪源的比较上^{[2, 8]}。

甲壳类动物消化系统形态和结构与脊椎动物存在较大差异，例如，甲壳类动物没有胆囊。胆囊的缺失提示甲壳类动物对脂质的乳化作用可能不及脊椎动物。而磷脂是一种具有双亲性的生物活性物质，能增强食物中脂质的乳化，促进甘油三酯、胆固醇和一些脂溶性营养物质的吸收与转运^[9]。已有大量研究证实磷脂是虾类生长和存活所必需的^[10-13]。磷脂是否能促进日本沼虾的生长和存活以及对脂类的吸收利用目前还不清楚。因此，本试验拟在不同脂肪水平下研究饲料磷脂水平对日本沼虾生长和生理的影响，旨在揭示饲料磷脂水平对日本沼虾脂肪需要量的影响，为甲壳类脂质营养生理理论的发展提供科学依据。

1 材料与方法 1.1 饲料制作

试验以大豆磷脂、鱼油和大豆油为磷脂来源。试验用大豆磷脂由苏州鑫裕饲料有限公司提供，其中磷脂酰胆碱含量为15%，磷脂酰乙醇胺的含量为13%，磷脂酰肌醇含量为9%；试验用鱼油为深海鳀鱼油，大豆油为金龙鱼大豆油。将鱼油和豆油等比例混合均匀，再与大豆磷脂分别按2 : 1和1 : 2混合，即大豆磷脂分别占脂类混合物的33.3%(低磷脂组)和66.7%(高磷脂组)。将2种脂类混合物分别按3%(低脂肪组)、6%(中脂肪组)、9%(高脂肪组)的比例添加到饲料中，配制出6种等氮等能的试验饲料。根据试验饲料中脂类混合物添加量和大豆磷脂添加量，将6种试验饲料分别命名为L3P1、L3P2、L6P2、L6P4、L9P3、L9P6，实测试验饲料中脂肪水平分别为7%、7%、10%、10%、13%、13%。试验饲料组成及营养水平见表 1。制备饲料颗粒时，首先将各种固态原料经粉碎机(1500型，永康市兆申电器有限公司)粉碎，过80目筛并经搅拌机(B-20型，广州市番禺力丰食品机械厂)搅拌，充分混合均匀，其中维生素和矿物质等微量原料采用逐级扩大法混合，再加入脂类混合物手工搓匀，继而加入40%的蒸馏水混合均匀，用双螺杆挤条机(自行研制的设备)压制成粒径为1.0 mm的饲料，风干后放入-20 ℃冰箱中保存备用。

表 1 试验饲粮组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (DM basis)

g/kg
项目 Items	饲料Diets
项目 Items	L3P1	L3P2	L6P2	L6P4	L9P3	L9P6
原料Ingredients
鱼粉Fish meal	300	300	300	300	300	300
豆粕Soybean meal	100	100	100	100	100	100
乌贼膏Squid paste	30	30	30	30	30	30
花生粕Peanut meal	80	80	80	80	80	80
菜籽粕Rapeseed meal	60	60	60	60	60	60
棉籽粕Cottonseed meal	40	40	40	40	40	40
玉米蛋白粉Corn gluten meal	40	40	40	40	40	40
α-淀粉α-starch	240	240	180	180	120	120
鱼油与豆油混合物Mixture of fish oil and soybean oil (1:1)	20	10	40	20	60	30
大豆磷脂Soybean phospholipids	10	20	20	40	30	60
矿物质与维生素预混料Mineral and vitamin premix¹⁾	20	20	20	20	20	20
蜕壳素Each molt	1	1	1	1	1	1
螺旋藻Spirulina powder	30	30	30	30	30	30
磷酸二氢钙Ca(H₂PO₄)₂	15	15	15	15	15	15
胆固醇Cholesterol	2	2	2	2	2	2
黏合剂Adhesive	5	5	5	5	5	5
羧甲基纤维素钠CMC-Na	7	7	37	37	67	67
合计Total	1 000	1 000	1 000	1 000	1 000	1 000
营养水平Nutrient levels²⁾
水分Moisture	98	96	101	99	100	103
粗蛋白质CP	408	410	412	409	407	410
粗脂肪EE	70	70	101	101	128	130
粗灰分Ash	76	77	74	79	74	76
总能GE/(MJ/kg)	19.54	20.23	19.77	19.52	20.33	19.64
¹⁾矿物质与维生素预混料为每千克饲料提供Mineral and vitamin premix provided the following per kg of diets：Cu 2.0 mg，Zn 34.3 mg，Fe 20.9 mg，Mn 6.2 mg，Se 0.18 mg，I 1.61 mg，Mg 52 mg，Co 0.24 mg，VA 16 000 IU，VD₃ 8 000 IU，VE 160 mg，VK₃ 14.70 mg，VB₁ 17.8 mg，VB₂ 48 mg，VB₆ 29.52 mg，VB₁₂ 240 mg，VC (35%) 800 mg，烟酸胺niacinamide 79.2 mg，D-泛酸钙calcium-D-pantothenate 73.6 mg，叶酸folic acid 6.4 mg，生物素biotin 640 μg，肌醇inositol 320 mg。 ²⁾实测值Measured values。

表 1 试验饲粮组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (DM basis)

1.2 试验虾和养殖管理

试验在苏州市相城区阳澄湖现代农业产业园有限公司的配载中心(江苏省企业研究生工作站进行)。试验用虾苗购自本地虾苗繁育场，幼虾初始体重为(0.075±0.001) g，健康无病，规格整齐。试验虾在养殖水池暂养15 d，禁食24 h后分于24个100 cm×100 cm×100 cm的塑料缸内饲养，养殖缸盛水约300 L，并放置有生物性和非生物性的虾体附着物。每缸放养150尾。每种试验饲料投喂4缸试验虾，试验饲料随机分配。每天07:30和18:30各投喂1次，饱食投喂，发现死亡虾捞出并称重。试验用水为纱网过滤、沉淀24 h后的湖水。试验期间水体pH为7.5~8.1，氨氮浓度低于0.05 mg/L，连续增氧保持溶氧浓度在6.2~7.1 mg/L。每天排污1次，隔天换水1/3，水温24~28 ℃。饲养4周时称重1次，饲养8周后，禁食24 h后开始采样。

1.3 测定指标与方法 1.3.1 生长性能测定

将每缸所有日本沼虾捞出后分别称总重，记录尾数，用于计算增重率(WGR)、成活率(SR)、特定生长率(SGR)及饲料系数(FCR)。各生长性能指标计算公式如下：

增重率(%)＝100×(终末体重-初始体重)/初始体重；

成活率(%)＝100×终末虾尾数/初始虾尾数；

特定生长率(%)＝100×(ln终末体重-ln初始体重)/饲养天数；

饲料系数＝干物质摄入量/虾体增重。

1.3.2 肝胰腺消化酶活力和抗氧化指标的测定

从每缸中随机选取8尾日本沼虾，冰浴短暂麻醉，用磷酸盐缓冲液(PBS)缓慢冲洗，吸水纸吸去表面水分，在无菌操作箱(xw-80，泰州市高港鑫伟试验设备厂)中取其肝胰腺，剪碎混匀后，取0.5 g左右组织样品，加入9倍体积质量分数为0.8%的生理盐水制成10%的组织匀浆液，3 000 r/min离心10 min，取上清液，用于测定肝胰腺中消化酶活性和抗氧化指标。淀粉酶(amylase)、类胰蛋白酶(typtase)、脂肪酶(lipase)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及总抗氧化能力(T-AOC)与总蛋白含量均采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒测定。

1.3.3 肝胰腺组织学观察

制作冷冻切片观察肝胰腺组织学，样品制备参考周永梅等^[14]的方法，稍作修改。每缸取3尾日本沼虾，冰浴麻醉状态下取其肝胰腺，用OCT包埋剂包埋后，用Leical 1900(德国Leical公司)冷冻切片机切片，切片10 μm厚，黏附在载破片上，然后采用苏丹Ⅲ染液染色，70%乙醇洗去多余染液，甘油明胶封片液封片，采用OLYMPUS BX 51(日本Olympus公司)显微成像系统观察和拍摄肝胰腺组织形态。

1.3.4 营养成分分析

采集饲料样品用于饲料概略养分分析，收集剩余的虾用于体成分分析。其中，水分含量测定采用低温冷冻干燥法(LJB 18型冷冻干燥机，北京四环科学仪器厂有限公司)；粗蛋白质含量测定采用凯氏定氮法(GB 5009.5—2010；所用消化仪：LNK 87型，江苏省宜兴市科教仪器研究所；蒸馏仪：KN 520型，济南阿尔瓦仪器有限公司)；粗脂肪含量测定采用索氏抽提法(GB/T 14772—2008)。饲料的总能采用全自动氧弹量热仪(PARR 6300型，上海昌吉地质仪器有限公司)测定；粗灰分含量采用GB 5009.4—2010中方法测定，样品先于200 ℃碳化至不冒烟，再于550 ℃陶瓷纤维马弗炉中(8-10TP型，上海慧泰仪器制造有限公司)灼烧至恒重。

1.4 数据分析

所有数据以平均值±标准差表示。数据分析使用SPSS 11.0软件进行，采用单因素方差分析(one-way ANOVA)和双因素方差分析(two-way ANOVA)程序对数据进行分析，并采用Duncan氏法进行多重比较，显著性水平设为P < 0.05。

2 结果与分析 2.1 生长性能

由表 2可知，脂类混合物添加量和大豆磷脂比例对日本沼虾的终末体重、增重率、特定生长率、饲料系数和成活率均存在显著影响(P < 0.05)，且二者的交互作用对日本沼虾的终末体重、增重率、特定生长率也存在显著影响(P < 0.05)。各组日本沼虾的成活率介于47.8%~66.9%，以L6P4组成活率最高。方差分析结果显示，低和中脂肪组的成活率高于高脂肪组(P < 0.05)，高磷脂组成活率显著高于低磷脂组(P < 0.05)。增重率和特定生长率均以L6P4组最高，其次是L3P2组，二者显著高于其他各组(P < 0.05)。方差分析结果显示，随着脂肪水平升高，增重率和特定生长率均逐渐下降，而高磷脂组显著高于低磷脂组(P < 0.05)。各组间饲料系数的差异与增重率和特定生长率相反。

表 2 日本沼虾的生长性能 Table 2 Growth performance of oriental river prawn (Macrobrachium nipponensis) (n=4)

2.2 体成分

由表 3可知，脂类混合物添加量和大豆磷脂比例对日本沼虾的虾体粗脂肪含量存在显著影响(P < 0.05)，而对虾体粗蛋白质和水分含量无显著影响(P>0.05)，且二者的交互作用对虾体粗脂肪、粗蛋白质和水分含量均无显著影响(P>0.05)。方差分析结果显示，虾体粗脂肪含量以L9P3组最高，显著高于其他各组(P < 0.05)；随着饲料中脂肪水平的升高，虾体粗脂肪含量显著上升(P < 0.05)；高磷脂组虾体粗脂肪含量显著低于低磷脂组(P < 0.05)。

表 3 日本沼虾的体成分以及肝胰腺消化酶活性和抗氧化指标 Table 3 Body composition, the activities of digestive enzymes and the antioxidant indices in hepatopancreas of oriental river prawn (Macrobrachium nipponensis) (n=4)

项目 Items	体成分 Body composition/%			肝胰腺消化酶活性 Digestive enzyme activities in hepatopancreas			肝胰腺抗氧化指标 Antioxidant indices in hepatopancreas
项目 Items	水分 Moisture	粗蛋白质 CP	粗脂肪 EE	类胰蛋白酶 Typtase/ (U/μg prot)	脂肪酶 Lipase/ (U/g prot)	淀粉酶 Amylase/ (U/mg prot)	超氧化物歧化酶SOD (U/μg prot)	总抗氧化能力T-AOC/ (U/μg prot)
组别Groups
L3P1	78.31±0.31	14.32±0.34	1.07±0.11^cd	2.92±0.24^abc	298.26±24.40^b	0.124±0.013	106.74±11.50^bc	0.45±0.12^d
L3P2	78.35±0.41	14.33±0.95	0.97±0.06^d	3.13±0.67^ab	361.01±33.16^a	0.128±0.015	128.87±17.00^ab	1.22±0.38^bc
L6P2	78.62±0.76	14.42±0.50	1.52±0.07^b	2.78±0.51^abc	261.26±19.04^b	0.132±0.024	144.63±22.49^a	0.85±0.07^cd
L6P4	77.89±0.81	14.56±0.70	1.20±0.09^c	3.35±0.46^a	359.93±34.59^a	0.172±0.038	133.44±12.84^ab	0.96±0.19^c
L9P3	78.83±0.74	13.92±1.93	1.71±0.15^a	2.28±0.12^c	182.91±7.29^c	0.160±0.035	74.57±12.00^d	1.73±0.26^a
L9P6	78.39±1.02	14.46±1.02	1.47±0.11^b	2.52±0.16^bc	200.73±10.43^c	0.134±0.025	86.17±10.92^cd	1.57±0.32^ab
脂类混合物添加量Addition of lipid mixture (L)/%
3	78.33	14.33	1.02^c	3.03^a	329.63^a	0.126	117.80^b	0.83^b
6	78.25	14.49	1.36^b	3.07^a	310.59^a	0.152	139.04^a	0.91^b
9	78.97	14.19	1.60^a	2.40^b	191.82^b	0.147	80.37^c	1.65^a
大豆磷脂比例Proportion of soybean phospholipids (P)/%
33.3	78.82	14.22	1.43^a	2.66	247.48^b	0.139	108.65	1.01
67.7	78.21	14.50	1.22^b	3.00	307.22^a	0.145	116.16	1.25
方差分析P值P-value of ANOVA
脂类混合物添加量L	0.316	0.871	< 0.001	0.027	< 0.001	0.268	< 0.001	< 0.001
大豆磷脂比例P	0.154	0.625	0.001	0.107	0.004	0.648	0.309	0.063
交互作用 Interaction	0.489	0.887	0.180	0.719	0.039	0.159	0.188	0.017

2.3 肝胰腺消化酶活性和抗氧化指标

由表 3可知，脂类混合物添加量和大豆磷脂比例及二者的交互作用对日本沼虾的肝胰腺淀粉酶活性影响不显著(P>0.05)。日本沼虾的肝胰腺类蛋白酶和脂肪酶活性均受脂类混合物添加量的显著影响(P < 0.05)，并均表现为高脂肪组显著低于中和低脂肪组(P < 0.05)。日本沼虾的肝胰腺脂肪酶活性也受大豆磷脂比例的显著影响(P < 0.05)，高磷脂组显著高于低磷脂组(P < 0.05)。此外，脂类混合物添加量和大豆磷脂比例对脂肪酶活性还具有显著的交互作用(P < 0.05)。

由表 3可知，日本沼虾的肝胰腺SOD活性和T-AOC均受脂类混合物添加量的显著影响(P < 0.05)，而大豆磷脂比例对二者的影响不显著(P < 0.05)。随着饲料脂肪水平的升高，肝胰腺SOD活性先升高后下降，而T-AOC则逐渐上升。此外，脂类混合物添加量和大豆磷脂比例对日本沼虾肝胰腺T-AOC还具有显著的交互作用(P < 0.05)。

2.4 肝胰腺组织学观察

光学显微镜下观察发现，L3P1、L3P2组日本沼虾肝胰腺中脂肪滴细小且较少，L6P2、L6P4组出现较大的脂肪颗粒，而L9P3、L9P6组这2个高脂肪水平组日本沼虾肝胰腺中脂肪滴密集但细小，且L9P3组脂肪颗粒数量要多于L9P6组(图 1)。

A:L3P1组; B:L3P2组; C:L6P2组; D:L6P4组; E和G:L9P3组; F和H:L9P6组。肝胰腺组织中染成黄色的为脂肪滴。 A:group L3P1; B:group L3P2; C:group L6P2; D:group L6P4; E and G:group L9P3; f and h:group L9P6. Lipid granules are stained yellow in hepatopancreas tissue. 图 1 日本沼虾肝胰腺冷冻切片 Figure 1 Frozen sections of hepatopancreas for oriental river prawn (Macrobrachium nipponensis)

3 讨论

虾类的生长和存活易受水环境中的一些胁迫因子的影响，如水体中氨氮浓度^[15]、亚硝酸盐浓度^[16]、pH^[17]、溶氧浓度^[18]等；此外，日本沼虾喜营附着生活，附着基的数量和质量也影响其生长和存活。本试验中，养殖用水为过滤沉淀后的阳澄湖水，同时养殖缸内投放盆栽伊乐藻供日本沼虾依附攀爬，并采用纳米管充氧，溶氧量高，气泡细小均匀，养殖过程中所监测的水质因子均在日本沼虾生长的安全阈值内，为日本沼虾的生长、脱壳、攀附营造了一个合适的条件。8周的生长试验结果显示，各组日本沼虾的成活率在47.8%~66.8%，增重率在173.67%~272.02%，饲料系数在1.31~1.70，表明日本沼虾生长良好，试验结果能够充分反映饲料的差异。

本研究中，双因素方差分析结果显示脂类混合物添加量为6%(饲料脂肪水平为10%)时日本沼虾的成活率最高，但增重率却显著低于脂类混合物添加量为3%(饲料脂肪水平为7%)时。尽管如此，这2组的特定生长率和饲料系数差异不显著，且单因素方差分析结果显示，L6P4组(饲料脂肪水平为10%)日本沼虾的特定生长率最高。日本沼虾具有相互残杀的习性，因此拥挤胁迫效应比较明显。本课题组在前期研究中发现放养密度高时日本沼虾成活率往往偏低，而相同放养密度下成活率低时个体增重率往往较高。考虑到高成活率导致的拥挤胁迫效应，有理由相信饲料中10%的脂肪水平比较接近日本沼虾对脂肪的需要量。

Hari等^[19]发现罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)在饲料脂肪水平为6%~8%时生长最好，若如果脂肪水平过高(>12%)，则对其生长有负面效应。黄凯等^[20]研究发现，凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)在饲料脂肪水平为8.47%时增重率和成活率最高，饲料脂肪水平过高或过低时对生长有一定抑制作用。本试验结果显示，饲料脂肪水平由10%提高到13%时，日本沼虾的特定生长率大幅度下降，与上述报道相支持。此外，有研究表明脂肪酶的活性会受到饲料脂肪水平的诱导，且二者具有一定的相关性^[21]。本试验中消化酶活性测定结果表明，饲料脂肪水平为13%时，日本沼虾肝胰腺中类胰蛋白酶、脂肪酶的活性显著低于饲料脂肪水平为10%和7%时。肝胰腺是甲壳动物重要的消化及吸收器官，消化酶活性下降提示消化吸收能力下降，这可能是其前期体内脂肪积累较多后的自我调节作用。本研究结果还显示，投喂高脂饲料(饲料脂肪水平为13%)的日本沼虾体脂含量最高(表 3)，肝组织中脂肪积累也最高(图 1)。

甲壳类动物幼体自身合成磷脂能力有限^[22]，因此饲料中添加不同形态的磷脂是仔虾及幼虾生长和存活所必需的^[10-13]。在凡纳滨对虾^{[10, 12]}和斑节对虾^[23]的研究中均发现，随着饲料磷脂水平的升高，幼虾的生长性能显著提高。Sui等^[24]研究发现，饲料中添加适量卵磷脂可以加快中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)蚤状幼体和大眼幼体的蜕壳和生长，提高其成活率。侯迎梅等^[25]研究发现，饲料中适宜水平(41.96 g/kg)的大豆磷脂可以提高三疣梭子蟹幼蟹的生长性能和饲料利用率。此外，由于大豆磷脂富含不饱和脂肪酸，对幼龄动物器官发育、机体成长也具有非常重要的促进作用^[26-28]。本试验结果表明，高磷脂饲料更有利于日本沼虾的生长，饲料效率更高，与上述报道相支持。

已有研究表明，饲料中补充磷脂可以提高脂质的利用效率^[29]。本试验结果显示，饲料脂肪(以脂类混合物添加量显示)与磷脂水平(以大豆磷脂比例显示)对日本沼虾生长性能(表 2)、肝胰腺脂肪酶活性(表 3)及肝胰脏T-AOC(表 3)具有显著的交互作用，对成活率的交互作用也趋于显著(表 2)，表现为随着磷脂水平的升高，高脂肪组日本沼虾的生长性能更好，成活率更高，脂肪酶活性增强，体脂(表 3)和肝脂(图 1)含量降低。这可能是由于大豆磷脂分子中存在疏水性的脂肪酸链和亲水基团，可起到表面活性剂和乳化剂的作用，能将进入小肠内的脂肪进一步分散，增大脂肪及脂溶性物质与肠黏膜的接触面积，从而提高脂肪的消化吸收率。同时，磷脂是脂蛋白装配和分泌所必需的成分，对乳糜微粒或脂蛋白的合成和分泌有特殊作用^[30]，可以通过对脂蛋白合成的影响来调节机体内脂类的代谢。这一现象提示日本沼虾饲料中脂肪和磷脂应保持一定的比例关系，但其适宜的比例关系还有待于进一步研究。

正常情况下，体内自由基的产生和清除处于平衡状态中，SOD与T-AOC是生物体清除活性氧自由基能力的重要表征。磷脂具有抗氧化性^[31]。徐丽珊等^[32]发现大豆磷脂可提高小鼠肝脏抗氧化能力，且高磷脂组显著高于低磷脂组。本研究结果发现，饲料磷脂比例对日本沼虾肝胰腺SOD活性和T-AOC均无显著影响(表 3)，这可能与磷脂的乳化特性有关，当添加量超过其临界胶束浓度后，磷脂的乳化能力趋于稳定，乳化效果不再增强^[33]。

4 结论

综上所述，日本沼虾饲料中脂肪与磷脂间应保持一定的比例。根据本试验结果，饲料中脂肪水平为10%、大豆磷脂添加量为4%时对日本沼虾比较适宜。

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