随着经济发展和社会消费水平的不断提高，人们对水产品的需求越来越大，水产养殖行业普遍采用了规模化、集约化的发展模式。这种模式确实给广大养殖户带来了可观的经济效益，但是养殖环境的恶化、病害的频发以及药物残留等一系列问题日益突出。这些问题严重阻碍了水产养殖行业的可持续发展，也威胁着人类的健康。因此，寻找一种绿色、安全、无残留的免疫增强剂来代替抗生素等化学药物成为广大科研工作者和养殖户密切关注和亟待解决的问题。

枸杞(Lycium barbarum L.)是管状花木，茄科，枸杞属的一种落叶灌木。在我国，枸杞的果实是一种传统的食药兼用的名贵中药材。世界上枸杞属植物共有70种，主要分布于南非、欧亚大陆、美洲和澳大利亚的亚热带地区^[1]，西北地区是我国枸杞的主要产地。枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide，LBP)是从枸杞中提取的总含量大约占枸杞重量3.36%的水溶性多糖^[2]。枸杞多糖因具有提高动物生产性能^[3-5]、增强免疫力^[6-8]、抗氧化^[9-11]、降糖调脂^[12-14]、保肝护肝^[15]等功效成为当前枸杞研究领域内的热点之一。枸杞多糖在水产养殖中的应用研究也在逐步展开。吴旋^[16]研究发现，在黄颡鱼饲料中添加适量的枸杞多糖可以显著提高其增重率并降低饲料系数，同时显著提高其非特异性免疫力。研究表明，枸杞多糖还能提高金丝鱼^[17]、草鱼^[18]和鲫鱼^[19]的非特异性免疫力。

卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)，俗称金鲳，隶属硬骨鱼纲，鲈形目，鲹科，主要分布于太平洋、印度洋和大西洋的温热带海域^[20]。卵形鲳鲹的肉质细嫩，味道鲜美，是名贵的食用鱼类。目前，在中国的福建、广东、广西和海南等地已经形成规模化养殖。但是近2年灾害频发，已经严重影响了卵形鲳鲹养殖业的可持续发展。本试验旨在通过梯度添加枸杞多糖来研究其对卵形鲳鲹生长性能、抗氧化能力、血清免疫、生化指标的影响，为卵形鲳鲹的健康养殖提供参考。

1 材料与方法 1.1 试验鱼与试验设计

养殖试验在中国水产科学研究院南海水产研究所深圳试验基地室外池塘网箱中进行。试验开始前，将卵形鲳鲹饥饿24 h，用丁香酚(成都艾科达化学试剂有限公司)麻醉，挑选平均体质量为(7.45±0.06) g、健康的幼鱼360尾，随机分为6组，每组3个重复，每个重复(网箱)20尾，分别饲喂枸杞多糖添加量为0(对照)、0.05%、0.10%、0.20%、0.40%和0.80%的6种等氮等脂饲料。试验饲料组成及营养水平表 1。

1.2 试验饲料制备

将鱼粉、豆粕、花生麸等原料用粉碎机粉碎并过40目筛网。按照饲料组成准确称量每种饲料原料，先把常量组分混合搅拌均匀，再把微量组分通过逐级扩大混匀的方法加入，初步混匀后放入搅拌机(SZ250，广州旭众食品有限公司)搅拌10 min后取出。按比例加入鱼油和大豆卵磷脂，人工搓碎混匀并过40目筛网后倒入搅拌机搅拌10 min。再加入适量的水(约40%)搅拌10 min后取出，用双螺杆挤条机(F-26，广州华南理工大学)挤压成直径为2.0和2.5 mm的条形物，经造粒机(G-500，广州华南理工大学)甩成颗粒后放在18 ℃空调房中抽干，然后用封口袋密封并做好标签，于-20 ℃保存备用。

1.3 饲养管理

试验开始前用商品料饱食驯化1周。试验开始后每天07:30和05:30各饱食投喂1次，连续充气，为期8周。试验期间详细记录每个网箱的采食量，试验鱼如有死亡，立即捞取称其体质量并做好记录。整个养殖过程中池塘水温为29.1~31.8 ℃，溶解氧浓度为4.8~7.2 mg/L，盐度为15~18。

1.4 样品采集

养殖试验结束后饥饿24 h，依次将网箱里的鱼全部捞出，麻醉后计数并称鱼体总质量。从中随机取4尾鱼测其体长、体质量并记录，测量完成后，用2.5 mL的注射器(1%的肝素钠润洗)尾静脉取血，注入1.5 mL的离心管中。4 ℃静置0.5 h后离心(3 000 r/min，10 min，4 ℃)，收集上清液并分装于0.5 mL的离心管中，于-80 ℃保存备用。采血后，按顺序解剖称量内脏和肝脏并记录，肝脏分装于2 mL离心管中，于-20 ℃保存备用。再将解剖后的鱼去皮取背部肌肉，于-20 ℃保存备用。另取3尾全鱼-20 ℃保存备用。

1.5 指标测定 1.5.1 生长性能 1.5.2 体成分

全鱼和肌肉中水分、粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分含量参照杜强^[21]所描述的方法进行测定。

1.5.3 肝脏抗氧化能力

肝脏组织匀浆的制备：准确称量0.5 g组织样本，然后按1：9的质量体积比加入生理盐水进行匀浆，匀浆后放入离心机中离心(3 000 r/min，10 min，4 ℃)，取上清液于-20 ℃保存备用。

肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量和总抗氧化能力(T-AOC)均采用南京建成生物工程研究所试剂盒进行测定，操作步骤详见说明书。

1.5.4 血清免疫和生化指标

血清中补体3(C3)、补体4(C4)含量和溶菌酶(LZM)、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)活性均采用南京建成生物工程研究所试剂盒进行测定，操作步骤详见说明书。

血清生化指标包括葡萄糖(GLU)、胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)含量及谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性，委托广州新海医院检验中心进行测定。

1.6 数据的处理分析

试验数据均采用Excel 2007软件进行处理，通过SPSS 18.0软件one-way ANOVA进行统计分析，所得数据以“平均值±标准差”表示，P < 0.05表示差异显著。

2 结果 2.1 枸杞多糖对卵形鲳鲹幼鱼生长性能的影响

由表 2可知，各组间末质量、增重率、特定生长率、饲料系数、成活率以及肥满度没有显著性差异(P > 0.05)。枸杞多糖添加量为0.10%时，试验鱼的肝体比显著低于0.05%和对照组(P < 0.05)。各添加组的脏体比显著低于对照组(P < 0.05)。

2.2 枸杞多糖对卵形鲳鲹幼鱼体成分的影响

由表 3可知，枸杞多糖对各组全鱼的水分、粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分含量均无显著影响(P > 0.05)。0.10%和0.20%组肌肉粗蛋白质含量显著高于0.80%和对照组(P < 0.05)，肌肉粗灰分含量显著低于0.05%和对照组(P < 0.05)。

2.3 枸杞多糖对卵形鲳鲹幼鱼肝脏抗氧化能力的影响

由表 4可知，0.10%和0.20%组肝脏超氧化物歧化酶活性显著高于对照组(P < 0.05)。0.10%、0.20%、0.40%和0.80%组肝脏过氧化氢酶活性显著高于对照组(P < 0.05)。随饲料中枸杞多糖添加量的增加，肝脏丙二醛含量先降低后升高，0.10%和0.20%组显著低于对照组(P < 0.05)。0.10%组肝脏谷胱甘肽过氧化物酶活性和总抗氧化能力显著高于对照组(P < 0.05)。

2.4 枸杞多糖对卵形鲳鲹幼鱼血清免疫指标的影响

由表 5可知，枸杞多糖显著影响了血清补体3、补体4含量和溶菌酶活性(P < 0.05)，对酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性没有显著性影响(P > 0.05)。0.10%组血清补体3含量显著高于0.05%和对照组(P < 0.05)。0.10%、0.20%和0.40%组血清补体4含量显著高于对照组(P < 0.05)。血清溶菌酶活性随饲料中枸杞多糖添加量的增加先升高后降低，0.10%和0.20%组显著高于0.40%、0.80%和对照组(P < 0.05)。

2.5 枸杞多糖对卵形鲳鲹幼鱼血清生化指标的影响

由表 6可知，0.10%和0.20%组血清葡萄糖含量显著低于0.05%和对照组(P < 0.05)。随饲料中枸杞多糖添加量的增加，血清胆固醇、甘油三酯以及低密度脂蛋白含量均呈现先降低后升高的趋势，而高密度脂蛋白含量呈现先升高后降低的趋势。0.10%、0.20%和0.40%组血清胆固醇含量显著低于0.05%和对照组(P < 0.05)。0.10%组血清甘油三酯含量显著低于0.05%和对照组(P < 0.05)。0.10%和0.20%组血清高密度脂蛋白含量显著高于对照组(P < 0.05)，低密度脂蛋白含量显著低于对照组(P < 0.05)。各组间血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性无显著性差异(P > 0.05)。

3 讨论

有研究表明，枸杞多糖可以提高动物的生长性能。刘亚娟等^[3]研究发现，饲粮中添加1%的枸杞多糖可以提高肉兔的生长性能，促进仔兔的生长发育，增加被毛密度。尹瑞卿^[4]报道，4 g/kg的枸杞多糖可显著降低肉仔鸡的料重比。吴旋^[16]在黄颡鱼饲料中添加4种不同水平的多糖，投喂8周后发现，1 200 mg/kg的枸杞多糖可以显著提升黄颡鱼的增重率，并降低饲料系数。本研究中，0.10%组的末质量、增重率以及特定生长率最大，而0.80%、0.40%、0.20%、0.05%组均低于对照组，但各组间没有显著性差异。这说明适量的枸杞多糖对卵形鲳鲹幼鱼的生长有一定的促进作用，但是未达到显著水平。已有研究显示，植物多糖主要通过促进与生长相关激素的合成与分泌来促进脂类与糖的代谢，提高机体氨基酸与蛋白质合成，以达到促生长的作用^[22-23]。适量的枸杞多糖显著降低了卵形鲳鲹幼鱼的肝体比和脏体比，这可能是枸杞多糖促进了肝脏和腹腔中脂肪的分解利用^[24-25]。

枸杞多糖不仅能提高动物的生长性能，还能改善动物的肌肉品质。本研究中，试验鱼肌肉的粗蛋白质含量随枸杞多糖添加量的增加呈先升高后降低趋势，0.10%和0.20%组显著高于对照组。这说明适量的枸杞多糖可以提高卵形鲳鲹幼鱼的肌肉粗蛋白质含量，改善肌肉品质，这与黄颡鱼^[16]的研究报道相似。枸杞多糖也显著影响了试验鱼肌肉的粗灰分含量，0.10%和0.20%组显著低于0.05%和对照组。这可能是因为枸杞多糖在增加肌肉蛋白质含量的同时，降低了肌肉中矿物质的含量^[25]。

大量研究表明，枸杞多糖可以有效增强机体的抗氧化能力。Xin等^[10]报道，枸杞多糖可以显著提高机体内超氧化物歧化酶的活性，同时减少心脏中的丙二醛含量。龚涛等^[11]在对D-半乳糖致衰小鼠的研究中发现，枸杞多糖可以显著促进小鼠体内超氧化物歧化酶等抗氧化酶的合成，同时抑制丙二醛含量的升高，减轻细胞损伤，提高抗氧化能力。超氧化物歧化酶作为一种抗氧化酶，在清除机体内的自由基方面发挥着重要作用。过氧化氢酶的主要作用是参与活性氧的代谢，保护机体内的功能性大分子物质免受活性氧损伤。丙二醛是脂质过氧化的最终产物，机体内丙二醛的含量反映组织中的自由基含量及受损情况^[26]。本研究中，0.10%和0.20%组肝脏超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性均显著高于对照组，且丙二醛含量显著低于对照组，这与黄颡鱼^[16]、金丝鱼^[17]的研究报道结果相似。也有研究显示，给D-半乳糖所致衰老小鼠灌服枸杞多糖既能提高其体内超氧化物歧化酶的活性，也能提高谷胱甘肽过氧化物酶的活性^[27]。谷胱甘肽过氧化物酶是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶，其既能清除细胞内有害的过氧化产物，也能切断脂质过氧化连锁反应，从而保护细胞膜的结构和功能不受过氧化物的干扰及损害^[28]。机体中存在包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等多种抗氧化物，这些抗氧化物可以清除体内的各种活性氧。总抗氧化能力是一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总的水平。本研究中，枸杞多糖显著提高了试验鱼肝脏谷胱甘肽过氧化物酶的活性和总抗氧化能力水平。这说明适量的枸杞多糖可以有效提高卵形鲳鲹幼鱼的肝脏抗氧化能力。因此，枸杞多糖提高机体抗氧化能力的途径可能有2种:一是通过提高超氧化物歧化酶等抗氧化酶的活性来清除过多的自由基；二是通过提高过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶等过氧化物分解酶的活性来清除过多的活性氧。

鱼类既有非特异性免疫系统又有特异性免疫系统，但是与高等脊椎动物相比，鱼类的特异性免疫系统尚不完善。因此，鱼类主要还是依赖非特异性免疫系统来应对外部环境刺激和病原入侵^[29]。补体系统作为一种蛋白质反应系统，主要负责破坏或清除病原微生物，是机体非特异性免疫的重要组成部分^[30]。本研究中，0.10%组血清补体3含量显著高于0.05%和对照组；0.10%、0.20%和0.40%组血清补体4的含量显著高于对照组。这说明适量的枸杞多糖可以激活卵形鲳鲹幼鱼的补体系统，提高血清补体含量。也有研究表明，不同的多糖激活补体系统的途径不同。例如圆锥绣球多糖是通过经典途径激活补体的，茯苓多糖和当归多糖是通过替代途径激活补体的，而车前子多糖和酸枣仁多糖可由替代和经典2条途径激活补体系统^[31]。在对草鱼的研究中发现，枸杞多糖不仅可以提高草鱼血清补体3的含量，也能提高血清溶菌酶的活性^[18]。溶菌酶也是机体非特异性免疫系统的重要组成部分，其可以溶解革兰氏阳性和阴性细菌细胞壁的黏多糖，从而消灭病原微生物^[16]。本研究中，适量的枸杞多糖可以显著提高卵形鲳鲹幼鱼血清溶菌酶的活性，这与金丝鱼^[17]、黄颡鱼^[16]以及鲫鱼^[19]的研究结果是相似的，说明枸杞多糖可以通过提高机体内溶菌酶的活性来提高非特异性免疫力。酸性磷酸酶和碱性磷酸酶是鱼类代谢过程中重要的调控酶，可以催化磷酸单酯的水解及磷酸基团的转移反应，对机体非特异性免疫也发挥着重要作用。枸杞多糖对试验鱼血清酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性没有显著性影响，富丽静等^[18]也有相似的报道。以上结果说明，适量的枸杞多糖可以提高卵形鲳鲹的非特异性免疫力。

血清生化指标反映了机体的营养水平、生理状态及健康状况及^[32]。正常情况下鱼体的血清葡萄糖处于动态平衡中，但是容易受到外部刺激而发生波动^[33]。研究表明，枸杞多糖可以降低机体的血清葡萄糖含量，提高抗应激的能力^[2]。本研究中，适量的枸杞多糖显著降低了试验鱼的血清葡萄糖含量，丁园^[12]、王玲等^[13]均有相关报道。有研究显示，枸杞多糖主要从3个方面来调控血清葡萄糖含量：一是降低小肠刷状缘对葡萄糖的吸收；二是抑制消化道内α-葡萄糖苷酶的活性; 三是改善胰岛细胞形态、数量和功能，调节胰岛内环境^{[13, 28, 34]}。枸杞多糖不仅可以降低血清葡萄糖含量，还可以降低血脂含量。高脂血症是导致动脉粥样硬化的主要因素之一，还能导致脂肪肝的发生，是医学上常见的一种代谢性疾病^[35]。而胆固醇、甘油三酯含量的升高与动脉粥样硬化的发生有直接的关系。赵晶丽等^[36]研究发现，枸杞多糖各剂量组均能显著降低大鼠血清中总胆固醇、甘油三酯以及低密度脂蛋白的含量，并且显著提高高密度脂蛋白的含量。同样，枸杞多糖对小鼠也有降脂的效果^{[14, 37]}。本研究中，适量的枸杞多糖可以显著降低卵形鲳鲹血清中胆固醇、甘油三酯以及低密度脂蛋白的含量，并且显著提高高密度脂蛋白的含量，这与以上研究报道相似。谷丙转氨酶和谷草转氨酶是在蛋白质代谢过程中起重要作用的氨基酸转氨酶，其活性变化可以反映肝细胞的受损情况^[38]。本研究中，枸杞多糖对试验鱼血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性没有显著性影响，陈玉春等^[38]也有相似结论。

4 结论

饲料中添加适量的枸杞多糖能显著提高卵形鲳鲹幼鱼的抗氧化能力和非特异性免疫力，且有显著的降血糖和降血脂作用，而促生长作用不显著。卵形鲳鲹幼鱼饲料中枸杞多糖的适宜添加量为0.10%。