饲粮钙、磷缺乏对1~21日龄肉仔鸡生长性能、佝偻病发病特征及胫骨组织结构的影响

引用本文

邵玉新, 邢冠中, 张丽阳, 吕林, 李素芬, 廖秀冬, 罗绪刚. 饲粮钙、磷缺乏对1~21日龄肉仔鸡生长性能、佝偻病发病特征及胫骨组织结构的影响[J]. 动物营养学报, 2019, 31(5): 2107-2118.

SHAO Yuxin, XING Guanzhong, ZHANG Liyang, LYU Lin, LI Sufen, LIAO Xiudong, LUO Xugang. Effects of Dietary Calcium and Phosphorus Deficiency on Growth Performance, Rickets Incidence Characters and Tibia Histological Structure of Broilers during 1 to 21 Days of Age[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2019, 31(5): 2107-2118.

饲粮钙、磷缺乏对1~21日龄肉仔鸡生长性能、佝偻病发病特征及胫骨组织结构的影响

邵玉新¹ , 邢冠中² , 张丽阳¹ , 吕林¹ , 李素芬² , 廖秀冬¹ , 罗绪刚¹

1. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 矿物元素营养研究室, 北京 100193;
2. 河北科技师范学院动物科技学院, 秦皇岛 066004

收稿日期: 2018-10-24

基金项目: 国家重点研发计划（2017YFD0502200）；国家自然科学基金重点项目和面上项目（31630073，31472116）；国家现代农业产业技术体系岗位专家专项经费（CARS-41）；中国农业科学院科技创新工程专项经费（ASTIP-IAS08）；河北省二期现代农业产业技术体系蛋肉鸡产业创新团队资助（HBCT2018150203）

作者简介: 邵玉新(1985-), 女, 天津人, 博士, 从事动物营养与科学研究。E-mail:syu123@sina.com.

通信作者: 廖秀冬, 助理研究员, E-mail：liaoxd56@163.com;
罗绪刚, 研究员, 博士生导师, E-mail：wlysz@263.net.

摘要: 本试验旨在研究饲粮钙、磷缺乏对1~21日龄肉仔鸡生长性能、佝偻病发病特征及胫骨组织结构的影响。试验选用504只1日龄爱拔益加肉公雏，采用2×2两因子完全随机试验设计，设2个钙水平（1.00%和0.35%）与2个非植酸磷水平（0.45%和0.23%），分为4个组，分别为正常对照组（1.00%钙+0.45%非植酸磷）、磷缺乏组（1.00%钙+0.23%非植酸磷）、钙缺乏组（0.35%钙+0.45%非植酸磷）和钙磷同时缺乏组（0.35%钙+0.23%非植酸磷），每组7个重复，每个重复18只鸡。试验期为21 d。结果表明：钙与磷的交互作用对1~21日龄肉仔鸡各个阶段的平均日采食量、平均日增重、料重比，7、14和21日龄胫骨长度，7日龄胫骨生长板增生区和肥大区长度以及14日龄胫骨生长板肥大区长度均具有显著影响（P < 0.05）。在正常钙水平时，低磷显著降低了1~21日龄肉仔鸡各个阶段的平均日采食量和平均日增重（P < 0.05），显著增加了料重比（P < 0.05），显著提高了7和14日龄胫骨生长板肥大区长度（P < 0.05）；在低钙水平时，低磷显著提高了15~21日龄和1~21日龄平均日增重以及7日龄胫骨生长板肥大区长度（P < 0.05），显著降低了7日龄胫骨生长板增生区长度（P < 0.05）。此外，与磷缺乏组相比，钙缺乏组和钙磷同时缺乏组1~21日龄肉仔鸡各个阶段的平均日采食量、平均日增重以及7日龄胫骨生长板增生区长度显著提高（P < 0.05），7和14日龄胫骨生长板肥大区长度显著降低（P < 0.05）。由此可见，肉仔鸡生长性能和胫骨结构对磷缺乏最为敏感，其次为钙缺乏，钙磷同时缺乏的影响较弱；三者佝偻病的典型特征分别为磷缺乏组的胫骨生长板肥大区长度增长，钙缺乏组和钙磷同时缺乏组的胫骨生长板增生区长度均增长，但钙磷同时缺乏组早期胫骨生长板增生区长度小于钙缺乏组。

关键词: 钙缺乏磷缺乏佝偻病胫骨肉仔鸡

Effects of Dietary Calcium and Phosphorus Deficiency on Growth Performance, Rickets Incidence Characters and Tibia Histological Structure of Broilers during 1 to 21 Days of Age

SHAO Yuxin¹ , XING Guanzhong² , ZHANG Liyang¹ , LYU Lin¹ , LI Sufen² , LIAO Xiudong¹ , LUO Xugang¹

1. Mineral Nutrition Research Division, Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China;
2. Department of Animal Science, Hebei Normal University of Science and Technology, Qinhuangdao 066004, China

Corresponding author: LIAO Xiudong, assistant professor, E-mail: liaoxd56@163.com;
LUO Xugang, professor, E-mail: wlysz@263.net.

Abstract: This experiment was conducted to investigate the effects of dietary calcium (Ca) or phosphorus (P) deficiency on growth performance, rickets incidence characters and tibia histological structure of broilers during 1 to 21 days of age. A total of 504 one-day-old Arbor Acres male broilers were selected, and a 2×2 two-factor complete random test design was adopted, there were two Ca levels (1.00% and 0.35%) and two non-phytate phosphorus (NPP) levels (0.45% and 0.23%), the 4 groups were normal control group (1.00% Ca+0.45% NPP), P deficiency group (1.00% Ca+0.23% NPP), Ca deficiency group (0.35% Ca+0.45% NPP) and Ca and P deficiency group (0.35% Ca+0.23% NPP), respectively; and there were 7 replicates per groups and 18 broilers per replicate. The experiment lasted for 21 days. The results showed that the interaction between Ca and P levels was significantly affected the average daily feed intake, average daily gain and feed to gain ratio at all stage of broilers during 1 to 21 days of age, tibia length at 7, 14 and 21 days of age, the lengths of proliferating zone and hypertrophy zone in tibia growth plate at 7 days of age, and the length of hypertrophy zone in tibia growth plate at 14 days of age (P < 0.05). In the normal Ca level, low P significantly decreased the average daily feed intake and average daily gain at all stage of broilers during 1 to 21 days of age (P < 0.05), significantly increased the feed to gain ratio (P < 0.05), and significantly improved the length of hypertrophy zone in tibia growth plate at 7 and 14 days of age (P < 0.05); in the low Ca level, low P significantly improved the average daily gain during 15 to 21 days of age and 1 to 21 days of age and the length of hypertrophy zone in tibia growth plate at 7 days of age (P < 0.05), and significantly decreased the length of proliferating zone in tibia growth plate at 7 days of age (P < 0.05). Besides, compared with the P deficiency group, the average daily feed intake and average daily gain at all stage of broilers during 1 to 21 days of age and the length of proliferating zone in tibia growth plate at 7 days of age of Ca deficiency group and Ca and P deficiency group were significantly increased (P < 0.05), and the length of hypertrophy zone in tibia growth plate at 7 and 14 days of age was significantly decreased (P < 0.05). The results indicate that the growth performance and tibia structure are the most sensitive to the P deficiency, followed by the Ca deficiency, and then the Ca and P deficiency has weaker influence. The typical characteristics of rickets show that the length of hypertrophy zone in tibia growth plate is lengthened in the P deficiency group, while the length of proliferating zone in tibia growth plate is lengthened in the Ca deficiency group and Ca and P deficiency group, but Ca and P deficiency group has the shorter length of proliferating zone in tibia growth plate than Ca deficiency group in the early stage.

Key words: Ca deficiency P deficiency rickets tibia broilers

钙、磷是家禽必需的矿物质元素，具有重要而广泛的生物学功能，在核酸代谢、能量代谢、肌肉收缩、酶的激活以及胞内信号转导等方面都有重要作用^[1-2]。此外，它们又是骨骼的主要成分，钙含量占骨骼总量的99%以上，磷含量占骨骼总量的80%以上，因此钙、磷在骨骼发育和矿化过程中具有重要作用^[2]。规模化肉仔鸡养殖生长速度快，对钙、磷的需要量高，因此饲粮中稍不注意科学合理添加，便发生钙、磷缺乏症，主要表现为骨骼发育不良，包括佝偻病和胫骨软骨发育不良，最终导致生产力下降以及死亡率增加等^[3]，给肉仔鸡养殖业造成了严重的经济损失。

佝偻病常发生于7~18日龄的肉仔鸡，主要是由饲粮钙、磷不足或其比例不平衡造成的骨钙化不完全^[4]，之后于3~4周龄可能发展为胫骨软骨发育不良^[5]。呙于明等^[6]研究发现，钙、磷同时缺乏(0.37%钙+0.14%非植酸磷)并未影响生长后期7周龄肉仔鸡(体重1.9 kg)的腿病发生率。罗玲萍等^[7]研究发现，分别给肉仔鸡饲喂钙缺乏(0.02%钙)和磷缺乏(0.3%总磷)饲粮时，3周龄缺钙、缺磷鸡只全部发生佝偻病。佝偻病的发病类型通常分为缺磷型和缺钙型2种，缺磷表现为骨骺端生长板之增生带增宽，缺钙表现为骨骺端之肥大带增宽^[8-9]。然而，近年来，由于快大型肉仔鸡品种的不断选育，肉仔鸡生长速度加快，钙、磷缺乏对3周龄之前更为早期的肉仔鸡胫骨结构变化有待进一步研究。因此，本试验通过建立肉仔鸡钙、磷缺乏的病变模型，探讨饲粮钙缺乏、磷缺乏及钙、磷同时缺乏对生长前期(1~21日龄)肉仔鸡生长性能、佝偻病发病特征及其胫骨组织结构的影响，为早期通过营养手段防治和改善佝偻病提供理论依据和实践指导。

1 材料与方法 1.1 试验设计

采用2×2两因子完全随机试验设计，根据NRC(1994)^[10]家禽营养需要量中建议的1~3周龄肉仔鸡饲粮钙、非植酸磷水平(1.00%钙+0.45%非植酸磷)，设置2个钙水平(1.00%、0.35%)和2个非植酸磷水平(0.45%、0.23%)，分别为正常对照组(1.00%钙+0.45%非植酸磷)、磷缺乏组(1.00%钙+0.23%非植酸磷)、钙缺乏组(0.35%钙+0.45%非植酸磷)和钙磷同时缺乏组(0.35%钙+0.23%非植酸磷)，共4个组，每组7个重复，每个重复18只鸡。

1.2 试验动物与饲粮

将504只1日龄爱拔益加(AA)肉仔鸡公雏，按上述试验设计随机分为4个组，每个组分别饲养于7个不锈钢镀塑重复笼中，每个重复笼18只鸡。试验期21 d。每日观察记录鸡只健康状况，包括鸡只死亡和佝偻病发病情况，如有死亡鸡只，立即解剖，观察分析病理死因，并结料。每周末以重复笼为单元称鸡空腹体重，并统计耗料量，计算鸡只平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。饲养管理按《AA肉仔鸡饲养管理手册》进行。鸡只自由采食及饮水，24 h恒定光照。参照NRC(1994)^[10]家禽营养需要量和我国《鸡饲养标准》(2004)^[11]中1~3周龄肉仔鸡营养需要建议量，以磷酸二氢钙、石粉、磷酸氢钙形式添加钙、磷而配制各组饲粮。试验饲粮组成及营养水平见表 1。饲粮以粉料形式饲喂。

表 1 试验饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis)

%
项目 Items	钙水平Ca level/%
	1.00		0.35
	非植酸磷水平 NPP level/%
	0.45	0.23	0.45	0.23
原料 Ingredients
玉米 Corn	53.42	53.42	53.42	53.42
豆粕 Soybean meal	38.10	38.10	38.10	38.10
大豆油 Soybean oil	4.42	4.42	4.42	4.42
食盐 NaCl¹⁾	0.30	0.30	0.30	0.30
磷酸氢钙 CaHPO₄¹⁾	1.82	0.50		0.50
磷酸二氢钙 Ca(H₂PO₄)₂¹⁾			1.35
石粉 Limestone¹⁾	1.32	2.00		0.23
DL-蛋氨酸 DL-Met¹⁾	0.30	0.30	0.30	0.30
预混料Premix²⁾	0.32	0.32	0.32	0.32
砂砾 Sand³⁾		0.64	1.79	2.41
合计 Total	100.00	100.00	100.00	100.00
营养水平 Nutrient levels⁴⁾
代谢能 ME/(MJ/kg)	12.56	12.56	12.56	12.56
粗蛋白质 CP	21.97	21.97	21.97	21.97
赖氨酸 Lys	1.12	1.12	1.12	1.12
蛋氨酸 Met	0.61	0.61	0.61	0.61
蛋氨酸+半胱氨酸 Met+Cys	0.90	0.90	0.90	0.90
钙 Ca	0.95	0.97	0.36	0.34
总磷 TP	0.69	0.48	0.72	0.46
非植酸磷 NPP	0.41	0.27	0.45	0.24
¹⁾饲料级Feed grade。 ²⁾预混料为每千克饲粮提供Premix provided the following per kilogram of diets：VA 15 000 IU，VD₃ 4 500 IU，VE 24 IU，VK₃ 3 mg，VB₁ 3 mg，VB₂ 9.6 mg，VB₆ 3 mg，VB₁₂ 0.018 mg，泛酸钙pantothenic acid calcium 15 mg，烟酸niacin 39 mg，叶酸folic acid 1.5 mg，生物素biotin 0.15 mg，胆碱choline 700 mg，Cu (CuSO₄·5H₂O) 8 mg，Mn (MnSO₄·H₂O) 110 mg，Fe (FeSO₄·H₂O) 40 mg，Zn(ZnSO₄·H₂O)60 mg，I (KI) 0.35 mg，Se (Na₂SeO₃) 0.15 mg，金霉素chlorotetracycline 50 mg。 ³⁾洗净的建筑沙，未检测到钙和磷，用于调整各组饲粮中的磷酸氢钙、磷酸二氢钙和石粉的用量。Washed building sand without Ca and P, which was used to adjust amounts of CaHPO₄, Ca(H₂PO₄)₂ and limestone. ⁴⁾粗蛋白质、钙、磷、非植酸磷为实测值，其余均为计算值。CP, Ca, P and NPP were measured values, while the others were calculated values.

表 1 试验饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis)

1.3 样品的采集与制备

配制饲粮时现场采样，研磨过200目筛后置于塑料瓶中低温保存，以备分析饲粮粗蛋白质、钙和非植酸磷含量。

分别于试验鸡的7、14和21日龄时，所有鸡只分别于前1天22:00开始禁食而不禁水，次日08:00分别称鸡只空腹个体活重，从每个重复笼各选取1只鸡，记录每只鸡体重，其中正常对照组选取接近笼平均体重的鸡只，其他组则优先选取临床上表现为佝偻病症状的鸡只。取左侧胫骨，去除外层附着物后，用尺子测量其长度并记录数值后，将胫骨近端沿其顶部纵向切开，对纵切面进行大体解剖学观察并拍照，之后分别放入10%中性福尔马林溶液中固定，以备制作切片，观察组织结构。

1.4 样品分析 1.4.1 饲料原料和饲粮样品分析

采用常规凯氏定氮法(GB/T 6432—1994)测定饲粮粗蛋白质含量^[12]，采用等离子发射光谱仪(Model IRIS Intrepid Ⅱ，Thermal Jarrell Ash公司，美国)测定饲粮钙含量，采用氯化铁沉淀法^[13]测定饲粮植酸磷含量，采用钼黄分光光度法(GB/T 6437—2002)测定饲粮总磷含量。

1.4.2 胫骨组织结构观察

将固定在中性福尔马林溶液中的胫骨取出后，放入乙二胺四乙酸(EDTA)脱钙液中进行脱钙(一般用大头针刺入标本，很快刺入不觉抵抗为止)，脱钙软化后经过冲水、梯度酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋法等处理后，以5 μm的厚度切片，常规苏木精-伊红(HE)染色后观察近端胫骨的生长板是否增生等病理学变化^[15]。最后，采用莱卡正置显微镜对切片进行低倍镜(12.5×)拍照以测定胫骨生长板增生区和肥大区的长度变化，然后再进行高倍镜(50×)拍照以观察胫骨生长板中的骨小梁和软骨细胞等结构的变化。

1.5 数据统计分析

试验数据采用SPSS 17.0软件中的一般线性模型(GLM)程序进行2×2两因子方差分析；方差分析显著者，以最小显著差异(LSD)法比较各组间平均值的差异显著性。以每个重复笼作为1个试验单元。以P＜0.05作为差异显著性检验水平。

2 结果与分析 2.1 饲粮钙、磷缺乏对不同日龄肉仔鸡临床和解剖特征的影响

本试验发现佝偻病发病初期的临床症状表现为：精神沉郁、食欲下降、喜卧和不愿行走。之后出现特征性临床症状：羽毛粗乱蓬松，嘴壳及两腿变软，跛行，严重者站立行走困难或卧地不起，低头闭目，双目下垂，逐渐消瘦至衰竭死亡，对发病鸡只进行解剖后，由图 1和图 2可见，磷缺乏组鸡只肋骨与肋骨软骨交界处出现串珠状结构，随着日龄的增加，胫骨软骨变软弯曲，并且胫骨生长板肥大区增长，而钙缺乏组和钙磷同时缺乏组鸡只肋骨处并未出现串珠状结构，但钙缺乏组鸡只胫骨增生区明显增长，而钙磷同时缺乏组胫骨增生区与肥大区变化不明显。根据上述佝偻病的临床及解剖特征，发现磷缺乏组于4日龄开始发病，到8日龄所有鸡只全部出现佝偻病症状并一直持续至21日龄；钙缺乏组和钙磷同时缺乏组于6日龄开始发病，其中1~7日龄发病率分别约为1.59%和9.52%，8~14日龄发病率约为2.04%；15~21日龄2组鸡只均未出现佝偻病特征。

B图中黑框为肋骨和肋骨软骨交界处的串珠状结构。 The black frame in the figure B was the rachitic rosary structure in the junction between the rib and rib cartilage. 图 1 饲粮钙、磷缺乏对7日龄肉仔鸡肋骨解剖结构的影响 Fig. 1 Effects of dietary Ca or P deficiency on rib anatomical structure of broilers at 7 days of age

PZ：生长板增生区；HZ：生长板肥大区。 PZ: growth plate proliferating zone; HZ: growth plate hypertrophic zone. 图 2 饲粮钙、磷缺乏对7、14和21日龄肉仔鸡胫骨骨骺端生长板解剖结构的影响 Fig. 2 Effects of dietary Ca or P deficiency on tibia epiphysis growth plate anatomical structure of broilers at 7, 14 and 21 days of age

2.2 饲粮钙、磷缺乏对1~21日龄肉仔鸡生长性能和死亡率的影响

由表 2可见，钙与磷的交互作用对1~7日龄肉仔鸡ADFI、ADG和F/G具有显著影响(P＜0.05)，对死亡率无显著影响(P>0.05)。在正常钙水平时，低磷显著降低了ADFI和ADG(P＜0.05)，显著提高了F/G(P＜0.05)；在低钙水平时，低磷对ADFI、ADG和F/G无显著影响(P>0.05)。与正常对照组相比，钙磷同时缺乏组F/G显著增加(P＜0.05)，但ADFI和ADG无显著差异(P>0.05)。此外，钙缺乏组和钙磷同时缺乏组的ADFI和ADG显著高于磷缺乏组(P＜0.05)，但F/G无显著差异(P>0.05)。

表 2 饲粮钙、磷缺乏对1~21日龄肉仔鸡生长性能和死亡率的影响 Table 2 Effects of dietary Ca or P deficiency on growth performance and mortality of broilers during 1 to 21 days of age

项目 Items	钙水平 Ca level/%				标准误 SEM	钙水平 Ca level/%		标准误 SEM	非植酸磷水平 NPP levels/%		标准误 SEM	P值P-value
	1.00		0.35			钙水平 Ca level/%			非植酸磷水平 NPP levels/%			钙水平 Ca level	非植酸磷水平 NPP level	钙水平×非植酸磷水平 Ca level× NPP level
	非植酸磷水平 NPP level/%					1.00	0.35		0.45	0.23
	0.45	0.23	0.45	0.23		1.00	0.35		0.45	0.23
1~7日龄 1~7 days of age
平均日采食量 ADFI/(g/d)	21.59^a	13.75^b	22.35^a	22.26^a	0.30	17.67	22.30	0.21	21.92	18.05	0.21	＜0.001	＜0.001	＜0.001
平均日增重 ADG/(g/d)	20.04^a	12.30^b	19.71^a	19.83^a	0.28	16.17	19.77	0.20	19.94	16.01	0.20	＜0.001	＜0.001	＜0.001
料重比 F/G	1.08^b	1.12^a	1.13^a	1.12^a	0.01	1.10	1.13	0.01	1.11	1.12	0.01	0.002	0.089	0.005
死亡率 Mortality/%	2.38	1.59	0.00	0.79	0.86	1.98	0.40	0.61	1.59	0.79	0.61	0.076	1.000	0.364
8~14日龄 8~14 days of age
平均日采食量 ADFI/(g/d)	50.43^a	21.78^c	44.74^b	44.63^b	0.61	36.11	44.68	0.43	47.58	33.21	0.43	＜0.001	＜0.001	＜0.001
平均日增重 ADG/(g/d)	38.49^a	11.62^c	31.71^b	31.54^b	0.43	25.06	31.63	0.31	35.10	21.58	0.31	＜0.001	＜0.001	＜0.001
料重比 F/G	1.31^b	1.89^a	1.41^b	1.41^b	0.05	1.60	1.41	0.03	1.36	1.65	0.03	＜0.001	＜0.001	＜0.001
死亡率 Mortality/%	2.04^b	23.47^a	1.02^b	1.02^b	1.95	12.76	1.02	1.38	1.53	12.24	1.38	＜0.001	＜0.001	＜0.001
15~21日龄 15~21 days of age
平均日采食量 ADFI/(g/d)	77.11^a	24.81^c	64.13^b	66.39^b	1.92	50.96	65.26	1.35	70.62	45.60	1.35	＜0.001	＜0.001	＜0.001
平均日增重 ADG/(g/d)	60.96^a	14.57^d	47.41^c	51.96^b	1.19	37.77	49.69	0.84	54.19	33.27	0.84	＜0.001	＜0.001	＜0.001
料重比 F/G	1.27^b	1.73^a	1.35^b	1.28^b	0.06	1.50	1.32	0.04	1.31	1.51	0.04	0.004	0.002	＜0.001
死亡率 Mortality/%	2.38^b	18.11^a	0.00^b	0.00^b	3.12	10.25	0.00	2.55	1.19	9.06	2.55	0.002	0.022	0.022
1~21日龄 1~21 days of age
平均日采食量 ADFI/(g/d)	49.74^a	20.11^c	43.74^b	44.47^b	0.71	34.93	44.10	0.50	46.74	32.29	0.50	＜0.001	＜0.001	＜0.001
平均日增重 ADG/(g/d)	39.83^a	12.83^d	32.95^c	34.44^b	0.46	26.33	33.70	0.32	36.39	23.64	0.32	＜0.001	＜0.001	＜0.001
料重比 F/G	1.25^b	1.57^a	1.33^b	1.29^b	0.03	1.41	1.31	0.02	1.29	1.43	0.02	0.001	＜0.001	＜0.001
死亡率 Mortality/%	5.56^b	26.19^a	0.79^c	1.59^bc	2.09	15.87	1.19	1.48	3.18	13.89	1.48	＜0.001	＜0.001	0.002
同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)，相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。 In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P＜0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05).

钙与磷的交互作用对8~14日龄肉仔鸡ADFI、ADG、F/G和死亡率具有显著影响(P＜0.05)。在正常钙水平时，低磷显著降低了ADFI和ADG(P＜0.05)，显著提高了F/G和死亡率(P＜0.05)；在低钙水平时，低磷对上述指标均无显著影响(P>0.05)。与正常对照组相比，钙缺乏组和钙磷同时缺乏组ADFI和ADG显著降低(P＜0.05)，但F/G和死亡率无显著差异(P>0.05)。此外，钙缺乏组和钙磷同时缺乏组的ADFI和ADG显著高于磷缺乏组(P＜0.05)，F/G和死亡率显著低于磷缺乏组(P＜0.05)。

钙与磷的交互作用对15~21日龄肉仔鸡ADFI、ADG、F/G和死亡率具有显著影响(P＜0.05)。在正常钙水平时，低磷显著降低了ADFI和ADG(P＜0.05)，显著提高了F/G和死亡率(P＜0.05)；在低钙水平时，低磷显著提高了ADG(P＜0.05)，对ADFI、F/G和死亡率均无显著影响(P>0.05)。与正常对照组相比，钙缺乏组和钙磷同时缺乏组ADFI和ADG均显著降低(P＜0.05)，但F/G和死亡率无显著差异(P>0.05)。此外，钙缺乏组和钙磷同时缺乏组的ADFI和ADG显著高于磷缺乏组(P＜0.05)，F/G和死亡率显著低于磷缺乏组(P＜0.05)。

钙与磷的交互作用对1~21日龄肉仔鸡ADFI、ADG、F/G和死亡率具有显著影响(P＜0.05)。在正常钙水平时，低磷显著降低了ADFI和ADG(P＜0.05)，显著提高了F/G和死亡率(P＜0.05)；在低钙水平时，低磷显著提高了ADG(P＜0.05)，对ADFI、F/G和死亡率均无显著影响(P>0.05)。与正常对照组相比，钙缺乏组和钙磷同时缺乏组的ADFI和ADG均显著降低(P＜0.05)，钙缺乏组的死亡率显著降低(P＜0.05)。此外，钙缺乏组和钙磷同时缺乏组的ADFI和ADG显著高于磷缺乏组(P＜0.05)，F/G和死亡率显著低于磷缺乏组(P＜0.05)。

2.3 饲粮钙、磷缺乏对7、14和21日龄肉仔鸡胫骨长度的影响

由表 3可见，钙与磷的交互作用对7、14和21日龄肉仔鸡胫骨长度具有显著影响(P＜0.05)。在正常钙水平时，低磷显著降低了7、14和21日龄胫骨长度(P＜0.05)；在低钙水平时，低磷显著提高了21日龄胫骨长度(P＜0.05)，对7和14日龄胫骨长度无显著影响(P>0.05)。与正常对照组相比，钙缺乏组和钙磷同时缺乏组7和14日龄胫骨长度无显著差异(P>0.05)，钙缺乏组21日龄胫骨长度显著降低(P＜0.05)，钙磷同时缺乏组21日龄胫骨长度无显著差异(P>0.05)。此外，钙缺乏组和钙磷同时缺乏组7、14和21日龄胫骨长度均显著高于磷缺乏组(P＜0.05)。

表 3 饲粮钙、磷缺乏对7、14和21日龄肉仔鸡胫骨长度的影响 Table 3 Effects of dietary Ca or P deficiency on tibia length of broilers at 7, 14 and 21 days of age

cm
钙水平 Ca level/%	非植酸磷水平 NPP level/%	7日龄 7 days of age	14日龄 14 days of age	21日龄 21 days of age
1.00	0.45	4.89^a	6.41^a	7.60^a
1.00	0.23	4.58^b	5.36^b	6.20^c
0.35	0.45	4.89^a	6.41^a	7.37^b
0.35	0.23	4.99^a	6.32^a	7.68^a
标准误SEM		0.04	0.04	0.06
钙水平 Ca level/%	0.45	4.74	5.88	6.90
钙水平 Ca level/%	0.23	4.94	6.37	7.53
标准误SEM		0.03	0.03	0.04
非植酸磷水平 NPP level/%	1.00	4.89	6.41	7.49
非植酸磷水平 NPP level/%	0.35	4.79	5.84	6.94
标准误SEM		0.03	0.03	0.04
P值P-value
钙水平Ca level		＜0.001	＜0.001	＜0.001
非植酸磷水平NPP level		0.027	＜0.001	＜0.001
钙水平×非植酸磷水平Ca level×NPP level		＜0.001	＜0.001	＜0.001
同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)，相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。 In the same column, values with different small letter superscripts mean significant difference (P＜0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

表 3 饲粮钙、磷缺乏对7、14和21日龄肉仔鸡胫骨长度的影响 Table 3 Effects of dietary Ca or P deficiency on tibia length of broilers at 7, 14 and 21 days of age

2.4 饲粮钙、磷缺乏对7、14和21日龄肉仔鸡胫骨组织结构的影响

由图 3可见，低倍显微镜下观察到的胫骨组织结构与临床症状一致，当钙、磷水平正常时，骨骺端生长板的增殖区和肥大区并未随日龄增加表现明显变化。当钙水平正常时，磷缺乏使7、14和21日龄肉仔鸡胫骨生长板软骨柱极度变长。当磷水平正常时，钙缺乏和钙磷同时缺乏使7日龄肉仔鸡生长板增生区明显变大，钙缺乏组的肥大区软骨柱可见轻度缩短。

PZ：生长板增生区；HZ：生长板肥大区。 PZ: growth plate proliferating zone; HZ: growth plate hypertrophic zone. 图 3 饲粮钙、磷缺乏对7、14和21日龄肉仔鸡胫骨骨骺端生长板HE染色切片结构的影响 Fig. 3 Effects of dietary Ca or P deficiency on anatomical structure of tibia epiphysis growth plate stained with haematoxylin and eosin of broilers at 7, 14 and 21 days of age (12.5×)

由图 4可见，高倍显微镜下观察发现，当钙、磷水平正常时，7日龄胫骨组织中骨小梁为过度型结构，钙化过程不明显，随着日龄增加骨小梁明显增多，且中间软骨基质的钙化过程增强。当钙水平正常，磷缺乏时，柱状软骨拉长并深入髓腔，7日龄胫骨组织中基本无过度型骨小梁，14和21日龄骨小梁稀疏，且其中的大部分软骨基质未能正常钙化，出现很多空泡状结构。而钙缺乏组和钙磷同时缺乏组的胫骨中骨小梁数量和软骨基质钙化状况均优于磷缺乏组，但两者无明显区别。

CC：软骨；TT：骨小梁。 CC:cartilage; TT:bone trabeculae. 图 4 饲粮钙、磷缺乏对7、14和21日龄肉仔鸡胫骨骨骺端生长板HE染色切片结构的影响 Fig. 4 Effects of dietary Ca or P deficiency on tibia epiphysis growth plate stained with haematoxylin and eosin of broilers at 7, 14 and 21 days of age (50×)

由表 4可见，通过测量和统计胫骨生长板增生区和肥大区的长度变化，发现钙水平和磷水平对7、14、21日龄胫骨生长板增生区和肥大区长度具有显著影响(P＜0.05)。低钙显著增加了14和21日龄胫骨生长板增生区长度(P＜0.05)，显著降低了21日龄胫骨生长板肥大区长度(P＜0.05)。低磷显著降低了14和21日龄胫骨生长板增生区长度(P＜0.05)，显著增加了21日龄胫骨生长板肥大区长度(P＜0.05)。钙与磷的交互作用对7日龄胫骨生长板增生区和肥大区长度和14日龄胫骨生长板肥大区长度均有显著影响(P＜0.05)。在正常钙水平时，低磷显著提高了7和14日龄胫骨生长板肥大区长度(P＜0.05)；在低钙水平时，低磷显著降低了7日龄胫骨生长板增生区长度(P＜0.05)，显著提高了7日龄胫骨生长板肥大区长度(P＜0.05)。与正常对照组相比，钙缺乏组和钙磷同时缺乏组7日龄胫骨生长板增生区长度均显著增加(P＜0.05)，但7和14日龄日龄胫骨生长板肥大区长度无显著差异(P>0.05)。此外，钙缺乏组和钙磷同时缺乏组的7日龄胫骨生长板增生区长度于显著高于磷缺乏组(P＜0.05)，7和14日胫骨生长板龄肥大区长度显著低于磷缺乏组(P＜0.05)。

表 4 饲粮钙、磷缺乏对7、14和21日龄肉仔鸡胫骨生长板增生区和肥大区长度的影响 Table 4 Effects of dietary Ca or P deficiency on length of proliferating zone and hypertrophic zone in tibia growth plate of broilers at 7, 14 and 21 days of age

mm
钙水平 Ca level/%	非植酸磷水平 NPP level/%	7日龄 7 days of age		14日龄 14 days of age		21日龄 21 days of age
钙水平 Ca level/%	非植酸磷水平 NPP level/%	增生区 Proliferating zone	肥大区 Hypertrophy zone	增生区 Proliferating zone	肥大区 Hypertrophy zone	增生区 Proliferating zone	肥大区 Hypertrophy zone
1.00	0.45	1.07^c	3.70^bc	0.96	3.84^b	1.01	3.82
1.00	0.23	0.84^c	7.31^a	0.74	7.10^a	0.70	7.38
0.35	0.45	2.16^a	3.47^c	2.05	4.38^b	3.37	3.88
0.35	0.23	1.52^b	4.24^b	1.60	4.48^b	2.24	4.45
标准误SEM		0.08	0.24	0.11	0.30	0.24	0.52
钙水平 Ca level/%	1.00	0.95	5.64	0.85^b	5.60	0.84^b	5.74^a
钙水平 Ca level/%	0.35	1.84	3.85	1.84^a	4.43	2.80^a	4.16^b
标准误SEM		0.06	0.18	0.07	0.21	0.18	0.38
非植酸磷水平NPP level/%	0.45	1.66	3.58	1.55^a	4.13	2.18^a	4.17^b
非植酸磷水平NPP level/%	0.23	1.18	5.77	1.13^b	5.89	1.51^b	5.72^a
标准误SEM		0.06	0.18	0.07	0.21	0.18	0.38
P值P-value
钙水平Ca level		＜0.001	＜0.001	＜0.001	0.002	＜0.001	0.013
非植酸磷水平NPP level		＜0.001	＜0.001	0.003	＜0.001	0.007	0.015
钙水平×非植酸磷水平Ca level×NPP level		0.026	＜0.001	0.310	＜0.001	0.117	0.097

3 讨论 3.1 饲粮钙、磷缺乏对1~21日龄肉仔鸡生长性能的影响

NRC(1994)^[10]推荐1~21日龄肉仔鸡钙和非植酸磷的最佳需要量分别为1.00%和0.45%。本研究发现，磷缺乏组(1.00%钙+0.23%非植酸磷)3个阶段的生长性能一直低于正常对照组，而钙缺乏组(0.35%钙+0.45%非植酸磷)与钙磷同时缺乏组(0.35%钙+0.23%非植酸磷)的ADFI和ADG于第2周龄开始低于对照组，但一直高于磷缺乏组。以上结果表明，生长前期肉仔鸡的生长性能对磷缺乏最为敏感。王晋晋等^[16]研究发现，低磷(1.00%钙+0.35%非植酸磷)、低钙(0.60%钙+0.45%非植酸磷)和低钙低磷(0.60%钙+0.35%非植酸磷)均显著降低了1~3周龄AA肉仔鸡ADFI和ADG，且3种饲粮之间无显著差异。而Driver等^[17]研究在正常非植酸磷水平下，饲喂不同钙水平(0.325%、0.400%、0.475%、0.550%、0.625%和0.900%)饲粮给1~19日龄科宝肉仔鸡，发现0.550%或0.625%的钙水平就可使肉仔鸡获得最佳生长性能，而0.400%以下的钙水平显著降低了肉仔鸡生长性能。此外，本试验还发现，钙磷同时缺乏组15~21日龄肉仔鸡的生长性能高于钙缺乏组和磷缺乏组，这表明钙与非植酸磷之比可能比饲粮中钙和非植酸磷的绝对含量更重要。Gautier等^[18]研究发现，低钙低磷(0.4%钙+0.2%非植酸磷)并未引起1~21日龄罗斯308肉仔鸡生长性能降低，这可能是由于试验中钙磷比为2 : 1，与NRC(1994)^[10]推荐的钙磷比一致。但也有文献表明，饲粮中钙和非植酸磷维持一定比例不变，但家禽的生长性能和骨骼发育仍受到饲粮中钙和非植酸磷绝对含量变化的影响^[19]。

3.2 饲粮钙、磷缺乏对7、14和21日龄肉仔鸡佝偻病特征和胫骨组织切片结构的影响

佝偻病的临床症状通常表现为明显跛行和站立困难，两腿变软，无法行走，严重者因机体衰竭而死亡^[20]。本试验发现，磷缺乏组所有鸡只于第2周全部出现佝偻病的临床症状，而钙缺乏组和钙磷同时缺乏组的佝偻病发病率和死亡率却明显低于磷缺乏组，且第3周无新的鸡只发病和死亡，这表明肉仔鸡佝偻病的发生对磷缺乏较钙缺乏和钙磷同时缺乏更为敏感。罗玲萍等^[7]研究发现，缺磷鸡与缺钙鸡症状不同，其中缺磷鸡佝偻病发病时间早、死亡率高，对机体影响较大，与本试验研究结果一致。较早文献表明，临床症状不明显的佝偻病常常是由饲粮钙不足或是磷过量引起的^[5]。此外，通过解剖胫骨骨骺端和低倍显微镜下观察及统计，发现缺钙鸡只骨骺生长板增生区增长，缺磷鸡只骨骺生长板肥大区增长，与前人的文献报道^{[4, 12]}一致。钙缺乏与磷缺乏引起明显不同病理症状的原因可能由于钙磷代谢机制不同造成的，相关机制还需进一步深入研究。此外，崔恒敏等^[21]研究发现，钙磷同时缺乏和钙缺乏雏鸡呈现相同的尸体剖检和组织学变化，鉴别诊断较为困难。尽管本试验发现钙缺乏和钙磷同时缺乏出现的其病理学症状也较为相似，但通过显微镜下观察并统计分析，发现两者7日龄的生长板变化明显不同，即钙缺乏鸡只的生长板增生区长度明显大于钙磷同时缺乏鸡只，而肥大区长度明显小于钙磷同时缺乏鸡只。这些发现对于早期鉴别诊断钙磷同时缺乏和钙缺乏具有重要意义。而且，本试验还发现在钙磷同时缺乏引起的佝偻病发病率在1~7日龄时高于钙缺乏，但随着日龄增加和佝偻病发病率的减少，钙磷同时缺乏组21日龄的胫骨长度显著高于钙缺乏组，并与正常对照组显著差异。这表明钙磷同时缺乏饲粮对肉仔鸡的骨骼发育的影响可能较钙缺乏饲粮小。造成上述结果的原因可能是钙磷同时缺乏组的钙磷比(1.43 : 1.00)较钙缺乏组的钙磷比为(0.78 : 1.00)更为接近NRC推荐的钙磷比(2 : 1)。低钙低磷(0.6%钙+0.3%非植酸磷，钙磷比2 : 1)较正常钙、磷水平(0.9%钙+0.40%非植酸磷)促进了11~21日龄肉仔鸡体内钙、磷向胫骨中转移的含量^[22]。此外，Gautier等^[18]研究发现，饲喂低钙低磷饲粮(0.4%钙+0.2%非植酸磷，钙磷比2 : 1)的鸡只体内磷沉积量显著高于饲喂钙缺乏饲粮(0.4%钙+0.45%非植酸磷)的鸡只。这些研究结果均表明维持正常钙磷比的低钙低磷饲粮其矿物元素的沉积效率更高。

4 结论

① 肉仔鸡生长性能和胫骨组织结构对饲粮磷缺乏最为敏感，其次为钙缺乏，最后为钙磷同时缺乏。

② 钙、磷缺乏引发肉仔鸡佝偻病的特征分别为：磷缺乏使胫骨生长板肥大区长度增长，钙缺乏和钙磷同时缺乏均使胫骨生长板增生区长度增长；钙磷同时缺乏组早期胫骨生长板增生区长度小于钙缺乏组，但肥大区长度却大于钙缺乏组。

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