硒作为动物体必需的一种微量元素，在维持动物心脏功能、骨骼生长、免疫机能、繁殖功能等方面起着极其重要的作用。硒缺乏会引起动物生长缓慢、免疫机能下降、羔羊白肌病等症状[1-2]，但硒过量会引起家畜中毒，导致动物出现食欲下降、心脏和肾皮质出血、肌肉痉挛等症状[3]。早在20世纪50年代末，Schwartz等[4]就研究发现硒可以预防大鼠的肝坏死。正常情况下，羊的硒需要量在0.1~0.2 mg/kg DM左右，其饲粮中硒的最大允许量在3~50 mg/kg DM[5]。Beilstein等[6]分别给雌性大鼠腹腔注射0.75 mg/kg硒代蛋氨酸和亚硒酸钠，发现无机硒组机体肌肉中硒的沉积量比有机硒组下降了65%，该结果表明有机硒比无机硒更容易在动物机体内存留。Aghwan等[7]研究表明，饲粮中添加0.6 mg/kg酵母硒可以改善山羊的生长性能、屠宰性状和肉品质。Juniper等[8]研究表明，绵羊羔羊饲粮中酵母硒添加量由0.14 mg/kg DM增加到6.63 mg/kg DM对其健康、生长发育和采食量没有产生不利影响。Ndiweni等[9]报道，在奶牛饲粮中添加硒可使毛细血管中中性粒细胞的不定向移动能力及吞喷能力显著上升。我国肉用绵羊育肥羊饲养标准推荐的硒添加量为0.18~0.31 mg/kg，但补硒过程中可能会出现硒过量的情况。本试验旨在通过探讨酵母硒对杜寒杂交羊生长性能、血常规和血清生化指标的影响，确定杜寒杂交羊饲粮中酵母硒的适宜添加量，并研究补硒过量对杜寒杂交羊产生的不良影响，为杜寒杂交羊饲粮中酵母硒的合理添加提供科学依据。
1 材料与方法 1.1 试验饲粮基础饲粮参照中华人民共和国农业行业标准《肉羊饲养标准》(NY/T 816—2004)建议的肉用绵羊营养需要配制，其组成及营养水平见表 1。在基础饲粮中分别添加0(对照)、0.2、0.4和0.8 mg/kg硒(硒的添加形式为酵母硒，酵母硒购自安琪酵母股份有限公司，其规格为2 000 mg/kg)制成4种试验饲粮，对应的试验饲粮中硒含量的实测值分别为0.074(对照)、0.307、0.491和0.846 mg/kg。将饲料原料粉碎按照配方添加混匀后，用制粒机制成直径为4 mm的全价颗粒饲料，通风避光处保存备用。
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表 1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) |
试验选用40只体重(34 kg左右)相近、健康状况良好的杜寒杂交断奶羔羊，随机分为4组，每组10只，试验羊单栏单只饲养。各组试验羊随机饲喂1种试验饲粮，于每天06:00、18:00饲喂，自由采食，自由饮水。按养殖厂的常规程序进行免疫和消毒。预试期10 d，正试期20 d。
1.3 样品的采集与制备每天准确称取每只羊的给料量，并回收剩余料量，统计每天的采食量，计算平均日采食量。在正式试验开始前、试验结束后进行空腹称重，除以试验天数即为平均日增重。
在饲养试验结束前1天，每组选择6只羊，静脉采集血液，分2份装于试管中，一份离心后取上清液，用于测定血清生化指标，另一份用肝素钠抗凝，用于测定血常规指标。
1.4 测定指标与方法 1.4.1 血常规指标取肝素钠抗凝处理的血液20 μL，注入180 μL 0.9%的生理盐水并充分摇匀后，用深圳迈瑞BC-3000pius全自动血液分析仪及配套试剂测定血常规指标。
1.4.2 血清生化指标血清中蛋白质和脂肪代谢相关指标(总蛋白、白蛋白、球蛋白、尿素氮、总胆红素、直接胆红素、肌酐、胆固醇、甘油三酯含量)采用日本和光提供的试剂盒，按说明书，在日立7020型全自动生化分析仪上进行测定。
血清中酶(谷丙转氨酶、天门冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶、γ-谷酰基转移酶)活性采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒，使用UV762型紫外分光光度计测定。
血清中矿物元素(钾、钠、钙、磷、镁、铁)含量使用日立7180型全自动生化分析仪进行测定。
1.5 数据处理与分析试验数据用平均值±标准误表示，采用SPSS 13.0软件进行单因素方差分析，并采用Duncan氏法进行多重比较，P < 0.05和P < 0.01分别表示差异显著和极显著。
2 结果与分析 2.1 酵母硒对杜寒杂交羊生长性能的影响由表 2可知，在初始体重无显著差异(P>0.05)的情况下，饲粮中添加酵母硒对杜寒杂交羊的平均日增重无显著影响(P>0.05)，但随着硒添加量的增加，平均日增重呈先增高后降低的趋势，当硒添加量为0.2 mg/kg时，平均日增重最大，为257.78 g/d。随着硒添加量的增加，杜寒杂交羊的平均日采食量呈逐渐下降的趋势，但组间差异不显著(P>0.05)，当硒添加量为0.8 mg/kg时，平均日采食量最低。当硒添加量为0.2 mg/kg时，杜寒杂交羊的料重比最低，为4.93，极显著低于其他3个组(P < 0.01)，0.4 mg/kg组的料重比也极显著高于对照组和0.8 mg/kg组(P < 0.01)。
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表 2 酵母硒对杜寒杂交羊生长性能的影响 Table 2 Effects of selenium yeast on growth performance of Dorper×thin-tailed Han crossbred sheep |
由表 3可知，当硒添加量为0.8 mg/kg时，血小板计数最高，达412.00×109个/L，与其他各组相比差异极显著(P < 0.01)。当硒添加量为0.8 mg/kg时，嗜碱性粒细胞百分数最高，为0.72×109个/L，与硒添加量为0.4 mg/kg时相比差异极显著(P < 0.01)。饲粮中添加不同水平的硒对其他血常规指标均无显著影响(P>0.05)，但是随着硒添加量的增加，白细胞计数呈增加的趋势，当硒添加量为0.8 mg/kg时，白细胞计数最高，为14.05×109个/L。
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表 3 酵母硒对杜寒杂交羊血常规指标的影响 Table 3 Effects of selenium yeast on blood routine indexes of Dorper×thin-tailed Han crossbred sheep |
由表 4可知，当硒添加量为0.8 mg/kg时，血清中总蛋白含量最高，为73.63 g/L，极显著高于其他各组(P < 0.01)。当硒添加量为0.8 mg/kg时，血清中尿素氮含量最高，为10.54 mmol/L，显著高于其他各组(P < 0.05)。当硒添加量为0.8 mg/kg时，血清中肌酐含量最高，为149.28 μmol/L，极显著高于其他各组(P < 0.01)。血清中胆固醇的含量随硒添加量的增加呈现逐渐升高的趋势，硒添加量为0.8 mg/kg时达到最高，但各组之间差异不显著(P>0.05)。
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表 4 酵母硒对杜寒杂交羊血清中蛋白质和脂肪代谢相关指标的影响 Table 4 Effects of selenium yeast on serum related indexes of protein and fat metabolism of Dorper×thin-tailed Han crossbred sheep |
由表 5可知，0.8 mg/kg组血清中谷丙转氨酶的活性最高，34.03 U/L，显著高于对照组(P < 0.05)。当硒添加量为0.8 mg/kg时，血清中谷草转氨酶的活性最高，为154.22 U/L，与对照组相比差异极显著(P < 0.01)。对照组血清中碱性磷酸酶的活性最高，为458.58 U/L，与0.4和0.8 mg/kg组相比差异显著(P < 0.05)。当硒添加量为0.8 mg/kg时，血清中γ-谷酰基转移酶的活性最高，为107.08 U/L，极显著高于其他各组(P < 0.01)。
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表 5 酵母硒对杜寒杂交羊血清中酶活性的影响 Table 5 Effects of selenium yeast on serum enzyme activities of Dorper×thin-tailed Han crossbred sheep |
由表 6可知，当硒添加量为0.8 mg/kg时，血清中磷含量最高，为3.04 mmol/L，极显著高于0.2和0.4 mg/kg组(P < 0.01)。当硒添加量为0.8 mg/kg时，血清中铁含量最低，为45.31 μmol/L，极显著低于对照组(P < 0.01)，同时0.4 mg/kg组血清中铁含量也极显著低于对照组(P < 0.01)。
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表 6 酵母硒对杜寒杂交羊血清中矿物元素含量的影响 Table 6 Effects of selenium yeast on serum mineral contents of Dorper×thin-tailed Han crossbred sheep |
硒作为动物生长必需的一种矿物质元素，在对动物生长性能的影响方面有着大量的报道。Swain等[10]报道，在肉鸡饲粮中添加0.5 mg/kg硒时增重和饲料利用率最高。郭孝等[11]研究表明，在杜泊羊饲粮中添加15%的高硒苜蓿青干草，体增重和饲料转化率均极显著增加。黄玉邦等[12]在滩羊羔羊饲粮中分别添加0.1 mg/kg DM亚硒酸钠和富硒酵母，饲喂60 d后，富硒酵母组羔羊的生长性能与亚硒酸钠组差异不显著。黄志秋等[13]研究表明，精料中补充0.245 mg/kg亚硒酸钠，青年荷斯坦母牛体增重效果显著，比对照组平均体增重提高34.89%。Ammerman等[14]研究显示，在考虑硒的添加量时，必须首先考虑硒源的存在形式和生物有效性。不同动物硒的推荐添加量各不相同，即使是同一种动物，不同的研究得出的硒适宜添加量也不尽相同，这可能是由于不同国家和地区土壤以及植被中硒的存在形式、生物有效性及其含量存在差异而造成的。本试验中，饲粮中添加0.2 mg/kg的酵母硒形式的硒时，杜寒杂交羊的平均日增重最大，随着硒添加量的继续增加，平均日增重又开始降低；另外，随着硒添加量的增加，杜寒杂交羊的平均日采食量呈逐渐下降的趋势，但各组之间差异不显著。这一结果说明，适量的硒可以提高杜寒杂交羊的生长性能，这是因为硒能够增强动物机体对糖原、蛋白质和脂肪的分解，有利于机体能量的供给，从而促进生长[15]。但硒的最适添加量与中毒剂量之间差距较小，过量添加硒会降低杜寒杂交羊的生长性能，其原因可能是硒含量过高会抑制瘤胃微生物的生长。
3.2 酵母硒对杜寒杂交羊血常规指标的影响血小板是存在于哺乳动物血液中的有形成分之一，当血小板计数>400×109个/L时即为血小板计数增多。血小板增多症是以血小板计数增多，有出血倾向及血栓形成风险等为特点的疾病[16]。本试验中，当硒添加量为0.8 mg/kg时，血小板计数高达412.00×109个/L，屠宰试验中发现，个别羊皮下有出血，腹部有出血点，原因可能是硒添加量为0.8 mg/kg时对杜寒杂交羊造成了中毒。Ivancic等[17]研究表明，适量补硒能提高动物健康水平，提高生长速度，但是过量补硒将导致硒中毒。虽然国内外对硒中毒的研究颇多，但是它的作用机理仍难以弄清。Wendel[18]提出了硒中毒作用机制的活性氧自由基理论，这一理论认为亚硒酸盐(SeO32-)与谷胱甘肽反应产生的硒化氢(H2Se)与氧反应产生超氧阴离子自由基(O2-·)和其他形式的活性氧，从而对机体造成损伤。嗜碱性粒细胞是白细胞的一种，其增多主要见于骨髓增生性疾病、中毒(铅、汞、锌等)及变态反应，当硒添加量为0.8 mg/kg时，嗜碱性粒细胞百分数为0.72%，显著高于对照组和0.2 mg/kg组，嗜碱性粒细胞的增多应该是硒过量引起了硒中毒。
3.3 酵母硒对杜寒杂交羊血清生化指标的影响血清中总蛋白、白蛋白、尿素氮可以反映动物体内蛋白质的代谢情况，在一定程度上体现了动物对蛋白质的消化吸收程度以及机体对蛋白质的合成代谢情况。当硒添加量为0.8 mg/kg时，血清中总蛋白含量最高，同时血清中尿素氮含量也高于其他各组，说明该组杜寒杂交羊对蛋白质的利用率较高。血液中肌酐的含量取决于肾小球的滤过功能，肾实质受损时血液中肌酐含量升高，当硒添加量为0.8 mg/kg时，血清中肌酐含量极显著高于其他各组，其原因可能是过量的硒导致肾功能损伤。
谷丙转氨酶主要存在于肝脏、心脏和骨骼肌中，肝细胞或某些组织损伤或坏死，都会使血液中谷丙转氨酶的活性升高。本试验中，当硒添加量为0.8 mg/kg时，血清中谷丙转氨酶的活性显著高于对照组，其原因可能是硒沉积在肝脏中，对肝功能造成了一定程度的损伤。谷草转氨酶主要存在于肝细胞线粒体内，当肝脏发生严重坏死或破坏时，才能引起谷草转氨酶在血清中活性的升高。本试验中，当硒添加量为0.8 mg/kg时，血清中谷草转氨酶的活性高达154.22 U/L，与对照组相比差异极显著，说明肝功能受到了损伤。碱性磷酸酶存在于机体的各个组织中，以骨骼、肝脏、肾脏中活性较高，碱性磷酸酶活性升高预示着肝脏异常，碱性磷酸酶活性降低可见于慢性肾炎、贫血、甲状腺机能不全。本试验中，对照组血清中碱性磷酸酶活性显著高于0.4、0.8 mg/kg组。血清中γ-谷氨酰转移酶主要来自肝脏，肝脏损伤会导致血清中此酶活性升高。本试验中，当硒添加量为0.8 mg/kg时，血清中γ-谷氨酰转移酶的活性极显著高于其他各组。综上所述，饲粮中添加0.8 mg/kg酵母硒形式的硒时，会对杜寒杂交羊的肝脏造成损伤。
血液中的电解质在体内发挥着重要的生理作用，维持血液渗透压和酸碱平衡，维持神经和肌肉的应激反应等。高剂量的硒会与部分微量元素产生拮抗作用，如硒与钼、铬、铜、硫元素有拮抗作用，同时硒又能减轻汞、铜、铊、砷的毒性。本试验结果显示，饲粮中添加0.4和0.8 mg/kg酵母硒形式的硒导致血清中铁的含量极显著下降，这可能是饲粮中的硒阻碍了铁的吸收导致的，也可能饲粮中长期添加硒导致羊体内有炎症反应，引起慢性感染，导致血清中铁含量降低，但硒对血红蛋白含量并无显著影响。此外，饲粮中添加不同水平的硒对血清中钾、钠、钙、镁的含量均无显著影响，这与贺建忠[19]的研究结果一致。
4 结论综合本试验的测定指标来看，饲粮中添加0.8 mg/kg酵母硒形式的硒时，会导致杜寒杂交羊生长性能下降，并且有皮下出血等疑似中毒的症状。根据本试验结果，推荐体重为34 kg左右的杜寒杂交羊饲粮中酵母硒形式硒的添加量为0.2 mg/kg(饲粮中硒含量的实测值为0.307 mg/kg)。
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