随着畜牧业的迅速发展，动物所需的饲料量也越来越多，造成了饲料资源的相对短缺，尤其是优质的蛋白质饲料资源缺乏严重[1]。为了弥补蛋白质饲料资源的不足，我国几乎每年都要从国外进口大量的鱼粉、豆粕等蛋白质饲料原料[2-3]。因此，优化产业结构、注重发展节粮型畜牧业，成为畜牧行业的必由之路[4]。驴是一种耐粗饲的草食家畜，具有较高的经济价值[5]，但目前关于驴的营养需求和饲养管理的研究较少。周小玲等[6]研究发现，给泌乳母驴补饲高蛋白质、高脂肪的精饲料可提高驴的产乳量，但对乳成分的影响不显著。有学者研究发现可用牛乳替代驴乳来促进早期断奶驴驹的生长发育[7]。据报道，蛋白质水平的提高可投高陕北白绒山羊的日增重和精液品质[8]。Titi等[9]报道，高蛋白质水平(18%)饲粮与中蛋白质水平(16%)饲粮对山羊体重无显著影响，且试验后期采食中蛋白质水平(16%)饲粮的山羊体重大于采食高蛋白质水平(18%)饲粮的山羊，说明过高的蛋白质水平并不能对动物产生积极作用。本试验通过将精饲料、粗饲料原料混匀后，压制成颗粒饲料，来研究不同蛋白质水平的全混合颗粒饲料对断奶驴驹生长发育、血液指标及血清酶活性的影响，为探索断奶驴驹最适饲粮蛋白质水平提供理论依据。
1 材料与方法 1.1 试验动物及试验设计采用单因子试验设计，选取健康体况良好的5~6月龄公驴驹30匹，将驴驹编号后，根据体重相近原则，随机分为3组，饲喂消化能水平接近而蛋白质水平分别为12.10%(试验Ⅰ组)、13.95%(试验Ⅱ组)和15.87%(试验Ⅲ组)的全混合颗粒饲料。试验饲粮参考NRC(2007)[10]成年体重200 kg马的营养需要配制，其组成及营养水平见表 1。
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表 1 试验饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) |
本试验采用低温制粒法[12]，将粗饲料、精饲料及预混料充分混匀后，压制成体积(直径0.5 cm左右、长度1.0~1.5 cm)适合驴驹采食的全混合颗粒饲料。所有试验动物均采用单独圈舍饲养，根据其采食量大致按3 : 3 : 4的比例在早、中、晚各饲喂1次，自由采食，以每天称取余料的方式精确记录每匹驴的日采食量，自由饮水。试验共计70 d，前10天为适应期，后60天为正试期，正试期的前31天为试验前期，后29天为试验后期。试验期间按常规免疫程序驱虫和消毒。
1.3 样品采集分别于试验前期和后期的最后1天，每个组随机选取8头驴，使用真空促凝管和抗凝管各采集血液15 mL。将真空促凝管于37 ℃水浴静置10 min，3 000 r/min下离心10 min，分离血清，-20 ℃保存待测，采用全自动生化分析仪(COBAS MIRA Plus，罗士公司，瑞士)测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)和乳酸脱氢酶(LDH)活性。抗凝管中血液采用全自动血液分析仪(KX-21，希森美康，日本)测定白细胞数量(WBC)、淋巴细胞数量(LYM#)、中间细胞数量(MID#)、粒细胞数量(GRAN#)、血红蛋白含量(HGB)、红细胞数量(RBC)及红细胞压积(HCT)。
1.4 体重及体尺的测定分别在正试期第1、32、61天早晨空腹称重并测量体尺数据。根据体重和采食量计算平均日增重、料重比。测定的体尺数据有体高、体长、尻长、胸围和管围，根据体尺数据计算体尺指标，计算格公式如下：
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试验数据采用SAS 9.2软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，采用Duncan氏法进行多重比较，试验结果采用“平均值±标准差”表示，P<0.05表示差异显著。
2 结果与分析 2.1 不同蛋白质水平的全混合颗粒饲料对断奶驴驹生长性能的影响由表 2可知，试验前期试验Ⅰ组和试验Ⅲ组的平均日增重显著高于试验Ⅱ组(P < 0.05)，试验Ⅱ组的平均日采食量低于试验Ⅰ组、试验Ⅲ组，试验Ⅰ组的料重比低于试验Ⅱ组、试验Ⅲ组，但差异均不显著(P>0.05)。试验后期试验Ⅱ组、试验Ⅲ组的平均日增重和平均日采食量显著高于试验Ⅰ组(P < 0.05)。试验全期，3种蛋白质水平的全混合颗粒饲料对平均日增重、平均日采食量和料重比均无显著影响(P>0.05)。
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表 2 不同组驴驹生长性能比较 Table 2 Comparison of growth performance of donkey foals in different groups |
由表 3可知，试验初始，3组间各项体尺指标均差异不显著(P>0.05)。由表 4可知，试验前期，3组间各项体尺指标均差异不显著(P>0.05)。由表 5可知，试验后期，试验Ⅰ组的体长指数显著高于试验Ⅱ组、试验Ⅲ组(P < 0.05)；试验Ⅱ组的体躯指数显著高于试验Ⅰ组(P < 0.05)，与试验Ⅲ组差异不显著(P>0.05)。
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表 3 不同组驴驹初始体尺比较 Table 3 Comparison of initial body measurements of donkey foals in different groups |
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表 4 不同组驴驹试验前期(第36天)体尺指标比较 Table 4 Comparison of body measurements at early trial period of donkey foals in different groups |
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表 5 不同组驴驹试验后期体尺比较 Table 5 Comparison of body measurements at later trial period of donkey foals in different groups |
由表 6可知，试验前期，试验Ⅲ组的淋巴细胞数量显著高于试验Ⅰ组、试验Ⅱ组(P < 0.05)；试验Ⅰ组、试验Ⅲ组的中间细胞数量显著高于试验Ⅱ组(P < 0.05)；试验Ⅰ组的粒细胞数量显著高于试验Ⅱ组(P < 0.05)；试验Ⅰ组的红细胞数量显著高于试验Ⅱ组、试验Ⅲ组(P<0.05)；试验Ⅰ组、试验Ⅱ组的红细胞压积显著高于试验Ⅲ组(P < 0.05)。
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表 6 不同组驴驹试验前期血液学指标比较 Table 6 Comparison of haematological indexes at early trial period of donkey foals in different groups |
由表 7可知，试验后期，试验Ⅰ组的白细胞数量显著高于试验Ⅱ组、试验Ⅲ组(P < 0.05)；试验Ⅰ组的淋巴细胞数量显著高于试验Ⅱ组、试验Ⅲ组(P < 0.05)；试验Ⅰ组的中间细胞数量显著高于试验Ⅱ组、试验Ⅲ组(P < 0.05)；试验Ⅰ组、试验Ⅲ组的粒细胞数量显著高于试验Ⅱ组(P < 0.05)；试验Ⅱ组、试验Ⅲ组的血红蛋白含量显著高于试验Ⅰ组(P < 0.05)。
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表 7 不同组驴驹试验后期血液学指标比较 Table 7 Comparison of haematological indexes at later trial period of donkey foals in different groups |
由表 8可知，试验前期，试验Ⅰ组、试验Ⅲ组谷丙转氨酶活性显著高于试验Ⅱ组(P < 0.05)；试验Ⅱ组的谷草转氨酶活性显著高于试验Ⅲ组(P < 0.05)；试验Ⅰ组、试验Ⅲ组碱性磷酸酶活性显著高于试验Ⅱ组(P<0.05)。
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表 8 不同组驴驹试验前期血清酶活性比较 Table 8 Comparison of serum enzyme activities at early trial period of donkey foals in different groups |
由表 9可知，试验后期，试验Ⅱ组的谷丙转氨酶活性显著高于试验Ⅰ组、试验Ⅲ组(P < 0.05)；试验Ⅲ组的碱性磷酸酶活性显著高于试验Ⅱ组(P < 0.05)。
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表 9 不同组驴驹试验后期血清酶活性比较 Table 9 Comparison of serum enzyme activities at late trial period of donkey foals in different groups |
饲粮的蛋白质水平对动物的生长发育起着关键作用。许多研究表明，给断奶羔羊提供蛋白质水平较高的饲粮，利于其体重的增加，且饲粮蛋白质水平与日增重的变化呈正相关[13-15]。Ott等[16]研究表明，提高饲粮蛋白质水平可提高马驹的采食量，降低饲粮蛋白质水平则会影响马驹的采食量。Schryver等[17]选用24匹4月龄的小马驹，分为4组，分别饲喂蛋白质水平为9%(低蛋白质组)、14%(中蛋白质组)和20%(高蛋白质组)且其他营养物质含量相同的饲粮，5个月后，低蛋白质组的小马驹在体重、日增重及采食量方面显著低于高、中蛋白质组，而后2组的相关指标差异不显著；随后，将低蛋白质组小马驹改喂高蛋白质组饲粮，5个月后，低蛋白质组与高蛋白质组的相关指标差异不显著。以上试验结果表明，饲粮蛋白质水平提高可促进马驹的采食量，提高日增重，与本研究中试验后期的结果一致。本研究中，试验前期，试验Ⅰ组和试验Ⅲ组的平均日增重显著高于试验Ⅱ组，且降低了平均日采食量而提高了料重比。分析认为，由于本试验中饲粮蛋白质水平呈明显的梯度变化，而其他养分含量及饲养管理水平基本一致，所以可能主要从以下3个方面影响了其生长性能的发挥：1)试验Ⅱ组饲粮氨基酸平衡性较差，对其产生了一定的影响。研究表明，氨基酸具有调节机体免疫的作用，饲粮氨基酸比例的不平衡或缺乏可引起蛋白质合成抑制，生长速度和饲料报酬降低，生产性能下降，减弱抗体和白细胞对入侵病原菌的应答，降低抵抗力[18-19]。2)由表 6可知，试验Ⅱ组驴驹淋巴细胞数量和中间细胞数量显著低于试验Ⅰ组、试验Ⅲ组，且白细胞数低于马属动物的正常范围，说明此阶段其免疫力较低，可能间接影响了生长性能的发挥。3)由表 8可知，试验Ⅱ组驴驹血清中碱性磷酸酶活性显著低于试验Ⅰ组、试验Ⅲ组，而碱性磷酸酶的不足会导致糖类、脂肪等转氨基作用减弱，从而影响机体蛋白质的合成，进而导致生长性能下降。试验后期，随着饲粮蛋白质水平的提高，试验Ⅱ组、试验Ⅲ组驴驹的平均日增重显著高于试验Ⅰ组，平均日采食量也有所升高，说明在本试验所设定的蛋白质水平范围内，提高饲粮蛋白质水平可促进试验后期驴驹的采食，提高增重，这与Coskuntuna等[20]的研究结果相同。但饲喂全混合颗粒饲料要有一定的适应期，这种增重效果才能体现，且随饲粮蛋白质水平的提高增重趋势逐渐降低。试验全期，各组间平均日增重、平均日采食量、料重比的差异均不显著。本研究结果表明：13.95%的饲粮蛋白质水平降低了试验前期驴驹的生长性能，提高饲粮蛋白质水平促进了试验后期驴驹的平均日增重和平均日采食量，但不同饲粮蛋白质水平对试验全期驴驹的生长性能均无显著影响。
3.2 不同蛋白质水平的全混合颗粒饲料对断奶驴驹体尺发育的影响体尺指标作为动物生长发育的重要标志，主要受营养状况和遗传潜力相互作用关系的影响[21]。根据Gompertz模型得出动物各体尺指标出现拐点的顺序不同，及体尺的发育呈现出不平衡性，先增加体长和体高，其次是深度，最后是宽度和厚度[22]。周小玲等[5]选用5~6月龄驴驹饲喂消化能为13.7 MJ/kg，但粗蛋白质水平分别为12.47%和17.19%的饲粮60 d后，经测定，2组驴驹的体尺指标无显著差异。本试验中，试验Ⅰ组初始管围显著低于试验Ⅱ组、试验Ⅲ组，但随着试验的进行，差距逐渐缩小，试验前期和后期均已不显著，说明不同蛋白质水平饲粮对管围发育没有显著影响；3个组的初始体长指数差异不显著，但在试验后期，试验Ⅰ组驴驹的体长指数显著高于试验Ⅱ组、试验Ⅲ组，说明12.10%的饲粮蛋白质水平较13.95%和15.87%的饲粮蛋白质水平促进了体长与体高的比率；3个组的初始体躯指数差异不显著，但在试验后期，试验Ⅱ组试验Ⅲ组此指标有高于试验Ⅰ组的趋势，且试验Ⅱ组显著高于试验Ⅰ组，说明饲粮蛋白质水平的提高，促进了胸围与体长的比率。以上试验结果表明，低蛋白质水平促进了驴驹体长的发育，蛋白质水平的提高促进了驴驹胸围的发育。研究表明，疆岳驴的体重与体尺指标有极显著的相关性，通过建立最优回归方程表明，影响体重的重要指标依次为胸围、体高和体长。因此，在驴的选育、提纯复壮和保种时应以胸围为主兼顾体高和体长，公驴应考虑管围，参照最优回归模型可以获得好的效果[23-24]。上述结果得出，在体尺发育过程中，胸围对体重的影响较显著，高蛋白质饲粮可促进驴驹胸围的发育和增重效应。
3.3 不同蛋白质水平的全混合颗粒饲料对断奶驴驹血液学指标的影响血液学指标主要包括血液中各种细胞的数量，可以直观地反映出动物机体的健康状况。白细胞可吞噬病原菌，对机体有防卫作用；淋巴细胞是发挥机体免疫功能的重要成员，主要由T、B淋巴细胞组成；中间细胞包括单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞，如其数量持续增高可能机体有病变反应；粒细胞是白细胞的一个分类，具有防卫作用；红细胞可以运送氧气，同时还有免疫功能；血红蛋白是红细胞内运送氧的特殊蛋白质，红细胞的生理机能主要由它完成；红细胞压积可间接反映红细胞数量、大小和体积。王定发等[25]采用2个蛋白质水平(15%和17%)和3个消化能水平(11.72、12.55、13.39 MJ/kg DM)设计6种精料补充料，以自由采食的方式饲喂海南黑山羊，饲喂90 d后，经测定发现17%蛋白质精料组黑山羊血液中胆固醇、总蛋白和血红蛋白含量显著高于15%蛋白质精料组，精料中蛋白质水平对黑山羊血液中红细胞数量和白细胞数量的影响不显著。尹福泉等[26]研究不同精粗比饲粮对雷州山羊血液生化指标影响时发现，白细胞数量随饲粮精料比例的提高显著降低，而红细胞数量、血红蛋白含量和红细胞压积随饲粮精料比例的提高而增多，与本研究中试验后期结果一致。本研究中，试验前期试验Ⅱ组驴驹在淋巴细胞数量、中间细胞数量、粒细胞数量方面都低于试验Ⅰ组、试验Ⅲ组，且都在正常范围内，在一定程度上反映出此阶段机体免疫机能相对其他组较弱，也与其生长性能较差能很好的吻合起来；另外，由表 8可知，试验Ⅱ组驴驹的血清谷丙转氨酶、碱性磷酸酶活性显著低于试验Ⅰ组、试验Ⅲ组，且都在正常可参考范围内[27-28], 表明相对于试验Ⅰ组、试验Ⅲ组，试验Ⅱ组驴驹此阶段蛋白质合成代谢缓慢，机体对营养物质的转化效率较低，且影响了骨骼的钙化与骨质的形成，从而影响了机体的免疫应答功能，使免疫细胞数量下降。当然，饲粮所提供氨基酸的种类、数量和比例，也可能对此阶段的机体免疫水平有一定的影响[18-19]。试验后期，试验Ⅰ组白细胞数量、淋巴细胞数量及中间细胞数量显著高于试验Ⅱ组、试验Ⅲ组，说明试验Ⅰ组的饲粮蛋白质水平在此阶段可能对这些指标有正效应；由表 7可知，各试验组除白细胞数量比标准范围略高，淋巴细胞数量及中间细胞数量都在正常可参考范围内，且淋巴细胞及中间细胞都是机体免疫应答功能的重要细胞成分，参与机体的体液免疫，所以可以在一定程度上反映试验Ⅰ组的饲粮蛋白质水平增强了机体的免疫功能。另外，提高饲粮蛋白质水平显著提高了驴驹红细胞数量、血红蛋白含量和红细胞压积，说明提高饲粮蛋白质水平可以提高携氧能力，具有改善血液循环的功能。本研究结果表明：12.10%的饲粮蛋白质水平可以增强机体免疫力，提高饲粮蛋白质水平可以增强机体携氧能力，改善血液循环。
3.4 不同蛋白质水平的全混合颗粒饲料对断奶驴驹血清酶活性的影响许多动物组织器官的功能障碍和慢性疾病可通过血清酶的活性来诊断[29]。有学者研究发现血清酶活性可作为肝脏健康和应激反应程度的重要指标[30-31]。谷丙转氨酶主要存在于肝脏细胞浆内，可以催化谷氨酸和丙酮酸之间的转氨基作用；谷草转氨酶可以催化天冬氨酸的转氨基作用，生成谷氨酸和草酰乙酸；碱性磷酸酶广泛存在于肝脏、骨骼等组织中，可以催化底物去磷酸化生成磷酸根离子和游离的羟基[32-33]。孟凡生等[34]采用蛋白质水平分别为10.0%、12.5%、15.0%的3种饲粮饲喂奶山羊60 d后，经测定，饲粮蛋白质水平对血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性无显著影响；王贤东等[35]采用11~12岁的处于泌乳期的伊犁马为试验动物，日饲喂粗蛋白质的量分别为1.20、1.35、1.44和1.55 kg/d，研究粗蛋白质饲喂量对马驹血清酶活性的影响，结果发现各组间血清谷丙转氨酶活性差异不显著，但粗蛋白质饲喂量1.35 kg/d组马驹血清谷草转氨酶活性显著提高[27]。在本研究中，试验前期试验Ⅱ组血清谷草转氨酶活性高于试验Ⅰ组、试验Ⅲ组，说明饲粮高和低蛋白质水平都提高了驴驹血清谷草转氨酶活性，即血清谷草转氨酶活性主要受高和低蛋白质水平的影响。试验前期试验Ⅱ组驴驹血清谷丙转氨酶、碱性磷酸酶活性显著低于试验Ⅰ组、试验Ⅲ组，与其血细胞中主要免疫细胞数量相对较少、生长性能相对较低相吻合。这可能是由于其机体免疫力较低或饲粮氨基酸平衡较差等原因导致机体对营养物质的转化效率降低，从而影响了血清谷丙转氨酶、碱性磷酸酶的活性。试验后期，随着饲粮蛋白质水平的提高，驴驹血清谷丙转氨酶、碱性磷酸酶活性有所提高，且都在正常可参考范围内，说明此阶段蛋白质水平提高促进了谷丙转氨酶、碱性磷酸酶的生成，加快了蛋白质的合成代谢与骨骼的钙化进程，与试验后期驴驹生长性能的提高相一致。本研究结果表明：血清谷草转氨酶活性主要受低和高蛋白质水平饲粮的影响，提高饲粮蛋白质水平的可升高血清谷丙转氨酶和碱性磷酸酶的活性。
4 结论本试验条件下，12.10%蛋白质水平的全混合颗粒饲料可满足断奶驴驹正常生长与体尺发育的需要，且能维持较高的机体免疫水平及适宜的血清酶活性。综合经济效益与饲养效果的最优原则，确定断奶驴驹全混合颗粒饲料的最佳蛋白质水平为12.10%。
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