瘤胃微生物对蛋氨酸的利用及微生物氮流转特征研究

引用本文

任傲, 朱晋佳, 陈亮, 孔志伟, 刘倩, 郭乙冰, 徐琪翔, 周传社, 张彬, 谭支良. 瘤胃微生物对蛋氨酸的利用及微生物氮流转特征研究[J]. 动物营养学报, 2019, 31(9): 4061-4069.

REN Ao, ZHU Jinjia, CHEN Liang, KONG Zhiwei, LIU Qian, GUO Yibing, XU Qixiang, ZHOU Chuanshe, ZHANG Bin, TAN Zhiliang. Utilization of Methionine by Rumen Microorganisms and Characteristics of Microbial Nitrogen Transfer[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2019, 31(9): 4061-4069.

瘤胃微生物对蛋氨酸的利用及微生物氮流转特征研究

任傲^1,2 , 朱晋佳^1,2 ^*, 陈亮^1,2 , 孔志伟² , 刘倩² , 郭乙冰^2,3 , 徐琪翔² , 周传社^1,2 , 张彬¹ , 谭支良²

1. 湖南农业大学动物科技学院, 长沙 410128;
2. 中国科学院亚热带农业生态研究所, 长沙 410125;
3. 西南大学动物科学学院, 重庆 402460

收稿日期: 2019-03-06

基金项目: 国家自然科学基金面上项目——瘤胃细菌蛋氨酸与赖氨酸的合成与分解代谢路径及调控机理（31772632）

作者简介: 任傲(1992-), 男, 湖南岳阳人, 博士研究生, 研究方向为反刍动物营养。E-mail:renao606@163.com.

通信作者: 周传社, 研究员, 硕士生导师, E-mail:zcs@isa.ac.cn;
张彬, 教授, 博士生导师, E-mail:zhb8236@126.com.

* 同等贡献作者

摘要: 本试验旨在利用同位素标记法研究瘤胃微生物对蛋氨酸（Met）的利用及Met对微生物氮流转的影响。试验以玉米-豆粕型精料（0.5 g）和玉米-秸秆型饲粮（0.5 g）为发酵底物，采用单因子试验设计，设试验组和对照组。试验组添加0.33 μmol同位素标记的碳13蛋氨酸（¹³C-Met，以0.18 mL溶液的形式添加到体外培养底物中），对照组添加等量蒸馏水，探究Met对体外发酵pH和氨态氮（NH₃-N）、挥发性脂肪酸（VFA）、微生物氮、微生物Met含量以及微生物¹³C丰度的影响。结果表明：1）添加Met能极显著提高发酵液的pH（P < 0.01）；2）添加Met能极显著提高微生物¹³C的丰度（P < 0.01）；3）添加Met对NH₃-N、VFA、微生物氮、微生物Met含量均没有显著影响（P>0.05）。由此可见，瘤胃微生物可有效利用Met，Met对发酵特性有一定的影响，但不影响微生物氮的流转。

关键词: 蛋氨酸 ¹³C丰度发酵特性微生物氮

Utilization of Methionine by Rumen Microorganisms and Characteristics of Microbial Nitrogen Transfer

REN Ao^1,2 , ZHU Jinjia^1,2 ^*, CHEN Liang^1,2 , KONG Zhiwei² , LIU Qian² , GUO Yibing^2,3 , XU Qixiang² , ZHOU Chuanshe^1,2 , ZHANG Bin¹ , TAN Zhiliang²

1. College of Animal Science and Technology, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, China;
2. Institute of Subtropical Agricultural Ecology, Chinese Academy of Sciences, Changsha 410125, China;
3. College of Animal Science, Southwest University, Chongqing 402460, China

Corresponding author: ZHOU Chuanshe, professor, E-mail:zcs@isa.ac.cn;
ZHANG Bin, professor, E-mail:zhb8236@126.com.

* Contributed equally

Abstract: The aim of this study was to investigate the utilization of methionine (Met) by rumen microorganisms and effects of Met on microbial nitrogen transfer. Corn-soybean meal concentrate and (0.5 g) and corn-straw diet (0.5 g) were used for fermentation substrates, the study was conducted as one-factor block experimental design, and set up test group and control group. The test group was supplemented with 0.33 μmol isotope labeling ¹³C methionine (¹³C-Met, addition of 0.18 mL solution to in vitro culture substrate), and the control group was supplemented with equivalent distilled water, to explore the effects of Met on in vitro fermentation pH, the contents of ammonia nitrogen (NH₃-N), volatile fatty acid (VFA), microbial nitrogen and microbial Met and the abundance of ¹³C in microbial. The results showed as follows:1) adding Met could significantly increase the pH of fermentation liquid (P < 0.01); 2) adding Met could significantly increase the abundance of ¹³C in microorganisms (P < 0.01); 3) adding Met had no significant effects on the contents of NH₃-N, VFA, microbial nitrogen and microbial Met (P>0.05). Therefore, it can be inferred that rumen microorganisms can effectively utilize Met, Met has some influence on fermentation characteristics, but do not affect the flow of microbial nitrogen.

Key words: Met δ¹³C fermentation characteristics microbial nitrogen

蛋氨酸作为生长山羊玉米-豆粕型精料和玉米-秸秆型饲粮的第一限制性氨基酸，能够提高反刍动物氨基酸利用效率，其缺乏会导致其他氨基酸的利用率下降^[1]。瘤胃保护性蛋氨酸能改善反刍动物生产性能。据报道，瘤胃保护性蛋氨酸能提高山羊的产奶量和乳品质^[2]，提高荷斯坦奶公牛的生长效率和能量利用效率^[3]，泌乳期奶山羊饲喂瘤胃保护性蛋氨酸能够减少体重损失^[4]。瘤胃非保护性蛋氨酸在反刍动物上的应用也有一定的研究。Barry等^[5]研究发现，腹膜注射和口服DL-蛋氨酸均能提高青年绵羊的增重；王杰等^[6]研究发现，限制饲粮中蛋氨酸水平会降低羔羊瘤胃重量、生长性能和屠宰性能，恢复蛋氨酸水平后，羔羊生长性能及内脏器官发育状况也随之恢复；而Lodman等^[7]研究证明，DL-蛋氨酸对奶牛体重、体况都没有显著影响，DL-蛋氨酸对奶牛的产奶性能也没有显著影响^[8]。这说明瘤胃非保护性蛋氨酸对反刍动物的影响具有不可预测性。研究表明，瘤胃非保护性氨基酸可能会对反刍动物营养与养生理功能产生积极或消极的影响，这可能与瘤胃微生物的存在有关^[9]，但相关原因仍需进一步研究证实。因此，氨基酸在瘤胃内的代谢是目前的一个研究热点。

细菌与原虫在瘤胃氮代谢过程中发挥着重要的作用。非保护性氨基酸在瘤胃中被细菌分解成氨态氮(NH₃-N)、有机酸、二氧化碳(CO₂)，或者直接被微生物吸收合成微生物蛋白质，一些细菌缺乏将氨基酸从细胞质转运到细胞外的机制，所以当氨基酸吸收过量时必须以NH₃-H的形式释放到胞外^[10]。原虫最重要的功能是它们能吞噬大分子物质、蛋白质、碳水化合物(CHO)以及细菌，而且由于原虫不能利用NH₃-N，所以原虫能为细菌生长提供可溶性蛋白质，调节细菌氮周转^[11]。因此，非保护性氨基酸主要通过影响发酵参数与微生物氮代谢进而影响反刍动物营养与生理功能。但是细菌与原虫如何利用蛋氨酸以及如何通过利用蛋氨酸影响发酵参数和微生物氮代谢仍有待进一步研究。因此，本试验通过稳定同位素标记法探究蛋氨酸对体外发酵特性的影响、细菌与原虫对蛋氨酸的利用情况以及氮素在细菌与原虫之间的流转情况，以期为反刍家畜蛋氨酸营养提供理论基础。

1 材料与方法 1.1 试验材料

发酵底物：玉米-豆粕型精料及玉米-秸秆型基础饲粮，基础饲粮组成及营养水平见表 1。

表 1 基础饲粮组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (DM basis)

添加剂：蛋氨酸为同位素标记的碳13蛋氨酸(¹³C-Met)，纯度98%，碳13(¹³C)标记率99%，由美国安德沃公司提供，其中蛋氨酸碳链上的1号碳原子用¹³C标记。

1.2 试验方法 1.2.1 试验设计

本试验采用单因子随机区组试验设计，设置对照组(C组)和试验组(T组)，对照组不添加蛋氨酸，试验组添加0.33 μmol蛋氨酸(具体添加物为¹³C-Met，以0.18 mL溶液的形式添加到体外培养底物中)，蛋氨酸添加量参照Fowler等^[12]的研究。每组设置12、24、36、48、72 h 5个采样时间点，每个采样时间点设置3个样品重复。

1.2.2 人工瘤胃液配制

晨饲前采集3头瘘管羊瘤胃食糜，用6层纱布过滤，滤液等体积混合后，装入事先充满CO₂并预热到39.5 ℃的保温瓶中，迅速带回实验室，与39.5 ℃预热的厌氧缓冲液混合(缓冲液体积:瘤胃液体积=4:1)，缓冲液按照Cone等^[13]提供的配方配制，并持续通入CO₂。

1.2.3 体外培养

称取0.5 g玉米-豆粕型精料和0.5 g玉米-秸秆型饲粮于发酵瓶中，向试验组发酵瓶中加入0.18 mL蛋氨酸溶液，对照组加入0.18 mL蒸馏水。将发酵瓶置于39.5 ℃恒温培养箱中预热，向发酵瓶中通入CO₂，随后加入60 mL发酵液，并持续通入CO₂，立即加上瓶塞瓶盖，并使用针头放气，使内外压强保持一致，然后迅速放回恒温培养箱，39.5 ℃恒温摇床(50 r/min)培养。

1.2.4 样品采集与处理

于发酵时间的12、24、36、48、72 h各采集10 mL发酵液于-20 ℃保存，用于全氮的测定；取1.5 mL发酵液，加入0.15 mL 25%偏磷酸，-20 ℃保存，用于挥发性脂肪酸(VFA)和氨态氮含量测定；剩余发酵液用400目尼龙布过滤，收集滤渣与滤液，利用pH计(REX PHS-3C，上海仪器设备厂)立即测定滤液pH；滤渣65 ℃烘干，供全氮含量测定；滤液500×g离心10 min收集沉淀，用10 mL生理盐水洗涤后再用500×g离心10 min，重复冲洗3次得到原虫；上清液离心(20 000×g，15 min，4 ℃)收集细菌，用生理盐水重复洗3遍得到细菌，细菌和原虫在-80 ℃下冷冻干燥供¹³C丰度(δ¹³C)测定。

1.2.5 指标测定方法 1.2.5.1 发酵参数测定方法

NH₃-N含量测定参照Wang等^[14]的方法，VFA含量测定参考Chen等^[15]方法，全氮含量的测定参考Horwitz^[16]的方法，发酵液pH测定参照陈亮等^[17]的方法。

1.2.5.2 δ¹³C测定方法

稳定碳同位素丰度的测定参照Zhou等^[18]的方法，采用MAT253型质谱仪测定，称取1 mg样品，加入装有1 g氧化铜(CuO)的Pyrex管中，排出空气，在550 ℃下燃烧6 h，使样品中的碳全部转化成CO₂，稳定碳同位素的丰度用低温蒸馏CO₂测定，以δ¹³C的形式表示。

1.2.6 计算公式

微生物氮和微生物蛋氨酸含量的计算公式^[12]如下：

1.3 数据处理与统计分析

所有数据采用Excel 2013进行初步统计，数据采用SAS 9.2的Proc Mixed统计分析，组间差异采用contrast语句进行比较。P < 0.05表示差异显著，P < 0.01表示差异极显著。

2 结果 2.1 蛋氨酸对体外发酵特性的影响

由表 2可知，添加蛋氨酸可极显著提高发酵液的pH(P＜0.01)，且随着时间的增加，各组发酵液pH极显著降低(P＜0.01)。试验组与对照组之间发酵液的NH₃-N含量无显著差异(P＞0.05)，但随着时间的增加，各组发酵液的NH₃-N含量极显著增加(P＜0.01)。添加蛋氨酸对发酵液各VFA、总挥发性脂肪酸(TVFA)含量及乙酸/丙酸均无显著影响(P＞0.05)，但随着时间的增加，各组各VFA、TVFA含量及乙酸/丙酸均显著或极显著增加(P＜0.05或P＜0.01)。除乙酸外，蛋氨酸与时间对各VFA、TVFA含量均无显著交互效应(P＞0.05)。

表 2 蛋氨酸对体外发酵特性的影响 Table 2 Effects of Met on in vitro fermentation characteristics

项目 Items	组别 Groups	平均值 Average	时间Time/h					SEM		P值P-value
			12	24	36	48	72	蛋氨酸 Met	时间 Time	蛋氨酸 Met	时间 Time	交互效应 Interaction
								蛋氨酸 Met	时间 Time	蛋氨酸 Met	时间 Time	交互效应 Interaction
pH	C	6.53^B	6.87^a	6.75^b	6.30^cd	6.38^c	6.34^c	0.01	0.02 0.17	< 0.01	< 0.01 < 0.01	NS
pH	T	6.59^A	6.97^a	6.90^a	6.41^b	6.35^b	6.31^b	0.01	0.02 0.17	< 0.01	< 0.01 < 0.01	NS
氨态氮 NH₃-N/(mg/dL)	C	24.01	16.34^d	14.61^d	20.84^c	32.02^b	36.19^a	0.51	2.18 1.78	NS	< 0.01 < 0.01	NS
氨态氮 NH₃-N/(mg/dL)	T	23.04	17.04^c	11.41^d	22.07^b	32.25^a	32.44^a	0.51	2.18 1.78	NS	< 0.01 < 0.01	NS
乙酸 Acetic acid/(mmol/L)	C	49.87	15.82^c	42.96^b	50.04^b	66.27^a	74.24^a	1.63	5.59 6.93	NS	< 0.01 < 0.01	< 0.05
乙酸 Acetic acid/(mmol/L)	T	50.09	18.32^d	31.70^c	56.82^b	75.85^a	67.79^ab	1.63	5.59 6.93	NS	< 0.01 < 0.01	< 0.05
丙酸 Propionic acid/(mmol/L)	C	18.52	6.31^c	16.73^b	18.64^b	24.20^a	26.74^a	0.62	1.92 2.78	NS	< 0.01 < 0.01	NS
丙酸 Propionic acid/(mmol/L)	T	18.61	7.26^d	12.36^c	21.53^b	27.24^a	24.64^ab	0.62	1.92 2.78	NS	< 0.01 < 0.01	NS
丁酸 Butyric acid/(mmol/L)	C	5.77	1.92^c	4.99^b	5.89^b	7.68^a	8.35^a	0.20	0.92 0.63	NS	< 0.01 < 0.01	NS
丁酸 Butyric acid/(mmol/L)	T	5.72	2.03^d	3.67^c	6.51^b	8.72^a	7.98^a	0.20	0.92 0.63	NS	< 0.01 < 0.01	NS
戊酸 Valeric acid/(mmol/L)	C	0.82	0.19^d	0.49^c	0.78^b	1.22^a	1.41^a	0.03	0.11 0.11	NS	< 0.01 < 0.01	NS
戊酸 Valeric acid/(mmol/L)	T	0.84	0.20^c	0.35^c	0.95^b	1.32^a	1.41^a	0.03	0.11 0.11	NS	< 0.01 < 0.01	NS
异丁酸 Isobutyric acid/(mmol/L)	C	0.51	0.10^d	0.20^d	0.49^c	0.79^b	0.98^a	0.02	0.09 0.08	NS	< 0.01 < 0.01	NS
异丁酸 Isobutyric acid/(mmol/L)	T	0.51	0.11^c	0.07^d	0.58^b	0.89^a	0.90^a		0.09 0.08	NS	< 0.01 < 0.01	NS
异戊酸 Isovaleric acid/(mmol/L)	C	1.02	0.13^d	0.44^d	0.91^c	1.59^b	2.05^a	0.04	0.18 0.15	NS	< 0.01 < 0.01	NS
异戊酸 Isovaleric acid/(mmol/L)	T	1.05	0.13^c	0.24^c	1.12^b	1.77^a	1.99^a	0.04	0.18 0.15	NS	< 0.01 < 0.01	NS
总挥发性脂肪酸 TVFA/(mmol/L)	C	76.52	24.48^c	65.82^b	76.76^b	101.78^a	113.63^a	2.47	8.64 10.38	NS	< 0.01 < 0.01	NS
总挥发性脂肪酸 TVFA/(mmol/L)	T	76.84	28.06^d	48.11^c	87.52^b	104.71^a	115.78^ab	2.47	8.64 10.38	NS	< 0.01 < 0.01	NS
乙酸/丙酸 Acetic acid/propionic acid	C	2.65	2.50^c	2.57^bc	2.68^abc	2.74^ab	2.78^a	0.02	0.11 0.07	NS	< 0.05 < 0.01	NS
乙酸/丙酸 Acetic acid/propionic acid	T	2.66	2.52^c	2.57^c	2.64^bc	2.80^ab	2.75^a	0.02	0.11 0.07	NS	< 0.05 < 0.01	NS
平均值的同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P < 0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P < 0.01)，相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。时间的同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P < 0.05)，相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。NS表示差异不显著(P>0.05)。下表同。 In the same column of average, values with different small letter superscripts mean significant difference (P < 0.05), and with different capital letter superscripts mean significant difference (P < 0.01), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). In the same row of time, values with different small letter superscripts mean significant difference (P < 0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). NS mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

表 2 蛋氨酸对体外发酵特性的影响 Table 2 Effects of Met on in vitro fermentation characteristics

2.2 蛋氨酸对细菌和原虫δ¹³C的影响

由表 3可知，添加蛋氨酸极显著提高了细菌和原虫δ¹³C(P＜0.01)。试验组细菌δ¹³C在12~24 h显著降低(P＜0.05)，24~36 h显著升高(P＜0.05)，36~48 h显著降低(P＜0.05)，蛋氨酸与时间对细菌δ¹³C有极显著交互效应(P＜0.01)。随着时间的增加，对照组细菌δ¹³C以及试验组和对照组原虫δ¹³C均无显著差异(P＞0.05)。

表 3 蛋氨酸对细菌、原虫δ¹³C的影响 Table 3 Effects of Met on δ¹³C of bacteria and protozoa

2.3 蛋氨酸对微生物氮代谢的影响

由表 4可知，在不同组之间以及不同时间点之间，未降解氮、总非氨态氮、总微生物氮、增加的微生物氮、总微生物蛋氨酸、增加的微生物蛋氨酸、细菌蛋氨酸、增加的细菌蛋氨酸、原虫蛋氨酸、增加的原虫蛋氨酸含量均没有显著差异(P＞0.05)，且蛋氨酸与时间对上述指标没有显著交互效应(P＞0.05)。

表 4 蛋氨酸对微生物氮及原虫和细菌蛋氨酸含量的影响 Table 4 Effects of Met on microbial nitrogen and content of Met in protozoa and bacteria

3 讨论 3.1 蛋氨酸对体外发酵特性的影响

瘤胃pH作为研究瘤胃发酵的重要指标，其变化可以反映瘤胃内环境的状况，一般认为，瘤胃pH在5.5~7.5之间是保持瘤胃正常发酵的必要前提^[19]，本试验添加蛋氨酸极显著提高了发酵液的pH，但发酵过程中发酵液的pH在6.28~6.99变化，属于瘤胃发酵正常范围。NH₃-N是瘤胃微生物降解饲料肽、氨基酸、蛋白质、尿素、氨化物及非蛋白氮的终产物；瘤胃微生物可以通过去氨基作用降解氨基酸产生NH₃-N^[8]，而NH₃-N是瘤胃微生物合成微生物蛋白的主要氮源，研究表明，瘤胃中约50%的细菌以NH₃-N作为唯一氮源就能正常生长，并且有26%的细菌必须以NH₃-N作为氮源维持生长需要^[19]。Chung等^[8]研究发现，添加0.26%的蛋氨酸对体外发酵液中的NH₃-N含量没有显著影响，但添加0.52%的蛋氨酸能显著提高体外发酵液中的NH₃-N含量。Baghbanzadeh-Nobari等^[20]研究表明，饲粮添加0.12%蛋氨酸对母羊的瘤胃瘤胃发酵特性没有影响。通过这些研究结果我们发现蛋氨酸添加量低于0.26%时不会影响NH₃-N的含量。而本研究中，蛋氨酸添加量为0.33 μmol/g底物(相当于饲粮的0.004 95%)，添加量明显低于0.26%，故发酵液的NH₃-N含量不受蛋氨酸的影响。蛋氨酸在瘤胃中被微生物分解成NH₃-N与有机酸或者直接被微生物吸收利用，VFA是反刍动物重要的能量来源，可为宿主提供70%~80%的能量，乙酸是反刍动物脂肪合成的前体物，而丙酸则是葡萄糖合成的前体物，因此乙酸与丙酸的比例能影响反刍动物能量利用效率与能量储存部位^[21]。Chung等^[8]研究表明，添加0.52%的蛋氨酸能提高体外发酵液中的丁酸含量，而添加0.26%的蛋氨酸不影响体外发酵液中的VFA含量。而本研究中，发酵液的VFA、TVFA含量和乙酸/丙酸均无显著差异，可能是蛋氨酸的添加量较低，不足以引起VFA含量的变化。而随着时间的增加，NH₃-N和VFA含量显著增加，这是因为分批培养过程中微生物降解饲料产生的NH₃-N和VFA未被消耗而在发酵液中累积，VFA的累积导致pH随时间增长而下降。

3.2 蛋氨酸对细菌和原虫δ¹³C的影响

瘤胃微生物可以通过去氨基作用脱去氨基酸的氨基，然后利用氨基酸中的碳为自身供能。本研究中，试验组的细菌δ¹³C显著高于对照组，说明细菌确实可以直接利用蛋氨酸，这与Onodera等^[22]的研究结果(试验组的原虫δ¹³C极显著高于对照组)一致。而研究表明，在除去细菌的培养液中，原虫仅仅能生存3~4 d^[23]。Quinn^[24]发现在缺乏活菌的情况下，内毛虫(Entodinia)迅速死亡，只有等毛虫属(isotricha)繁殖迅速。Rahman等^[25]通过试验推测出细菌与原虫之间的2个关系：第一，细菌可以作为原虫的营养物质；第二，消耗抑制原虫活动的代谢产物。Onodera等^[22]研究发现，纤毛虫可以降解蛋氨酸酸产生二氨基丁酸；但Williams等^[26]发现当有细菌存在的情况下，原虫更倾向于吞噬细菌获得生长所需的物质；王洪荣等^[21]也证实了原虫能吞噬瘤胃细菌作为自身生长营养物质。所以，本试验中原虫体内¹³C可能来自吞噬细菌和直接摄取发酵液中¹³C-Met获得，但更多的来自于吞噬的细菌。细菌体内δ¹³C在12~72 h出现反复降低与升高的情况，这可能是细菌降解¹³C-Met后将含有¹³C的代谢产物释放的发酵液中以及细菌对代谢产物的重复吸收利用，即¹³C在细菌与发酵液之间周转造成的。

3.3 蛋氨酸对微生物氮和微生物蛋氨酸含量的影响

瘤胃氮代谢分为2个部分，包括微生物对蛋白质的降解和微生物蛋白质的合成^[27]；瘤胃微生物利用饲料中的氮合成微生物蛋白质，可以提供反刍动物可吸收蛋白质总量的50%~80%^[28]，有研究表明，较低的pH能够降低粗蛋白质的降解率^[29-30]，但是瘤胃微生物产生的蛋白质水解酶能在一个较宽的pH范围内发挥活性^[31]，而本研究中pH在正常范围内波动，这可能是本研究中添加蛋氨酸显著提高pH，但未降解饲料氮含量没有显著变化的原因。Shriver等^[32]研究发现，pH的改变不会影响微生物氮的含量，这是由于瘤胃微生物生长状态保持不变，这与本研究结果一致。氮是反刍动物氨基酸、多肽以及蛋白质合成必不可少的元素，研究表明，50%以上的微生物氮来源于NH₃-N，其余的来自肽和氨基酸，当能量供应不足时，微生物通过去氨基作用将氨基酸转化成VFA供能，当能量充足时，微生物可以直接吸收利用氨基酸进行蛋白质合成^[27]，本研究中能量供应充足，故蛋氨酸主要被微生物吸收合成蛋白质，提高微生物氮的含量。Cardozo等^[33]研究发现，连续培养物中多肽、氨基酸以及NH₃-N的含量在采食8 h后恢复采食前水平，说明采食8 h后整个发酵内环境恢复稳定，微生物氮流转维持在平衡状态，而本研究中采样的时间点都在12 h以上，添加的蛋氨酸已被完全降解，故增加的微生物氮、细菌氮、原虫氮、微生物蛋氨酸、细菌蛋氨酸以及原虫蛋氨酸含量在不同组以及不同时间点之间都没有显著差异。

4 结论

① 蛋氨酸能提高体外发酵的pH，但对NH₃-N、VFA含量没有显著影响。

② 细菌可以直接摄取利用蛋氨酸。

③ 蛋氨酸对微生物氮代谢没有显著影响。

参考文献

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