2. 抚松县松江河特种动物繁育养殖中心, 抚松 134500
2. Fusong County Songjiang River Special Animal Breeding Center, Fusong 134500, China
饲粮中添加适当比例的油脂可以满足动物机体对必需脂肪酸的需求，改善饲粮的适口性，提高饲料利用率[1]。研究发现，向奶牛饲粮中添加植物油能通过瘤胃微生物代谢作用改变乳汁脂肪酸组成，增加有益于身体健康的多不饱和脂肪酸如共扼亚油酸(CLA)的含量[2-4]；给奶牛饲喂富含亚油酸和亚麻酸的豆油、胡麻油或油籽能够提高乳脂CLA或n-3脂肪酸含量[5-6]。然而，饲粮中添加过多油脂会影响瘤胃发酵类型、挥发性脂肪酸产量、乙酸与丙酸的比例、营养物质利用及纤维素的消化等[7]，对瘤胃微生物具有抑制甚至毒害作用[8]。梅花鹿的瘤胃微生物区系与牛、羊存在差异[9]，对油脂的利用与传统家畜可能有所不同，而在此方面国内外尚无相关报道。因此，本试验旨在研究饲粮脂肪水平对3岁生茸期梅花鹿营养物质消化率、血清生化指标及瘤胃液挥发性脂肪酸组成的影响，为梅花鹿养殖生产中饲粮的配制提供理论参考依据。
1 材料与方法 1.1 试验动物与地点选择健康、平均体重为(115±23) kg的3岁雄性梅花鹿12头，饲养试验在中国农业科学院特产研究所茸鹿实验基地进行。
1.2 试验饲粮以玉米、豆粕、玉米胚芽、苜蓿草粉、亚麻油、食盐、预混料等按不同比例配制成脂肪水平分别为2%、4%、6%的试验饲粮，并将试验饲粮制成直径为0.4 cm、长度为1.2~1.5 cm的颗粒型全混合日粮。试验饲粮组成及营养水平见表 1。
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表 1 试验饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) |
将12头雄性梅花鹿随机分为3个组，每组4个重复，每个重复1头，各组梅花鹿出生时间相近。Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组梅花鹿分别饲喂脂肪水平2%、4%和6%的试验饲粮。试验期间每日07: 00和15:00分组定量饲喂，日饲喂量按该时期梅花鹿的饲粮需求量而定，以无明显剩料为准，自由饮水。试验从2015年5月15日开始至2015年7月23日结束，预试期7 d，正试期63 d。
1.4 样品采集 1.4.1 瘤胃液和血液样本采集试验第34天晨饲前麻醉试验鹿，然后颈静脉采血10 mL，4 000 r/min离心10 min，收集血清于1.5 mL EP管中，置于-80 ℃低温冰箱用于血清相关指标检测；然后使用开口器将梅花鹿口腔打开，将瘤胃导管通过开口器插入到瘤胃中部，抽动瘤胃导管使瘤胃液流出，先弃掉开始流出的50 mL左右的瘤胃液，之后采集瘤胃液20 mL，4 ℃下10 000 r/min离心10 min，收集上清置于冻存管中液氮保存，用于挥发性脂肪酸浓度的测定。
1.4.2 粪便样本采集于试验中期(2015年6月18—20日)连续3 d在鹿圈内定点收集粪便，每个鹿圈定点3个，09: 00—10: 00每个定点采集粪样150~200 g，尽量去除杂质。
1.5 指标测定及方法 1.5.1 饲粮及粪样营养成分含量及营养物质消化率的测定干物质含量采用105 ℃烘干法测定，参照GB/T 6435—2006；粗蛋白质含量采用凯氏定氮法测定，参照GB/T 6432—1994；粗脂肪含量采用索氏抽提法测定，参照GB/T 6433—1994；粗灰分含量采用550 ℃灼烧法测定，参照GB/T 6438—1992；钙含量采用乙二胺四乙酸(EDTA)络合滴定法测定，参照GB/T 6436—1992；磷含量采用钒钼酸铵比色法测定，参照GB/T 6437—1992；酸性洗涤纤维(ADF)和中性洗涤纤维(NDF)含量采用范氏洗涤纤维分析法测定，参照GB/T 20806—2006。营养物质消化率采用2 mol/L盐酸不溶灰分(AIA)法，参考文献[10]的计算公式计算：
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血清中葡萄糖(GLU)含量采用己糖激酶法测定，甘油三酯(TG)含量采用酶法测定，胆固醇(CHO)含量采用胆固醇氧化酶法测定，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量采用酶法测定，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量采用遮蔽法测定，免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、补体3(C3)和补体4(C4)含量均采用免疫透射比浊法测定, 胰岛素(INS)含量采用电化学发光法测定，总蛋白(TP)含量采用双缩脲法测定，球蛋白(ALB)含量采用溴甲酚绿法测定，球蛋白(GLB)含量为TP和ALB含量的差值，尿素氮(UN)含量采用尿酶紫外速率法测定。血清中所有生化指标均采用罗氏(Roche)公司生产的试剂盒进行测定。
1.5.3 瘤胃液挥发性脂肪酸浓度的测定瘤胃液挥发性脂肪酸浓度的测定参考Li等[11]的方法，采用安捷伦6890气相色谱仪进行，主要测定瘤胃液乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、异戊酸、戊酸和总挥发性脂肪酸浓度。
1.6 数据统计与分析试验数据先采用Excel 2003进行整理，然后采用SAS 9.3软件的ANOVA程序进行统计分析，多重比较采用Duncan氏法进行，以P < 0.05为差异显著，P < 0.01为差异极显著，P>0.05为差异不显著。
2 结果 2.1 饲粮脂肪水平对3岁生茸期梅花鹿营养物质消化率的影响由表 2可知，饲粮脂肪水平对粗蛋白质、粗脂肪、钙和磷的消化率产生了显著或极显著影响(P < 0.05或P < 0.01)，Ⅰ组粗蛋白质消化率显著高于Ⅲ组(P < 0.05)，与Ⅱ组差异不显著(P>0.05)；Ⅰ组粗脂肪、钙和磷消化率极显著高于Ⅱ组和Ⅲ组(P < 0.01)，Ⅱ组极显著高于Ⅲ组(P < 0.01)；饲粮脂肪水平对干物质消化率无显著影响(P>0.05)。
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表 2 饲粮脂肪水平对3岁生茸期梅花鹿营养物质消化率的影响 Table 2 Effects of dietary fat level on nutrient digestibility of 3-year-old sika deer during velvet antler growth period |
由表 3可知，饲粮脂肪水平对血清GLU含量有极显著影响(P < 0.01)，具体表现为Ⅰ组和Ⅲ组极显著高于Ⅱ组(P < 0.01)，Ⅰ组与Ⅲ组之间差异不显著(P>0.05)；饲粮脂肪水平对血清TG、CHO、HDL-L和LDL-L含量均无显著影响(P>0.05)。
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表 3 饲粮脂肪水平对3岁生茸期梅花鹿血清糖脂代谢指标的影响 Table 3 Effects of dietary fat level on serum glucose and lipid metabolism indexes of 3-year-old sika deer during velvet antler growth period |
由表 4可知，饲粮脂肪水平对血清IgA和C3含量产生了显著影响(P < 0.05)，对血清IgM、IgG、C4和INS含量未产生显著影响(P>0.05)。其中，Ⅰ组IgA含量显著高于Ⅲ组(P < 0.05)，与Ⅱ组差异不显著(P>0.05)；Ⅰ组C3含量显著高于Ⅱ组和Ⅲ组(P < 0.05)，Ⅱ组与Ⅲ组之间差异不显著(P>0.05)。
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表 4 饲粮脂肪水平对3岁生茸期梅花鹿血清免疫指标的影响 Table 4 Effects of dietary fat level on serum immune indexes of 3-year-old sika deer during velvet antler growth period |
由表 5可知，饲粮脂肪水平对血清TP含量有显著影响(P < 0.05)，具体表现为Ⅱ组显著高于Ⅲ组(P < 0.05)，与Ⅰ组差异不显著(P>0.05)；饲粮脂肪水平对血清ALB、GLB和UN含量无显著影响(P>0.05)。
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表 5 饲粮脂肪水平对3岁生茸期梅花鹿血清蛋白质代谢指标的影响 Table 5 Effects of dietary fat level on serum protein metabolism indexes of 3-year-old sika deer during velvet antler growth period |
由表 6可知，饲粮脂肪水平对瘤胃液中乙酸、丙酸、丁酸、戊酸和总挥发性脂肪酸浓度产生了极显著或显著影响(P < 0.01或P < 0.05)，对异丁酸和异戊酸无显著影响(P>0.05)。其中，Ⅰ组和Ⅱ组乙酸、丁酸、总挥发性脂肪酸浓度极显著高于Ⅲ组(P < 0.01)，Ⅰ组与Ⅱ组之间差异不显著(P>0.05)；Ⅱ组丙酸、戊酸浓度显著高于Ⅲ组(P < 0.05)，与Ⅰ组差异不显著(P>0.05)。
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表 6 饲粮不同脂肪水平对3岁生茸期梅花鹿瘤胃液挥发性脂肪酸组成的影响 Table 6 Effects of dietary fat level on volatile fatty acid composition in rumen fluid of 3-year-old sika deer during velvet antler growth period |
饲粮中添加油脂在一定程度上能提高反刍动物的生产性能。动物生产中常基于脂肪适口性好、含能高的特点，适当提高饲粮中脂肪的用量，以改善饲料适口性，提高饲料转化效率[12]。研究表明，在奶牛常规饲粮中分别添加200、300、350 g/(d·头)过瘤胃保护油脂(脂肪酸钙)后产奶量分别较添加前提高了10.6%、19.3%和26.6%[13-15]。本试验发现，随饲粮脂肪水平的升高，粗蛋白质、粗脂肪、钙和磷消化率均呈下降趋势，说明饲粮中脂肪水平达到一定程度会对梅花鹿瘤胃微生物产生影响，从而抑制对营养物质的消化利用，3周岁处于生茸期的梅花鹿摄取外源营养物质和动用自身的营养成分主要为满足鹿茸的生长，但梅花鹿的瘤胃微生物区系与牛、羊存在差异[9]，可能是导致瘤胃微生物对饲粮过多脂肪利用率低的原因，这一结果与瘤胃中挥发性脂肪酸组成变化相一致，但具体机制还有待深入分析。
3.2 饲粮脂肪水平对3岁生茸期梅花鹿血清生化指标的影响研究报道，奶牛饲粮中添加200 g/(d·头)脂肪酸钙升高了其血清GLU含量，这与添加脂肪酸钙为乳糖及其他物质的合成提供了原料[16]有关；奶牛基础饲粮中添加200 g/(d·头)过瘤胃脂肪，试验组奶牛产后28 d血清GLU含量逐渐上升，并高于对照组，这与饲粮中添加过瘤胃脂肪有关[17]。本试验直接在饲粮中添加油脂而非保护性脂肪，随饲粮脂肪水平的升高，血清GLU含量先降低然后又升高，且饲粮脂肪水平最高组血清GLU含量最高，这可能是由于添加油脂提高了能量水平而阻碍了糖酵解[18]，或由于脂肪提供脂肪酸，进一步促进了糖异生作用，但具体机制还需进一步研究。本试验中未添加油脂组即饲粮脂肪水平为2%组，血清IgA和C3含量高于其他组，且随饲粮脂肪水平的升高，血清IgA和C3含量呈显著降低趋势，其他免疫指标虽未达到显著水平，但也有逐渐降低趋势，分析其原因可能是由于梅花鹿采食未被保护的脂肪，脂肪中的多不饱和脂肪酸经瘤胃微生物降解后变成饱和脂肪酸，不能以n-3多不饱和脂肪酸的形式被利用，还可能是由于添加油脂抑制了瘤胃微生物的活动，影响其他营养成分的消化吸收，从而降低了机体的免疫性能。有研究显示，补充过瘤胃脂肪未显著影响产后奶牛血浆TP、ALB、GLB和UN含量，说明过瘤胃脂肪不影响体内蛋白质和氨基酸代谢[19]。本试验结果显示，随着饲粮脂肪水平的升高，血清TP含量呈先升高后降低趋势，而对ALB、GLB和UN含量未产生显著影响，与上述文献报道不尽相同，说明适量油脂的添加有利于梅花鹿体内蛋白质的代谢与利用，但过量后则会影响体内蛋白质的消化与吸收。
3.3 饲粮脂肪水平对3岁生茸期梅花鹿瘤胃液挥发性脂肪酸组成的影响饲粮中添加植物油对瘤胃发酵产生的挥发性脂肪酸的组成的影响比较复杂，与脂肪的添加量和种类等有关[6]。添加玉米油对瘤胃发酵所产生的总挥发性脂肪酸浓度依其添加比例有不同的影响，当添加量(4%)低时基本不影响[20]。当豆油添加量低于3.3%时可使总挥发性脂肪酸的产量增加，但添加量超过5.0%时则会减少[21]。研究显示，在阉羊饲粮中添加10%豆油后瘤胃液中总挥发性脂肪酸浓度显著下降，乙酸比例较对照组下降8.1%，丙酸比例较对照组升高11.8%[22]；饲粮添加植物油显著降低了瘤胃液丁酸、戊酸和总挥发性脂肪酸浓度，乙酸和丙酸浓度无显著变化但有降低的趋势[6]。本试验结果显示，随着饲粮脂肪水平的升高，梅花鹿瘤胃液中乙酸、丙酸、丁酸、戊酸和总挥发性脂肪酸浓度呈先升高后降低趋势，饲粮脂肪水平4%时梅花鹿瘤胃液中乙酸、丙酸、丁酸、戊酸和总挥发性脂肪酸浓度较高，而当饲粮脂肪水平达到6%时，上述各种挥发性脂肪酸浓度显著或极显著降低，这与上述文献结果相一致，说明饲粮过量添加脂肪会扰乱瘤胃发酵平衡[23-25]，而适量添加含有不饱和脂肪酸的植物油对瘤胃发酵不会产生负面影响[26]。
4 结论从节约饲养成本及提高营养物质利用角度考虑，饲喂脂肪水平为2%的饲粮有利于营养物质消化吸收，保证瘤胃处于正常内环境，能够满足3岁生茸期梅花鹿健康生产需求。
| [1] |
王颖, 严昌国, 金英海, 等. 植物油在反刍动物饲料中的应用[J]. 饲料工业, 2006, 27(23): 49-51. DOI:10.3969/j.issn.1001-991X.2006.23.015 |
| [2] |
PIPEROVA L S, SAMPUGNA J, TETER B B. Duodenal and milk trans octadecenoic acid and conjugated linoleic acid (CLA) isomers indicate that postabsorptive synthesis is the predominant source of cis-9-containing CLA in lactating dairy cows[J]. The Journal of Nutrition, 2002, 132(6): 1235-1241. DOI:10.1093/jn/132.6.1235 |
| [3] |
PIPEROVA L S, TETER B B, BRUCKENTAL I, et al. Mammary lipogenic enzyme activity, trans fatty acids and conjugated linoleic acids are altered in lactating dairy cows fed a milk fat-depressing diet[J]. The Journal of Nutrition, 2000, 130(10): 2568-2574. DOI:10.1093/jn/130.10.2568 |
| [4] |
ROCHE H M, NOONE E, GIBNEY A N, et al. Conjugated linoleic acid:a novel therapeutic nutrient[J]. Nutrition Research Reviews, 2001, 14(1): 173-188. DOI:10.1079/095442201108729187 |
| [5] |
CHILLIARD Y, FERLAY A, DOREAU M. Effect of different types of forages, animal fat or marine oils in cow's diet on milk fat secretion and composition, especially conjugated linoleic acid (CLA) and polyunsaturated fatty acids[J]. Livestock Production Science, 2001, 70(1/2): 31-48. |
| [6] |
杨舒黎.日粮添加豆油和胡麻油对奶牛瘤胃细菌及发酵参数的影响[D].博士学位论文.北京: 中国农业科学院, 2007: 1-4.
|
| [7] |
FUJIHARA T, MAEDA S, MATSUI T, et al. The effect of treated (spray-dried) beef-tallow supplementation on feed digestion, ruminal fermentation and fat nutrition in sheep[J]. Animal Science and Technology, 1996, 67(1): 14-23. |
| [8] |
MACHMVLLER A, OSSOWSKI D A, WANNER M, et al. Potential of various fatty feeds to reduce methane release from rumen fermentation in vitro(Rusitec)[J]. Animal Feed Science and Technology, 1998, 71(1/2): 117-130. |
| [9] |
李志鹏.梅花鹿瘤胃微生物多样性与优势菌群分析[D].硕士学位论文.北京: 中国农业科学院, 2013: 36-42.
|
| [10] |
王钰明, 赵峰, 陈寿飞, 等. 猪生长阶段与饲粮类型对酸不溶灰分法测定养分消化率的影响[J]. 动物营养学报, 2015, 27(3): 811-819. DOI:10.3969/j.issn.1006-267x.2015.03.019 |
| [11] |
LI Z P, WRIGHT A D G, LIU H L, et al. Response of the rumen microbiota of sika deer (Cervus nippon) fed different concentrations of tannin rich plants[J]. PLoS One, 2015, 10(5). |
| [12] |
郑晓中, 冯仰廉.反刍家畜脂肪补充饲料的研究与应用[C]//中国畜牧医学会第十届会员代表大学暨学术年会论文集.北京: 中国农业大学出版社, 1996: 67-70.
|
| [13] |
张仲平, 张峰. 奶牛日粮中添加脂肪酸钙试验[J]. 饲料工业, 1993, 14(8): 29. |
| [14] |
高士争, 雷风, 杨炳毅, 等. 脂肪酸钙添加剂提高奶牛生产性能的研究[J]. 中国奶牛, 1998(4): 21-22. |
| [15] |
BOODIOLU P, FOLLEGATTI L, LANZINI A, et al. Fatty acid calcium soaps is animal feeding.In vitro behaviour and technological/practical consideration[[J]. Rivista Italiana-delle Sostanze Grasse, 1999, 70: 271-274. |
| [16] |
刘艳琴, 高洁, 高玉红, 等. 炎热夏季奶牛日粮中添加脂肪酸钙对热应激影响的研究[J]. 草食家畜, 1999(4): 37-39. |
| [17] |
蔡瑞琪.添加过瘤胃脂肪对奶牛产后生产性能、血液生化指标及激素的影响[D].硕士学位论文.银川: 宁夏大学, 2016: 15-20.
|
| [18] |
PALMQUIST D L.Meeting the energy needs of dairy cows during early lactation[C]//Proceedings of the Tri-State Dairy Nutrition Conference Ft.Wayne, IN: [s.n.], 1993: 43-50.
|
| [19] |
张克春, 谭勋, 王小龙. 瘤胃稳定性脂肪对产后奶牛产奶量和血液生化指标的影响[J]. 上海交通大学学报:农业科学版, 2006, 24(3): 293-297. |
| [20] |
李凤学. 添加玉米油对瘤胃挥发性脂肪酸(VFA)浓度及比例的影响[J]. 张家口农专学报, 2000, 16(2): 1-7. |
| [21] |
CLINQUART A, VAN EENAEME C, DUFRASNE I, et al. Soya oil in the diet of growing-fattening bulls.Ⅱ.Effects on metabolism in the rumen, apparent digestibility, plasma hormones and metabolites[J]. Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition, 1995, 74(1/2/3/4/5): 15-23. |
| [22] |
JENKINS T C. Butylsoyamide protects soybean oil from ruminal biohydrogenation:effects of butylsoyamide on plasma fatty acids and nutrient digestion in sheep[J]. Journal of Animal Science, 1995, 73(3): 818-823. DOI:10.2527/1995.733818x |
| [23] |
GONTHIER C, MUSTAFA A F, BERTHIAUME R, et al. Effects of feeding micronized and extruded flaxseed on ruminal fermentation and nutrient utilization by dairy cows[J]. Journal of Dairy Science, 2004, 87(6): 1854-1863. DOI:10.3168/jds.S0022-0302(04)73343-3 |
| [24] |
JENKINS T C. Lipid metabolism in the rumen[J]. Journal of Dairy Science, 1993, 76(12): 3851-3863. DOI:10.3168/jds.S0022-0302(93)77727-9 |
| [25] |
KLUSMEYER T H, LYNCH G L, CLAR J H, et al. Effects of calcium salts of fatty acids and proportion of forage in diet on ruminal fermentation and nutrient flow to duodenum of cows[J]. Journal of Dairy Science, 1991, 74(7): 2220-2232. DOI:10.3168/jds.S0022-0302(91)78395-1 |
| [26] |
刘瑞芳, 嘎尔迪, 伊福泉, 等. 日粮中添加不同植物油对奶牛瘤胃内环境的影响[J]. 内蒙古农业大学学报, 2006, 27(4): 54-57. |