2. 甘肃农业大学动物科学技术学院, 兰州 730070;
3. 中国农业大学动物科学技术学院, 北京 100193;
4. 河南农业大学牧医工程学院, 郑州 450002
2. College of Animal Science and Technology, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China;
3. College of Animal Science and Technology, China Agricultural University, Beijing 100193, China;
4. College of Animal Husbandry and Veterinary Science, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China
竹叶(bamboo leaf, BL)和茶叶渣(tea-leaves residue, TR)是我国南方地区重要的经济作物副产物,2017年茶叶产量达到255万t[1],竹子种植量达到4万km2。有研究表明,茶叶浸提之后的茶叶渣中含有丰富的单宁、茶皂素等化合物,竹叶中含有丰富的竹叶黄酮、竹叶多糖[2],能够调节机体的免疫和抗氧化能力[3],具有不可忽视的利用价值。竹叶和茶叶渣中含有较高的粗蛋白质(CP)和中性洗涤纤维(NDF),具备成为反刍动物粗饲料来源的可能性,如果将竹叶和茶叶渣开发成粗饲料资源,不仅可以减少对环境的污染和资源的浪费,而且可以充分利用地域性资源缓解我国粗饲料的紧缺状况。犊牛出生时瘤胃功能尚未完善,随后快速发育,到3~4月龄时复胃容积比例接近于成年牛,同时瘤胃对粗饲料的消化能力不断增强[4],此时饲粮中的NDF对促进咀嚼和反刍功能具有重要意义。已有的文献显示,犊牛饲粮中的纤维性碳水化合物的来源和组成能够调控犊牛的生长发育、采食量[5]和日增重[6],且维持适宜的NDF水平能够保证犊牛瘤胃的正常发育[7-8],并影响犊牛对营养物质的消化利用[9]。茶叶渣和竹叶可否作为犊牛饲粮中NDF来源,其生物活性成分是否可发挥积极作用,目前尚未见到系统的研究。因此,本试验旨在相同的饲粮NDF水平下,以不同NDF来源的竹叶、茶叶渣或苜蓿(alfalfa hay, AH)为粗饲料配制成全混合日粮(TMR),研究其对断奶犊牛生长性能、消化代谢、血清抗氧化和免疫指标的影响,为研究竹叶和茶叶渣在断奶犊牛饲粮中的利用提供科学依据。
1 材料与方法 1.1 试验材料竹叶(产自江西省)风干后粉碎鞣制成1.5~2.0 cm;茶叶渣(浸提茶叶之后的副产物)晒干;紫花苜蓿(产自河南省,初花期收割)粉碎鞣制至1.5~2.0 cm。苜蓿、竹叶和茶叶渣的纤维特性见表 1。
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表 1 苜蓿、竹叶和茶叶渣的纤维特性(干物质基础) Table 1 Fibre characteristic of alfalfa hay, bamboo leaf and tea-leaves residue (DM basis) |
试验采用单因素设计,选取45头105日龄、体重(92.77±5.61) kg的断奶荷斯坦公犊牛,随机分成3组,每组15头犊牛。3组分别饲喂以苜蓿(AH组)、竹叶(BL组)或茶叶渣(TR组)为主要NDF来源配制的TMR,通过玉米、麸皮和豆粕调整TMR的营养水平中NDF、CP和代谢能(ME)相同。试验饲粮的营养水平参照NRC(2001)[10],其组成及营养水平见表 2。试验全期75 d(预试期15 d,正试期60 d)。
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表 2 试验饲粮组成及营养水平(干物质基础) Table 2 Composition and nutrient levels of experimental diets (DM basis) |
犊牛清晨空腹称重,并佩戴耳标和驱虫,转至犊牛岛(4.5 m×1.5 m)内单栏饲养并提供单独的水槽和料槽。按体重的3.5%[干物质(DM)基础]投喂TMR,每天08:00和16:00各投喂1次。自由采食、自由饮水。犊牛岛每周清理和消毒1次。
1.4 样品采集与测定 1.4.1 饲料样品的采集与测定每天晨饲前称量每头犊牛的剩料量,用于计算每天的干物质采食量(DMI)。每天采集200 g左右的鲜料样和每头犊牛的剩料样于-20 ℃保存。参照AOAC(2000)[12]的方法测定饲料样、剩料样和粗饲料(苜蓿、竹叶和茶叶渣)中的营养成分。采用FOSS自动蛋白分析仪(Kjetle-8240)测定CP含量,采用Fiber Analyzer(ANKOM 200)测定NDF、酸性洗涤纤维(ADF)和木质素含量,采用全自动氧弹量热仪(PARR-6400)测定总能(GE),采用ANKOM-XT15i全自动脂肪分析仪测定粗脂肪(EE)含量,采用马弗炉测定粗灰分(Ash)含量。通过Megazyme淀粉试剂盒(Bray Business Park Bray, Co.,爱尔兰)测定淀粉含量。计算半纤维素和纤维素含量:
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参照Van Amburgh等[13]的方法计算饲粮康乃尔净碳水化合物和净蛋白质体系(CNCPS)中可溶性纤维(CB2)、可消化纤维(CB3)和不消化纤维(CC)部分的含量。
1.4.2 生长性能的测定在犊牛120、135、150、165和180日龄晨饲前空腹称量犊牛的体重,计算每头犊牛每一阶段的(ADG)和料重比(F/G)。
1.4.3 粪样和尿样的收集与分析通过全收粪尿法在140和170日龄时,每个组选择6头体重相近的犊牛进行2次消化代谢试验,每次试验预试期3 d,正试期4天。记录每头犊牛每天的采食量、粪排出量、尿排出量。收集每天混匀的粪样100 g和尿样100 mL,分别加入50和10 mL的硫酸溶液(10%)固氮,于-20 ℃保存待测。
粪样中CP、NDF、ADF、DM、Ash的含量和粪能,以及尿样中的尿能、尿氮依照AOAC(2000)[12]的方法测定,仪器设备如上所述。并计算饲粮的代谢能,其中甲烷能按总能的6.5%[11]计算。
1.4.4 血样的采集和测定每个组选择6头体重相近的犊牛,于试验期的120、150和180日龄晨饲前颈静脉采血10 mL于真空采血管中(不含抗凝剂),1 500×g离心30 min,并收集血清于-20 ℃保存待测。犊牛血清中的抗氧化和免疫指标采用标准试剂盒(南京建成生物工程研究所)测定,用KHB-1280全自动生化分析仪(科华ZY,上海科华生物工程股份有限公司)测定血清免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性及总抗氧化能力(T-AOC)。
1.5 数据统计分析运用SAS 9.2软件分析试验数据,试验期间的消化代谢数据采用one-way ANOVA模型,差异显著时用Duncan氏法进行多重比较;生长性能及血清抗氧化和免疫指标采用有重复测量数据的MIXED模型,差异显著时LSD法进行两两比较。P < 0.05为差异显著。
2 结果 2.1 竹叶和茶叶渣对断奶犊牛生长性能的影响由表 3可知,180日龄时,BL组的体重与AH组无显著差异(P>0.05),TR组的体重显著低于AH组(P < 0.05);120~135日龄时,TR组的ADG显著高于AH组(P < 0.05);151~165日龄时,TR组的F/G显著高于AH组(P < 0.05);166~180日龄时,TR组的ADG显著低于AH组(P < 0.05)。试验期间,BL组与AH组之间的ADG、DMI和F/G无显著差异(P>0.05)。
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表 3 竹叶和茶叶渣对断奶犊牛生长性能的影响 Table 3 Influences of bamboo leaf and tea-leaves residue on growth performance of weaned calves |
试验全期(120~180日龄),各组的ADG、DMI和F/G均受日龄的显著影响(P < 0.05),ADG和F/G均受饲粮和日龄之间交互作用的显著影响(P < 0.05)。
2.2 竹叶和茶叶渣对断奶犊牛营养物质表观消化率的影响由表 4可知,与AH组相比,BL和TR组的代谢体重、采食量、采食量/代谢体重和粪排出量差异不显著(P>0.05);BL组的DM和ADF表观消化率显著降低了7.23%和23.61%(P < 0.05),而OM和NDF表观消化率差异不显著(P>0.05);TR组的NDF表观消化率显著提高了20.05%(P < 0.05),而DM、OM和ADF表观消化率差异不显著(P>0.05)。
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表 4 竹叶和茶叶渣对断奶犊牛营养物质表观消化率的影响 Table 4 Influences of bamboo leaf and tea-leaves residue on nutrient apparent digestibilities of weaned calves |
由表 5可知,与AH组相比,BL、TR组的摄入总能、粪能、甲烷能、消化能和代谢能无显著差异(P>0.05),BL组的尿能、总能消化率、总能代谢率和消化能代谢率显著降低(P < 0.05),TR组的尿能、总能消化率、总能代谢率和消化能代谢率无显著差异(P>0.05)。
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表 5 竹叶和茶叶渣对断奶犊牛能量利用的影响 Table 5 Influences of bamboo leaf and tea-leaves residue on energy utilization of weaned calves |
由表 6可知,与AH组相比,BL、TR组的摄入氮、沉积氮、消化氮无显著差异(P>0.05);BL组的尿氮显著提高了54.90%(P < 0.05),氮沉积率显著降低了18.23%(P < 0.05);TR组的粪氮显著提高了24.77%(P < 0.05),氮表观消化率显著降低了11.54%(P < 0.05)。
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表 6 竹叶和茶叶渣对断奶犊牛氮代谢的影响 Table 6 Influences of bamboo leaf and tea-leaves residue on nitrogen metabolism of weaned calves |
由表 7可知,与AH组相比,BL、TR组的血清IgG、IgM含量和SOD活性无显著差异(P>0.05);BL和TR组的血清GSH-Px和CAT活性显著降低(P < 0.05),血清IgA、MDA含量显著升高(P < 0.05);BL组的血清T-AOC显著降低(P < 0.05)。
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表 7 竹叶和茶叶渣对断奶犊牛血清抗氧化和免疫指标的影响 Table 7 Influences of bamboo leaf and tea-leaves residue on serum antioxidant and immune indices of weaned calves |
饲粮的组成和营养水平影响犊牛对营养物质的吸收与利用,进一步影响机体的生长发育。茶叶渣含有茶皂素,能够改变瘤胃发酵和瘤胃微生物的相对丰度[14-16],进而影响犊牛对饲粮中营养物质的利用。在本研究中发现,茶叶渣饲粮相比苜蓿饲粮饲用价值较低,主要是随着犊牛的干物质采食量逐渐增加,茶叶渣的摄入量逐渐增加,而茶皂素等抗营养因子的摄入量也逐渐增加,影响了营养物质的利用[17-18],从而使饲喂茶叶渣饲粮断奶犊牛的F/G由2.38上升到4.89,而ADG由1.62 kg/d降至1.07 kg/d,表明断奶犊牛阶段饲粮中添加24.43%的茶叶渣作为粗饲料来源时相比苜蓿饲粮降低了犊牛的生长性能。饲喂竹叶饲粮断奶犊牛的体重、ADG和F/G与苜蓿饲粮之间无显著差异,这与倪晓燕等[19]在羔羊阶段补饲竹叶颗粒料的结果一致。本试验中,在151~165日龄时断奶犊牛的ADG均降低,可能是此试验阶段气温急剧降低,造成冷应激,犊牛将更多的能量用于热增耗,从而降低了生长性能。
3.2 竹叶和茶叶渣对断奶犊牛消化代谢的影响犊牛从出生到成年其消化系统的结构和功能逐渐完善,到3~4月龄时复胃容积比例接近于成年牛,瘤胃对粗饲料的消化能力不断增强[4]。反刍动物能够将饲粮中的NDF在瘤胃中降解为挥发性脂肪酸(VFA)[20],并为犊牛提供能量来源,同时保证其他营养物质的消化利用[21]。Castells等[22]在犊牛饲粮中添加燕麦干草、大麦秸秆、黑麦干草与添加苜蓿干草时取得了相似的结果。而Suárez等[23]则发现相比苜蓿干草,犊牛阶段饲喂其他来源的牧草时瘤胃发育放缓,且瘤胃细菌的丰富度和多样性改变,影响对营养物质的利用。本研究中也发现,饲喂竹叶饲粮断奶犊牛的OM、NDF消化率虽与苜蓿饲粮相似,但ADF和DM表观消化率有所降低,其原因可归结为竹叶饲粮影响断奶犊牛瘤胃对ADF的降解。本研究中还发现,与苜蓿饲粮相比,犊牛对茶叶渣饲粮的OM、DM表观消化率无显著差异,这与潘发明等[24]添加不同梯度(5%~15%)的茶叶渣在绵羊上的结果一致。但茶叶渣饲粮的NDF表观消化率显著提高,一方面是由于茶叶渣饲粮的可消化纤维高于苜蓿饲粮而不消化纤维较低,另一方面是由于茶叶渣中的化合物能够促进肠道的蠕动作用[22],从而提高营养物质在肠道中的利用。
饲粮的能量满足维持需要之后才能够用于生产,犊牛阶段能量主要用于组织器官的生长和机体的发育[25],同时瘤胃微生物能够将饲粮中的碳水化合物和其他营养物质发酵生成VFA、二氧化碳和甲烷,为机体提供能量,而在生成乙酸的过程中产生大量的氢离子,并以瘤胃甲烷的形式排出,造成能量的浪费[25]。提高能量的利用效率在于提高能量的代谢率[26]。本试验发现,竹叶和茶叶渣饲粮随甲烷能、粪能和尿能损失的能量占总能的40.67%和38.21%,而苜蓿饲粮随甲烷能、粪能和尿能损失的能量占总能的37.56%,因此饲喂竹叶饲粮断奶犊牛的总能消化率、总能代谢率和消化能代谢率降低,能量利用率降低。而本研究茶叶渣饲粮的总能消化率与Khan等[27]报道的71.7%相近,与苜蓿饲粮相近。
饲粮中适宜的能量水平和蛋白质含量才能被犊牛充分的利用,否则影响对能量和氮的利用率[28],反刍动物通过氮代谢途径来利用氮[29],Raven[30]发现饲粮营养物质含量影响犊牛对氮的利用。本研究中发现,饲喂茶叶渣饲粮断奶犊牛的氮表观消化显著降低,可能是摄入的茶叶渣中的茶皂素等化合物改变瘤胃微生物区系中原虫的数量[17, 31],影响瘤胃微生物对氮的利用,并降低茶叶渣饲粮的氮表观消化率。而Kondo等[32]添加茶叶渣代替苜蓿和豆粕饲喂奶牛时发现,添加茶叶渣对尿氮、粪氮无显著影响,可能是该研究中只添加5%的茶叶渣,添加量低于本研究中的24.43%。同时,本研究中发现饲喂竹叶饲粮与饲喂苜蓿饲粮断奶犊牛的粪排出量和粪氮相似,而尿氮高于苜蓿饲粮,从而降低了饲喂竹叶饲粮断奶犊牛的氮沉积率,这与Castells等[22]以不同的牧草为主要NDF来源影响氮利用率的结果相一致。这表明断奶犊牛阶段饲喂竹叶饲粮和茶叶渣饲粮相比饲喂苜蓿饲粮降低了氮的利用率。
3.3 竹叶和茶叶渣对断奶犊牛血清抗氧化和免疫性能的影响血液指标能够反映机体的新陈代谢机能和相关组织器官的机能变化情况,同时受饲粮的营养水平、犊牛的发育阶段和自身内分泌状况等因素的影响[33]。血清免疫球蛋白是体液免疫的重要指标,是提高犊牛自身免疫的重要物质,本试验全期饲喂竹叶饲粮和茶叶渣饲粮断奶犊牛的血清IgA含量显著高于苜蓿饲粮,说明饲喂竹叶饲粮和茶叶渣饲粮断奶犊牛的免疫力提高,对环境的适应能力增强。
机体在氧化代谢过程中会产生大量超氧阴离子自由基,具有强氧化性,正常生理状态时氧阴离子自由基处于动态平衡状态。当动物机体氧化防御系统受到损伤时,能够引起机体氧化应激并造成氧化损伤,血清中T-AOC和SOD、CAT、GSH-Px活性以及MDA含量等指标能够反映机体的抗氧化能力。MDA是脂质氧化作用的产物,能够反映机体脂质过氧化的程度,间接反映细胞的损伤程度。本研究中,饲喂竹叶饲粮和茶叶渣饲粮断奶犊牛的血清MDA含量显著提高,可能是茶叶渣中的化合物单宁、茶多酚等物质对机体造成了一定的损伤程度。T-AOC能够反映机体的抗氧化能力,GSH-Px能特异性催化还原型谷胱甘肽对过氧化氢(H2O2)等氢过氧化物的还原反应,将细胞内的H2O2和脂质自由基清除,起到保护细胞膜结构和维持细胞膜功能。同时CAT在动物机体内参与活性氧代谢的过程,而本试验中,饲喂竹叶饲粮断奶犊牛的血清GSH-Px及T-AOC、CAT活性显著降低,饲喂茶叶渣饲粮断奶犊牛的血清GSH-Px、CAT活性显著降低,表明犊牛阶段饲喂竹叶或者茶叶渣作为主要的NDF来源的饲粮降低了犊牛的抗氧化能力。
4 结论① 与饲喂苜蓿饲粮相比,饲喂竹叶饲粮的犊牛生长性能及OM、NDF表观消化率相近,但能量和氮的利用率降低;
② 与饲喂苜蓿饲粮相比,饲喂茶叶渣饲粮的犊牛能量利用率相近,而NDF表观消化率显著提高,生长性能和氮的利用率降低;
③ 与饲喂苜蓿饲粮相比,饲喂竹叶饲粮和茶叶渣饲粮的断奶犊牛血清IgA含量显著提高,抗氧化能力降低;
④ 综上所述,断奶犊牛阶段可以用竹叶(24.38%)替代苜蓿作为粗饲料。
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