红鳍东方鲀幼鱼赖氨酸需求量的研究

引用本文

张庆功, 王建学, 卫育良, 徐后国, 梁萌青. 红鳍东方鲀幼鱼赖氨酸需求量的研究[J]. 动物营养学报, 2020, 32(2): 847-855.

ZHANG Qinggong, WANG Jianxue, WEI Yuliang, XU Houguo, LIANG Mengqing. Requirement of Lysine in Juvenile Tiger Puffer (Takifugu rubripes)[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2020, 32(2): 847-855.

红鳍东方鲀幼鱼赖氨酸需求量的研究

张庆功^1,2 , 王建学^1,2 , 卫育良^1,3 , 徐后国^1,3 , 梁萌青^1,3

1. 中国水产科学研究院黄海水产研究所, 青岛 266071;
2. 上海海洋大学水产与生命学院, 上海 201306;
3. 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室, 青岛 266237

收稿日期: 2019-08-27

基金项目: 现代农业产业技术体系专项资金（CARS-47-15）

作者简介: 张庆功(1993-), 男, 山东菏泽人, 硕士研究生, 研究方向为水产动物营养与饲料。E-mail:592565638@qq.com.

通信作者: 梁萌青, 研究员, 硕士生导师, E-mail:liangmq@ysfri.ac.cn.

摘要: 本试验旨在研究红鳍东方鲀幼鱼对饲料赖氨酸的需求量。在基础饲料中分别添加不同水平晶体赖氨酸配制成6种等氮等脂饲料（赖氨酸水平分别为1.65%、2.58%、3.18%、4.01%、4.80%、5.52%）。将体重（13.83±0.63）g红鳍东方鲀幼鱼随机放入18个养殖桶（6个组，每组3个重复，每桶30尾鱼），在室内流水系统中进行67 d的养殖试验。结果表明：随着饲料赖氨酸水平的提高，红鳍东方鲀的特定生长率、饲料效率和蛋白质沉积率均呈先升高后降低的趋势，且当赖氨酸水平为4.80%时达到最高，显著高于1.65%赖氨酸组（P < 0.05）；1.65%赖氨酸组鱼体粗脂肪含量、肝体比和脏体比最高，显著高于其他组（P < 0.05）；随着饲料赖氨酸水平的提高，肝脏和血清谷草转氨酶活性呈先升高后降低的趋势，血清高密度脂蛋白胆固醇含量呈逐渐升高的趋势，4.80%和5.52%赖氨酸组显著高于1.65%赖氨酸组（P < 0.05）。以特定生长率为评价指标进行二次回归曲线分析，得出红鳍东方鲀幼鱼对饲料赖氨酸需求量为3.83%，占饲料蛋白质的7.66%。

关键词: 红鳍东方鲀赖氨酸生长性能体组成生化指标

Requirement of Lysine in Juvenile Tiger Puffer (Takifugu rubripes)

ZHANG Qinggong^1,2 , WANG Jianxue^1,2 , WEI Yuliang^1,3 , XU Houguo^1,3 , LIANG Mengqing^1,3

1. Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China;
2. College of Fisheries and Life Sciences, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China;
3. Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao National Laboratory for Marine Science and Technology, Qingdao 266237, China

Corresponding author: LIANG Mengqing, professor, E-mail:liangmq@ysfri.ac.cn.

Abstract: The aim of this study was to investigate dietary lysine requirement for tiger puffer Takifugu rubripes. Six isonitrogenous and isoenergetic semi-purified diets were formulated to contain graded lysine levels (1.65%, 2.58%, 3.18%, 4.01%, 4.80% and 5.52%). Juvenile tiger puffer[initial body weight (13.83±0.63) g] were randomly assigned to 18 tanks (30 fish per tank and 3 replicate tanks per group) in indoor flow-through and aerated aquaria for 67 days. The results showed as follows:the specific growth rate, feed efficiency and protein deposition rate firstly increased and then decreased with the increase of dietary lysine level, and reached the highest value when experimental diets contained 4.80% lysine, which was significantly higher than that in 1.65% lysine group (P < 0.05). The whole body crude lipid content, hepatosomatic index and viscerosomatic index in the 1.65% group was significantly higher than that in other groups (P < 0.05). Glutamic oxaloacetic transaminase activity in liver and serum increased first and then decreased with the increase of dietary lysine level. Serum high density lipoprotein cholesterol content increased with the increase of dietary lysine level, which was significantly higher in the 4.80% and 5.52% groups than that in 1.65% group (P < 0.05). Second-order polynomial regression analysis on the basis of specific growth rate (SGR) indicates that the optimum dietary lysine requirements of tiger puffer is estimated to be 3.83% of diet (7.66% of dietary protein).

Key words: tiger puffer lysine growth performance body composition biochemical indexes

植物蛋白质通常缺乏1种或多种必需氨基酸，因此，研究氨基酸需求量对于评估植物蛋白质替代鱼粉具有重要意义^[1-2]。在组成蛋白质的氨基酸中，有10种被认为是鱼类的必需氨基酸，其中赖氨酸是大部分植物蛋白质的第一限制性氨基酸，当植物蛋白质替代鱼粉时，经常会由于缺乏赖氨酸而影响肉食性鱼类的生长和饲料利用^[3-4]。此外，赖氨酸除参加蛋白质合成外，还可以作为肉碱的合成底物，参与脂肪代谢^[5]。目前，国内外学者已经对多种鱼类包括花鲈(Lateolabrax japonicus)^[6]、大黄鱼(Pseudosciaena crocea R)^[7]、大菱鲆(Scophthalmus maximus)^[8]、团头鲂(Megalobrama amblycephala)^[9]、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)^[10]等进行赖氨酸需求量的研究。

红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)隶属于硬骨鱼纲，鲀形目，鲀科，东方鲀属，俗称河豚，是我国北方重要的海水养殖品种之一，具有较高的经济价值。近年来，随着我国有条件开放红鳍东方鲀养殖政策的实施，红鳍东方鲀的养殖产业得到进一步发展，但是目前关于红鳍东方鲀赖氨酸需求量的研究未见报道。本试验通过研究不同水平赖氨酸对红鳍东方鲀生长性能、体组成、肝脏和血清生化指标的影响，确定红鳍东方鲀幼鱼对饲料赖氨酸需求量，为开发红鳍东方鲀配合饲料提供基础数据。

1 材料与方法 1.1 试验饲料

在基础饲料中分别添加0、0.8%、1.6%、2.4%、3.2%和4.0%的L-赖氨酸。以谷氨酸作为赖氨酸的等氮替代物，配制成6种不同赖氨酸水平的等氮等脂的半精制饲料，试验饲料组成及营养水平、氨基酸组成分别见表 1和表 2，其中饲料蛋白质和脂肪水平的设定分别参照Kim等^[11]和Kikuchi等^[12]的研究，氨基酸混合物的添加参考红鳍东方鲀肌肉氨基酸组成^[13]。所有饲料原料经粉碎过80目筛，然后根据饲料配方制成直径3.5 mm的颗粒饲料，55 ℃烘干后，保存于-20 ℃冰箱中备用。经测定，各组饲料的实际赖氨酸水平分别为1.65%、2.58%、3.18%、4.01%、4.80%和5.52%。

表 1 试验饲料组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (DM basis)

%
项目 Items	饲料赖氨酸水平Dietary lysine levels/%
项目 Items	1.65	2.58	3.18	4.01	4.80	5.52
原料Ingredients
鱼粉Fish meal	25.00	25.00	25.00	25.00	25.00	25.00
玉米蛋白Corn gluten meal	30.00	30.00	30.00	30.00	30.00	30.00
小麦粉Wheat meal	13.61	13.61	13.61	13.61	13.61	13.61
糊精Dextrin	8.00	8.00	8.00	8.00	8.00	8.00
氨基酸混合物Amino acid mixture¹⁾	6.59	6.59	6.59	6.59	6.59	6.59
赖氨酸Lysine²⁾		0.80	1.60	2.40	3.20	4.00
谷氨酸Glutamate	4.00	3.20	2.40	1.60	0.80
鱼油Fish oil	3.00	3.00	3.00	3.00	3.00	3.00
豆油Soybean oil	2.50	2.50	2.50	2.50	2.50	2.50
卵磷脂Lecithin	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50
维生素预混料Vitamin premix³⁾	0.80	0.80	0.80	0.80	0.80	0.80
矿物质预混料Mineral premix⁴⁾	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50
磷酸二氢钙CaH₂PO₄	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50
甜菜碱Betaine	0.50	0.50	0.50	0.50	0.50	0.50
氯化胆碱Choline chloride	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00
维生素C Vitamin C	0.50	0.50	0.50	0.50	0.50	0.50
合计Total	100.00	100.00	100.00	100.00	100.00	100.00
营养水平Nutrient levels⁵⁾
粗蛋白质CP	50.18	50.16	50.53	50.01	50.76	50.08
粗脂肪EE	10.29	10.15	10.32	10.31	10.32	10.25
粗灰分Ash	7.42	7.46	7.39	7.42	7.38	7.36
赖氨酸Lys	1.65	2.58	3.18	4.01	4.80	5.52
1)氨基酸混合物为每千克饲料提供Amino acid mixture provided the following per kg of diets：精氨酸arginine 15.1 g，组氨酸histidine 1.9 g，异亮氨酸isoleucine 8.9 g，蛋氨酸methionine 2.6 g，苏氨酸threonine 7.4 g，色氨酸tryptophan 2.8 g，缬氨酸valine 9.2 g，半胱氨酸cystine 8 g，牛磺酸taurine 5 g，羟脯氨酸hydroxyproline 5 g。 2)赖氨酸为L-赖氨酸形式，购自上海麦克林生化科技有限公司，纯度为98%。Lysine, as the form of L-lysine, was purchased from Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd., and contained the purity of 98%. 3)维生素预混料为每千克饲料提供Vitamin premix provided the following per kg of diets：硫胺素thiamine 2.5 mg，核黄素riboflavin 4.5 mg，盐酸吡哆醇pyridoxine 2 mg，VB₁₂ 0.01 mg，生物素biotin 0.12 mg，VK₃ 1 mg，肌醇inositol 80 mg，泛酸pantothenate 6 mg，烟酸nicotinic acid 20 mg，叶酸folic acid 2 mg，VA 3.2 mg，VD 0.5 mg，VE 12 mg，次粉wheat flour 666 mg。 4)矿物质预混料为每千克饲料提供Mineral premix provided the following per kg of diets：NaF 0.2 mg，KI 0.08 mg，CoCl₂·6H₂O 5 mg，CuSO₄·5H₂O 1 mg，FeSO₄·7H₂O 8 mg，ZnSO₄·7H₂O 5 mg，MnSO₄·4H₂O 120 mg，Ca(H₂PO₄)₂·H₂O 300 mg，NaCl 10 mg，沸石粉zeolite powder 1 349 mg。 5)饲料的营养水平均为实测值。Nutrient levels of diets were all measured values.

表 1 试验饲料组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (DM basis)

表 2 试验饲料的氨基酸组成(干物质基础) Table 2 Amino acid composition of experiment diets (DM basis)

%
氨基酸 Amino acids	饲料赖氨酸水平Dietary lysine levels/%
氨基酸 Amino acids	1.65	2.58	3.18	4.01	4.80	5.52
赖氨酸Lys	1.65	2.58	3.18	4.01	4.80	5.52
组氨酸His	0.88	0.85	0.87	0.89	0.86	0.83
精氨酸Arg	2.42	2.38	2.44	2.43	2.38	2.37
苏氨酸Thr	1.68	1.61	1.69	1.67	1.60	1.69
苯丙氨酸Phe	2.32	2.40	2.48	2.41	2.23	2.22
缬氨酸Val	2.24	2.11	2.16	2.14	2.12	2.12
蛋氨酸Met	0.93	0.89	0.86	0.84	0.84	0.82
异亮氨酸Ile	1.84	1.77	1.80	1.79	1.79	1.77
亮氨酸Leu	3.82	3.62	3.70	3.66	3.51	3.58
酪氨酸Tyr	1.70	1.66	1.71	1.60	1.62	1.63
谷氨酸Glu	10.45	9.81	9.01	8.33	6.95	5.91
丙氨酸Ala	1.41	1.38	1.40	1.41	1.40	1.41
牛磺酸Tau	0.68	0.64	0.68	0.69	0.65	0.63
天冬氨酸Asp	2.29	2.19	2.24	2.21	2.24	2.27
甘氨酸Gly	2.02	1.96	2.02	1.95	1.94	1.98
半胱氨酸Cys	0.64	0.67	0.60	0.67	0.62	0.59
丝氨酸Ser	1.46	1.40	1.43	1.42	1.42	1.44

表 2 试验饲料的氨基酸组成(干物质基础) Table 2 Amino acid composition of experiment diets (DM basis)

1.2 试验鱼与养殖管理

红鳍东方鲀幼鱼购自海阳黄海水产有限公司。试验开始前，投喂所有组混合后的饲料暂养1周，使其适应饲料及养殖环境。试验开始时，饥饿24 h，挑选体质健康、体格均匀的鱼，称重后放入18个桶(500 L)中，每个桶中放入30尾鱼[平均体重为(13.83±0.61) g]，然后，每种饲料随机饲喂3个桶，即3个重复。试验期间，每天分别于07:00、12:00、16:00和20:00进行手动投喂达到饱食，摄食结束后，清除残饵，每2 d刷桶1次，保持桶壁和桶底清洁，试验持续67 d。

养殖用水为浅井海水，经二级沉淀和砂率后进入蓄水池，采用室内流水养殖系统；试验期间，采取适当的措施降低室内光线强度，溶氧含量高于6 mg/L，试验期间，水温为22~27 ℃，盐度为24‰~26‰，pH为7.90~8.05。

1.3 试验取样

试验开始前随机取10尾红鳍东方鲀幼鱼作为初始鱼，用于常规营养成分分析。试验结束后，饥饿24 h，然后对每桶鱼进行计数、称重。每桶随机取4尾试验鱼-20 ℃保存，用于体成分分析。每桶随机另取6尾鱼，尾静脉取血，静置后3 000 r/min离心获得血清；随后解剖取肝脏和肌肉，迅速放入液氮中速冻。之后所有样品转移到-80 ℃冰箱保存，用于试验相关指标的测定。

1.4 指标分析

饲料原料、试验饲料和鱼体的粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分和水分含量的测定均参照AOAC(1984)^[14]方法进行。水分含量采用105 ℃烘干至恒重后失重法测定；粗灰分含量采用马弗炉550 ℃高温灼烧法16 h后测定；粗脂肪含量采用索氏抽提法测定(所用仪器为FOSS脂肪测定仪SOXTEC 2050，瑞典)；粗蛋白质含量采用凯氏定氮法测定(所用仪器为UDK142凯氏定氮仪，意大利)。饲料氨基酸组成采用6 mol/L的盐酸在110 ℃下水解22~24 h，用全自动氨基酸分析仪(日立L-8900全自动生化分析仪，日本)测定。血清生化指标采用全自动生化分析仪(BeckmanLX-20全自动生化分析仪，美国)测定。肝脏谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性均采用南京建成生物工程研究所试剂盒，按照试剂盒说明书的方法测定。

1.5 计算公式

1.6 统计方法

试验数据以平均值±标准误(mean±SE)表示，使用SPSS 17.0统计软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，当差异达到显著水平(P < 0.05)，进行Duncan氏多重比较。

2 结果 2.1 饲料赖氨酸水平对红鳍东方鲀生长性能的影响

饲料赖氨酸水平对红鳍东方鲀生长性能的影响如表 3所示。饲料赖氨酸水平显著影响红鳍东方鲀的SR、SGR、FI、FE和PPV(P＜0.05)。SR、SGR、FE和PPV在各组之间变化趋势相似，均随着赖氨酸水平的提高呈先增高后降低的趋势：SR为74.44%~96.67%，在4.01%赖氨酸组达到了最高，显著高于1.65%和2.58%赖氨酸组(P＜0.05)，但与其他各组无显著差异(P＞0.05)；SGR在4.80%赖氨酸组达到最高，显著高于1.65%和5.52%赖氨酸组(P＜0.05)，与其他各组无显著差异(P＞0.05)；FE在4.80%赖氨酸组达到最高，显著高于1.65%赖氨酸组(P＜0.05)，与其他各组无显著差异(P＞0.05)；PPV在4.80%赖氨酸组达到最高，与4.01%赖氨酸组无显著差异(P>0.05)，但显著高于其他各组(P＜0.05)。FI随红鳍东方鲀饲料赖氨酸水平的提高呈现降低的趋势，在4.80%和5.52%赖氨酸组显著低于其他各组(P＜0.05)。PER在各组之间无显著差异(P>0.05)。另外，饲料赖氨酸水平对CF无显著影响(P>0.05)，但HSI和VSI均在1.65%赖氨酸组显著高于其他各组(P＜0.05)。

表 3 饲料赖氨酸水平对红鳍东方鲀生长性能的影响 Table 3 Effects of dietary lysine level on growth performance of Takifugu rubripes

项目 Items	饲料赖氨酸水平Dietary lysine levels/%
项目 Items	1.65	2.58	3.18	4.01	4.80	5.52
初重IBW/g	13.83±0.61	13.83±0.61	13.83±0.61	13.83±0.61	13.83±0.61	13.83±0.61
末重FBW/g	70.29±0.16^a	79.64±2.20^bc	79.91±3.38^bc	81.43±0.43^bc	85.03±1.12^c	75.68±3.30^ab
成活率SR/%	74.44±1.11^a	76.67±3.33^ab	85.56±5.56^abc	96.67±3.33^c	87.78±2.94^bc	88.33±1.67^bc
增重率WGR/%	410.77±2.85^a	472.88±13.17^bc	474.20±26.93^bc	489.44±4.23^bc	516.49±7.60^c	447.42±23.37^ab
特定生长率SGR/(%/d)	2.15±0.01^a	2.29±0.03^bc	2.30±0.06^bc	2.33±0.01^bc	2.39±0.02^c	2.23±0.06^ab
摄食率FI/(%/d)	2.27±0.03^b	2.27±0.05^b	2.16±0.06^b	2.15±0.08^b	1.92±0.02^a	2.06±0.14^a
饲料效率FE	0.71±0.03^a	0.79±0.04^ab	0.80±0.06^ab	0.85±0.01^ab	0.91±0.02^b	0.83±0.08^ab
蛋白质效率PER	1.82±0.01	1.84±0.04	1.80±0.02	1.82±0.02	1.80±0.02	1.77±0.02
蛋白质沉积率PPV/%	27.68±0.70^a	29.61±1.31^ab	30.84±0.96^ab	32.59±0.78^bc	34.98±0.18^c	31.29±1.60^b
肝体比HSI/%	9.95±0.19^b	8.03±0.36^a	8.30±0.23^a	8.46±0.31^a	7.44±0.25^a	8.14±0.61^a
脏体比VSI/%	14.64±0.26^b	12.96±0.44^a	12.83±0.36^a	13.14±0.45^a	12.18±0.28^a	12.47±0.58^a
肥满度CF/(g/cm³)	4.10±0.14	4.05±0.09	3.90±0.10	4.02±0.11	3.99±0.13	4.22±0.23
同行数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05)，不同字母表示差异显著(P < 0.05)。下表同。 In the same row, values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different letter superscripts mean significant difference (P < 0.05). The same as below.

表 3 饲料赖氨酸水平对红鳍东方鲀生长性能的影响 Table 3 Effects of dietary lysine level on growth performance of Takifugu rubripes

将红鳍东方鲀的SGR与饲料赖氨酸水平进行二次曲线拟合分析，得到SGR(y)与饲料赖氨酸水平(x)的二次曲线关系为：y=-0.045x²+0.345x+1.685(R²=0.698)。由图 1可知，当赖氨酸水平为3.83%，即占饲料蛋白质的7.66%时，红鳍东方鲀的SGR达到最高。

图 1 红鳍东方鲀特定生长率与饲料赖氨酸水平的二次曲线关系 Fig. 1 Second-order polynomial relationship between SGR and dietary lysine levels of Takifugu rubripes

2.2 饲料赖氨酸水平对红鳍东方鲀鱼体成分和肌肉氨基酸组成的影响

饲料赖氨酸水平对红鳍东方鲀鱼体成分的影响如表 4所示。饲料赖氨酸水平对鱼体水分和粗蛋白质含量无显著影响(P＞0.05)；红鳍东方鲀的粗脂肪含量在1.65%赖氨酸组时最高，显著高于其他各组(P＜0.05)；粗灰分含量随着赖氨酸水平的提高呈现出了依次降低的趋势，在5.52%赖氨酸组最低，显著低于除4.80%赖氨酸组以外的其他各组(P＜0.05)。

表 4 饲料赖氨酸水平对红鳍东方鲀鱼体成分的影响(湿重基础) Table 4 Effects of dietary lysine level on body composition of Takifugu rubripes (wet weight basis)

饲料赖氨酸水平对红鳍东方鲀肌肉氨基酸组成的影响如表 5所示。肌肉中的必需氨基酸苏氨酸、精氨酸和苯丙氨酸及非必需氨基酸丝氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸和甘氨酸含量均呈现先升高再趋于平稳的趋势，在4.01%赖氨酸组达到最大值，显著高于2.58%赖氨酸组(P＜0.05)；肌肉中组氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸、丙氨酸、酪氨酸及脯氨酸含量在各组之间无显著差异(P＞0.05)。

表 5 饲料赖氨酸水平对红鳍东方鲀肌肉氨基酸组成的影响(干物质基础) Table 5 Effects of dietary lysine level on amino acid composition of muscle of Takifugu rubripes (DM basis)

%
氨基酸 Amino acids	饲料赖氨酸水平Dietary lysine levels/%
氨基酸 Amino acids	1.65	2.58	3.18	4.01	4.80	5.52
赖氨酸Lys	6.44±0.01^a	6.46±0.23^a	6.97±0.49^a	8.56±0.73^b	8.56±0.71^b	9.08±0.10^b
组氨酸His	1.65±0.02	1.63±0.11	1.73±0.12	1.90±0.14	1.72±0.16	1.77±0.06
苏氨酸Thr	3.24±0.07^ab	2.94±0.18^a	3.25±0.28^ab	3.77±0.30^b	3.40±0.33^ab	3.51±0.14^ab
精氨酸Arg	4.46±0.08^ab	4.17±0.11^a	4.45±0.35^ab	5.16±0.31^b	4.59±0.46^ab	4.75±0.18^ab
蛋氨酸Met	1.65±0.27	1.83±0.05	1.88±0.24	2.18±0.20	2.08±0.15	1.96±0.08
苯丙氨酸Phe	4.47±0.50^ab	5.29±0.67^b	4.11±0.53^ab	3.66±0.21^a	3.44±0.23^a	3.51±0.26^a
异亮氨酸Ile	3.34±0.03	3.12±0.11	3.38±0.30	3.85±0.28	3.52±0.30	3.55±0.12
缬氨酸Val	3.59±0.02	3.40±0.12	3.67±0.31	4.15±0.30	3.77±0.32	3.83±0.12
亮氨酸Leu	5.58±0.03	5.24±0.19	5.59±0.48	6.39±0.47	5.81±0.53	5.94±0.19
丙氨酸Ala	4.19±4.19	3.97±3.97	4.28±4.28	4.83±4.83	4.28±4.28	4.43±4.43
酪氨酸Tyr	2.48±0.02	2.33±0.10	2.50±0.27	2.89±0.22	2.65±0.20	2.63±0.10
丝氨酸Ser	2.71±0.03^ab	2.51±0.14^a	2.78±0.25^ab	3.24±0.24^b	2.87±0.29^ab	2.99±0.13^ab
谷氨酸Glu	10.77±0.26^ab	9.80±0.54^a	10.86±1.07^ab	12.79±0.96^b	11.46±1.11^ab	11.79±0.51^ab
半胱氨酸Cys	0.63±0.03^ab	0.49±0.04^a	0.60±0.14^ab	0.78±0.07^b	0.69±0.06^ab	0.67±0.04^ab
脯氨酸Pro	2.55±0.03	2.47±0.08	2.60±0.18	2.92±0.13	2.50±0.23	2.80±0.09
天冬氨酸Asp	6.51±0.21^ab	5.91±0.36^a	6.66±0.68^ab	7.91±0.60^b	7.11±0.70^ab	7.28±0.34^ab
甘氨酸Gly	3.50±0.03^ab	3.18±0.13^a	3.58±0.34^ab	4.19±0.25^b	3.51±0.38^ab	3.76±0.22^ab

2.3 饲料赖氨酸水平对红鳍东方鲀血清和肝脏生化指标的影响

饲料赖氨酸水平对红鳍东方鲀血清和肝脏生化指标的影响如表 6所示。随着赖氨酸水平的提高，肝脏和血清GOT活性呈现先升高后降低的趋势，肝脏中的GOT活性在4.80%赖氨酸组达到最高，显著高于1.65%和2.58%赖氨酸组(P＜0.05)，与其他各组无显著差异(P＞0.05)，血清中的GOT活性在4.01%赖氨酸组达到最高，显著高于除3.18%赖氨酸组以外的其他各组(P＜0.05)；血清总蛋白(TP)含量呈现先升高后趋于平缓的趋势，在3.18%赖氨酸组达到了最高，显著高于1.65赖氨酸组(P＜0.05)；血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量随着赖氨酸水平的升高而升高，在4.80%和5.52%赖氨酸组显著高于其他各组(P＜0.05)。饲料赖氨酸水平对肝脏及血清GPT活性，血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHOL)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、葡萄糖(GLU)及总胆汁酸(TBA)含量无显著影响(P＞0.05)。

表 6 饲料赖氨酸水平对红鳍东方鲀血清和肝脏生化指标的影响 Table 6 Effects of dietary lysine level on biochemical parameters in serum and liver of Takifugu rubripes

项目 Items	饲料赖氨酸水平Dietary lysine levels/%
项目 Items	1.65	2.58	3.18	4.01	4.80	5.52
肝脏Liver
谷丙转氨酶 GPT/(U/g prot)	77.08±2.71	77.81±7.03	87.34±1.97	85.30±3.13	93.98±4.89	83.21±3.00
谷草转氨酶 GOT/(U/g prot)	97.32±8.31^a	90.43±4.56^a	91.11±8.97^ab	101.82±4.66^ab	107.15±2.86^b	100.81±1.17^ab
血清Serum
谷丙转氨酶GPT/(U/L)	37.67±6.17	43.50±13.50	43.33±8.25	56.50±5.50	35.00±7.21	29.00±7.02
谷草转氨酶GOT/(U/L)	77.00±14.00^ab	57.00±14.00^a	95.50±10.50^bc	114.00±4.36^c	65.67±10.48^ab	56.00±3.00^a
甘油三酯TG/(mmol/L)	1.90±0.11	1.85±0.13	1.84±0.14	1.83±0.06	1.96±0.10	1.94±0.10
总胆固醇 CHOL/(mmol/L)	3.09±0.11	3.18±0.27	3.33±0.33	3.17±0.09	3.55±0.21	3.49±0.21
葡萄糖GLU/(mmol/L)	1.06±0.11	1.11±0.19	1.14±0.17	0.81±0.08	1.22±0.08	1.15±0.07
总胆汁酸TBA/(μmol/L)	2.10±0.60	1.53±0.12	1.70±0.25	1.30±0.15	1.83±0.19	1.40±0.15
总蛋白TP/(g/L)	31.94±0.87^a	33.56±0.68^ab	37.01±1.85^b	34.08±2.00^ab	35.17±0.55^ab	35.11±1.09^ab
高密度脂蛋白胆固醇 HDL-C/(mmol/L)	2.81±0.05^a	2.93±0.14^ab	3.00±0.22^ab	2.90±0.08^ab	3.25±0.13^b	3.25±0.06^b
低密度脂蛋白胆固醇 LDL-C/(mmol/L)	0.22±0.01	0.23±0.07	0.21±0.05	0.22±0.01	0.26±0.06	0.25±0.02

表 6 饲料赖氨酸水平对红鳍东方鲀血清和肝脏生化指标的影响 Table 6 Effects of dietary lysine level on biochemical parameters in serum and liver of Takifugu rubripes

3 讨论 3.1 饲料不同赖氨酸水平对红鳍东方鲀生长性能的影响

剂量-效应法是评价鱼类营养需求最常用的方法，目前大部分鱼类的赖氨酸需求量都是采用该方法得到的^[15]。本试验在研究红鳍东方鲀赖氨酸需求量时，也采用同样的方法进行评价。根据红鳍东方鲀生长性能的结果，饲料不同赖氨酸水平均显著影响了红鳍东方鲀的末重、增重率、SR、SGR、FE、FI和PPV，且除FI外，均呈现先升高后降低的趋势。因此，本试验以对生长具有综合评价效果的SGR为评价指标做二次回归曲线拟合分析，得出初始体重为13.83 g的红鳍东方鲀幼鱼的饲料赖氨酸需求量为占饲料干物质的3.83%，占饲料蛋白质的7.66%。以赖氨酸占饲料蛋白质的百分比计算，发现红鳍东方鲀幼鱼对饲料赖氨酸的需求量高于大菱鲆(5.00%)、花鲈(5.80%)、大黄鱼(5.77%)、卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)(6.70%)、军曹鱼(Rachycentron canadum)(5.30%)、石斑鱼(Epinephelus coioides)等海水鱼类^{[6-8, 16-18]}，这表明在海水鱼类中，红鳍东方鲀对饲料赖氨酸具有较高的需求量。另外，本试验发现一个非常有趣的结果是红鳍东方鲀的SR也随着饲料赖氨酸水平的提高，呈现先升高后降低的趋势，由于饲料赖氨酸水平对大部分海水鱼类的存活率均无显著影响^{[6-8, 16]}，而红鳍东方鲀在养殖过程中存在严重的残食行为导致养殖的成活率较低，因此，是否存在饲料中适宜的赖氨酸水平能部分减缓红鳍东方鲀的残食而提高成活率的情况值得在今后的研究中进一步进行相关的试验进行验证。

3.2 饲料不同赖氨酸水平对鱼体成分及肌肉氨基酸组成的影响

赖氨酸可与蛋氨酸一起作为前体参与肉碱的合成，而肉碱是脂肪代谢的重要物质，参与长链脂肪酸从细胞质转运至线粒体进行β-氧化的过程^[19]。因此，本试验分析了赖氨酸水平对鱼体脂肪含量及HSI和VSI的影响，结果表明未添加赖氨酸的1.65%赖氨酸组的鱼体粗脂肪含量显著高于添加赖氨酸的其他各组，同时，HSI和VSI也在1.65%赖氨酸组显著升高，该结果与之前在布氏鲳鲹(Trachinotus blochii)、大黄鱼、花鲈、军曹鱼、大西洋鳕鱼(Gadus morhua)等鱼类的研究结果^{[6-7, 15]}类似，这表明红鳍东方鲀在饲料赖氨酸缺乏时，可能会影响其体内肉碱的合成，导致脂肪氧化分解减弱而引起体内脂肪异常沉积，从而增加鱼体、肝脏及内脏的脂肪含量。

此外，与在花鲈和胭脂鱼(Myxocyprinus asiaticus)的结果^{[6, 20]}类似，本研究还发现肌肉中的赖氨酸含量随着饲料赖氨酸水平的提高呈现先增加后趋于平稳的趋势，且肌肉中的苏氨酸、精氨酸、丝氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸和甘氨酸含量也呈现与赖氨酸相似的变化趋势。Mai等^[6]认为，饲料中不同赖氨酸水平对肌肉中赖氨酸含量的影响可作为判定氨基酸需求量的一个重要参考指标，而本试验中，包括赖氨酸在内，肌肉中大部分产生差异的氨基酸的转折点在4.01%赖氨酸组，即饲料赖氨酸水平为4.01%时，这与本试验以SGR为评价指标，得到红鳍东方鲀赖氨酸需求量为3.83%接近，因此，本试验结果进一步验证了Mai等^[6]提出观点的正确性。

3.3 饲料不同赖氨酸水平对血清和肝脏生化指标的影响

GOT和GPT是鱼类氨基酸分解代谢的2个重要酶，GOT催化将天冬氨酸和α-酮戊二酸生成谷氨酸和草酰乙酸，GPT催化将丙氨酸和α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸，而草酰乙酸和丙酮酸可以进入三羧酸循环参与能量代谢，因此，GOT和GPT活性升高，既表明肝脏中转氨基酸活性增强，又表明这些氨基酸参与能量代谢的活力增强^[21-23]。本试验中，尽管GPT活性在各组无显著变化，但GOT活性在肝脏4.80%赖氨酸组和血清4.01%赖氨酸组显著高于1.65%赖氨酸组，说明饲料中适宜赖氨酸水平，可能会提高机体的转氨基活性，并增强能量代谢。另外，饲料赖氨酸水平显著影响血清TP和HDL-C的含量，其中TP的含量随着饲料赖氨酸水平的提高呈现先升高后趋于平缓的趋势，这与在黑鲷(Sparus macrocephalus)、军曹鱼和石斑鱼的研究结果^{[16-17, 24]}类似，表明适量增加饲料赖氨酸水平会提高血清TP含量。Leszczynski等^[25]报道机体摄入过多的赖氨酸可能会引起高胆固醇血症，而本试验中，HDL-C含量随饲料赖氨酸水平的提高而显著升高，高密度脂蛋白在体内的重要作用是参与胆固醇代谢，将外周组织中的胆固醇通过HDL-C形式转运至肝脏，然后由肝脏排泄出体外^[26]，因此，本试验中血清HDL-C在赖氨酸过量的4.80%和5.52%赖氨酸组显著升高，可能表示机体通过提高HDL的转运能力，从而增强对胆固醇的排泄，这可能是鱼体调节过量赖氨酸的一种自我保护机制，同时，该结果也再一次证明当饲料赖氨酸水平在4.80%和5.52%时，可能已经超过了红鳍东方鲀对赖氨酸的最适需求量，因此，这一结果也间接证明本试验通过SGR得到的赖氨酸适宜需求量3.83%的正确性。

4 结论

本研究结果表明，红鳍东方鲀对赖氨酸的需求量以占饲料蛋白质的比例计算，高于大部分现有的海水养殖鱼类，即以SGR为评价指标，经过二次回归曲线分析得到初始体重为13.83 g的红鳍东方鲀幼鱼对饲料中的赖氨酸需求量为3.83%，占饲料蛋白质的7.66%。

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