乳鸽刚出壳时眼睛尚未睁开，不能采食成年鸟类的食物，需要由双亲哺喂鸽乳^[1]。出壳后，乳鸽的消化系统由胚胎期的卵黄囊内源性营养向双亲哺喂转变，机体开始肠内营养^[2]。乳鸽出壳后早期生长速度快，增重强度大，不同品种的鸽子具有不同的种质特性。丁原春等^[3]研究发现，乳鸽的品种不同，其生长速度和屠宰体重各不相同，杂交王鸽的体重最重，生长速度最快；银王鸽次之，丹麦王鸽再次之；美国白王鸽的生长速度最慢，体重最轻。狄小松等^[4]研究发现，杂交组肉鸽的初生重、4周龄体重均高于本交组，三元杂交比二元杂交肉鸽4周龄体重多9 g，净膛重多12 g，说明三元杂交效果好、生长速度快、体重增加明显。肠道消化酶的活性变化与生长发育阶段的新陈代谢水平有关。有研究发现，农大三号成年蛋鸡的十二指肠胃蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶活性均显著高于海兰褐成年蛋鸡^[5]，表明品种不同消化酶的分泌能力也有所区别。

目前，国内外对各品种鸽子消化酶活性的研究不是很多，主要集中在早期生长阶段，并且由于饲粮、饲养管理、取样方法、消化酶活性分析方法以及消化酶活性表达方式的不同，所得数据的可比性有限。不同品种鸽子的体重、消化酶活性是否存在差异，有待于进一步研究。而肠道紧密连接是构成肠上皮屏障功能最重要的结构，由闭合小环蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(Occludin)等结构蛋白及各类连接蛋白分子共同组成。肠道紧密连接蛋白的结构及功能的正常是肠屏障功能正常发挥的保障。因此，研究ZO-1和Occludin可以评价不同品种乳鸽肠黏膜紧密连接屏障和通透性功能。深王鸽W系体型大，前期生长速度快，繁殖性能良好，且肉质优良。白卡奴鸽K系产蛋性能好，抗病力强，是世界上公认的优秀肉鸽品种。敖峰鸽A系为三元杂交组合，体型小，育成率较低，但产蛋性能好，肉质鲜嫩，是当地居民最喜爱的肉鸽品种。因此，本试验选用深王鸽、卡奴鸽和敖峰鸽作为研究对象，比较不同品种乳鸽的体重、消化酶活性及回肠ZO-1、Occludin的基因表达，以期为选育品种特性鲜明、生产性能优良的乳鸽品种提供基础理论参考。

1 材料与方法 1.1 试验动物和试验设计

试验动物由温州平阳县敖峰鸽业有限公司提供，雏鸽孵化后由亲本哺喂，每对亲鸽哺喂2只乳鸽，亲鸽饲养于3层全阶梯鸽笼，每个鸽笼里饲养1对亲鸽和2只雏鸽。3个品种(深王鸽、卡奴鸽和敖峰鸽)即为3组，每组6个重复，每个重复20只乳鸽。试验期21 d。

1.2 亲鸽饲粮组成

参照《美国王鸽种鸽饲养管理技术标准》(DB34/T 541—2005)配制亲鸽基础饲粮(谷粒原粮)，基础饲粮组成及营养水平见表 1。

1.3 饲养管理

饲养试验在温州平阳县敖峰鸽业有限公司进行，采用3层阶梯式笼养，开放式鸽舍，自然通风与照明，自动喂料机给料，自由饮水。每天早上在喂料前打扫鸽舍，清理水槽。试验期间每日观察试验鸽的健康状况、精神状态，记录死亡数。

1.4 十二指肠和空肠消化酶活性检测

分别于1、7、14、21日龄每个品种每个重复挑选试验乳鸽1只(每窝最多只取1只雏鸽)，称重后屠宰，收集十二指肠和空肠内容物，立即放入冻存管中，置于-80 ℃保存待测。将十二指肠和空肠样品按1 : 9体积比加入生理盐水中。在冰浴条件下制备组织匀浆，4 ℃、10 000 r/min离心20 min，收集上清进行酶活性检测。十二指肠和空肠消化酶指标包括脂肪酶、蔗糖酶、麦芽酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶，具体检测方法参照试剂盒说明书进行，所用试剂盒购自北京华英生物技术研究所。

1.5 回肠Occludin、ZO-1基因表达量检测

Occludin、ZO-1和内参基因β-肌动蛋白(β-actin)引物序列均利用NCBI引物设计软件设计，由上海捷瑞生物工程有限公司合成。回肠RNA的提取、cDNA以及荧光定量所需试剂盒均购自南京诺唯赞生物科技有限公司，操作步骤参照试剂盒有关说明进行。目的基因相对表达量用2^-△△Ct法计算。

1.6 统计分析

数据经Excel 2010初步分析后，均采用SPSS 21.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，并采用Tukey法进行多重比较。以P < 0.05为差异显著性标准，所有检验结果均以“平均值±标准差”表示。

2 结果 2.1 不同品种乳鸽的体重变化

由表 3可知，日龄对不同品种乳鸽体重有显著影响(P < 0.05)，不同品种乳鸽体重随日龄增加呈线性升高(P < 0.05)。敖峰鸽在7、14、21日龄时的体重分别为1日龄时的6.93倍(P < 0.05)、21.67倍(P < 0.05)、31.16倍(P < 0.05)，卡奴鸽在7、14、21日龄时的体重分别为1日龄时的7.02倍(P < 0.05)、22.64倍(P < 0.05)、34.16倍(P < 0.05)，深王鸽在7、14、21日龄时的体重分别为1日龄时的7.09倍(P < 0.05)、23.42倍(P < 0.05)、33.53倍(P < 0.05)。不同品种对乳鸽体重无显著影响(P＞0.05)。

2.2 不同品种乳鸽十二指肠脂肪酶、蔗糖酶、麦芽酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶活性的比较

由表 4可知，1日龄卡奴鸽的十二指肠糜蛋白酶、胰蛋白酶活性显著高于深王鸽(P < 0.05)，7日龄深王鸽、敖峰鸽的十二指肠脂肪酶活性显著高于卡奴鸽(P < 0.05)，14日龄敖峰鸽的十二指肠蔗糖酶活性以及深王鸽的十二指肠蔗糖酶、麦芽糖酶活性显著高于卡奴鸽(P < 0.05)。

与1日龄相比，21日龄敖峰鸽、深王鸽的十二指肠胰蛋白酶活性显著升高(P < 0.05)，21日龄卡奴鸽、深王鸽、敖峰鸽的十二指肠蔗糖酶、麦芽糖酶、脂肪酶活性显著升高(P < 0.05)。不同品种乳鸽的十二指肠胰蛋白酶、麦芽糖酶、脂肪酶活性均随日龄的增加而增加。卡奴鸽、深王鸽、敖峰鸽的十二指肠蔗糖酶、麦芽糖酶、脂肪酶活性以及敖峰鸽、深王鸽的十二指肠胰蛋白酶活性随日龄增加呈线性增加(P < 0.05)。

2.3 不同品种乳鸽空肠脂肪酶、蔗糖酶、麦芽糖酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶活性的比较

由表 5可知，1日龄卡奴鸽的空肠糜蛋白酶活性显著高于深王鸽(P < 0.05)，空肠蔗糖酶活性显著高于敖峰鸽(P < 0.05)，空肠麦芽糖酶、脂肪酶活性显著高于深王鸽和敖峰鸽(P < 0.05)；14日龄深王鸽的空肠胰蛋白酶、蔗糖酶、麦芽糖酶活性显著高于卡奴鸽(P < 0.05)；21日龄深王鸽的空肠糜蛋白酶、蔗糖酶、脂肪酶活性显著高于卡奴鸽(P < 0.05)。

与1日龄相比，21日龄深王鸽的空肠糜蛋白酶活性显著增加(P < 0.05)，21日龄卡奴鸽、深王鸽的空肠胰蛋白酶活性显著增加(P < 0.05)，21日龄卡奴鸽、深王鸽、敖峰鸽的空肠蔗糖酶、脂肪酶活性显著升高(P < 0.05)，21日龄敖峰鸽、深王鸽的空肠麦芽糖酶活性显著升高(P < 0.05)。卡奴鸽、深王鸽、敖峰鸽的空肠蔗糖酶、麦芽糖酶、脂肪酶活性以及深王鸽的空肠糜蛋白酶、胰蛋白酶活性随日龄增加呈线性增加(P < 0.05)。

2.4 不同品种乳鸽回肠紧密连接蛋白相关基因表达量的比较

由表 6可知，卡奴鸽、深王鸽、敖峰鸽的回肠ZO-1、Occludin的基因表达量随日龄的增加而升高，但不同品种间无显著差异(P＞0.05)。与1日龄相比，21日龄卡奴鸽、深王鸽、敖峰鸽的回肠ZO-1、Occludin的基因表达量显著升高(P < 0.05)。回肠ZO-1、Occlidin的基因表达量随日龄增加呈线性增加(P < 0.05)。在1、7、14和21日龄，不同品种回肠ZO-1的基因表达量一直保持敖峰鸽＞卡奴鸽＞深王鸽的趋势。

3 讨论 3.1 不同品种乳鸽早期体重的变化及差异

生长发育规律是畜禽品种的主要种质特征之一。胡文娥等^[6]指出，乳鸽出壳后早期生长速度较快，自然育雏乳鸽的增重速度在第2周龄时达到最快。高产肉鸽专门化B品系的生长高峰出现于6~16日龄，在10~14日龄生长速度出现短期剧烈下降，20日龄后生长速度很慢^[7]。本试验中，乳鸽生长高峰期出现在1~14日龄，与上述研究相似，14日龄后生长速度放缓，与亲鸽已产蛋孵化、哺喂料量减少、亲鸽哺喂乳鸽的食物转换经嗉囊浸润软化的饲粮等因素有关。本研究发现不同品种间乳鸽早期体重差异不显著，表明品种对乳鸽体重无显著影响。

早熟孵化的鸟类需要分泌足够量的消化酶才能水解外源饲粮，从而被肠细胞吸收，如果所需的酶分泌不足可能限制其早期生长。肠道的消化酶来自胰腺，这些酶只有进入肠道才具有活性并发挥作用, 因此肠道消化酶的变化能更好地说明消化过程的发展^[8]。饲粮的初始消化是由胃蛋白酶开始进行的，经胰腺蛋白酶、肽酶、脂肪酶和淀粉酶进一步促进分解^[9]。刷状缘膜中的酶是微绒毛膜的重要组成部分，在小肠中和转运蛋白一起对食物的营养成分进行最终的消化和吸收。有研究发现，乳鸽出壳后小肠黏膜酶总水解能力随日龄变化与体重呈显著线性正相关关系^[10]。早期研究表明，每天给鸡和小鼠饲喂少量的鸽乳可提高它们的生长水平^[11-12]，而乳鸽出壳后最初几天小肠发育程度比其他禽类低，但早期生长速度却显著快于快大型鸡^[1]。沙文锋等^[13]、吴红等^[14]、卜柱等^[15]研究表明，亲鸽饲粮粗蛋白质水平为14.22%能满足亲鸽自身繁育和乳鸽的生长发育，且繁育期适宜饲粮粗蛋白质水平为16%~18%。由此我们可以推论，乳鸽小肠发育的特点、亲鸽分泌的鸽乳及饲粮决定了乳鸽机体的生长速度。

3.2 不同品种乳鸽十二指肠和空肠脂肪酶、蔗糖酶、麦芽糖酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶活性的比较

雏鸽出壳时消化酶比活力处于较低水平，出壳后消化酶比活力发生显著变化，但在各个肠段的发育速率不同。Dong等^[16]测定了生长鸽孵化后期和出壳后消化酶的活性，发现小肠上皮刷状缘酶在生长鸽孵化后期就已经具有活性，相关转运载体基因在生长鸽孵化期12 d就已经开始表达。小肠中分解蛋白质的酶主要包括糜蛋白酶、胰蛋白酶等，7日龄时，除了深王鸽，卡奴鸽和敖峰鸽的十二指肠和空肠的糜蛋白酶活性均有下降趋势，原因可能是7日龄开始，雏鸽食入的鸽乳开始过渡到混有浸湿的玉米等谷物饲粮，早期卡奴鸽和敖峰鸽消化酶合成能力不足，深王鸽对蛋白质类饲粮消化能力强。这在一定程度上也能够解释深王鸽在7~14日龄的体重增长速度高于卡奴鸽和敖峰鸽的原因。

脂肪酶是脂肪代谢最基本的酶，它能将脂肪水解成为游离的脂肪酸、甘油和甘油单酯，以供机体吸收利用^[17]，Escribano等^[18]报道，在7日龄的火鸡胚胎卵黄囊中检测到脂肪酶活性，并在胚胎期到孵化后第4天一直可检测到。孙福方等^[19]研究发现，泰平王鸽小肠脂肪酶活性在3~8日龄显著降低，8~14日龄有上升趋势。龚俊勇等^[20]研究发现，肉鸡饲粮中添加不同剂量的脂肪酶均可提高平均日增重，对粗脂肪的利用率有提高趋势；且脂肪酶和乳化剂配合使用可加强两者之间的协同互作，改善生长性能。本研究发现，随着日龄的增加和鸽乳到亲鸽饲喂谷物饲料的变化，胰腺需要分泌更多的脂肪酶来满足消化鸽乳中的脂肪。在发育后期阶段，深王鸽十二指肠和空肠中的脂肪酶活性均高于卡奴鸽和敖峰鸽，说明深王鸽对鸽乳中的油脂类物质的利用率高于卡奴鸽和敖峰鸽。

二糖酶是按照作用底物命名的一类消化酶，禽类黏膜二糖酶主要以蔗糖酶、麦芽糖酶和异麦芽糖酶为主。二糖不能被小肠直接吸收利用，因此小肠二糖酶对碳水化合物的利用极其重要。Sell等^[21]研究发现，火鸡在出壳前6 d可检测到空肠内蔗糖酶的活性，出壳后第1天达到峰值，随后逐渐下降；出壳前4 d可检测到麦芽糖酶的活性。鸡从出壳到43日龄小肠内二糖酶活性随着日龄增加而增加^[22]。Dong等^[16]试验发现，乳鸽胚胎发育至14日龄时可以检测到二糖酶活性。李忠良^[23]研究发现，在黄羽肉鸡饲粮添加木聚糖酶后空肠黏膜二糖酶活性显著提高。本研究发现，除了1和7日龄卡奴鸽空肠麦芽糖酶活性有些许下降，其他2个品种的乳鸽空肠二糖酶活性均随日龄的增加而增加，且在14和21日龄深王鸽空肠二糖酶活性与其他2个品种差异显著，表明深王鸽对碳水化合物的利用能力强。

孙福方等^[19]研究发现，泰平王鸽空肠中胰蛋白酶活性在3~8日龄时显著上升，从8~14日龄时显著下降，这与本研究结果不一致；同时也发现十二指肠中糜蛋白酶的活性从3~8日龄稍微下降，从8~14日龄上升，这与本文敖峰鸽和卡奴鸽的研究结果相似。3个品种十二指肠和空肠胰蛋白酶活性基本上都是随日龄增加而上升，卡奴鸽7和14日龄空肠胰蛋白酶活性略有下降，但差异不显著。Marchaim等^[24]研究发现，雏鸡糜蛋白酶活性在胚胎时期增长很快，在孵出最初几天下降，随后上升，这种先下降后上升的趋势说明胰腺合成酶在逐步增加，并且随着日龄的增长，对外源性饲粮逐步适应。

奚雨萌等^[25]研究发现，在青脚麻鸡饲粮中添加益生菌及有机酸复合制剂，可以增强胰蛋白酶、淀粉酶及脂肪酶的活性。冯亚强等^[26]研究表明，饲粮中添加芽孢杆菌可以提高动物的消化酶活性。这说明益生菌及有机酸的添加可以激活消化酶的分泌，增加营养物质的消化吸收效率，促进生长。在实际生产应用中，益生菌在乳鸽方面也开始有相关研究。袁文华等^[27]研究表明，饲粮中添加益生菌能够改善青年鸽的生长性能并增强机体免疫力。在相同制粒水平下，发酵豆粕比普通豆粕更容易被乳鸽吸收利用，能显著提高乳鸽肠道吸收能力^[28]。

3.3 不同品种乳鸽回肠紧密连接蛋白相关基因表达量的比较

紧密连接蛋白能够维持上皮细胞与内皮细胞之间结构的完整性，其表达在调节上皮细胞渗透性、维持细胞极性中发挥重要作用，为动物体内微环境的稳定提供保障。有研究证实Occludin蛋白表达量的下降，会直接影响细胞间的渗透性^[29]。在刚孵化的雏鸡中，不同的小肠段有特定的个体遗传时间表，然而，最显著的变化发生在24 h后^[30]。雏鸡出壳后，空肠Occludin mRNA表达量随着日龄增加而线性增加，回肠Occludin和闭合小环蛋白-2(ZO-2)mRNA表达量并未受出壳后日龄增长的影响^[31]。而本研究发现，乳鸽在刚出生时ZO-1、Occludin的基因表达量较低，但随着日龄的增长，ZO-1、Occludin的基因表达量开始线性增加。当发生热应激时，肉鸡肠道内乳酸杆菌和双歧杆菌数量减少，细胞通透性增加，Occludin和ZO-1的蛋白表达量下调，会引起肠道屏障功能损伤^[32]。在热环境条件下饲养的蛋鸡中，饲粮中添加甜菜碱可以提高其产蛋性能，并选择性地改变与空肠紧密连接相关的基因表达^[33]。本研究发现，不同品种间乳鸽紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的基因表达量无显著差异，说明品种对ZO-1、Occludin的基因表达无显著影响。

4 结论

① 深王鸽、敖峰鸽和卡奴鸽的体重均随日龄的增加线性增加，但相同日龄不同品种间无显著差异。

② 1日龄卡奴鸽的十二指肠和空肠糜蛋白酶活性显著高于深王鸽，14日龄深王鸽的十二指肠和空肠蔗糖酶和麦芽糖酶活性显著高于卡奴鸽和敖峰鸽，表明不同品种的乳鸽在不同发育阶段具有不同的消化特性。

③ 不同品种乳鸽回肠紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的基因表达量随日龄增加呈线性增加，但相同日龄不同品种间无显著差异。