2. 中国海洋大学, 农业部水产动物营养与饲料重点实验室, 教育部海水养殖重点实验室, 青岛 266003;
3. 湖南农业大学动物科学技术学院, 长沙 410128
2. Key Laboratory of Aquaculture Nutrition and Feed, Ministry of Agriculture and Key Laboratory of Mariculture, Ministry of Education, Ocean University of China, Qingdao 266003, China;
3. College of Animal Science and Technology, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, China
我国有着丰富的植物性蛋白质源，如豆粕、菜籽粕、棉籽粕和花生粕等[1]。与动物性蛋白质源相比，植物性蛋白质源具有来源广且价格相对便宜的特点，采用植物性蛋白质源部分替代鱼粉已成为水产养殖业可持续发展的一个重要战略举措[2]。但是，由于水产动物体温不稳定，消化道短，消化系统不完全，消化酶活性弱，对植物蛋白质消化利用率低；同时，由于植物性蛋白质源中含有诸多抗营养因子，如蛋白酶抑制因子、酚类化合物、植酸和非淀粉多糖等[3-4]，极大地限制了其在水产饲料中的使用。通过外源添加酶制剂的方法可破坏饲料原料中的抗营养因子，提高水产动物对蛋白质、能量、脂肪、钙(Ca)和磷(P)等营养物质的利用率[5]。目前，应用于水产饲料中的酶制剂主要有植酸酶[6-7]、蛋白酶[8-9]和非淀粉多糖酶[10-11]等。植酸酶能够将磷酸残基从植酸上水解下来，因此破坏了植酸对矿物元素的亲和力，同时释放出与植酸(盐)结合的其他营养物质，从而提高营养物质的利用率，并减少无机磷酸盐的添加量，不仅对动物具有良好的增重效果，同时可降低动物磷排泄量，有利于环境保护[12]。另外，水产动物因其特殊的消化系统及生活环境等，在生长发育过程中内源消化酶可能分泌不足，特别是幼龄动物，外源蛋白酶的添加一方面可以降解植物性原料中的抗营养因子[13]，另一方面可以促进内源性酶的分泌[14]，从而改善水产动物的消化环境，促进生长。目前，植酸酶已在斑点叉尾(Ictalurus puuctatus)[15]、草鱼(Ctenopharyngodon idellus)[16]、花鲈(Lateolabrax japonicas)[17]、黑鲷(Acanthopagrus schlegelii)[18]、异育银鲫(Carassius auratus gibelio)[19]等水产动物饲料中使用。此外，蛋白酶在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)[20]、异育银鲫[21]、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)[8]和青鱼(Mylopharyngodon piceus)[22]等水产动物上得到应用。这些研究结果表明，饲料中添加植酸酶和蛋白酶均能在不同程度上提高水产动物的生长性能。
植物性蛋白质源在水产动物养殖过程中的使用比例在不断增加，如何充分利用其营养成分，降低鱼粉的使用量和对外依存度，提高饲料报酬的同时减少环境污染，已受到广大学者的广泛关注。因此，本研究主要集中在如何充分利用植酸酶和蛋白酶的营养价值，减少磷酸二氢钙和鱼粉的使用方面。草鱼是我国主要大宗水产养殖经济鱼类，其具有生长快、营养丰富及味道鲜美等特点[23]，深受广大消费者的喜爱。因此，本研究以草鱼为研究对象，在低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶，通过测定生长性能、体成分、肠道消化酶活性、营养物质表观消化率和血清免疫功能相关指标，来综合评价饲料中添加植酸酶和蛋白酶对草鱼的影响，以期为植酸酶和蛋白酶在水产饲料中的应用提供部分理论依据。
1 材料与方法 1.1 试验材料植酸酶和蛋白酶均由广东溢多利生物科技股份有限公司提供。植酸酶活性为2 000 U/g，适宜pH为4.5~8.0，85 ℃湿热处理后酶活性保留率达86%；蛋白酶活性为20 000 U/g，适宜pH为5.0~10.0，90 ℃湿热处理后酶活性保留率达92%。
1.2 试验设计与饲料配方试验用健康草鱼购自广东中山百川育苗场。草鱼购回后，进行4周的驯养试验，使其适应养殖环境和试验饲料。然后选择体格健壮、体重均匀(平均体重为9.66 g)健康草鱼630尾，随机分为7组(每组3个重复，每个重复30尾)，分别饲喂正常磷正常鱼粉饲料(Ⅰ组)、低磷正常鱼粉饲料(Ⅱ组)、低磷正常鱼粉并添加植酸酶饲料(Ⅲ组)、正常磷低鱼粉饲料(Ⅳ组)、正常磷低鱼粉并添加蛋白酶饲料(Ⅴ组)、低磷和低鱼粉饲料(Ⅵ组)、低磷低鱼粉并添加植酸酶和蛋白酶饲料(Ⅶ组)，具体试验设计见表 1。试验饲料组成及营养水平见表 2。养殖试验持续56 d。在各试验饲料中添加0.02%的三氧化钇(Y2O3)作为指示剂，用于营养物质表观消化率的测定。饲料原料过40目筛，逐级混匀，用单螺杆挤压机制成直径为2 mm的沉性颗粒饲料，制粒温度为80~90 ℃，颗粒饲料在通风阴凉处晾干后置于4 ℃冰箱中保存备用。
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表 1 试验设计 Table 1 Design of experiment |
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表 2 试验饲料组成及营养水平(风干基础) Table 2 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) |
养殖试验在广东溢多利生物科技股份有限公司产学研基地室内循环水养殖系统中进行，试验鱼以重复为单位饲养于试验缸呢，每个试验缸大小为0.6 m×0.7 m×0.7 m(有效水体250 L)。饲养期间，每天定时定点投喂(08:30、12:30和16:30)，投喂30 min后收集剩料，烘干称重，并根据摄食情况调整投喂量。饲养期间，每日吸污，同时更换1/10~3/10的水量；水温保持在(27.0±2.0) ℃，pH保持在7.0±0.5，溶解氧浓度>6 mg/L。
1.4 指标测定 1.4.1 生长性能指标分别在正式试验开始前和结束后，对各组试验鱼进行计数和称重，计算体增重率(weight gain rate, WGR)、特定生长率(specific growth rate, SGR)、摄食量(feed intake, FI)、饲料系数(feed conversion rate, FCR)。各指标计算公式如下：
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养殖试验开始和结束时，将试验鱼分别饥饿24 h，用干毛巾吸干鱼体表面的水分后称重。在养殖试验开始前，取6尾鱼进行初始全鱼营养成分分析。在56 d的养殖试验结束后，每缸取2尾鱼(每组6尾)，用自封袋装好后置于-20 ℃冰箱中保存，用于全鱼营养成分分析。饲料、鱼体的常规营养成分含量采用AOAC(1995)法测定，具体方法如下：在105 ℃烘箱中烘至恒重后测定水分含量；分别采用凯氏定氮法(氮×6.25)和索氏提取法测定粗蛋白质和粗脂肪含量；在马弗炉中灼烧(550 ℃)后测定粗灰分含量；分别采用乙二胺四乙酸(EDTA)络合滴定法和钼黄比色法测定钙、磷含量。
1.4.3 营养物质表观消化率测定在养殖试验开始后2周，每天在投喂后采用虹吸的方法收集粪便，每天收集2次。然后用镊子选择新鲜、完整的、外表带有包膜的粪便于-20 ℃冰箱中保存。试验结束后将收集到的粪便集中，并在烘箱中烘干(60 ℃)备用。测定粪便中粗蛋白质、钙、磷以及饲料和粪便中钇含量，其中钇含量的测定采用等离子体发射光谱法，其他指标的测定方法同1.4.2。营养物质表观消化率的计算公式如下：
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饲养试验结束后，每组随机选择15尾鱼，用经肝素钠试剂润洗后的注射器尾静脉采血，离心制备血清后存储于-80 ℃冰箱中。血清中谷草转氨酶(glutamic oxalacetic transaminase, GOT)、谷丙转氨酶(glutamate pyruvate transaminase, GPT)、溶菌酶(lysozyme, LZM)活性和丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量均采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测定，具体测定步骤参照试剂盒说明书。
1.4.5 肠道消化酶活性测定快速分离经采血后鱼体的肠道，再用液氮速冻后保存于-80 ℃冰箱中。肠道中消化酶如胰蛋白酶(trypsin)、糜蛋白酶(chymotrypsin)、淀粉酶(amylase)、脂肪酶(lipase)活性以及上清液中蛋白质含量均采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测定，具体测定步骤参照试剂盒说明书。
1.5 数据统计及分析本试验所有数据均采用平均值±标准差(mean±SD)表示，采用SPSS 18.0对数据进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，并结合Duncan氏法对组间数据进行多重比较，以P < 0.05作为差异显著水平。
2 结果与分析 2.1 生长性能由表 3可知，低磷低鱼粉组的WGR和SGR均显著低于对照组(正常磷和正常鱼粉组，下同)(P＜0.05)。与低磷正常鱼粉组相比，在其饲料中添加植酸酶能够使WGR提高11.03%(P < 0.05)、SGR提高4.71%(P < 0.05)、FCR降低9.60%(P < 0.05)，且与对照组差异不显著(P＞0.05)。与正常磷低鱼粉组相比，在其饲料中添加蛋白酶能够使WGR提高16.55%(P>0.05)、SGR提高7.09%(P < 0.05)、FCR降低12.23%(P < 0.05)，且SGR和FCR与对照组差异不显著(P＞0.05)。与低磷低鱼粉组相比，在其饲料中添加植酸酶和蛋白酶能够使WGR提高15.71%(P < 0.05)、SGR提高6.87%(P < 0.05)、FCR降低12.76%(P < 0.05)，但WGR和SGR仍显著低于、FCR仍显著高于对照组(P < 0.05)。
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表 3 低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶对草鱼生长性能的影响 Table 3 Effects of adding phytase and protease in low phosphorus and low fish meal diets on growth performance of grass carp |
由表 4可知，低磷低鱼粉组的全鱼钙和磷含量均显著低于对照组(P＜0.05)。与低磷正常鱼粉组和正常磷低鱼粉组相比，在其饲料中分别添加植酸酶和蛋白酶均能够显著提高全鱼钙和磷含量(P＜0.05)，且与对照组差异不显著(P＞0.05)。与低磷低鱼粉组相比，在其饲料中添加植酸酶和蛋白酶能够显著提高全鱼钙和磷含量(P＜0.05)，且与对照组差异不显著(P＞0.05)。各组全鱼水分、粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分含量均无显著差异(P＞0.05)。
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表 4 低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶对草鱼体成分的影响 Table 4 Effects of adding phytase and protease in low phosphorus and low fish meal diets on body composition of grass carp |
由表 5可知，低磷低鱼粉组的胰蛋白酶、糜蛋白酶和淀粉酶活性显著低于对照组(P＜0.05)。与低磷正常鱼粉组和正常磷低鱼粉组相比，在其饲料中分别添加植酸酶和蛋白酶均能够显著提高胰蛋白酶、糜蛋白酶和淀粉酶活性(P＜0.05)，且与对照组差异不显著(P＞0.05)。与低磷低鱼粉组相比，在其饲料中添加植酸酶和蛋白酶能够显著提高胰蛋白酶、糜蛋白酶和淀粉酶活性(P＜0.05)，且与对照组差异不显著(P＞0.05)。各组脂肪酶活性无显著差异(P＞0.05)。
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表 5 低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶对草鱼肠道消化酶活性的影响 Table 5 Effects of adding phytase and protease in low phosphorus and low fish meal diets on intestinal digestive enzyme activities of grass carp |
由表 6可知，低磷低鱼粉组的干物质、粗蛋白质、钙和磷的表观消化率均显著低于对照组(P＜0.05)。与低磷正常鱼粉组和正常磷低鱼粉组相比，在其饲料中分别添加植酸酶和蛋白酶均能够显著提高干物质、粗蛋白质、钙和磷的表观消化率(P＜0.05)，且与对照组差异不显著(P＞0.05)。与低磷低鱼粉组相比，在其饲料中添加植酸酶和蛋白酶能够显著提高干物质、粗蛋白质、钙和磷的表观消化率(P＜0.05)，且粗蛋白质和磷的表观消化率与对照组差异不显著(P＞0.05)。
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表 6 低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶对草鱼营养物质表观消化率的影响 Table 6 Effects of adding phytase and protease in low phosphorus and low fish meal diets on nutrient apparent digestibility coefficients of grass carp |
由表 7可知，低磷低鱼粉组的LZM活性显著低于对照组(P＜0.05)，而MDA含量显著高于对照组(P＜0.05)。与低磷正常鱼粉组和正常磷低鱼粉组相比，在其饲料中分别添加植酸酶和蛋白酶均能够显著提高LZM活性和降低MDA含量(P＜0.05)，且与对照组差异不显著(P＞0.05)。与低磷低鱼粉组相比，在其饲料中添加植酸酶和蛋白酶能够显著提高LZM活性和降低MDA含量(P＜0.05)，且与对照组差异不显著(P＞0.05)。各组在GOT和GPT活性方面无显著差异(P＞0.05)。
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表 7 低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶对草鱼血清生化指标的影响 Table 7 Effects of adding phytase and protease in low phosphorus and low fish meal diets on serum biochemical indices of grass carp |
在饲料中添加酶制剂既能降解植物性饲料原料中的抗营养因子，同时还可弥补机体内源消化酶的不足，从而促进动物对饲料的消化利用，提高饲料报酬，促进生长[24]。植酸酶可有效降解饲料中的植酸，不仅释放出与之螯合的磷，同时还可将钙和蛋白质等营养物质释放出来供动物吸收利用，减少氮、磷的排泄，提高营养物质利用率，从而促进动物生长[25]。张晓清等[5]的研究表明，添加300 mg/kg植酸酶能够提高建鲤的体增重。Lu等[6]的研究表明，添加200 mg/kg植酸酶能够促进黑鲷的生长，且可以使饲料中磷酸二氢钙的水平从1.5%降至1.0%。在以植物蛋白质为主要蛋白质源的饲料中，添加植酸酶能够促进植酸磷水解，促进鲫鱼(Carassius auratus)生长[26]。本试验结果显示，低磷饲料中添加300 mg/kg植酸酶能够提高草鱼的WGR和SGR，促进生长。这可能是因为添加的植酸酶降解了饲料原料中的植酸，释放出的营养物质改善了草鱼的营养状态，从而达到了促进生长的作用。蛋白酶能够通过水解植物性蛋白质原料中的抗营养因子，提高水解产物中易被消化吸收利用的氨基酸的含量[27]，还能激活内源消化酶活性[21]，从而提高动物对植物性蛋白质的利用率。本试验结果显示，低鱼粉饲料中添加500 mg/kg蛋白酶同样能够提高草鱼的WGR和SGR，促进其生长。Li等[28]在罗非鱼上的研究显示，饲料中添加175 mg/kg的蛋白酶能够显著提高增重，改善生长性能。在虹鳟上的试验结果表明，低鱼粉饲料中添加175 mg/kg蛋白酶能够提高WGR和降低FCR，且提高率和降低率分别达到9.42%和7.80%[29]。在异育银鲫上的试验也有相似的研究结果，低鱼粉饲料中添加不同水平的蛋白酶(120、150和175 mg/kg)均能提高其体增重，且提高率分别达到5.73%、22.40%和14.38%[21]。但在虹鳟的报道中显示，饲料中添加蛋白酶对虹鳟的生长性能无显著影响[30-31]。不同试验结果存在差异可能与试验饲料类型，试验鱼种类、大小，酶制剂来源和养殖环境不同有关。
目前，植酸酶和蛋白酶的复合使用在部分水产动物上已有报道。在建鲤上的试验表明，低磷(1.5%→1.0%)无鱼粉(6%→0)饲料中添加植酸酶和蛋白酶能够使WGR提高8.88%[5]。在罗非鱼上的试验表明，低磷(1.8%→1.2%)无鱼粉(6%→0)饲料中添加植酸酶和蛋白酶能够使WGR提高13.03%[9]。草鱼是我国主要大宗水产养殖经济鱼类，其肌肉中含有丰富的多不饱和脂肪酸，具有重要的保健功能，深受消费者的喜欢[23]。本研究结果显示，在低磷(2.0%→1.3%)低鱼粉(3.0%→1.5%)饲料中添加植酸酶和蛋白酶能够提高草鱼的WGR和SGR，且提高率分别达到15.71%和6.87%，此结果与上述学者的研究结果相似，表明饲料中添加植酸酶和蛋白酶能够促进动物生长，说明不同酶制剂的配伍使用使得酶功能产生了协同作用，发挥了较大的经济效益。但是，与对照组相比，低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶后各生长指标还是低于对照组，这可能是由于降低了鱼粉在饲料中的使用量，导致鱼粉中一些微量营养元素不能满足鱼体生长所需，从而造成些许差异。
3.2 低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶对草鱼体成分的影响关于植酸酶和蛋白酶对动物体成分的影响已有诸多研究报道。Shi等[21]的研究显示，在低鱼粉饲料中添加不同水平的蛋白酶(120、150和175 mg/kg)，对异育银鲫体成分(水分、粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分含量)无显著影响。Lin等[11]的研究显示，饲料中添加由蛋白酶、β-葡聚糖酶和木聚糖酶组成的复合酶制剂对罗非鱼全鱼水分、粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分含量无显著影响。张晓清等[5]的研究显示，低磷无鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶对建鲤全鱼水分、粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分含量均无显著影响。此外，张瑞[32]的研究显示，饲料中添加植酸酶能够提高建鲤肌肉粗蛋白质含量，但对粗脂肪和粗灰分含量无显著影响。张璐等[33]在大黄鱼上的研究也有类似的结果，饲料中添加200 mg/kg植酸酶对全鱼粗蛋白质、粗脂肪含量和总能无显著影响。本试验结果显示，各组之间在草鱼全鱼水分、粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分含量方面均无显著差异，该结果可能说明鱼类的营养组成相对稳定，不易受到饲养环境和营养条件的影响；但低磷低鱼粉组全鱼钙、磷含量要低于对照组，表明低磷低鱼粉组中的钙、磷不能满足鱼体的生长需要，从而导致生长性能的下降；而在低磷低鱼粉饲料中补充植酸酶和蛋白酶后，其钙、磷的营养状况有所改善。这说明植酸酶和蛋白酶在水解饲料原料时，会释放出钙、磷等营养物质，促进矿物元素的沉积，从而提高动物对营养物质的利用。
3.3 低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶对草鱼营养物质表观消化率的影响饲料的营养价值是影响动物生长的重要因素，而生产上常用消化率来评价饲料的营养价值，进而考察其对动物生长的影响[12]。动物的生长与干物质、粗蛋白质等营养物质表观消化率呈正相关[34]。Biswas等[35]的研究发现，在用豆粕部分替代鱼粉的饲料中添加2 000 U/kg植酸酶，能够显著提高真鲷(Pagrus major)蛋白质和磷的表观消化率，且分别较豆粕对照组提高3.26%和60.04%。在斑点叉尾鮰上的试验表明，饲料中添加植酸酶能够提高粗蛋白质、粗脂肪和磷的表观消化率[36]。同样，在罗非鱼上也有相似的研究结果[37]。在以豆粕、葵籽粕和菜籽粕分别部分替代鱼粉的饲料中添加蛋白酶、葡聚糖酶和木聚糖酶能够提高虹鳟的粗蛋白质和粗脂肪表观消化率[31]。在异育银鲫上的试验表明，饲料中添加蛋白酶能够提高干物质和蛋白质的表观消化率[21]。本试验结果表明，低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶能够提高草鱼对干物质、粗蛋白质、钙和磷的表观消化率。这可能是由于植酸、蛋白酶抑制因子等抗营养成分对鱼类的消化酶活性有抑制作用，从而抑制了营养物质的消化吸收。植酸酶和蛋白酶的添加一方面可以释放出与植酸结合的营养物质，促进其消化吸收利用，另一方面也能够激活部分内源酶，从而改善肠道对营养物质的消化利用。因此，本试验继续对植酸酶和蛋白酶对草鱼肠道消化酶活性的影响进行了研究。
3.4 低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶对草鱼肠道消化酶活性的影响动物的生长与消化能力密切相关，而消化能力受到消化酶活性的影响[38]。胰蛋白酶、糜蛋白酶、淀粉酶以及脂肪酶是动物胃肠道中消化营养物质的关键酶[39]。Liu等[40]的研究发现，外源脂肪酶的添加能够通过提高草鱼肠道中胰蛋白酶、糜蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的活性提高草鱼的消化能力，从而达到促进生长的作用。关于植酸酶和蛋白酶对动物肠道消化酶活性的影响已有诸多报道。在异育银鲫上的试验表明，饲料中添加植酸酶能够提高肝胰脏和肠道蛋白酶活性[41]。在鲤鱼上的试验表明，低鱼粉饲料中添加蛋白酶能够高前肠和食糜蛋白酶活性[42]。本试验结果表明，在低磷正常鱼粉饲料中添加植酸酶，正常磷低鱼粉饲料中添加蛋白酶以及低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶均能在不同程度上提高草鱼肠道中胰蛋白酶和糜蛋白酶的活性，与上述研究结果相似。其原因可能是植物蛋白质源中含有的抗营养因子(植酸、蛋白酶抑制因子等)可与饲料中的蛋白质、糖类和矿物质等结合，导致底物释放不彻底，对消化酶活性有抑制作用[43]。而植酸酶和蛋白酶可水解饲料原料中的植酸和蛋白酶抑制因子，充分释放结合部分，刺激机体内源消化酶的分泌[21]，从而提高消化酶活性。此外，在淀粉酶和脂肪酶上的研究显示，饲料中添加植酸酶对鲈鱼(Lateolabrax japonicus)胃和肠道中淀粉酶和脂肪酶的活性的影响不显著[44]。常青等[45]的研究报道，蛋白酶的添加对鱼体消化器官淀粉酶和脂肪酶的活性无显著影响。本研究结果显示，饲料中添加植酸酶和蛋白酶可提高肠道淀粉酶的活性，但对脂肪酶的活性无显著影响。综上所述，外源酶制剂的添加能够通过提高消化酶活性，增强动物肠道对营养物质的消化吸收，从而促进生长。而出现部分试验结果不一致的原因可能与酶的种类、用量，鱼的品种、大小，饲料配方以及养殖环境有关。
3.5 低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶对草鱼血清生化指标的影响血液中的有效成分可以反映机体新陈代谢机能、组织及细胞通透性和健康状态[46]。GOT和GPT主要参与机体组织中氨基酸的转运[47]。在本试验条件下，各组草鱼血清中GOT和GPT活性无显著差异，这与张晓清等[5]在建鲤上的研究结果相似。LZM是鱼类先天性免疫系统中的重要杀菌物质，主要通过破坏病原菌的细胞壁，进而导致病原菌裂解、死亡[48]。MDA是体内氧自由基攻击生物膜中多不饱和脂肪酸而产生的重要产物，可以反映细胞受损伤以及脂质过氧化程度[49]。Adeoye等[50]研究发现，饲料中添加植酸酶、蛋白酶和木聚糖酶能够增加罗非鱼血清中LZM活性。另一篇在罗非鱼上的研究也有相似的结果，饲料中添加木聚糖酶、蛋白酶、α-淀粉酶和纤维素酶能够提高血清中LZM活性[51]。而在鲟鱼(Acipenser baeri Brandt ♀×A. schrenckii Brandt)上的试验表明，低鱼粉饲料中添加植酸酶对血清LZM活性无显著影响，但能降低血清MDA含量[52]。本试验结果显示，低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶能够提高草鱼血清中LZM活性和降低MDA含量。这些结果说明植酸酶和蛋白酶的添加能够改善草鱼的先天性免疫状况。这可能是因为植酸酶和蛋白酶的添加提高了动物体对蛋白质及其他营养成分的利用率，同时也促进了免疫相关因子的合成，进而提高了机体的免疫力。
4 结论在低磷(2.0%→1.3%)正常鱼粉(3.0%)饲料中添加0.03%植酸酶、正常磷(2.0%)低鱼粉(3.0%→1.5%)饲料中添加0.05%蛋白酶、低磷(2.0%→1.3%)低鱼粉(3.0%→1.5%)饲料中添加0.03%植酸酶和0.05%蛋白酶均能够提高草鱼的营养物质表观消化率、肠道消化酶活性和免疫力，从而改善其生长性能。
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