2. 泰高营养科技有限公司, 北京 100089
2. Trouw Nutrition Technology Co., Ltd., Beijing 100089, China
目前饲料霉菌毒素污染现象普遍,通常霉菌毒素在饲料中并不是单独存在的,可能以一种或数种毒素为主,当多种毒素并存时,其负面影响比单一毒素更为严重[1]。黄曲霉毒素B1(AFB1)和T-2毒素是饲料污染中常见的2种危害比较严重的霉菌毒素,对家禽生长发育、内脏器官和免疫功能等造成巨大损伤[2-3],且目前我国关于T-2毒素基础毒理学的研究较少。生产中去除霉菌毒素最有效的方法是添加吸附剂,但由于吸附剂的特异选择性较差,往往对某一种毒素的吸附效果较好,而对其他毒素的吸附效果不理想[4]。鉴于此,本试验就吸附剂对AFB1和T-2毒素的吸附效果进行体内评估,旨在探讨吸附剂对饲喂含AFB1和T-2毒素饲粮白羽肉鸡生长性能、器官指数、血清生化指标和抗氧化能力的影响,为今后霉菌毒素吸附剂的开发提供一定的试验依据,同时对促进畜牧业发展、降低经济损失、保障食品安全具有重要的现实意义。
1 材料与方法 1.1 试验材料吸附剂:为复合吸附剂,主要成分为斑脱土和酵母细胞壁,符合饲料卫生标准,可作为饲料原料使用,饲粮中的添加水平为0.10%~0.25%。
AFB1和T-2毒素:纯度均>99%。
1.2 试验设计采用2×2双因子完全随机试验设计,选择遗传背景相同、同一批次、发育正常的1日龄健康爱拔益加(AA)肉仔鸡448羽,随机分为4个组,每组8个重复,每个重复14羽(公母各占1/2)。各组鸡的初始体重无显著差异(P>0.05)。对照组饲喂基础饲粮,Ⅰ组在基础饲粮中添加0.25%吸附剂,Ⅱ组在基础饲粮中添加0.2 mg/kg AFB1+1.0 mg/kg T-2毒素,Ⅲ组在基础饲粮中添加0.25%吸附剂+0.2 mg/kg AFB1+1.0 mg/kg T-2毒素,具体见表 1。试验期42 d,分为育雏期(1~21日龄)和育成期(22~42日龄)2个阶段。基础饲粮采用玉米-豆粕型饲粮,参考《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004)配制,其组成及营养水平见表 2。霉菌毒素剂量参照《饲料卫生标准》(GB 13078—2001)中禽配合饲料允许的最大限量值设定。霉菌毒素组饲粮配制时通过梯度稀释法进行,将霉菌毒素组的基础饲粮分配完毕后,取少量与AFB1和T-2毒素混合均匀,再将混匀后的饲粮与基础饲粮混合均匀。
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表 1 试验设计 Table 1 Experimental design |
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表 2 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 2 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis) |
试验鸡采用单层笼养,24 h光照制度。育雏时采用红外灯供暖,第1周温度为33~34 ℃,第2周为27~31 ℃,第3周为24~26 ℃,之后保持在20~21 ℃。相对湿度保持在55%~65%,鸡舍自然通风,定期打扫卫生,自由饮水和采食。按照常规饲养操作规程和免疫程序进行饲养和免疫。
1.4 测定指标及方法 1.4.1 生长性能分别于21和42日龄时,以重复为单位对试验鸡进行称重,统计试验期间各重复的耗料量,计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。记录试验期间各组试验鸡的死亡和淘汰情况。
1.4.2 器官指数分别于21和42日龄时,每重复随机选取1只试验鸡,取脾脏、胸腺、法氏囊和肝脏,剔除表面结缔组织和脂肪等,并用滤纸吸干血水后称重,计算器官指数,公式为:
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分别于21和42日龄时,每重复随机选取1只试验鸡,颈静脉采血10 mL,分离血清,严格按照试剂盒(购于南京建成生物工程研究所)方法测定血清总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量和过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性。
1.4.4 血清生化指标分别于21和42日龄时,每重复随机选取1只试验鸡,颈静脉采血10 mL,分离血清,严格按照试剂盒(购于南京建成生物工程研究所)方法测定血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、尿素氮(UN)含量和谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活性。
1.5 数据统计分析试验数据采用SPSS 21.0统计软件中的一般线性模型(GLM)进行双因素方差分析(two-factor ANOVA),对差异显著者采用Duncan氏法进行多重比较,模型的主要影响因素包括是否添加霉菌毒素、是否添加吸附剂以及二者之间的交互作用,当交互作用显著时,主要讨论其中一个因素对试验指标的作用效果在另一因素的不同水平上的差异。所有数据以平均值表示,以P < 0.05为差异显著。
2 结果 2.1 吸附剂对饲喂含AFB1和T-2毒素饲粮肉鸡生长性能的影响由表 3可知,1~21日龄时,吸附剂对肉鸡的末重、ADG和ADFI均无显著影响(P>0.05);与空白组相比,霉菌毒素组的F/G显著升高(P<0.05)。22~42日龄时,与空白组相比,霉菌毒素组肉鸡的末重和ADG均显著降低(P<0.05);而添加吸附剂显著提高末重和ADFI(P<0.05)。整个试验期,霉菌毒素和吸附剂对肉鸡的生长性能指标无显著交互作用(P>0.05)。
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表 3 吸附剂对饲喂含AFB1和T-2毒素饲粮肉鸡生长性能的影响 Table 3 Effects of adsorbent on growth performance of broilers fed diets contaminated with AFB1 and T-2 toxin |
由表 4可知,21日龄时,吸附剂和霉菌毒素对肉鸡的胸腺指数有显著交互作用(P<0.05);与空白组相比,添加霉菌毒素显著提高脾脏指数(P<0.05);各组间法氏囊指数和肝脏指数无显著差异(P>0.05)。42日龄时,与空白组相比,霉菌毒素组肉鸡的法氏囊指数显著降低(P<0.05),添加吸附剂缓解了法氏囊萎缩,但效果不显著(P>0.05);吸附剂对其他器官指数无显著影响(P>0.05)。
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表 4 吸附剂对饲喂含AFB1和T-2毒素饲粮肉鸡器官指数的影响 Table 4 Effects of adsorbent on organ indexes of broilers fed diets contaminated with AFB1 and T-2 toxin |
由表 5可知,21日龄时,与空白组相比,添加霉菌毒素显著降低肉鸡的血清CAT活性(P<0.05),对其他抗氧化指标无显著影响(P>0.05)。42日龄时,添加吸附剂显著降低肉鸡的血清CAT活性(P<0.05);添加霉菌毒素和吸附剂均显著提高血清MDA含量(P<0.05),但无显著交互作用(P>0.05)。
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表 5 吸附剂对饲喂含AFB1和T-2毒素饲粮肉鸡血清抗氧化指标的影响 Table 5 Effects of adsorbent on serum antioxidant indexes of broilers fed diets contaminated with AFB1 and T-2 toxin |
由表 6可知,21日龄时,与空白组相比,霉菌毒素组肉鸡的血清ALT活性显著升高(P<0.05),且霉菌毒素与吸附剂有显著交互作用(P<0.05),不添加吸附剂时,霉菌毒素显著提高血清ALT活性(P<0.05),而添加吸附剂后,霉菌毒素对血清ALT活性影响不显著(P<0.05);吸附剂组血清ALP活性显著降低(P<0.05);吸附剂对血清TP、ALB、GLB、UN含量及AST活性无显著影响(P>0.05)。42日龄时,与空白组相比,霉菌毒素组肉鸡的血清TP含量显著降低(P<0.05);添加吸附剂显著提高血清ALB含量(P<0.05);霉菌毒素和吸附剂对血清GLB含量有显著交互作用(P<0.05);各组间其他血清生化指标无显著差异(P>0.05)。
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表 6 吸附剂对饲喂含AFB1和T-2毒素饲粮肉鸡血清生化指标的影响 Table 6 Effects of adsorbent on serum biochemical indexes of broilers fed diets contaminated with AFB1 and T-2 toxin |
多种霉菌毒素联合使用对动物生长性能的影响是复杂的[5],其交互毒害作用主要取决于动物胃肠道对不同毒素的吸收率[6]。研究表明,多种霉菌毒素同时存在可降低动物的生长性能[7-8],且毒素自然污染玉米对动物的负面影响比任何一种单一毒素都大[9],这可能是因为霉菌毒素之间存在协同作用。AFB1作为一种剧毒致癌物质,往往会对动物的生产性能产生严重的不良影响[10]。左瑞雨等[11]研究发现,给42日龄肉鸡饲喂含400 μg/kg AFB1的饲粮,肉鸡的末重、ADG、ADFI和F/G均显著降低。邓庆庆等[12]研究发现,肉鸡采食含黄曲霉毒素的饲粮后,其采食量下降,饲料转换率降低,与宋洪国[13]的研究结果相一致。T-2毒素一直被认为是对家禽毒性作用最大的霉菌毒素,几乎对整个消化系统的所有细胞都有毒性[14]。进入消化道后会刺激黏膜,导致炎症及溃疡,从而引起食欲下降、体重减轻,降低生产性能[15]。Brake等[16]研究表明,肉鸡采食含5 mg/kg T-2毒素的饲粮,会导致其日增重降低;而用1~5 mg/kg的剂量连续饲喂1周以上,其中毒症状明显加重。本试验中,联合使用AFB1和T-2毒素对肉鸡的生长性能造成了显著负面影响,这与前人研究结果较为一致。
在饲粮中添加吸附剂是生产中预防霉菌毒素危害的常见方法。理想的吸附剂应能与不同种类的霉菌毒素结合,特别是黄曲霉毒素、赭曲霉毒素和单端孢霉烯族毒素[17]。研究表明,吸附剂如硅铝酸盐类、沸石、膨润土、活性炭、酯化甘露聚糖等对霉菌毒素均表现出很好的脱毒效果[18]。本试验中,吸附剂对肉鸡1~21日龄时的生长性能无显著影响,这可能是因为肉鸡在前期采食量少,毒素摄入量也少,且代谢快,不足以产生负面影响,因此吸附剂的作用效果也不显著。而随后大量多次摄食后,机体毒素的排出速度变慢,体内出现毒素累积,导致代谢饱和。22~42日龄时,对照组添加吸附剂使肉鸡的末重和ADFI分别提高0.69%和2.54%,而添加霉菌毒素后再添加吸附剂使肉鸡的末重和ADFI分别提高12.15%和9.22%,极大程度上恢复了由霉菌毒素造成的生长性能下降,这与陈光明等[19]报道的吸附剂可有效缓解饲粮霉菌毒素对肉鸡生长性能造成的损伤相一致。
3.2 吸附剂对饲喂含霉菌毒素饲粮肉鸡器官指数的影响家禽采食含霉菌毒素的饲粮后,内脏器官会受到不同程度的损害。肝脏是黄曲霉毒素和T-2毒素对机体作用的靶器官,肉鸡摄食的毒素会在肝脏堆积,并导致肝脏发生变脆、变黄、胆管阻塞等一系列病理性变化[20-21]。温子瑜[22]试验发现,饲粮中添加50%霉玉米有提高肉鸭前期肝脏指数的趋势,添加100%霉玉米显著提高肝脏指数;100%霉玉米组添加吸附剂能降低肉鸭的肝脏指数和肝细胞凋亡率,但无法恢复至正常健康水平。黄晓琳[23]试验也表明,霉菌毒素能使肉鸡的肝脏肿大,而添加吸附剂蒙脱石使肝脏肿大得到了很好的控制。然而,本试验中,霉菌毒素组与空白组肉鸡的肝脏指数无显著差异,分析原因可能是本试验选择的霉菌毒素剂量暂时对肝细胞不造成严重的损伤。同样,添加吸附剂的两个试验组也未见肉鸡的肝脏显著病变,说明添加吸附剂后,肉鸡长期摄入不会对肝脏造成损伤。
此外,霉菌毒素能使免疫器官发育受阻,引起脾脏肿大,法氏囊和胸腺萎缩[23]。宋洪国[13]研究发现,随着AFB1添加水平的增加,脾脏指数呈上升趋势,胸腺和法氏囊呈现不同程度的萎缩,且添加水平为0.1 mg/kg时脾脏指数极显著增大228.57%,法氏囊指数显著降低50%。王兆钧等[24]研究表明,饲喂霉变玉米的肉鸡脾脏肿大、胸腺和法氏囊萎缩。本试验中,21日龄时霉菌毒素组肉鸡的胸腺指数显著降低,脾脏指数显著升高,42日龄时霉菌毒素组的法氏囊指数显著降低,表明霉菌毒素对肉鸡的免疫器官有不同程度的抑制作用,这可能是因为霉菌毒素的混合毒性比单一毒素的毒性要强,消化吸收进入血液循环后对器官组织的攻击性也不同;同时不同器官的解毒能力和细胞再生的修复能力也有所不同,这与前人研究结果基本一致。添加吸附剂后肉鸡的胸腺指数有降低趋势,法氏囊萎缩也得到了缓解,与胡贵丽[25]的试验结果相类似。这可能是因为吸附剂吸附了毒素,减少了毒素对胸腺和法氏囊的损害,从而有效提高了肉鸡的免疫功能,但吸附剂对脾脏健康无显著改善作用。此外,仅添加吸附剂肉鸡各免疫器官与对照组相比无显著差异,说明吸附剂对肉鸡没有造成毒性反应。
3.3 吸附剂对饲喂含霉菌毒素饲粮肉鸡血清抗氧化能力和生化指标的影响CAT和SOD是机体重要的抗氧化酶,MDA是脂质过氧化降解的主要产物,T-AOC则是反映机体抗氧化系统的综合指标。研究证实,黄曲霉毒素容易引起机体氧化应激,继而引发一系列毒性作用[26]。Chen等[27]报道认为,饲粮中添加AFB1引起肉鸡的脾脏CAT活性降低,MDA含量增加,产生氧化损伤。与黄曲霉毒素不同的是,有研究表明T-2毒素不通过氧化应激来发挥其毒性作用[28]。而多种霉菌毒素对动物抗氧化功能的影响存在联合效应,从而引起更为严重的氧化应激[29]。本试验结果显示,与空白组相比,霉菌毒素组肉鸡21日龄时的血清CAT活性显著降低,42日龄时的血清MDA含量显著增加,与上述研究结果一致,说明霉菌毒素对肉鸡造成了氧化损伤;添加吸附剂对肉鸡机体的氧化损伤改善效果并不显著,42日龄时还显著提高血清MDA含量,与Che等[30]研究结果不同。不同试验结果存在一定差异,具体原因还需要进一步试验探究。
黄曲霉毒素和T-2毒素均会对肝脏造成损伤,而血清生化指标能够反映动物器官机能状态变化和总体健康水平,尤其是肝脏健康水平。血清ALT、AST和ALP活性是反映肝功能是否正常的3个重要指标,当肝脏组织发生病变时,其活性随之升高[31-32]。本试验中,添加霉菌毒素显著提高21日龄时肉鸡的血清ALT活性,表明霉菌毒素虽然没有对肝脏器官指数产生不利影响,但仍然使肉鸡的肝功能受到严重损害,与前人研究结果相似[33-35]。此外,血清TP和ALB含量也可以用来衡量肝功能是否正常[36],当肝功能受损时,血清TP含量尤其是ALB含量显著降低。本试验研究发现,霉菌毒素组肉鸡42日龄时的血清TP含量显著降低,表明霉菌毒素能够影响肉鸡的肝脏蛋白质合成能力,与前人报道的试验结果[37-38]相似;添加吸附剂后,肉鸡21日龄时的血清ALP活性显著降低,42日龄时血清ALB含量显著升高,说明添加吸附剂可有效降低霉菌毒素对肉鸡的毒性,改善肝脏健康状况,但是无法恢复到正常水平。研究显示,蛋白质含量也能反映肠道消化吸收功能[39]。血清ALB含量增加,会促进家禽对饲粮的利用,提高机体营养物质吸收[40],进而提高肉鸡的生长速度,这与本试验中生长性能结果相一致。
4 结论吸附剂可有效缓解AFB1和T-2毒素对肉鸡生长性能、器官指数和血清生化指标带来的负面影响,且对肉鸡无任何毒性作用,可作为一种有效脱毒剂添加到肉鸡饲粮中。
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