2. 山东民和牧业股份有限公司, 蓬莱 265600;
3. 青岛市即墨区畜牧发展服务中心, 青岛 266000;
4. 山东龙昌动物保健品有限公司, 德州 253000
2. Shandong Minhe Animal Husbandry Co., Ltd., Penglai 265600, China;
3. Animal Husbandry Development Service Center in Jimo District of Qingdao, Qingdao 266000, China;
4. Shandong Longchang Animal Health Products Co., Ltd., Dezhou 253000, China
近年来,有关植物精油在动物生产中的研究和应用报道日渐增多。植物精油是一类来源于植物的花、叶、茎、根或果实的次生代谢产物,分子量较小,在动物体内吸收代谢快、无毒无残留,具有促进动物生长、消炎杀菌及抗氧化等功效[1-4],有望成为促生长类抗生素替代品,是近年来国内外的研究热点。植物精油因其来源不同且成分复杂,所以功能各异,已知的植物精油有3 000多种,主要成分包括萜烯类、芳香族、脂肪族和含氮含硫类等化合物[4]。桉树精油由桉树枝叶通过蒸馏法萃取而得,桉树精油的大量生产始于20世纪60年代,用途广泛[5]。桉树精油主要成分为1, 8-桉树脑、芦丁等黄酮类物质,临床证明其具有抗菌消炎的功效[6],有报道桉树精油可以通过消除羟基自由基从而改善炎症症状[7]。有关桉树精油在我国畜禽养殖领域的应用研究起步较晚,目前报道多见于抑菌、杀虫作用方面[5, 8-9],其他方面的研究鲜见报道。因此,本试验旨在研究富含1, 8-桉树脑成分的桉树精油对笼养白羽肉鸡生长性能、免疫机能和抗氧化机能的影响,以期获得其对肉鸡的作用效果及适宜添加水平,为其推广应用提供理论依据。
1 材料与方法 1.1 试验材料桉树精油产品由山东某公司提供,以澳大利亚潍州天然野生桉树叶为原料提取,桉树精油含量≥5%,其主要活性成分为1, 8-桉树脑,含量≥85%。
1.2 试验设计试验选用300只1日龄爱拔益加(AA)商品白羽肉鸡公雏,随机分为6组,每组设5个重复,每个重复10只鸡。Ⅰ组为对照组,饲喂基础饲粮;Ⅱ~Ⅵ组为试验组,分别在基础饲粮中添加50、75、100、125和150 mg/kg的桉树精油。试验期42 d。
1.3 试验饲粮和饲养管理肉鸡采用3层笼养,饲养期间自由采食和饮水,按照白羽肉鸡常规饲养管理程序进行管理。按常规免疫程序进行免疫:7日龄采用滴鼻点眼方式进行鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗(La Sota株+QXL87株)免疫,14日龄采用饮水免疫方式进行鸡传染性法氏囊病活疫苗(B87株)免疫,21日龄采用滴鼻点眼方式进行鸡新城疫活疫苗(La Sota株)免疫(疫苗均购于易邦生物工程有限公司)。基础饲粮参考NY/T 33—2004《鸡饲养标准》营养标准配制,其组成及营养水平见表 1。
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表 1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis) |
分别于出壳当天、试验第21天和第42天,以重复为单位对试验鸡进行空腹称重,准确记录各阶段采食量。计算1~21日龄、22~42日龄及1~42日龄的平均日增重、平均日采食量和料重比。
1.4.2 免疫机能 1.4.2.1 血清新城疫抗体效价于试验第42天,从每组每重复中随机取1只鸡,翅静脉采血,4 000 r/min离心分离血清,-20 ℃冷冻待测。采用血凝-血凝抑制(HA-HI)试验检测血清新城疫抗体效价[10]。
1.4.2.2 免疫器官指数于试验第42天,从每组每重复中选择体重接近其所在重复平均体重的肉鸡1只,颈部放血宰杀,解剖取法氏囊和脾脏,准确称重,计算免疫器官指数。
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于试验第21天,从每组每重复中随机取1只鸡心脏采血;于试验第42天,从每组每重复中随机取1只鸡翅静脉采血,血清采集方法同1.4.2.1。采用TECAN SPARK酶标仪及试剂盒测定血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量。试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
1.5 数据处理与统计分析对试验数据采用Excel 2016软件进行初步处理,采用SPSS 20.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA),采用Duncan氏法进行组间多重比较和差异显著性分析,结果以“平均值±标准差”表示。P<0.05为差异显著,P<0.01为差异极显著。采用Excel 2016软件进行桉树精油添加水平与效应之间的二次回归分析,计算最佳值。
2 结果与分析 2.1 不同桉树精油添加水平对肉鸡生长性能的影响不同桉树精油添加水平对肉鸡生长性能的影响见表 2,由表可知,1~21日龄,Ⅱ~Ⅴ组肉鸡21日龄时平均体重显著或极显著高于Ⅰ组(P<0.05或P<0.01),Ⅳ组肉鸡平均日增重最高,Ⅱ~Ⅵ组肉鸡平均日增重之间无显著差异(P>0.05),Ⅱ~Ⅵ组分别较Ⅰ组提高了14.10%(P<0.05)、19.00%(P<0.01)、19.60%(P<0.01)、14.17%(P<0.05)和10.79%(P>0.05);各组肉鸡平均日采食量无显著差异(P>0.05);Ⅱ~Ⅵ组料重比显著或极显著低于Ⅰ组(P<0.05或P<0.01),Ⅳ组料重比最低,Ⅲ组次之,Ⅲ组、Ⅳ组极显著低于Ⅵ组(P<0.01)。22~42日龄,Ⅳ组肉鸡42日龄时平均体重显著高于Ⅰ组(P<0.05),各组间肉鸡平均日增重、平均日采食量和料重比无显著差异(P>0.05)。1~42日龄,Ⅱ~Ⅵ组肉鸡平均日增重均不同程度高于Ⅰ组,其中Ⅳ组显著高于Ⅰ组(P<0.05);Ⅱ~Ⅵ组料重比均低于Ⅰ组,其中Ⅳ组显著低于Ⅰ组(P<0.05);各组间平均日采食量无显著差异(P>0.05)。
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表 2 不同桉树精油添加水平对肉鸡生长性能的影响 Table 2 Effects of different supplemental levels of eucalyptus essential oil on growth performance of broilers |
随着桉树精油添加水平的升高,1~21日龄和1~42日龄肉鸡平均日增重呈现先上升后下降趋势,料重比则呈现先下降后上升的趋势,剂量效应明显。桉树精油添加水平与生长性能指标的二次回归分析结果(表 3)表明,饲粮中桉树精油的添加水平分别为95.25和105.83 mg/kg时,1~21日龄和1~42日龄肉鸡可获得最高平均日增重,分别为38.00和53.87 g/d;饲粮中桉树精油的添加水平分别为105.00和115.00 mg/kg时,1~21日龄和1~42日龄肉鸡可获得最低料重比,分别为1.24和1.55。
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表 3 桉树精油添加水平与生长性能指标的二次回归分析结果 Table 3 Quadratic regression analysis results of eucalyptus essential oil supplemental level and growth performance indices |
不同桉树精油添加水平对肉鸡免疫机能的影响见表 4,由表可知,Ⅱ~Ⅵ组肉鸡血清新城疫抗体效价、脾脏指数和法氏囊指数均略高于Ⅰ组,但各组间差异不显著(P>0.05)。
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表 4 不同桉树精油添加水平对肉鸡免疫机能的影响 Table 4 Effects of different supplemental levels of eucalyptus essential oil on immune function of broilers |
不同桉树精油添加水平对肉鸡抗氧化机能的影响见表 5,由表可知,21和42日龄时,肉鸡血清T-SOD活性随桉树精油添加水平升高均呈升高趋势。21日龄时,Ⅴ组肉鸡血清T-SOD活性显著或极显著高于Ⅰ~Ⅲ组(P<0.05或P<0.01),Ⅵ组显著高于Ⅰ组(P<0.05);42日龄时,Ⅴ组肉鸡血清T-SOD活性最高,显著或极显著高于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05或P<0.01),Ⅳ组和Ⅵ组显著高于Ⅰ组(P<0.05)。21和42日龄时,Ⅱ~Ⅵ组肉鸡血清GSH-Px活性均不同程度高于Ⅰ组,21日龄时,Ⅱ~Ⅵ组显著或极显著高于Ⅰ组(P<0.05或P < 0.01);42日龄时,Ⅳ组显著高于Ⅰ组(P<0.05)。21和42日龄时,Ⅱ~Ⅵ组肉鸡血清MDA含量均不同程度低于Ⅰ组,21日龄时,Ⅳ~Ⅵ组极显著低于Ⅰ组(P<0.01),Ⅴ组最低,与Ⅱ组差异极显著(P<0.01),与Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅵ组差异显著(P<0.05);42日龄时,Ⅳ组和Ⅴ组显著或极显著低于Ⅰ~Ⅲ组(P<0.05或P<0.01),Ⅲ组和Ⅵ组显著或极显著低于Ⅰ组(P<0.05或P < 0.01)。
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表 5 不同桉树精油添加水平对肉鸡抗氧化机能的影响 Table 5 Effects of different supplemental levels of eucalyptus essential oil on antioxidant function of broilers |
随着桉树精油添加水平的升高,21和42日龄肉鸡血清GSH-Px和T-SOD活性均呈现逐渐上升然后下降趋势,血清MDA含量则呈现逐渐下降然后上升趋势。桉树精油添加水平与抗氧化机能指标的二次回归分析结果(表 6)表明,饲粮中桉树精油的添加水平分别为151.13、205.60和188.00 mg/kg时,21日龄肉鸡可获得最高血清GSH-Px和T-SOD活性以及最低血清MDA含量;饲粮中桉树精油的添加水平分别为93.38、139.12和158.57 mg/kg时,42日龄肉鸡可获得最高血清GSH-Px和T-SOD活性以及最低血清MDA含量。
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表 6 桉树精油添加水平与抗氧化机能指标的二次回归分析结果 Table 6 Quadratic regression analysis results of eucalyptus essential oil supplemental level and antioxidant function indices |
据报道,天然1, 8-桉树脑存在于200余种天然植物挥发油中,是迷迭香精油、百里香精油以及桉树精油的主要组成部分[11-13]。刘大林等[14]研究表明,饲粮添加迷迭香精油对京海黄鸡生长性能无显著影响;Mueller等[15]研究表明,饲粮添加0.15 g/kg的百里香和迷迭香精油,有提高罗斯308肉鸡体增重和饲料转化率的趋势;朱晓磊等[16]研究表明,在饲粮中添加百里香精油可显著提高22~42日龄麻花鸡平均日增重,降低料重比;Mathlouthi等[17]研究表明,基础饲粮中添加100 mg/kg迷迭香精油(含49.99%的1, 8-桉树脑)、50 mg/kg迷迭香和50 mg/kg牛至精油混合物、1 000 mg/kg的市售精油混合物(主要成分为肉桂醛和1, 8-桉树脑),肉鸡体增重和饲料转化率均显著高于无添加的对照组,作用效果等同于抗生素对照组(添加阿维霉素促生长剂),因此认为上述精油均可以替代生长促进剂类抗生素;Nameghi等[18]也报道,饮用水中添加150 mg/L混合物精油(由百里香精油、薄荷油和桉树精油组成)可显著提高罗斯308肉鸡的体增重和饲料转化率;Al-Fataftah等[19]报道,与对照组相比,在AA肉鸡饮用水中添加100 mg/L的桉树提取物能够显著提高体增重,降低料重比;Barbour等[20]研究表明,在饮用水中添加主要成分为1, 8-桉叶醇和α-蒎烯的桉树和薄荷油的商品混合物显著提高了肉鸡的生长性能;Mashayekhi等[21]研究表明,饲粮添加0.5%的桉叶粉显著提高了罗斯308肉鸡26~42日龄和1~42日龄的体增重,降低了料重比。本试验结果表明,饲粮添加50~125 mg/kg的桉树精油可显著提高1~21日龄肉鸡的平均日增重,显著降低料重比;饲粮添加100 mg/kg桉树精油可显著提高1~42日龄肉鸡平均日增重,显著降低料重比。本试验所用桉树精油的主要成分为1, 8-桉树脑,其可能是改善肉鸡生长性能的主要活性物质,其促生长作用机制有待进一步研究。
3.2 不同桉树精油添加水平对肉鸡免疫机能的影响免疫器官指数是衡量肉仔鸡免疫功能的指标之一[22]。朱晓磊等[23]研究表明,百里香精油提高了麻花鸡的胸腺指数,但脾脏指数降低;Nameghi等[18]也报道,随着饮水中百里香、薄荷和桉树精油添加水平提高,罗斯308肉鸡血清中新城疫抗体效价呈线性增长,并且当饮水中添加150 mg/L百里香、薄荷和桉树精油的混合精油时显著提高了罗斯308肉鸡胸腺和法氏囊指数;Mashayekhi等[21]研究表明,饲粮添加0.5 %的桉叶粉显著提高了罗斯308肉鸡的法氏囊指数;但熊娟等[24]研究表明,植物精油(肉桂醛、香芹酚、百里香酚、丁香酚、薄荷和桉叶油)与酸化剂(主要由柠檬酸、乳酸、磷酸及富马酸等组成)组合对肉仔鸡胸腺指数以及脾脏指数均无显著影响。本试验结果表明,饲粮添加50~150 mg/kg桉树精油可使肉鸡脾脏指数、法氏囊指数和血清新城疫抗体效价略高于对照组,但无统计意义上的差异显著性,这可能是本试验所用的添加水平未达到显著提高上述免疫指标所需剂量,有关桉树精油对其他免疫指标的影响及其作用机制有待进一步研究。
3.3 不同桉树精油添加水平对肉鸡抗氧化机能的影响研究表明,植物精油具有较强的抗氧化作用,可以减少因氧化应激导致的细胞凋亡和损伤[22]。王兰等[25]研究表明,使用200 mg/kg百里香酚、丁香酚和肉桂醛组成的复合精油可以显著提高肉鸡血清T-SOD活性;刘大林等[14]研究表明,150 mg/kg的迷迭香精油显著提高了京海黄鸡血清GSH-Px和T-SOD活性,显著降低了血清MDA含量;Mueller等[15]研究表明,饲粮添加0.15 g/kg的姜油、牛至油、百里香和迷迭香精油可提高罗斯308肉鸡空肠和肝脏的Trolox当量抗氧化能力,并减少二价铁离子(Fe2+)诱导的肝脏脂质过氧化作用;Ahlem等[26]研究表明,在小鼠饮水中添加桉叶提取物,能够提高肝脏和肾脏中过氧化氢酶、T-SOD和GSH-Px的活性,降低脂质过氧化水平。El-Ghorab等[27]研究表明,采用水蒸气蒸馏法从赤桉叶中提取的精油抗氧化效果显著,可作为天然抗氧化剂。此外,据报道,1, 8-桉树脑、樟脑和β-蒎烯等成分相互协同作用,能更好地发挥抗氧化活性[28];五叶子精油中含有少量1, 8-桉树脑成分[29];而五味子精油能够上调成肌细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)的蛋白表达,从而提高抗氧化酶活性,降低动物机体氧化损伤[30]。有关桉树精油对肉鸡抗氧化机能的影响研究报道较少。本试验结果表明,饲粮添加一定量的桉树精油显著降低了肉鸡血清MDA含量,显著提高肉鸡血清GSH-Px和T-SOD活性,这说明桉树精油能够提高肉鸡抗氧化能力,其提高抗氧化酶活性的分子作用机制有待进一步研究。
4 结论① 在饲粮中添加适宜水平的桉树精油可显著提高笼养白羽肉鸡生长性能和抗氧化机能。
② 饲粮添加50~125 mg/kg桉树精油可显著提高1~21日龄肉鸡生长性能,饲粮添加100 mg/kg桉树精油可使1~42日龄肉鸡获得最佳的生长性能;饲粮添加50~150 mg/kg桉树精油可显著提高21日龄肉鸡抗氧化机能,饲粮添加75~150 mg/kg桉树精油可显著提高22~42日龄肉鸡抗氧化机能;饲粮添加50~150 mg/kg桉树精油有提高肉鸡免疫器官指数和血清新城疫抗体效价的趋势。
③ 结合回归结果综合分析,笼养白羽肉鸡饲粮中桉树精油适宜添加水平为105.00 mg/kg。
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