额尔齐斯河银鲫(Carassius auratus gibelio Block)为鲫鱼的一个亚种，分布于欧亚中北部，我国仅见于黑龙江和额尔齐斯河水系，是一种广温、杂食性鱼[1-3]。它对各种环境有广泛的适应性，与其他鲫鱼品种相比，对不良环境的耐受力较强且营养价值较高，市场前景广阔[2, 4-5]。目前，额尔齐斯河银鲫产量仍主要依靠额尔齐斯河及其附属水体的天然渔业资源，近几年已呈现逐渐衰退的趋势，依靠天然捕捞已无法较稳定的满足日益增长的消费需求[2]，急需开展人工养殖，以满足市场需求。
鱼类人工养殖的发展离不开优质水产饲料的支撑[6]。脂肪是构成鱼类机体组织的要素，维持其生命活动的主要能源物质，也是脂溶性维生素的媒介体[7]。饲料中适宜的脂肪水平不仅有利于鱼体生长与健康，而且对蛋白质也有节约作用[8-9]，因此有必要研究鱼类对饲料中脂肪的需要量。目前，对鲫鱼脂肪需要量的研究报道主要集中在异育银鲫，研究发现，对于初始体质量为2.05 g/尾的幼鱼，其饲料中适宜的脂肪水平为9.93%~11.60%[10-11]，4.5 g/尾的为14.05%[12]，17 g/尾的则为4.08%~6.08%[7]，而大规格鲫鱼鱼种饲料中适宜的脂肪尚缺乏参考依据。因此，本研究拟以大规格额尔齐斯河银鲫为研究对象，研究饲料脂肪水平对其生长性能、饲料利用、体成分和血清生化指标的影响，以期获得大规格额尔齐斯河银鲫饲料中适宜的脂肪水平，为其精准配合饲料的开发提供参考依据。
1 材料与方法 1.1 试验设计以鱼粉、豆粕、菜籽粕为蛋白质源，以鱼油为脂肪源，配制脂肪水平分别为3.88%、6.52%、8.87%、11.25%和13.52%的5种等氮不等脂的实用饲料(分别记为CL3.88、CL6.52、CL8.87、CL11.25和CL13.52)，试验饲料组成及营养水平见表 1。将需粉碎的原料经粉碎机(9FZ-15型，四川简阳城西精工机械有限公司生产)粉碎后过60目筛，按表 1将不同固体原料称重，少量的组分(＜5%)采用逐级预混法充分混匀，随后加入鱼油，再次混合后加约30%的自来水，用饲料机(120型，山东章丘宇龙机械有限公司生产)制作成直径为2 mm的圆柱形长条饲料，自然风干破碎后置于-20 ℃冰箱中冷藏备用。
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表 1 试验饲料组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) |
试验用大规格额尔齐斯河银鲫取自新疆水生野生动物救护中心，为自繁池塘养殖1龄鱼种。试验正式开始前在室内圆形水泥池中用CL3.88饲料驯养4周，使其适应试验饲料和养殖环境。
1.3 养殖管理试验鱼在正式试验前停食24 h，随后挑选150尾外观健康、规格整齐的试验鱼，初始体质量为(52.78±0.10) g，放入同一套循环水养殖系统的15个养殖玻璃缸(长0.6 m×宽0.4 m×高0.7 m)中，每缸放鱼10尾。将15缸试验鱼随机分为5组，每组3缸，分别投喂5种试验饲料，并根据所投喂饲料名称分别命名为CL3.88、CL6.52、CL8.87、CL11.25和CL13.52组。养殖试验持续8周，每天饱食投喂3次(10:00、14:00和18:00)，保证无残饵剩余。
试验用水为经充分曝气后的深井水。每个养殖缸的循环水量为100~120 L/h。试验期间水温为21~23 ℃，pH为8.0~8.6，溶氧浓度≥6.0 mg/L，氨氮浓度＜0.15 mg/L，亚硝酸盐浓度＜0.05 mg/L。
1.4 样品采集饲养试验结束后，停食24 h，最后，对每缸试验鱼进行计数和称重。每缸随机选取试验鱼2尾，麻醉(苯氧乙醇，300 μL/L)测定体长、体重后，用1 mL无菌注射器于尾静脉取血，在4 ℃下1 000×g离心(3K15型离心机，德国希格玛实验室离心机公司生产)10 min后，取血清用于测定血清生化指标；解剖鱼体取肝脏、内脏并称重，随后取背部肌肉，置于-20 ℃保存，用于检测肌肉营养组成。另每缸随机选取3尾试验鱼，称重后置于-20 ℃保存，用于检测全鱼营养组成。
1.5 指标测定 1.5.1 生长性能和饲料利用根据下列公式，计算试验鱼的增重率(weight gain rate, WGR)、特定生长率(special growth ratio, SGR)、饲料效率(feed efficiency, FE)、摄食率(feed intake, FI)、脏体比(viscerosomatic index, VSI)、肝体比(hepatosomatic index, HSI)和肥满度(condition factor, CF)。
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式中：W0为试验鱼初始体质量(g)；W1为试验鱼终末体质量；Wi为试验鱼初始总质量；Wf为试验鱼终末总质量(g)；t为养殖时间(d)；FT为试验期间投喂饲料总质量(g)；Vw为试验鱼内脏质量(g)；W为试验鱼体质量(g)；Hw为试验鱼肝脏质量(g)；L为试验鱼体长(cm)。
1.5.2 营养成分含量试验样品的粗蛋白质含量采用凯氏定氮法(GB/T 5009.5—2003)测定，粗脂肪含量采用索氏抽提法(GB/T 5009.6—2003)测定，粗灰分含量采用马福炉灰化法(GB/T 5009.4—2003)测定，水分含量采用103 ℃恒温干燥失重法(GB/T 5009.3—2003)测定。
1.5.3 血清生化指标血清生化指标包括谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性以及总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLOB)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)含量，采用7180型全自动生化分析仪(日立，日本)测定。
1.6 数据处理与分析试验结果采用SPSS 22.0的单因素方差分析(one-way ANOVA)和Turkey均值多重比较法进行差异显著性分析，所有结果均以平均值±标准差(mean±SD)表示，P＜0.05为差异显著。
2 结果 2.1 生长性能和饲料利用在整个养殖试验期间，各组试验鱼的摄食情况良好，体表正常，成活率均为100%。由表 2可知，饲料脂肪水平对试验鱼的终末体质量无显著影响(P＞0.05)，但试验鱼的WGR、SGR和FE随饲料脂肪水平的升高先增加后降低，在CL8.87组达到最高，显著高于CL3.88组(P＜0.05)，而与CL11.25和CL13.52组差异不显著(P＞0.05)。试验鱼的FI随饲料脂肪水平的升高而持续下降，至CL13.52组最低，显著低于CL3.88、CL6.52和CL8.87组(P＜0.05)。
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表 2 饲料脂肪水平对试验鱼生长性能和饲料利用的影响 Table 2 Effects of dietary lipid level on growth performance and feed utilization of experimental fish |
以SGR和FE为评价指标，分别进行折线和二次回归分析，得出大规格额尔齐斯河银鲫饲料中适宜的脂肪水平分别为8.51%和10.45%(图 1)。
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图 1 基于模型估测饲料中适宜的脂肪水平 Fig. 1 Estimation of dietary optimal lipid level based on models |
由表 3可知，饲料脂肪水平对试验鱼的CF、VSI和HSI均无显著影响(P＞0.05)。
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表 3 饲料脂肪水平对试验鱼形体指标的影响 Table 3 Effects of dietary lipid level on morphological indicators of experimental fish |
由表 4可知，饲料脂肪水平对全鱼粗蛋白质和粗灰分含量以及肌肉水分、粗蛋白质和粗灰分含量无显著影响(P＞0.05)。在全鱼和肌肉中，随饲料脂肪水平的升高，水分含量有下降的趋势，而粗脂肪含量有上升的趋势。CL11.25和CL13.52组的全鱼水分含量显著低于其他组(P＞0.05)。CL11.25组的全鱼粗脂肪含量与CL8.87和CL13.52组差异不显著(P＞0.05)，但显著高于CL3.88和CL6.52组(P＜0.05)。CL11.25组的肌肉粗脂肪含量与CL6.52、CL8.87、CL11.25和CL13.52组差异不显著(P＞0.05)，但显著高于CL3.88组(P＜0.05)。
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表 4 饲料脂肪水平对试验鱼全鱼和肌肉营养组成的影响(湿重基础) Table 4 Effects of dietary lipid level on whole body and muscle nutrient composition of experimental fish (wet weight basis) |
由表 5可知，饲料脂肪水平对血清ALT、AST活性以及TP、ALB、GLOB含量无显著影响(P＞0.05)。CL3.88组试验鱼的血清TC含量显著低于其他4组(P＜0.05)。随着饲料脂肪水平的升高，试验鱼血清TG、HDL和LDL含量先逐渐增加，在饲料脂肪水平达到8.87%后保持相对稳定，CL8.87、CL11.25和CL13.52组间差异不显著(P＞0.05)。
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表 5 饲料脂肪水平对试验鱼血清生化指标的影响 Table 5 Effects of dietary lipid level on serum biochemical indicators of experimental fish |
在本试验中，随饲料脂肪水平的升高，大规格额尔齐斯河银鲫的WGR、SGR和FE表现出先升高后下降的趋势，最高值均出现在饲料脂肪水平为8.87%时。类似的结果在草鱼[13]、罗非鱼[14]等的研究中也有所发现，表明摄食适量脂肪水平的饲料可以促进其生长和饲料利用。本试验中，试验鱼的FI随饲料脂肪水平的升高而降低，这也在初始体质量为4.5 g的异育银鲫研究中有所表现[12]，基于本试验中试验饲料的能量水平随脂肪水平的增加而升高，表明试验鱼可以根据饲料中的能量水平来调节摄食量[15]。
在本试验中，以SGR和FE为依据，得出大规格额尔齐斯河银鲫饲料中脂肪的适宜水平为8.51%~10.45%，低于之前对初始体质量2.05 g[10-11]和4 g[12]异育银鲫的研究中所得结果，这可能与本试验选取的试验鱼规格较大有关；但是高于初始体质量17 g异育银鲫(养殖水温25~30 ℃)的研究中所得结果[7]，这可能是因为本试验使用的水温(21~23 ℃，新疆地区池塘水可以较长时间维持的温度)较低，而低温需要较高的不饱和脂肪酸[16]和脂肪水平[17]来满足鱼类生长。
3.2 饲料脂肪水平对大规格额尔齐斯河银鲫形体指标的影响鱼类的形体指标可以反映其营养状况。在多种鱼类，如大口黑鲈[18]、多鳞白甲鱼[19]、巴丁鱼[20]等中均发现饲料脂肪水平的升高引起组织脂肪沉积增加[21]，导致CF、VSI和HSI逐渐升高。而在本试验中，形体指标未受到饲料脂肪水平的显著影响。在对初始体质量17 g的异育银鲫的研究中发现，饲料中4.08%~9.88%的脂肪水平未对CF、VSI和HSI造成显著影响[7]，而对初始体质量2.5 g的异育银鲫的研究中也发现1.4%~11.6%的脂肪水平未影响到CF、VSI和HSI[10]。这可能表明形体指标在额尔齐斯河银鲫的饲料脂肪需要研究中不是敏感指标。
3.3 饲料脂肪水平对大规格额尔齐斯河银鲫鱼体和肌肉营养组成的影响通常，体脂量会随饲料脂肪水平的升高而增加[12]，这与脂肪代谢的外源性途径有关。饲料中的脂肪在肠道酶的作用下，主要分解产物为游离脂肪酸和甘油，然后过肠道膜在黏膜细胞内合成TG，并与磷脂、胆固醇和蛋白质结合成为乳糜微粒，大部分通过淋巴系统进入血液循环，被肌肉、脂肪组织等外周组织利用[22]，过量的脂肪被储存在体内，引起体内脂肪含量增加[18]。在本试验中，随着饲料脂肪水平的升高，全鱼和肌肉粗脂肪含量逐渐增加，结合形体指标来看，表明试验鱼更能有效的利用脂肪沉积于可食组织中。
3.4 饲料脂肪水平对大规格额尔齐斯河银鲫血清生化指标的影响转氨酶尤其是ALT在肝细胞内的活性是血清中1 100~5 000倍，若有1%的肝细胞受到损害，就会使血清中ALT的活性显著增高，因此，血清中转氨酶活性是判断肝功能损伤的敏感指标[23]。TP和ALB是检测肝脏健康的重要指标，肝脏损伤会造成血清TP、ALB含量下降[24]；同时，它们也与机体营养状况呈正相关[25]，而在本试验中发现这些指标随饲料脂肪水平的升高均无显著变化，表明本试验设定的饲料脂肪水平对肝功能均无显著负面影响。
血浆中TC和TG的来源包括外源性和内源性的。外源性的TC和TG是从饲料中获取并经消化道进入血液，内源性TC和TG在肝脏、脂肪组织等部位合成后进入血液[26]。LDL的主要作用是将肝脏中过多的脂肪转运到外周组织；HDL主要负责胆固醇的逆向转运，血浆中高含量的HDL表明外周组织向肝脏转运胆固醇的速率较快[22]。本试验发现，与脂肪代谢相关的血清产物TC、TG、HDL和LDL的含量均与饲料脂肪水平存在正相关关系，表明随饲料脂肪水平的升高鱼体的脂代谢在增强。
4 结论饲料中过高的脂肪水平不利于大规格额尔齐斯河银鲫鱼种的生长和饲料利用。以SGR和FE为评价指标，分别进行折线和二次回归分析，得出大规格额尔齐斯河银鲫饲料中脂肪的适宜水平为8.51%~10.45%。
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