2. 扬州大学动物科学与技术学院, 扬州 225009;
3. 广西大学动物科学技术学院, 南宁 530004;
4. 山东新希望六和集团有限公司, 青岛 266061
2. School of Animal Science and Technology, Yangzhou University, Yangzhou 225009, China;
3. School of Animal Science and Technology, Guangxi University, Nanning 530004, China;
4. Shandong New Hope Liuhe Group Co., Ltd., Qingdao 266061, China
随着畜牧业快速发展，长期低剂量预防用药或过量使用、滥用抗生素等因素，造成畜禽体内药物残留和蓄积毒素、细菌产生耐药性、动物免疫力下降等问题日益突出。因此，我国农业农村部于2019年7月发布第194号公告，自2020年7月1日起，饲料生产企业停止生产含有促生长类药物饲料添加剂(中药类除外)的商品饲料。开发天然、绿色、无毒副残留的抗生素替代物已刻不容缓。
化香果(Plotytarya strohilacea Sieb. et Zuce)又称化香树果，是胡桃科植物化香树的果序。果序呈长椭圆状，萼片宿存，褐色。化香树在我国分布广泛，在我国民间的应用广且历史悠久，多以叶、果序入药[1]。化香果序中含有较丰富的植物单宁。化香果单宁属于鞣花单宁，主要成分为英国栎鞣花素、木麻黄亭，均由2个六羟基联苯二酰基与葡萄糖形成的酯。鞣花单宁经过水解可以得到鞣花酸。化香果单宁具有特殊的生物学和药理学活性，药用价值较高[2]。已知国内外文献对化香果序提取物及药理学活性的研究，多集中在化香树及其果序提取的化香果单宁对抑制细胞毒性和肠道内有害菌，抗氧化、预防癌症和抗衰老作用，以及作为复方中药治疗急性慢性鼻炎和鼻窦炎的报道[3-4]。可见化香果单宁具有替代抗生素的潜力，但作为家禽饲料添加剂的研究尚未见报道。因此，本试验旨在研究饲粮添加化香果单宁对肉鸡生长性能、屠宰性能、器官指数、肉品质、抗氧化功能和肠道发育的影响，为化香果单宁在家禽生产中的应用提供科学依据。
1 材料与方法 1.1 试验材料试验用爱拔益加(AA)肉鸡购自江苏京海禽业集团有限公司。化香果单宁(单宁含量≥65%，粉末状，棕褐色)由中国林业科学研究院林产化学工业研究所植物单宁化学利用课题组提供。
1.2 试验设计选取1日龄雄性AA肉鸡288羽，随机分为4组，每组6个重复，每个重复12羽。对照组(PT0组)饲喂基础饲粮，试验组分别在基础饲粮中添加100(PT100组)、500(PT500组)和1 000 mg/kg(PT1 000组)化香果单宁。试验期42 d。
1.3 基础饲粮和饲养管理试验在中国农业科学院家禽研究所仪征试验基地开展，试验鸡采用网上平养模式，自由采食和饮水，试验初始温度34 ℃，随后每周降低2~3 ℃，直至降至24 ℃。每天24 h光照。通风和免疫等其他管理措施按饲养管理手册执行。基础饲粮按照NRC(1994)肉鸡营养需求配制并制粒，基础饲粮组成及营养水平见表 1。
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表 1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis) |
在1、21和42日龄分别称重，记录剩余料重。分别计算1~21日龄、22~42日龄和1~42日龄各组肉鸡的平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。
1.4.2 屠宰性能42日龄时，每个重复随机选取1羽，测定宰前重、屠体重、全净膛重、胸肌重、腿重、翅膀重、爪重、腹脂重和腹部脂带宽，并计算屠宰率、全净膛率、胸肌率、腿比率、翅膀率、爪重率和腹脂率。计算公式如下：
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21和42日龄时，每个重复随机选取1羽进行屠宰，解剖取出心脏、胰腺、肝脏(无胆囊)、腺胃和肌胃(去除内容物及内金)称重，按照公式计算器官指数：
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42日龄时，每个重复随机选取1羽，将其屠宰解剖后，统一取左侧整块胸肌。根据《畜禽肉质的测定》(NY/T 1333—2007)测定肉鸡胸肌系水力、pH24 h和肉色；按照《肉嫩度的测定剪切力测定法》(NY/T 1180—2006)测定肉鸡胸肌剪切力。
1.4.5 肌肉抗氧化指标测定21和42日龄肉鸡胸肌中过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量，所用试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。
1.4.6 肠道校正长度和指数21和42日龄时，每个重复随机选取1羽，屠宰后测量十二指肠和盲肠(两侧)的长度和重量(去除内容物)，计算十二指肠和盲肠的校正长度以及十二指肠和盲肠指数。
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21和42日龄时，每个重复随机选取1羽，屠宰后迅速剪取空肠和回肠中段各1 cm左右，放入10%甲醛溶液中固定，24 h后更换新的10%甲醛溶液。石蜡包埋，连续切片，片厚5 μm，进行规苏木精-伊红(HE)染色后运用莱卡(Leica)图像处理系统，于显微镜(DM4000B，Leica Microsystems，德国)下观测切片，测定绒毛高度(villus height)和隐窝深度(crypt depth)，计算绒毛高度/隐窝深度(V/C)。
1.5 数据处理与统计分析试验数据采用SPSS 20.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)和线性、二次分析，组间采用LSD法进行多重比较检验。结果用平均值和均值标准误(SEM)表示，P < 0.05表示显著差异，0.05≤P < 0.10表示有趋势。
2 结果 2.1 饲粮添加化香果单宁对肉鸡生长性能的影响由表 2可知，PT100组1~21日龄肉鸡的ADFI显著低于PT0组(P < 0.05)，且ADFI与化香果单宁添加量呈显著二次相关(P < 0.05)。与PT0组相比，PT100组22~42日龄肉鸡的料重比有降低趋势(P=0.068)。
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表 2 饲粮添加化香果单宁对肉鸡生长性能的影响 Table 2 Effects of dietary Plotytarya strohilacea Sieb. et Zuce tannin on growth performance of broilers |
由表 3可知，饲粮添加化香果单宁对肉鸡屠宰性能无显著影响(P>0.05)。
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表 3 饲粮添加化香果单宁对肉鸡屠宰性能的影响 Table 3 Effects of dietary Plotytarya strohilacea Sieb. et Zuce tannin on slaughter performance of broilers |
由表 4可知，PT1 000组42日龄肉鸡肌胃指数显著低于其他各组(P < 0.05)，且肌胃指数与化香果单宁添加量呈显著二次相关(P < 0.05)。
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表 4 饲粮添加化香果单宁对肉鸡器官指数的影响 Table 4 Effects of dietary Plotytarya strohilacea Sieb. et Zuce tannin on organ indexes of broilers |
由表 5可知，饲粮添加化香果单宁对肉鸡肉品质无显著影响(P>0.05)。
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表 5 饲粮添加化香果单宁对肉鸡肉品质的影响 Table 5 Effects of dietary Plotytarya strohilacea Sieb. et Zuce tannin on meat quality of broilers |
由表 6可知，42日龄时，PT500和PT1 000组肉鸡胸肌T-SOD活性显著高于PT0组(P < 0.05)，且胸肌T-SOD活性与化香果单宁添加量呈显著线性相关(P < 0.05)。
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表 6 饲粮添加化香果单宁对肉鸡胸肌抗氧化指标的影响 Table 6 Effects of dietary Plotytarya strohilacea Sieb. et Zuce tannin on pectoralis muscle antioxidant indexes of broilers |
由表 7可知，饲粮添加化香果单宁对肉鸡肠道校正长度和指数无显著影响(P>0.05)。
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表 7 饲粮添加化香果单宁对肉鸡肠道校正长度和指数的影响 Table 7 Effects of dietary Plotytarya strohilacea Sieb. et Zuce tannin on intestinal correction length and indexes of broilers |
由表 8可知，21日龄时，PT500组肉鸡空肠绒毛高度显著高于其他各组(P < 0.05)，且空肠绒毛高度与化香果单宁添加量呈显著线性相关(P < 0.05)。42日龄时，PT100、PT500和PT1 000组肉鸡空肠绒毛高度显著高于PT0组(P < 0.05)，且空肠绒毛高度与化香果单宁添加量呈显著线性和二次相关(P < 0.05)。
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表 8 饲粮添加化香果单宁对肉鸡空肠黏膜形态结构的影响 Table 8 Effects of dietary Plotytarya strohilacea Sieb. et Zuce tannin on jejunum mucosal morphology of broilers |
由表 9可知，42日龄时，PT0和PT100组肉鸡回肠V/C显著高于PT500组(P < 0.05)，且回肠V/C与化香果单宁添加量呈显著线性相关(P < 0.05)。
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表 9 饲粮添加化香果单宁对肉鸡回肠黏膜形态结构的影响 Table 9 Effects of dietary Plotytarya strohilacea Sieb. et Zuce tannin on ileal mucosal morphology of broilers |
生长性能是反映肉鸡生长的最直接指标，提高动物的生长性能是增加经济效益的关键。植物单宁在单胃动物生产中应用与研究相对较少，人们早期在饲粮中添加高剂量植物单宁或者植物单宁含量高的饲料原料(高粱)，导致单胃动物产生采食量、蛋白质消化率和生长性能下降等负面影响，因此被视为是一种抗营养因子[5-6]。但近年多项研究表明，饲粮添加适量植物单宁能够提高单胃动物生长性能、抗氧化功能和免疫性能等[1-4, 7]。Starčević等[8]研究表明，饲粮添加适量植物单宁能够提高肉鸡生长性能。张亮亮等[2]研究发现，饲料添加0.5%化香果单宁能够促进青石斑鱼生长。本试验结果发现，饲粮添加适量化香果单宁具有降低22~42日龄肉鸡料重比的趋势，但会影响1~21日龄肉鸡的采食量。这与前人研究结果[2, 8]并不完全一致。可能是化香果单宁的苦涩味影响了适口性，从而降低肉鸡的采食量[9]。此外，结合1~21日龄肉鸡ADG和料重比结果，发现并未对其造成负面影响。这表明化香果单宁可能并未对消化道多个位点的消化酶产生抑制作用，不影响肉鸡对营养物质的消化吸收和利用[10]。由此可见，本试验条件下饲粮添加适量的化香果单宁对肉鸡生长性能有一定有益效果。
3.2 饲粮添加化香果单宁对肉鸡屠宰性能和器官指数的影响屠宰性能可直观地反映出动物体构成和可食部分的比例，是衡量动物生长性能的重要指标之一[11]。屠宰率和全净膛率分别在80%和60%以上，则表示肉鸡的产肉性能良好[12]。Jamroz等[13]研究表明，饲粮添加甜栗木单宁未对肉鸡屠宰性能造成显著影响。刘娇等[14]研究发现，饲粮添加辣木提取物(富含黄酮类化合物)未对肉鸡屠宰性能造成显著影响。本试验结果发现，饲粮添加化香果单宁对肉鸡屠宰性能未造成显著影响，各组的屠宰率和全净膛率分别在92%和78%以上。与前人研究结果[13-14]一致，表明化香果单宁对肉鸡屠宰性能无负面影响。
器官指数能够在一定程度上反映肉鸡发育状况，对于理论研究和生产实践有重要意义。刘娇等[15]研究表明，饲粮添加辣木提取物(富含黄酮类化合物)对肉鸡器官指数均未造成显著影响。本试验结果与之相似，饲粮添加化香果单宁对肉鸡胰腺、肝脏和腺胃指数均无显著影响。另外，饲粮添加适量化香果单宁能够提高肌胃指数，表明化香果单宁对肉鸡肌胃发育具有促进作用。
3.3 饲粮添加化香果单宁对肉鸡肉品质的影响肌肉pH、肉色、系水力和嫩度等指标能够更加直观地综合反映肉品质，也能够决定消费者的消费取向。肌肉系水力是肌肉组织保持水分的能力，是评价家禽肉品质的重要指标之一[16]。本试验结果表明，饲粮添加化香果单宁未对胸肌肉系水力造成显著影响。Przywitowski等[17]研究发现，饲粮添加单宁对火鸡胸肌系水力并无显著影响，这与本试验得到的结果一致。肉鸡宰后肌肉的pH变化反映了肌肉内能量和物质的代谢变化过程，此过程肌肉pH会逐渐降低，较低的pH可以抑制破坏性微生物的大量繁殖，防止肉腐败[18]。Jung等[19]研究发现，肉鸡饲粮中添加没食子酸和共轭亚油酸复合物对肌肉pH无显著差异。Przywitowski等[17]研究发现，在火鸡饲粮中添加蚕豆单宁对胸肌pH无显著影响。本试验中，饲粮添加化香果单宁未对肌肉pH24 h造成显著影响，这与前人研究结果[18-20]一致。肉色和嫩度都是评价肉质的重要指标，本试验结果表明，饲粮添加化香果单宁未对肉鸡肉色和嫩度造成显著影响。综上所述，饲粮添加化香果单宁对肉鸡肉品质相关指标均未造成显著影响。
3.4 饲粮添加化香果单宁对肉鸡胸肌抗氧化指标的影响植物单宁具有抗氧化的生物学功能，其能够有效清除体内氧自由基，提高抗氧化酶活性，降低体内氧化应激水平[7, 15]。CAT和T-SOD均是机体中的抗氧化酶之一，能够清除体内的氧自由基。T-AOC则是反映机体抗氧化系统的综合指标。Chamorro等[21]研究表明，肉鸡饲粮中添加10%葡萄渣(主要成分为植物单宁)能够增强肉鸡的抗氧化性能，延缓脂质氧化。Farahat等[22]也研究表明，在肉鸡饲粮中添加植物单宁(单宁含量≥40%)能够显著提高肝脏谷胱甘肽含量，降低肌肉MDA含量。本试验结果发现，饲粮添加化香果单宁能够显著提高42日龄肉鸡的胸肌T-SOD活性，且化香果单宁与肉鸡胸肌T-SOD活性呈剂量依赖关系。这与前人研究结果[21-22]一致，表明饲粮添加化香果单宁能够提高肉鸡的抗氧化功能。
3.5 饲粮添加化香果单宁对肉鸡肠道发育的影响肠道是肉鸡消化吸收的主要器官。各肠段长度及重量反映了肠段的生长发育程度，而发育程度又能反映消化吸收的功能。本试验以肠道校正长度和指数来评价肠道生长发育状况。已有研究发现，饲粮添加适量的单宁能够通过减轻氧化应激，促进肠道有益菌繁殖，抑制有害菌繁殖，从而保护和促进肠道发育[19, 23]。本试验结果发现，饲粮添加化香果单宁未对肉鸡肠道校正长度和指数造成显著影响，这与前人研究结果[19, 23]并不一致。可能是添加的单宁提取来源和活性成分浓度不同导致的差异，具体机制有待进一步研究。
肠道绒毛高度、隐窝深度和V/C是衡量肠道消化吸收能力的重要指标之一。已有研究发现，肉鸡饲粮中添加橡椀单宁能够提高42日龄肉鸡空肠和回肠绒毛高度[15]。Brus等[24]研究发现，饲粮添加低浓度的鞣花单宁能够刺激肠道上皮细胞增殖，促进肉鸡肠道发育。本试验结果与之相似，饲粮添加适量化香果单宁能够显著提高21和42日龄肉鸡空肠绒毛高度，并且空肠绒毛高度与单宁添加量呈显著线性相关。另外，肉鸡回肠V/C与化香果单宁添加量呈显著线性相关。这与本试验生长性能相对应，肉鸡ADFI降低，AGD却未降低，推测化香果单宁能够提高肉鸡小肠吸收营养物质的面积，从而减轻化香果单宁苦涩味带来的负面影响。这可能是由于低剂量的化香果单宁能够促进肠道上皮细胞增殖，保护细胞增殖过程DNA完整性，从而促进肠道健康发育，有益于生长性能。
4 结论饲粮添加化香果单宁能够提高肉鸡抗氧化功能、空肠绒毛高度和回肠V/C，降低1~21日龄肉鸡ADFI，且具有降低22~42日龄肉鸡料重比的趋势。综合各项指标，化香果单宁在肉鸡饲粮中的推荐添加量为500 mg/kg。
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