添加蛋白酶对肉鸭菜籽粕代谢能值的影响

引用本文

于爽, 王建萍, 曾秋凤, 丁雪梅, 白世平, 张克英. 添加蛋白酶对肉鸭菜籽粕代谢能值的影响[J]. 动物营养学报, 2021, 33(5): 2672-2680.

YU Shuang, WANG Jianping, ZENG Qiufeng, DING Xuemei, BAI Shiping, ZHANG Keying. Effects of Adding Protease on Metabolizable Energy Values of Rapeseed Meal in Meat Ducks[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2021, 33(5): 2672-2680.

添加蛋白酶对肉鸭菜籽粕代谢能值的影响

于爽 , 王建萍 , 曾秋凤 , 丁雪梅 , 白世平 , 张克英

四川农业大学动物营养研究所, 动物抗病营养教育部重点实验室, 动物抗病营养农业农村部重点实验室, 动物抗病营养四川省重点实验室, 成都 611130

收稿日期: 2020-11-06

基金项目: 现代农业产业技术体系专项（CARS-42-10）

作者简介: 于爽(1994-), 女, 河北保定人, 硕士研究生, 动物营养与饲料科学专业。E-mail: 1651476797@qq.com.

通信作者: 张克英, 教授, 博士生导师, E-mail: zkeying@sicau.edu.cn.

摘要: 本试验旨在评价添加蛋白酶对肉鸭菜籽粕代谢能值和饲粮养分真利用率的改善效果。选用19周龄以上健康的樱桃谷肉公鸭，采用真代谢能（TME）结合套算法进行代谢试验，选用5种不同蛋白质溶解度的菜籽粕（分别命名为A1、A2、A3、A4、A5），菜籽粕按40%替代玉米，豆粕按35%替代玉米。试验设13个组，包括1个玉米组、1个豆粕组、1个饥饿内源组、5个菜籽粕不加酶组、5个菜籽粕加酶组（蛋白酶制剂添加量为200 mg/kg，蛋白酶制剂中蛋白酶活性为1×10⁵ U/g）。每个组设12个重复，每个重复1只鸭。结果表明：1）添加蛋白酶使菜籽粕饲粮干物质（DM）、粗脂肪（EE）、粗蛋白质（CP）、中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）、粗纤维（CF）、粗灰分（Ash）、钙（Ca）、磷（P）真利用率分别提高了3.73%（P < 0.05）、9.92%（P < 0.05）、8.51%（P < 0.05）、15.78%（P < 0.05）、17.09%（P < 0.05）、2.12%（P>0.05）、8.55%（P < 0.05）、2.81%（P>0.05）、12.96%（P < 0.05）；2）添加蛋白酶可以显著提高菜籽粕的表观代谢能（AME）、TME、氮校正表观代谢能（AMEn）、氮校正真代谢能（TMEn）（P < 0.05），提高程度分别为2.01、2.01、1.80、1.80 MJ/kg。综上可知，添加蛋白酶可以改善肉鸭菜籽粕代谢能值和菜籽粕饲粮养分真利用率。

关键词: 肉鸭菜籽粕代谢能蛋白酶

Effects of Adding Protease on Metabolizable Energy Values of Rapeseed Meal in Meat Ducks

YU Shuang , WANG Jianping , ZENG Qiufeng , DING Xuemei , BAI Shiping , ZHANG Keying

Key Laboratory for Animal Disease Resistance Nutrition of the Ministry of Education, Key Laboratory of Animal Disease Resistance nutrition of Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Key Laboratory of Animal Disease Resistance Nutrition of Sichuan Province, Institute of Animal Nutrition, Sichuan Agricultural University, Chengdu 611130, China

Corresponding author: ZHANG Keying, professor, E-mail: zkeying@sicau.edu.cn.

Abstract: The purpose of this experiment was to evaluate the improvement effect of adding protease on the metabolizable energy values of rapeseed meal and the nutrient true availabilities of diets for meat ducks. Healthy cherry-grain male ducks over 19 weeks of age were selected for metabolism test by true metabolizable energy (TME) method combined with set algorithm, and 5 rapeseed meals with different protein solubilities were selected (named A1, A2, A3, A4 and A5, respectively). Rapeseed meal was used to replace corn at 40%, and soybean meal was used to replace corn at 35%. Thirteen groups were set, including 1 corn group, 1 soybean meal group, 1 hungry endogenous group, 5 rapeseed meal groups without protease addition, and 5 rapeseed meal groups with protease addition (the addition level of protease preparation was 200 mg/kg, and the protease activity in the protease preparation was 1×10⁵ U/g). Each group had 12 replicates with 1 duck per replicate. The results showed as follows: 1) the true availabilities of dry matter (DM), ether extract (EE), crude protein (CP), neutral detergent fiber (NDF), acid detergent fiber (ADF), crude ash (Ash), calcium (Ca) and phosphorus (P) in rapeseed meal diets were increased by 3.73% (P < 0.05), 9.92% (P < 0.05), 8.51% (P < 0.05), 15.78% (P < 0.05), 17.09% (P < 0.05), 2.12% (P>0.05), 8.55% (P < 0.05), 2.81% (P>0.05) and 12.96% (P < 0.05) by adding protease, respectively. 2) Adding protease could significantly improve the apparent metabolizable energy (AME), TME, nitrogen correction apparent metabolizable energy (AMEn) and nitrogen correction true metabolizable energy (TMEn) of rapeseed meal (P < 0.05), and the improvement degrees of them were 2.01, 2.01, 1.80 and 1.80 MJ/kg, respectively. It can be concluded that adding protease can improve the metabolizable energy values of rapeseed meal and the nutrient true availabilities of rapeseed meal diet.

Key words: meat ducks rapeseed meal metabolizable energy protease

蛋白酶是催化分解蛋白质肽键的一类酶的总称。饲料中外源蛋白酶的添加弥补了内源蛋白酶分泌不足的缺陷，还会提高饲料的饲用品质，提高代谢能和养分利用率^[1]。因此，关于蛋白酶的研究引起了人们的关注。Ghazi等^[2]研究发现，添加蛋白酶提高了豆粕的氮表观消化率和真代谢能(TME)，弥补了家禽内源蛋白酶的不足。汪银锋等^[3]报道，在饲粮中添加蛋白酶可弥补体内蛋白酶分泌的不足，加速对家禽蛋白质的消化吸收，提高饲粮中蛋白质的利用率，改善家禽的生长性能。Angel等^[4]和Rubio等^[5]研究发现，在饲粮中添加蛋白酶能提高肉鸡的生长性能。有研究表明，饲粮中添加外源性蛋白酶不仅能提高肉鸡的生长性能，还能提高养分利用率^[6-7]。由此可见，蛋白酶在肉鸡上的应用相对广泛，同样的，蛋白酶在肉鸭上也有相关研究。张开心等^[8]研究表明，在肉鸭饲粮中添加蛋白酶，可提高肉鸭菜籽粕标准回肠氨基酸消化率。Adeola等^[9]研究得出，添加蛋白酶可提高肉鸭对大豆的能量利用率并有提高干物质(DM)利用率的趋势。目前，关于蛋白酶对肉鸭菜籽粕代谢能影响的研究较为缺乏。因此，本研究旨在采用TME结合套算法评定添加蛋白酶对5种不同蛋白质溶解度的菜籽粕肉鸭代谢能值的改善效果，为合理利用蛋白酶改善菜籽粕代谢能提供科学依据。

1 材料与方法 1.1 试验设计

选用19周龄以上健康的樱桃谷肉公鸭，平均体重为(3.35±0.45) kg，采取TME结合套算法进行代谢试验。试验设13个组，包括1个玉米组、1个豆粕组、1个饥饿内源组、5个菜籽粕不加酶组、5个菜籽粕加蛋白酶组(蛋白酶制剂添加量为200 mg/kg，蛋白酶制剂中蛋白酶活性为1×10⁵ U/g)。每个组设12个重复，每个重复1只鸭。玉米组和豆粕组也进行加酶处理，菜籽粕按40%替代玉米，豆粕按35%替代玉米。选用5种不同蛋白质溶解度的菜籽粕(分别命名为A1、A2、A3、A4、A5)，5种菜籽粕的理化特性见表 1。本试验中使用的蛋白酶制剂的蛋白酶活性定义参考李东东等^[10]，蛋白酶添加量参考张开心等^[8]。

表 1 不同来源菜籽粕的理化特性(风干基础) Table 1 Physicochemical properties of rapeseed meal from different sources (air-dry basis)

样品编号 Sample number	颜色 Color	形状 Form	总能 GE/(MJ/kg)	蛋白质溶解度 PS/%	干物质 DM/%	粗蛋白质 CP/%	粗脂肪 EE/%	粗灰分 Ash/%	粗纤维 CF/%	中性洗涤纤维 NDF/%	酸性洗涤纤维 ADF/%	钙 Ca/%	磷 P/%
A1	黄褐色	大颗粒状	16.99	47.20	87.79	37.08	1.63	6.29	11.00	27.28	17.16	0.56	0.88
A2	黄褐色	颗粒状	16.48	44.79	86.55	41.64	1.86	6.45	11.52	26.19	17.43	0.67	0.89
A3	青黄色	瓦片状	18.35	93.91	91.31	37.83	8.35	6.60	11.09	25.05	19.44	0.25	0.78
A4	青黄色	小瓦片状	18.81	99.06	91.53	41.78	9.50	7.18	7.30	18.58	11.67	0.20	0.94
A5	青黄色	瓦片状	18.45	96.01	91.40	39.84	7.15	7.15	7.57	27.58	16.94	0.72	1.05
平均值Mean			17.82	76.19	89.72	39.63	5.70	6.73	9.70	24.94	16.53	0.48	0.91
标准差SD			0.91	27.64	2.37	2.15	3.70	0.41	2.08	3.69	2.89	0.24	0.10
变异系数CV/%			5.11	36.28	2.64	5.42	65.00	6.07	21.41	14.80	17.50	50.11	10.83
最大值Max			18.45	99.06	91.53	41.78	9.50	7.18	11.52	27.58	19.44	0.72	1.05
最小值Min			16.48	44.79	86.55	37.08	1.63	6.29	7.30	18.58	11.67	0.20	0.78

表 1 不同来源菜籽粕的理化特性(风干基础) Table 1 Physicochemical properties of rapeseed meal from different sources (air-dry basis)

1.2 饲养管理与样品采集

代谢试验在四川农业大学动物营养研究所科研试验基地进行。所有试验用鸭都单独饲养在代谢笼中，按照常规方式进行饲养管理。适应期饲喂维持饲粮(参考NY/T 2122—2012《肉鸭饲养标准》中北京鸭的营养需要配制)，泄殖腔缝合集粪瓶盖后适应1周的时间，称量试验鸭体重并记录；饥饿内源组试验鸭饥饿36 h，继续饥饿，收集排泄物36 h；其他组试验鸭饥饿36 h，然后按体重的2%强饲对应的待测饲粮，旋上集粪袋，记录时间，收集排泄物36 h；排泄物间隔6 h收集1次，并置于对应的自封袋中-20 ℃保存。样品采集结束后，将收集的排泄物置于65 ℃烘箱内烘至恒量，室温回潮24 h后称重并记录，作为风干排泄物总量，然后粉碎，过40目筛，封存备测。

1.3 测定指标

菜籽粕蛋白质溶解度参考豆粕蛋白质溶解度的测定方法(DB13/T 812—2006)测定。菜籽粕和排泄物中总能(GE)采用氧氮测热法测定，DM(GB/T 6435—2006)、粗脂肪(EE)(GB/T 6433—2006)、粗蛋白质(CP)(GB/T 6432—1994)、粗纤维(CF)(GB/T 6434—2006)、中性洗涤纤维(NDF)(GB/T 20806—2006)、粗灰分(Ash)(GB/T 6438—2007)、钙(Ca)(GB/T 6436—2002)、磷(P)含量(GB/T 6437—2002)均参照对应的国标方法测定，酸性洗涤纤维(ADF)含量参照农业行业标准《饲料中酸性洗涤纤维的测定》(NY/T 1459—2007)测定。

1.4 计算公式

养分真利用率计算公式：

代谢能计算公式：

氮沉积量计算公式：

式中：RN1表示家禽每摄入1 kg饲粮干物质的表观氮沉积量；RN2表示家禽每摄入1 kg饲粮干物质去除内源氮部分的真氮沉积量。

式中：34.39为鸡每克尿氮的产热量。

1.5 数据处理与分析

用SAS 9.0的GLM程序对试验数据先进行单因素方差分析，再进行2×5二因素方差分析(加酶与否，5个菜籽粕来源)，主效应包括蛋白酶、菜籽粕来源以及两者间的互作效应。试验结果用平均值和标准误(SE)表示，以P < 0.05为差异显著性判定标准。对菜籽粕的蛋白质溶解度与其代谢能值和饲粮养分利用率进行相关性分析，P < 0.05为显著相关，P < 0.01为极显著相关。

2 结果 2.1 各组间肉鸭平均体重、强饲量、氮沉积量、氮排泄量、内源能排泄量的比较

从表 2可以看出，不同组间肉鸭的平均体重、强饲量、内源能排泄量无显著差异(P>0.05)，但表观氮沉积量、真氮沉积量、氮排泄量存在显著差异(P < 0.05)。其中，表观氮沉积量以A4不加蛋白酶组最高，玉米组最低；真氮沉积量以A4不加蛋白酶组和豆粕组较高，玉米组最低；氮排泄量以A1和A5不加蛋白酶组较高，玉米组最低。

表 2 不同组肉鸭平均体重、强饲量、氮沉积量、氮排泄量及内源能排泄量的比较(干物质基础) Table 2 Comparison of average body weight, over-feeding amount, nitrogen deposition, nitrogen excretion and endogenous energy excretion of meat ducks in different groups (DM basis)

项目 Items	蛋白酶 Protease	平均体重 Average body weight/kg	强饲量 Over-feeding amount/g	表观氮沉积量 Apparent nitrogen deposition/kg	真氮沉积量 True nitrogen deposition/kg	氮排泄量 Nitrogen excretion/g	内源能排泄量 Endogenous energy excretion/MJ
玉米Corn	+	3.31	66.23	0.008^e	0.010^e	0.39^e	0.054
豆粕SBM	+	3.33	66.50	0.024^ab	0.030^a	0.72^d	0.054
A1	-	3.34	66.70	0.020^bc	0.024^bc	1.11^a	0.054
	+	3.27	65.43	0.021^abc	0.027^abc	0.82^bcd	0.054
A2	-	3.35	66.97	0.017^cd	0.024^bc	1.09^ab	0.054
	+	3.28	65.58	0.025^ab	0.028^ab	0.58^de	0.054
A3	-	3.37	67.33	0.021^abc	0.024^bc	0.80^cd	0.054
	+	3.29	65.78	0.023^ab	0.029^ab	0.55^de	0.054
A4	-	3.24	64.82	0.026^a	0.031^a	0.78^cd	0.054
	+	3.30	65.98	0.024^ab	0.027^abc	0.77^cd	0.054
A5	-	3.26	65.10	0.012^de	0.018^d	1.22^a	0.054
	+	3.31	66.18	0.017^cd	0.022^cd	1.06^abc	0.054
标准误SE		0.07	1.30	0.002	0.002	0.09	< 0.001
P值P-value		0.98	0.98	< 0.01	< 0.01	< 0.01	0.99
“+”：添加蛋白酶；“-”：不添加蛋白酶。A1、A2、A3、A4、A5表示5种不同来源的菜籽粕。同列数据肩标不同字母表示差异显著(P < 0.05)，相同字母或无字母表示差异不显著(P>0.05)。表 3和表 4同。 “+”: adding protease; “-”：no protease added. A1, A2, A3, A4 and A5 represented rapeseed meal from five different sources. In the same column, values with different letter superscripts mean significant difference (P < 0.05), while with the same letter or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as Table 3 and Table 4.

2.2 添加蛋白酶对饲粮养分真利用率的影响

从表 3可以看出，除菜籽粕来源对饲粮DM和Ash真利用率、蛋白酶对CF和Ca真利用率以及蛋白酶与菜籽粕来源的交互作用对Ca真利用率无显著影响(P>0.05)外，菜籽粕来源、蛋白酶及两者的交互作用均显著影响饲粮的养分真利用率(P < 0.05)。

表 3 添加蛋白酶对菜籽粕饲粮养分真利用率的影响(风干基础) Table 3 Effects of adding protease on nutrient true availabilities of rapeseed meal diets (air-dry basis)

%
项目 Items	蛋白酶 Protease	干物质 DM	粗脂肪 EE	粗蛋白质 CP	中性洗涤纤维 NDF	酸性洗涤纤维 ADF	粗纤维 CF	粗灰分 Ash	钙 Ca	磷 P
玉米Corn	+	92.86^a	92.93^a	89.41^a	32.36^def	-37.60^e	37.13^a	58.07^a	66.14^a	92.68^a
豆粕SBM	+	88.85^b	77.63^c	77.94^bc	42.80^abcd	2.90^bcd	35.17^a	54.68^a	48.54^b	70.30^b
A1	-	76.86^hg	71.08^d	63.57^e	31.54^ef	-5.02^bcd	19.32^abc	40.07^bc	12.73^cde	46.58^d
	+	82.09^cd	91.65^a	76.28^bc	47.48^a	12.02^b	21.88^abc	53.91^a	24.18^c	69.17^b
A2	-	75.63^h	78.88^c	65.86^de	23.60^fg	1.66^bcd	5.68^cd	36.42^c	19.73^cd	28.15^e
	+	81.69^de	85.71^b	83.71^abc	33.72^cdef	6.87^bc	7.02^cd	39.24^bc	23.16^c	56.89^cd
A3	-	77.76^efgh	83.81^b	74.45^cd	14.23^g	-11.76^cd	9.09^c	34.86^c	4.16^de	56.27^cd
	+	85.71^bc	94.92^a	85.99^ab	48.19^a	31.16^a	28.63^ab	58.03^a	1.16^e	74.20^b
A4	-	81.54^def	84.68^b	81.50^abc	36.26^bcde	1.70^bcd	15.12^bc	45.89^abc	20.71^cd	65.45^bc
	+	80.06^defg	92.99^a	77.27^bc	46.15^ab	-0.05^bcd	-12.53^e	39.03^bc	16.06^cde	65.89^bc
A5	-	77.36^fgh	92.86^a	58.31^e	34.53^cde	-15.62^d	-23.99^e	40.70^bc	12.43^cde	76.66^b
	+	79.31^defgh	90.61^a	62.98^e	43.54^abc	5.92^bc	-9.21^de	50.51^ab	19.25^cd	72.07^b
标准误SE		1.36	1.68	3.50	3.44	6.09	5.88	4.14	5.39	3.95
菜籽粕来源 RSM source	A1	79.47	81.37^b	69.93^b	39.51^a	3.50^ab	20.60^a	46.99	18.45^a	58.01^b
	A2	78.66	82.29^b	74.79^ab	28.66^b	4.26^ab	6.35^b	37.83	21.45^a	42.52^c
	A3	81.74	89.37^a	80.22^a	31.21^b	9.92^a	18.86^a	46.45	2.66^b	65.24^b
	A4	80.80	88.83^a	79.39^a	41.21^a	0.83^ab	1.29^b	42.46	18.39^a	65.67^b
	A5	78.33	91.74^a	60.64^c	39.03^a	-4.85^b	-16.60^c	45.61	15.84^a	74.37^a
标准误SE		1.01	1.04	2.61	2.41	3.45	4.01	2.98	4.00	2.87
蛋白酶	-	77.83^b	82.26^b	68.74^b	28.03^b	-5.81^b	5.04	39.59^b	13.95	54.68^b
Protease	+	81.77^a	92.18^a	77.25^a	43.81^a	11.27^a	7.16	48.14^a	16.76	67.64^a
标准误SE		0.67	0.66	1.65	1.52	2.18	2.54	1.89	2.53	1.82
P值P-value	菜籽粕来源RSM source	0.10	< 0.01	< 0.01	< 0.01	0.04	< 0.01	0.17	0.01	< 0.01
	蛋白酶Protease	< 0.01	< 0.01	< 0.01	< 0.01	< 0.01	0.56	< 0.01	0.43	< 0.01
	菜籽粕来源×蛋白酶 RSM source×protease	0.01	< 0.01	0.04	< 0.01	< 0.01	< 0.01	< 0.01	0.59	< 0.01

表 3 添加蛋白酶对菜籽粕饲粮养分真利用率的影响(风干基础) Table 3 Effects of adding protease on nutrient true availabilities of rapeseed meal diets (air-dry basis)

从菜籽粕来源对不同菜籽粕饲粮养分真利用率的影响来看：菜籽粕来源对饲粮养分真利用率的影响不同，显著影响EE、CP、NDF、ADF、CF、Ca、P真利用率(P < 0.05)，但对DM、Ash真利用率影响不显著(P>0.05)。其中，A3、A4、A5菜籽粕饲粮的EE真利用率显著高于A1和A2菜籽粕饲粮(P < 0.05)；A3、A4菜籽粕饲粮的CP真利用率显著高于A1菜籽粕饲粮(P < 0.05)，同时A1和A2菜籽粕饲粮显著高于A5菜籽粕饲粮(P < 0.05)；A1、A4、A5菜籽粕饲粮的NDF真利用率显著高于A2和A3菜籽粕饲粮(P < 0.05)；A3菜籽粕饲粮的ADF真利用率显著高于A5菜籽粕饲粮(P < 0.05)，另外3种菜籽粕饲粮之间差异不显著(P>0.05)；A1、A3菜籽粕饲粮的Ash真利用率显著高于A2和A4菜籽粕饲粮(P < 0.05)，同时A2和A4菜籽粕饲粮显著高于A5菜籽粕饲粮(P < 0.05)；A3菜籽粕饲粮的Ca真利用率显著低于另外4种菜籽粕饲粮(P < 0.05)；A5菜籽粕饲粮的P真利用率显著高于A1、A3、A4菜籽粕饲粮(P < 0.05)，同时A1、A3和A4菜籽粕饲粮显著高于A2菜籽粕饲粮(P < 0.05)。

从蛋白酶对不同菜籽粕饲粮养分真利用率影响来看：添加蛋白酶有升高饲粮CF和Ca真利用率的趋势，对饲粮DM、EE、CP、NDF、ADF、Ash、P真利用率具有显著的改善作用(P < 0.05)。添加蛋白酶使饲粮DM、EE、CP、NDF、ADF、CF、Ash、Ca、P真利用率分别提高了3.73%、9.92%、8.51%、15.78%、17.09%、2.12%、8.55%、2.81%、12.96%，其中改善效果较好的是NDF、ADF、P真利用率。

2.3 添加蛋白酶对菜籽粕AME、TME、AMEn、TMEn的影响

从表 4可以看出，菜籽粕来源、蛋白酶及两者的交互作用均显著影响菜籽粕的AME、TME、AMEn、TMEn(P < 0.05)。

表 4 添加蛋白酶对菜籽粕AME、TME、AMEn、TMEn的影响(绝干基础) Table 4 Effects of adding protease on AME, TME, AMEn and TMEn of rapeseed meal (absolute dry basis)

MJ/kg
项目 Items	蛋白酶 Protease	表观代谢能 AME	真代谢能 TME	氮校正表观代谢能 AMEn	氮校正真代谢能 TMEn
豆粕SBM	+	13.72^ab	14.60^ab	11.88^ab	12.59^ab
A1	-	9.29^f	10.17^f	8.03^e	8.79^e
	+	11.80^de	12.68^de	10.33^cd	11.09^cd
A2	-	8.95^f	9.83^f	7.74^e	8.49^e
	+	12.51^bcde	13.39^bcde	10.84^bcd	11.59^bcd
A3	-	11.30^e	12.18^e	8.92^d	10.63^d
	+	14.14^a	14.98^a	12.55^a	13.22^a
A4	-	12.51^bcde	13.39^bcde	10.67^bcd	11.38^bcd
	+	12.89^abcd	13.77^abcd	11.30^bc	12.01^bc
A5	-	11.42^e	12.30^e	10.75^bcd	11.51^bcd
	+	12.13^cde	12.97^cde	11.13^bc	11.84^bcd
标准误SE		0.10	0.10	0.09	0.09
菜籽粕来源 RSM source	A1	10.54^b	11.42^b	9.20^b	9.92^b
	A2	10.71^b	11.59^b	9.29^b	10.04^b
	A3	12.72^a	13.56^a	11.25^a	11.92^a
	A4	12.72^a	13.56^a	11.00^a	11.72^a
	A5	11.76^a	12.64^a	10.92^a	11.67^a
标准误SE		0.08	0.08	0.07	0.07
蛋白酶	-	10.67^b	11.55^b	9.41^b	10.17^b
Protease	+	12.68^a	13.56^a	11.21^a	11.97^a
标准误SE		0.05	0.05	0.04	0.04
P值 P-value	菜籽粕来源 RSM source	< 0.01	< 0.01	< 0.01	< 0.01
	蛋白酶Protease	< 0.01	< 0.01	< 0.01	< 0.01
	菜籽粕来源×蛋白酶 RSM source×protease	< 0.01	< 0.01	< 0.01	< 0.01

表 4 添加蛋白酶对菜籽粕AME、TME、AMEn、TMEn的影响(绝干基础) Table 4 Effects of adding protease on AME, TME, AMEn and TMEn of rapeseed meal (absolute dry basis)

从菜籽粕来源对菜籽粕AME、TME、AMEn、TMEn的影响来看：菜籽粕来源显著影响菜籽粕的AME、TME、AMEn、TMEn(P < 0.05)。其中，A3、A4和A5之间AME、TME、AMEn、TMEn差异不显著(P>0.05)，但均显著高于A1和A2(P < 0.05)。

从添加蛋白酶对菜籽粕AME、TME、AMEn、TMEn的影响来看：添加蛋白酶对菜籽粕的AME、TME、AMEn、TMEn均有显著的提高作用(P < 0.05)，使其分别提高了2.01、2.01、1.80、1.80 MJ/kg。不同来源菜籽粕添加蛋白酶后，AME、TME、AMEn、TMEn的提高程度不同，A4和A5的TME、AMEn、TMEn提高程度不显著(P>0.05)，A1、A2和A3的AME、TME、AMEn、TMEn提高程度显著(P < 0.05)。综上所述，添加蛋白酶对不同来源的5种菜籽粕的代谢能值均有提高作用，但主要是对蛋白质溶解度为40%~50%的菜籽粕的代谢能值有显著提高作用。

2.4 菜籽粕的蛋白质溶解度与养分真利用率和代谢能值的相关性分析

从表 5可以看出，菜籽粕的蛋白质溶解度与饲粮EE真利用率呈极显著正相关(P < 0.01)，与饲粮CF、Ca、ADF真利用率呈负相关，与菜籽粕AME、TME呈显著正相关(P < 0.05)，与菜籽粕AMEn、TMEn呈极显著正相关(P < 0.01)。由此可见，菜籽粕的蛋白质溶解度与其AME、TME、AMEn、TMEn相关性很高。

表 5 菜籽粕的蛋白质溶解度与养分真利用率、代谢能值的相关系数 Table 5 Correlation coefficient between PS of rapeseed meal and nutrient true availabilities and metabolizable energy values

3 讨论

近年来的研究表明，饲粮添加外源性蛋白酶可以改善肉鸡的生长性能和养分利用率^[6-7]。Freitas等^[11]研究了在玉米、豆粕、肉骨粉中添加外源蛋白酶的效果，添加蛋白酶可提高脂肪和蛋白质的消化率和AME。Yang等^[12]对淀粉酶、蛋白酶和木聚糖酶组成的复合酶在肉鸡饲粮中的耐热性和有效性进行了研究，得出添加复合酶对36日龄肉鸡饲喂玉米粉和豆粕饲粮的养分消化率有明显的改善作用。Ghazi等^[2]在肉鸡上的应用研究表明，蛋白酶P2处理提高了氮表观消化率和TME。郭正富等^[13]研究表明，饲粮添加蛋白酶显著提高了肉鸡的AME、总能和氮的利用率。本研究结果表明，蛋白酶对菜籽粕的AME、TME、AMEn、TMEn有提高作用，且对饲粮不同养分的真利用率有不同程度提高，与上述学者研究结果一致。

蛋白酶主要是通过补充内源消化酶的不足来提高养分的利用率^[14]。奚刚等^[15]的研究表明，加酶组丝毛乌骨鸡37和67日龄胃蛋白酶活性分别比对照组增加了5.39%和5.37%，小肠中胰蛋白酶和总蛋白酶活性与对照组相比也有所提高。此外，外源蛋白酶有助于中和饲料中抗营养因子的的负面影响，并将大的蛋白质分子分解成较小的可吸收的片段^[16]。Douglas等^[17]和Ghazi等^[18]的研究表明，蛋白酶可以最小化与大豆蛋白相关的抗营养作用。唐德富等^[19]的研究显示，添加含木聚糖酶、淀粉酶、蛋白酶的外源复合酶制剂A和B均可提高3种菜籽粕的AME和AMEn，推测其原因是添加外源性复合酶制剂使部分抗营养因子得到降解，抗营养作用得到解除，进而促进了养分的消化利用。此外，蛋白酶还可改善家禽的生长性能，提高家禽对饲粮的消化效率，提高机体免疫力，且减少氮排放量^[20]。

蛋白质溶解度低于35%时，表示加热过度，蛋白质遭到了破坏，而蛋白质溶解度在35%~88%时，蛋白质品质无太大差别^[21]。Pastuszewska等^[22]的研究显示，蛋白质溶解度在55%~60%的菜籽粕具有较高的营养价值。目前，关于菜籽粕蛋白质溶解度与其代谢能值关系的研究相对较少，更多的是关于加热过程对菜籽粕蛋白质溶解度影响的研究。唐精等^[23]的研究表明，加热会使游离氨基酸与其他化合物的基团形成牢固的不能被消化酶所打开的分子间和分子内的结合键，从而降低蛋白质溶解度。初雷等^[24]在研究菜籽粕的品质指标变化规律及相互关系时也指出菜籽粕加热时，还原糖会与某些氨基酸的N-末端或赖氨酸的ε-侧链结合，使较多的氨基酸转变为纤维的一部分，因而降低菜籽粕的蛋白质溶解度，升高纤维水平。纤维作为菜籽粕的抗营养因子，其水平的升高势必会造成代谢能值的降低。本试验结果也同样发现，菜籽粕的蛋白质溶解度与菜籽粕饲粮的CF、NDF、ADF真利用率呈负相关，印证了这一观点。

4 结论

① 添加蛋白酶显著提高菜籽粕饲粮的DM、EE、CP、NDF、ADF、Ash、P真利用率。

② 添加蛋白酶显著提高菜籽粕的AME、TME、AMEn、TMEn，蛋白酶对蛋白质溶解度为40%~50%的菜籽粕代谢能值的改善程度较大。

③ 菜籽粕的蛋白质溶解度与其AME、TME呈显著正相关，与其AMEn、TMEn呈极显著正相关。

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