乳化剂的使用可以使脂肪的利用得到提高，胆汁酸是一种新型的绿色乳化剂，对于脂类的吸收具有很好的促进作用。研究发现，饲粮中添加胆汁酸可以提高机体对脂类物质的乳化和吸收，胆汁酸还可消炎杀菌，保护肝脏和胆，减少其病变[1-2]。王进等[1]研究发现，在基础饲粮中添加胆汁酸对生猪的生长性能有显著提高作用，从而提高经济收益。程伟伟等[2]研究在饲粮中添加500 g/t胆汁酸对肉鸡的影响，发现饲养前期添加胆汁酸组肉鸡的平均体重和平均体增重显著提高，料重比下降。杨玉芝等[3]研究发现，对于生长前期的肉鸡，在饲粮中添加适量胆汁酸可以使肉鸡的平均日增重显著提高。曾本和等[4]研究发现，高脂饲料中添加胆汁酸可以使齐口裂腹鱼的肝胰脏脂肪代谢酶活性显著提高，促进脂质代谢。貉是珍贵的毛皮动物，近年来，我国貉的养殖数量不断上升，目前胆汁酸在其他动物上的研究较多，但在毛皮动物方面的研究未见报道。因此，本试验以育成期貉作为研究对象，探究饲粮胆汁酸水平对于育成期貉的生长性能、营养物质表观消化率、氮沉积和血清生化指标的影响，从而选择出适宜的胆汁酸添加水平，为胆汁酸在貉养殖过程中的合理利用提供理论参考。
1 材料与方法 1.1 试验设计本试验采用单因素随机试验设计，选取健康、体重相近的50日龄公貉64只，随机分成4组，每组16个重复，每个重复1只貉。试验地点为河北华夏新农科技股份公司昌黎莫各庄养殖场。4组分别饲喂在基础饲粮中添加0(Ⅰ组)、100(Ⅱ组)、300(Ⅲ组)、500 mg/kg胆汁酸(Ⅳ组)的饲粮。预试期10 d，正试期90 d。
1.2 试验饲粮基础饲粮参考NRC(1982)和相关文献[5-6]及生产实践经验值进行配制，其组成及营养水平见表 1。
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表 1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) |
在试验开始前要对貉的食盆和笼舍进行彻底的清洗和消毒，采用单笼饲养，每日早、晚各饲喂1次(07:30与15:30)。自由饮水，每日记录进食量，早上喂料后观察貉的健康情况。
1.4 消化代谢试验于2019年7月26日至2019年7月28日进行消化代谢试验，共计3 d，每组分别挑选8只体重相近、健康状况良好的貉，使用全收粪法进行试验。在每个收集桶内加入20 mL的10%的硫酸进行固氮，每天记录貉的给食量和剩料量，计算采食量。3 d之后将全部的粪样和尿样分别收集。将收集的尿样混匀并过滤，放置在-20 ℃保存备用，粪样称重后按鲜重的5%喷洒10%的硫酸，65 ℃烘干至恒重，粉碎过40目筛，制成风干样本，保存待测。
1.5 血清制备育成期试验结束时，每组随机选取8只健康貉，在空腹时后肢静脉采血，血液收集用5 mL的促凝管，经4 000 r/min离心10 min，分离血清放置于-80 ℃保存，备用。
1.6 测定指标及方法试验开始时对貉称重作为初始体重，在之后每隔20 d早上空腹对貉进行1次称重，并记录貉日采食量，计算平均日增重、平均日采食量及料重比。
依据国标对样品进行分析测定，依据GB/T 6435—2014对干物质含量进行测定，依据GB/T 6438—2007对粗灰分含量进行测定，依据GB/T 6433—2006对粗脂肪含量进行测定，依据GB/T 6432—2018对粗蛋白质含量进行测定。相关指标的计算公式如下：
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血清生化指标包括谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、谷丙转氨酶(ALT)活性及葡萄糖(GLU)、总蛋白(TP)、甘油三酯(TG)、白蛋白(ALB)、低密度脂蛋白(LDL)、胆固醇(CHOL)、尿素(UREA)、高密度脂蛋白(HDL)含量，采用中生北控试剂盒，参照说明书通过VITAL-E全自动生化分析仪测定[7]。
1.7 数据处理试验数据用Excel 2010进行计算处理，用软件SPSS 22对数据进行单因素方差分析，使用LSD进行多重比较，试验结果差异显著用P＜0.05来表示，差异极显著用P＜0.01来表示，试验的结果以"平均值±标准差"的形式表示。
2 结果 2.1 饲粮胆汁酸水平对育成期貉生长性能的影响如表 2所示，Ⅱ组末重显著高于Ⅰ组(P＜0.05);Ⅰ组平均日采食量显著高于其他3组(P＜0.05)；各组间平均日增重没有显著差异(P＞0.05)；Ⅱ组料重比显著低于Ⅰ组(P＜0.05)。
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表 2 饲粮胆汁酸水平对育成期貉生长性能的影响 Table 2 Effects of dietary bile acid level on growth performance of growing raccoon dogs |
如表 3所示，Ⅱ组干物质表观消化率显著高于Ⅳ组(P＜0.05)，与Ⅰ组和Ⅲ组差异不显著(P＞0.05)；Ⅰ组粗蛋白质表观消化率显著高于Ⅳ组(P＜0.05)，Ⅱ组粗蛋白质表观消化率极显著高于Ⅳ组(P＜0.01)；Ⅰ组粗脂肪表观消化率显著低于Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组(P＜0.05)，Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组之间差异不显著(P＞0.05)。
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表 3 饲粮胆汁酸水平对育成期貉营养物质表观消化率的影响 Table 3 Effects of dietary bile acid level on nutrient apparent digestibilities of growing raccoon dogs |
如表 4所示，Ⅱ组和Ⅰ组的粪氮排出量显著低于Ⅳ组(P＜0.05)；Ⅱ组的氮沉积显著高于Ⅳ组(P＜0.05)。
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表 4 饲粮胆汁酸水平对育成期貉氮代谢的影响 Table 4 Effects of dietary bile acid level on nitrogen metabolism of growing raccoon dogs |
如表 5所示，Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组的血清TP含量极显著高于Ⅰ组(P＜0.01)，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组之间无显著差异(P＞0.05)；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组的血清ALB含量极显著高于Ⅰ组(P＜0.01)，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组之间无显著差异(P＞0.05)。各组间的血清AST活性没有显著差异(P＞0.05)；Ⅳ组的血清ALT活性极显著高于Ⅰ组(P＜0.01)，Ⅳ组显著高于Ⅱ、Ⅲ组(P＜0.05)；Ⅳ组的血清GLU含量与Ⅰ组存在极显著差异(P＜0.01)。Ⅲ、Ⅳ组的血清CHOL含量极显著高于Ⅰ组(P＜0.01)，Ⅱ组显著高于Ⅰ组(P＜0.05)，Ⅳ组显著高于Ⅱ组(P＜0.05)；Ⅳ组的血清TG含量极显著高于Ⅰ、Ⅱ组(P＜0.01)。
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表 5 饲粮胆汁酸水平对育成期貉血清生化指标的影响 Table 5 Effects of dietary bile acid level on serum biochemical indices of growing raccoon dogs |
饲粮胆汁酸水平对育成期貉生长性能有影响，胆汁酸添加水平为100 mg/kg时，貉末重最大。杨家昶[8]在肉鸡饲粮中添加400 g/t胆汁酸时，对21日龄前的肉仔鸡体重有促进作用。这和程伟伟等[2]在肉鸡饲粮中添加胆汁酸显著提高了公鸡和母鸡饲养前期的平均体重和平均体增重的研究结果一致。试验发现，饲粮中添加500 mg/kg的胆汁酸时日增重并不高，高水平的胆汁酸会产生负反馈抑制法尼醇X受体激活的胆汁酸合成途径[9]。有研究发现，肝脏中的法尼醇X受体可以被胆汁酸激活来降低机体对GLU的进食量，主要的表现形式有2种，一种是促进肝糖原的合成，另一种是降低糖异生[9]。高水平的胆汁酸可能抑制貉的进食量，导致Ⅳ组平均日增重不高。左旭冬[10]研究发现，在饲粮中添加胆汁酸水平为500 mg/kg时，对于子代母鸡的平均日增重有抑制作用，胆汁酸的添加水平较低时有促进作用。料重比是评价饲料报酬的一个重要指标，料重比对企业的成本控制和盈利能力有决定性影响[11]。添加胆汁酸使料重比降低，貉生长前期在饲粮中胆汁酸水平为100 mg/kg时经济效益较好。赵盼月[12]研究发现，在欧洲鳗鲡饲料中添加胆汁酸可以促进其生长，降低饲料系数。孙建珍[13]研究发现，在大菱鲆幼鱼中添加胆汁酸对饲料的利用情况有提高作用。通过貉体重指标可以得出，育成期貉饲粮中添加适宜水平的胆汁酸能够提高其生长性能。
3.2 饲粮胆汁酸水平对育成期貉营养物质表观消化率的影响营养物质的消化率体现了动物对饲料的利用效率，营养物质的消化吸收是动物调节生理功能的基础，提高营养物质消化率对提高动物的生产性能有重要的意义。本试验中育成期貉饲粮中添加100 mg/kg胆汁酸时，干物质表观消化率和粗蛋白质表观消化率均最高，但与Ⅰ组无显著差异。吴明海[14]饲喂奶牛基础饲粮和在基础饲粮中添加0.2%胆汁酸盐预混料，发现2组之间干物质消化率和粗蛋白质消化率没有显著差异。本试验结果与前人在其他动物上的研究结果一致。胆汁酸盐具有乳化脂肪的作用，从而促进了机体对脂肪的合成代谢[15]。唐精等[16]研究发现，胆汁酸可以调控脂蛋白酯酶和胰脂肪酶的活性，从而促进脂肪消化吸收。本试验研究得到了相同的结果，随着饲粮胆汁酸水平的增加，粗脂肪表观消化率有提高的趋势，饲粮中添加胆汁酸能够提高貉对饲料中脂肪利用率。
3.3 饲粮胆汁酸水平对育成期貉氮代谢的影响氮代谢反映了貉对蛋白质的利用率情况，机体对蛋白质的吸收程度也影响着动物机体的健康状况。食入氮的多少取决于动物的采食量。在肠肝循环中，胆汁酸与受体结合可调节胆汁酸代谢和糖脂代谢和一些能量代谢、炎症过程等[17]，胆汁酸对于蛋白质的影响研究较少，本试验中，胆汁酸添加水平为100 mg/kg的组氮沉积显著高于胆汁酸添加水平为500 mg/kg的组，可能是由于胆汁酸添加水平过高对动物机体产生了损失。胆汁酸添加水平为100 mg/kg的组蛋白质生物学效价和净蛋白质利用率与其他组相比有增加的趋势，但是差异没有达到显著的水平。
3.4 饲粮胆汁酸水平对育成期貉血清生化指标的影响血液中的TP、ALB含量高存在多种可能，可能是由于饲粮本身的蛋白质含量高或者是动物机体对蛋白质的利用率提高，也有可能是动物机体健康状态不佳。综合本试验结果分析，在低水平胆汁酸时蛋白质的利用率提高，高水平胆汁酸对动物机体造成损害，导致血清TP、ALB含量过高。Borg等[18]和Malmlof[19]研究发现，血清中较低的UREA含量表明氨基酸平衡良好，机体的蛋白质合成率较高。本试验发现，在饲粮中添加100 mg/kg胆汁酸时，蛋白质合成较高。血浆酶活性可以反映肝脏的代谢状况[20]，AST和ALT主要分布在肝细胞内其活性反映蛋白质的代谢和氨基酸的利用水平。如果肝细胞膜的通透性增加或者肝细胞坏死会导致AST和ALT活性升高[21]。本试验中，胆汁酸添加水平为500 mg/kg时，血清AST和ALT活性均比较高，可能是高水平的胆汁酸对肝细胞造成损伤。张玲等[22]研究发现，胆汁酸的添加使鲫鱼血清的ALT和AST活性降低，这与本试验的结果存在差异，可能是由于本试验中由于胆汁酸的长期饲喂使肝细胞受到了损伤，造成血清中ALT和AST的活性显著升高。有研究发现，胆汁酸可通过调节抑制胰高血糖素的生成，进而降低GLU含量，但Zhang等[9]在研究中发现，使用GW4064长期处理小鼠会产生相反的效果，天然的胆汁酸对于GLU的长期调节效果更佳。Woollett等[23]研究发现，人在服用胆汁酸补充剂后可以显著提高血清CHOL的吸收，与GLU代谢相似，胆汁酸的短期饲喂可以降低TG和CHOL含量，对维持正常的脂质代谢有积极作用，但是长期使用胆汁酸对于机体的脂代谢调节不利。周书耘等[24]研究中发现，饲喂军曹鱼胆汁酸会提高其血清中TG和CHOL含量，而张国安等[25]研究发现，在饲粮中添加300 mg/kg的胆汁酸可以降低大菱鲆幼鱼血清中TG的含量，这与本试验的结果存在差异。这可能是由于动物种类不同和生长阶段的不同造成的差异。LDL与HDL是运载胆固醇的脂蛋白，动物机体不能长时间处于过高或过低的CHOL、TG含量，对于血脂代谢和转运有非常不好的影响，严重时将会使动物患病。本试验中高水平的胆汁酸添加对貉的影响不利，这与在小鼠[9]上的研究一致。
4 结论在本试验条件下，综合生长性能指标和粗脂肪表观消化率得出，当育成期貉饲粮中添加100 mg/kg胆汁酸时，能够提高育成期貉体重和脂肪消化率，生长性能较好。
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