维生素A和维生素K<sub>3</sub>对产蛋后期蛋鸡生产性能、蛋品质、肝脏指数和脂质代谢的影响

引用本文

习羽, 方璧君, 徐晶云, 赵迪, 郭双双, 张正帆, 丁斌鹰. 维生素A和维生素K₃对产蛋后期蛋鸡生产性能、蛋品质、肝脏指数和脂质代谢的影响[J]. 动物营养学报, 2021, 33(7): 3863-3872.

XI Yu, FANG Bijun, XU Jingyun, ZHAO Di, GUO Shuangshuang, ZHANG Zhengfan, DING Binying. Effects of Vitamin A and Vitamin K₃ on Performance, Egg Quality, Liver Index and Lipid Metabolism of Laying Hens during Later Laying Period[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2021, 33(7): 3863-3872.

维生素A和维生素K₃对产蛋后期蛋鸡生产性能、蛋品质、肝脏指数和脂质代谢的影响

习羽 , 方璧君 , 徐晶云 , 赵迪 , 郭双双 , 张正帆 , 丁斌鹰

武汉轻工大学动物营养与饲料科学湖北省重点实验室, 武汉 430023

收稿日期: 2020-12-13

基金项目: 国家重点研发计划课题（2016YFD0501202）

作者简介: 习羽(1997-), 男, 湖北咸宁人, 硕士研究生, 研究方向动物营养与饲料科学。E-mail: 873455309@qq.com.

通信作者: 张正帆, 副教授, 硕士生导师, E-mail: zhang850820@hotmail.com;
丁斌鹰, 教授, 博士生导师, E-mail: dbying7471@126.com.

摘要: 本试验旨在研究维生素A和维生素K₃对产蛋后期蛋鸡生产性能、蛋品质、肝脏指数和脂质代谢的影响。采用3×3因子设计，选取88周龄罗曼粉蛋鸡1 080羽，随机分成9个处理，每个处理8个重复，每个重复15只鸡。饲粮维生素A添加水平分别为0、7 000和14 000 IU/kg，维生素K₃添加水平分别为0、2.0和4.0 mg/kg。试验期为8周。结果表明：1）维生素A和维生素K₃对产蛋后期蛋鸡生产性能和鸡蛋品质无显著影响（P>0.05）。2）与添加0 IU/kg维生素A相比，添加7 000和14 000 IU/kg维生素A显著提高了第4周血清高密度脂蛋白和极低密度脂蛋白含量（P < 0.05），显著降低了第8周血清甘油三酯（TG）含量和肝脏指数（P < 0.05）；与添加0和2.0 mg/kg维生素K₃相比，添加4.0 mg/kg维生素K₃显著降低了第8周血清TG含量。3）与添加7 000 IU/kg维生素A相比，添加14 000 IU/kg维生素A显著降低了肝脏总胆固醇和TG含量（P < 0.05）。4）与添加0 IU/kg维生素A相比，添加14 000 IU/kg维生素A显著下调了肝脏过氧化物酶体增殖物激活受体γ和脂肪酸合成酶mRNA相对表达量（P < 0.05），显著上调了肝脏钠葡萄糖共转运载体1 mRNA相对表达量（P < 0.05）。5）维生素A和维生素K₃对血清TG含量和肝脏指数存在显著交互作用（P < 0.05）。综上所述，饲粮添加14 000 IU/kg维生素A和4.0 mg/kg维生素K₃可以改善产蛋后期蛋鸡的脂质代谢功能，降低肝脏指数，但不影响生产性能和蛋品质。

关键词: 维生素A 维生素K₃ 蛋鸡肝脏指数脂质代谢

Effects of Vitamin A and Vitamin K₃ on Performance, Egg Quality, Liver Index and Lipid Metabolism of Laying Hens during Later Laying Period

XI Yu , FANG Bijun , XU Jingyun , ZHAO Di , GUO Shuangshuang , ZHANG Zhengfan , DING Binying

Hubei Key Laboratory of Animal Nutrition and Feed Science, Wuhan Polytechnic University, Wuhan 430023, China

Corresponding author: ZHANG Zhengfan, associate professor, E-mail: zhang850820@hotmail.com;
DING Binying, professor, E-mail: dbying7471@126.com.

Abstract: This experiment was conducted to study the effects of vitamin A and vitamin K₃ on performance, egg quality, liver index and lipid metabolism of laying hens during later laying period. In a 3×3 factorial arrangement, a total of 1 080 Roman laying hens (88-week-old) were allotted into 9 treatments with 3 replicates per treatment and 15 hens per replicate. Dietary vitamin A supplemental levels were 0, 7 000 and 14 000 IU/kg, respectively, and vitamin K₃ supplemental levels were 0, 2.0 and 4.0 mg/kg, respectively. The experiment lasted for 8 weeks. The results showed as follows: 1) Vitamin A and vitamin K₃ had no significant effects on performance and egg quality of laying hens during later laying period (P>0.05). 2) Compared with 0 IU/kg vitamin A supplementation, the 7 000 and 14 000 IU/kg vitamin A supplementation significantly increased the contents of high-density lipoprotein and very low-density lipoprotein in serum at week 4 (P < 0.05), and significantly decreased the serum triglyceride (TG) content and liver index at week 8 (P < 0.05).; compared with 0 and 2.0 mg/kg vitamin K₃ supplementation, the 4.0 mg/kg vitamin K₃ supplementation significantly decreased the serum TG content at week 8 (P < 0.05). 3) Compared with 7 000 IU/kg vitamin A supplementation, the 14 000 IU/kg vitamin A supplementation significantly decreased the contents of total cholesterol and TG in liver (P < 0.05). 4) Compared with 0 IU/kg vitamin A supplementation, the 14 000 IU/kg vitamin A supplementation significantly down-regulated the mRNA relative expression levels of peroxisome proliferator activated receptor γ and fatty acid synthetase in liver (P < 0.05), and significantly up-regulated the liver sodium glucose cotransporter 1 mRNA relative expression level (P < 0.05). 5) Vitamin A and vitamin K₃ had significant interaction on serum TG content and liver index (P < 0.05). In conclusion, dietary supplementation of 14 000 IU/kg vitamin A and 4.0 mg/kg vitamin K₃ can improve the function of lipid metabolism of laying hens during later laying period, decrease the liver index, but it does not affect the performance and egg quality.

Key words: vitamin A vitamin K₃ laying hens liver index lipid metabolism

维生素能调节家禽新陈代谢，改变肠道菌群，提高生产性能，维生素缺乏会引起脂肪肝和疲劳症等疾病^[1]。维生素A能维持蛋鸡视觉功能，提高免疫力、产蛋率、料蛋比和孵化率^[2-3]。维生素K能够促进血液凝固和血清骨钙素合成，加快骨矿化，降低血清中钙、磷含量^[4-5]。维生素A和维生素K与动物脂质代谢也密切相关，能抑制脂肪合成，促进脂肪动员和脂肪酸氧化分解^[6-7]。然而，大剂量同时添加维生素A和维生素K会抑制肉鸡生长，减少骨钙素合成，延长骨矿化和凝血时间，降低机体凝血能力^{[5, 8]}。老龄蛋鸡因抗氧化能力减弱和免疫系统衰退，导致产蛋性能下降和蛋品质降低，进而对维生素需要量提高^{[1, 9]}。NRC(1994)维生素推荐量已不能完全满足现代蛋鸡生产需要^[10]。因此，本试验通过在饲粮中添加不同水平的维生素A和维生素K₃，探究两者对产蛋后期蛋鸡生产性能、蛋品质、肝脏指数和脂质代谢的影响及其交互作用，旨在为老龄蛋鸡生产上的维生素应用方案提供一定数据支持。

1 材料与方法 1.1 试验设计

试验选取1 080羽88周龄罗曼粉蛋鸡，采用3×3因子试验设计，随机分成9个处理，每个处理8个重复，每个重复15只鸡。试验开始前，用玉米-豆粕型基础饲粮预饲2周，调整各组产蛋率一致，正试期8周(90~97周龄)。正试期饲粮维生素A添加水平分别为0、7 000和14 000 IU/kg，维生素K₃添加水平分别为0、2.0和4.0 mg/kg。

1.2 基础饲粮

试验采用玉米-豆粕型基础饲粮，参照《罗曼蛋鸡饲养管理手册》产蛋后期营养需要量配制，基础饲粮组成及营养水平见表 1。基础饲粮维生素A含量为1 320 IU/kg，维生素K₃含量为0.6 mg/kg。除维生素A和维生素K₃按照试验设计额外添加，其他营养物质均满足或超过蛋鸡营养需要，各组均以粉料形式饲喂。

表 1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis)

%
项目Items	含量Content
原料Ingredients
玉米Corn	61.50
豆粕Soybean meal	17.60
豆油Soybean oil	1.60
玉米蛋白粉Corn gluten meal (CP 60%)	2.00
喷浆玉米皮Sprayed corn husks	5.00
磷酸氢钙CaHPO₄	0.70
石粉Limestone	10.30
碳酸氢钠NaHCO₃	0.25
食盐NaCl	0.10
L-赖氨酸硫酸盐L-Lys·H₂SO₄	0.38
DL-蛋氨酸DL-Met	0.20
氯化胆碱Choline chloride	0.15
微量元素预混料Trace mineral premix¹⁾	0.20
维生素预混料Vitamin premix²⁾	0.02
合计Total	100.00
营养水平Nutrient levels³⁾
代谢能ME/(MJ/kg)	11.50
粗蛋白质CP	16.20
钙Ca	3.98
总磷TP	0.52
有效磷AP	0.30
赖氨酸Lys	0.74
蛋氨酸+半胱氨酸Met+Cys	0.61
苏氨酸Thr	0.49
1)微量元素预混料为每千克饲粮提供Trace mineral premix provided the following per kilogram of the diet：Cu (as copper sulfate) 5 mg，Zn (as zinc sulfate) 60 mg，Fe (as ferrous sulfate) 50 mg，Mn (as manganese sulfate) 80 mg，Se (as sodium selenite) 0.2 mg，I (as potassium iodide) 0.5 mg。 2)维生素预混料为每千克饲粮提供Vitamin premix provided the following per kilogram of the diet：VD₃ 3 640 IU，VE 26 mg，VB₁ 2.6 mg，VB₂ 6.5 mg，VB₆ 4.68 mg，VB₁₂ 0.026 mg，生物素biotin 0.182 mg，叶酸folic acid 1.3 mg，泛酸pantothenic acid 13 mg，烟酸nicotinic acid 41.6 mg。 3)营养水平为计算值。Nutrient levels were calculated values.

表 1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis)

1.3 饲养管理

养殖试验在湖北省荷香水美蕲春广源养鸡场进行。采用半开放式3层阶梯式笼养，为避免换料应激，预试期第2周采用基础饲粮和试验饲粮以1 : 1、1 : 2配比过度1周，第3周饲喂试验饲粮。正式试验开始前，各组的产蛋率无显著差异(P＞0.05)。试验期间采用定量饲喂。蛋鸡采用乳头式饮水器饮水，鸡舍光照时间为16 h，相对湿度为50%~60%，温度为(19±1) ℃，按照常规程序免疫，定期进行消毒，保持鸡舍环境卫生，每日观察和记录鸡群健康状况。

1.4 样品采集与处理

试验期间，每天准确记录各重复的采食量，并统计蛋鸡每天死淘数、产蛋数、蛋重和不合格蛋数。试验第4周和第8周末，每重复各选5枚样蛋，共360枚，做好标记，送至实验室，进行蛋品质检测。

试验第4周和第8周末，蛋鸡在前1天晚上空腹处理，于次日07：00采血，每个重复随机选取1只鸡，翅下静脉采血5 mL，低温送至实验室，在3 000 r/min、4 ℃条件下离心10 min，取上清分装于干净的EP管中，-20 ℃冷冻储存，用于血清生化指标检测。第8周末记录蛋鸡空腹体重后进行屠宰取样，颈动脉放血致死后，使用无菌剪刀和镊子，打开腹腔，完整剥离腹脂，剪取肝脏进行称重，取部分肝脏置于液氮中速冻，转至-80 ℃冰箱中冷冻保存，用于脂质代谢相关指标检测。

1.5 检测指标与方法 1.5.1 肝脏指数和腹脂指数

肝脏指数和腹脂指数的计算公式如下：

1.5.2 血清生化指标的检测

使用全自动生化分析仪(日立HITEC-7100)测定血清中总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)含量，使用南京建成生物工程研究所试剂盒测定血清甘油三酯(TG)含量。

1.5.3 肝脏TC和TG含量的检测

肝脏样品按照1 : 9(g : mL)比例加入生理盐水，4 ℃、3 000 r/min离心10 min，制成10%匀浆液，测定匀浆液的蛋白质含量，试验结果以蛋白质含量为基础计算。肝脏TC和TG含量使用南京建成生物工程研究所试剂盒测定。

1.5.4 肝脏脂质代谢相关基因的检测

采用荧光定量荧光PCR法测定肝脏中的乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、3-羟3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、脂肪酸合成酶(FAS)、胰岛素受体(INSR)、钠葡萄糖共转运载体1(SGLT1)、载脂蛋白B(ApoB)、卵黄蛋白原Ⅱ(VTGⅡ)的mRNA相对表达量。使用RNA裂解液(大连TaKaRa公司)提取肝脏RNA，随后用试剂盒(prime-Scripte RT reagent Kit with cDNA Eraser，大连TaKaRa公司)进行反转录，得到相应的cDNA，然后用real-time PCR试剂盒(SYBR Premix Ex Taq^TM，大连TaKaRa公司)和RT-PCR扩增仪(Real-time PCR仪，Applied-Biosystems公司，美国)进行荧光定量PCR检测，所有操作步骤严格按照说明书进行，基因检测均以β-肌动蛋白(β-actin)为内参，数据结果采用的2^-ΔΔCt方法计算，检测基因的引物序列见表 2。

表 2 检测基因的引物序列 Table 2 Primer sequences for detection genes

1.6 数据统计与分析

试验数据采用SPSS 21.0统计软件进行双因素方差分析(two-way ANOVA)，当组间差异显著时，采用Duncan氏法进行多重比较。P < 0.05表示差异显著，0.05≤P < 0.10表示有显著趋势。试验结果用平均值和标准差表示。

2 结果 2.1 维生素A和维生素K₃对产蛋后期蛋鸡生产性能和蛋品质的影响

整个试验期间，维生素A和维生素K₃对产蛋后期蛋鸡采食量[(107.7±3.9) g]、产蛋率[(85.95±3.29)%]、料蛋比(1.90±0.06)、蛋重[(65.92±1.28) g]、破蛋率[(1.21±0.79)%]、蛋白高度[(5.06±1.53) mm]、哈氏单位(63.60±15.49)、蛋黄颜色(10.54±0.59)、蛋黄重量[(18.68±1.47) g]均无显著影响(P>0.05)，括号中数据为蛋鸡生产性能和蛋品质的平均值。

2.2 维生素A和维生素K₃对产蛋后期蛋鸡肝脏指数和腹脂指数的影响

由表 3可见，与添加0 IU/kg维生素A相比，添加7 000和14 000 IU/kg维生素A显著降低了肝脏指数(P < 0.05)，分别下降了9.1%和18.4%；维生素A和维生素K₃对肝脏指数存在显著交互作用(P < 0.05)。维生素A和维生素K₃对腹脂指数无显著影响(P>0.05)，且二者无显著交互作用(P>0.05)。

表 3 维生素A和维生素K₃对产蛋后期蛋鸡肝脏指数和腹脂指数的影响 Table 3 Effects of vitamin A and vitamin K₃ on liver index and abdominal index of laying hens during later laying period

g/kg
项目 Items		肝脏指数 Liver index	腹脂指数 Abdominal fat index
维生素A Vitamin A/(IU/kg)	维生素K₃ Vitamin K₃/(mg/kg)
0	0	15.13	49.62
0	2.0	17.14	40.21
0	4.0	16.27	41.66
7 000	0	16.40	39.43
7 000	2.0	13.35	40.48
7 000	4.0	14.38	51.37
14 000	0	13.34	46.17
14 000	2.0	13.42	42.67
14 000	4.0	12.84	58.89
标准差SD		1.60	6.55
主效应Main effect
	0	16.180^c	43.831
维生素A Vitamin A/(IU/kg)	7 000	14.709^b	43.762
	14 000	13.202^a	49.245
	0	14.958	45.074
维生素K₃ Vitamin K₃/(mg/kg)	2.0	14.634	41.124
	4.0	14.498	50.639
P值P-value
维生素A Vitamin A		< 0.001	0.557
维生素K₃ Vitamin K₃		0.768	0.279
维生素A×维生素K₃ Vitamin A×vitamin K₃		0.040	0.644
同列数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05)，不同小写字母表示差异显著(P < 0.05)。下表同。 In the same column, values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P < 0.05). The same as below.

2.3 维生素A和维生素K₃对血清脂质代谢相关生化指标的影响

由表 4可见，与添加0 IU/kg维生素A相比，添加7 000和14 000 IU/kg维生素A显著增加了第4周血清HDL和VLDL含量(P < 0.05)。随着维生素A添加水平的提高，第8周血清TG含量显著降低(P < 0.05)。与添加0 mg/kg维生素K₃相比，添加4.0 mg/kg维生素K₃显著降低了第8周血清TG含量(P < 0.05)，且维生素A和维生素K₃存在显著交互作用(P < 0.05)，以14 000 IU/kg维生素A和0 mg/kg维生素K₃组血清TG含量最低。维生素A和维生素K₃对提高第8周血清HDL含量有交互作用的趋势(P=0.056)，以14 000 IU/kg维生素A和2.0 mg/kg维生素K₃组血清HDL含量最高。维生素K₃对血清TC、HDL、VLDL含量无显著影响(P>0.05)。

表 4 维生素A和维生素K₃对产蛋后期蛋鸡血清脂质代谢相关生化指标的影响 Table 4 Effects of vitamin A and vitamin K₃ on serum lipid metabolism related biochemical indexes of laying hens during later laying period

项目 Items		第4周Week 4				第8周Week 8
项目 Items		总胆固醇TC/ (mg/dL)	甘油三酯TG/ (mmol/L)	高密度脂蛋白HDL/ (mg/dL)	极低密度脂蛋白VLDL/ (mg/dL)	总胆固醇TC/ (mg/dL)	甘油三酯TG/ (mmol/L)	高密度脂蛋白HDL/ (mg/dL)	极低密度脂蛋白VLDL/ (mg/dL)
维生素A Vitamin A/(IU/kg)	维生素K₃ Vitamin K₃/(mg/kg)
0	0	138.64	18.80	22.93	27.37	122.42	26.22^a	29.06	27.41
0	2	135.81	14.66	26.56	27.68	156.04	26.90^a	26.77	26.34
0	4	128.07	15.18	27.31	24.67	109.99	21.47^a	22.22	27.45
7 000	0	191.54	16.25	30.66	32.51	138.63	24.29^a	31.80	26.79
7 000	2	123.76	15.15	36.17	29.82	128.44	23.83^a	26.25	26.54
7 000	4	144.50	17.53	31.90	28.88	114.89	11.54^b	27.64	25.00
14 000	0	149.77	16.08	31.79	29.38	102.75	8.58^b	27.36	24.56
14 000	2	151.93	14.50	30.29	29.27	135.28	12.07^b	34.00	27.31
14 000	4	166.95	18.11	33.76	31.85	115.95	9.19^b	27.95	26.52
标准差SD		20.94	1.56	4.01	2.36	16.50	7.71	3.35	1.03
主效应Main effect
	0	134.17	16.21	25.60^a	26.57^a	129.48	24.87^a	26.02	27.07
维生素A Vitamin A/ (IU/kg)	7 000	153.27	16.31	32.91^b	30.40^b	127.32	19.89^b	28.56	26.11
	14 000	156.22	16.23	31.95^b	30.17^b	117.99	9.95^c	29.77	26.13
	0	159.98	17.04	28.46	29.75	121.26	19.70^a	29.41	26.25
维生素K₃ Vitamin K₃/ (mg/kg)	2	137.16	14.77	31.01	28.92	139.92	20.94^a	29.01	26.73
	4	146.51	16.94	30.99	28.46	113.61	14.07^b	25.93	26.32
P值P-value
维生素A Vitamin A		0.235	0.999	0.008	0.028	0.634	< 0.01	0.114	0.683
维生素K₃ Vitamin K₃		0.269	0.651	0.502	0.708	0.113	< 0.01	0.112	0.919
维生素A×维生素K₃ Vitamin A×vitamin K₃		0.194	0.932	0.690	0.430	0.482	0.041	0.056	0.611

2.4 维生素A和维生素K₃对肝脏脂质代谢相关生化指标的影响

由表 5可知，与添加0 IU/kg维生素A相比，添加7 000 IU/kg维生素A显著提高了肝脏TC含量(P < 0.05)，添加14 000 IU/kg维生素A显著减低了肝脏TG含量(P < 0.05)。维生素K₃对肝脏TC和TG含量无显著影响(P>0.05)，维生素A和维生素K₃对肝脏TC和TG含量无显著交互作用(P>0.05)。

表 5 维生素A和维生素K₃对产蛋后期蛋鸡肝脏脂质代谢相关生化指标的影响 Table 5 Effects of vitamin A and vitamin K₃ on liver lipid metabolism related biochemical indexes of laying hens during later laying period

mmol/g prot
项目 Items		总胆固醇 TC	甘油三酯 TG
维生素A Vitamin A/(IU/kg)	维生素K₃ Vitamin K₃/(mg/kg)
0	0	0.13	0.57
0	2.0	0.11	0.45
0	4.0	0.10	0.47
7 000	0	0.13	0.52
7 000	2.0	0.16	0.56
7 000	4.0	0.13	0.54
14 000	0	0.11	0.44
14 000	2.0	0.12	0.44
14 000	4.0	0.10	0.38
标准差SD		0.02	0.07
主效应Main effect
	0	0.115^a	0.496^b
维生素A Vitamin A/(IU/kg)	7 000	0.143^b	0.540^b
	14 000	0.111^a	0.424^a
	0	0.127	0.512
维生素K₃ Vitamin K₃/(mg/kg)	2.0	0.129	0.484
	4.0	0.113	0.463
P值P-value
维生素A Vitamin A		0.004	0.003
维生素K₃ Vitamin K₃		0.250	0.366
维生素A×维生素K₃ Vitamin A×vitamin K₃		0.345	0.279

2.5 维生素A和维生素K₃对肝脏脂质代谢相关基因表达的影响

由表 6可知，与添加0 IU/kg维生素A相比，添加14 000 IU/kg维生素A显著下调了肝脏PPARγ、FAS mRNA相对表达量(P < 0.05)，显著上调了肝脏SGLT1 mRNA相对表达量(P < 0.05)。随维生素A添加水平上升，肝脏ACC、APoB、VTGⅡ mRNA相对表达量有下调的趋势(P=0.054、P=0.085、P=0.067)。维生素K₃对肝脏脂质代谢相关基因mRNA相对表达量无显著影响(P>0.05)，维生素A和维生素K₃对肝脏脂质代谢相关基因mRNA相对表达量无显著交互作用(P>0.05)。

表 6 维生素A和维生素K₃对产蛋后期蛋鸡肝脏脂质代谢相关基因表达的影响 Table 6 Effects of vitamin A and vitamin K₃ on liver lipid metabolism related genes expression of laying hens during later laying periods

项目 Items		乙酰辅酶A羧化酶 ACC	3-羟3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A还原酶 HMGR	过氧化物酶体增殖物激活受体α PPARα	过氧化物酶体增殖物激活受体γ PPARγ	固醇调节元件结合蛋白 SREBP1	脂肪酸合成酶 FAS	胰岛素受体 INSR	钠葡萄糖共转运载体1 SGLT1	载脂蛋白B ApoB	卵黄蛋白原Ⅱ VTGⅡ
维生素A VitaminA/(IU/kg)	维生素K₃ VitaminK₃/(mg/kg)
0	0	1.10	1.12	1.09	1.00	1.13	1.11	1.03	1.02	1.20	1.24
0	2.0	0.91	0.86	1.02	0.91	0.69	0.98	0.88	1.32	0.81	0.81
0	4.0	1.37	1.27	1.01	0.91	0.63	1.01	1.13	1.41	0.93	1.23
7 000	0	1.11	1.04	0.96	0.88	0.79	1.04	1.04	1.49	1.12	1.22
7 000	2.0	0.67	0.98	0.84	0.76	0.54	0.49	0.82	1.17	0.69	1.09
7 000	4.0	0.69	0.76	1.08	0.82	0.76	0.45	1.09	1.37	0.77	0.94
14 000	0	0.61	0.78	0.85	0.66	0.85	0.46	0.91	1.70	0.55	0.55
14 000	2.0	0.80	0.87	1.05	0.71	1.03	0.48	1.13	1.54	0.85	1.09
14 000	4.0	0.55	0.60	1.30	0.93	0.67	0.50	0.81	1.99	0.42	0.30
标准差SD		0.28	0.20	0.14	0.11	0.19	0.30	0.13	0.29	0.25	0.33
主效应Main effect
	0	1.127	1.083	1.040	0.944^b	0.818	1.036^b	1.013	1.250^a	0.978	1.095
维生素A Vitamin A/ (IU/kg)	7 000	0.823	0.930	0.959	0.819^ab	0.699	0.660^ab	0.985	1.342^ab	0.859	1.083
	14 000	0.654	0.752	1.068	0.767^a	0.849	0.478^a	0.949	1.744^b	0.608	0.646
	0	0.939	0.981	0.967	0.849	0.922	0.870	0.993	1.405	0.955	1.002
维生素K₃ Vitamin K₃/ (mg/kg)	2.0	0.793	0.905	0.970	0.794	0.756	0.652	0.944	1.341	0.782	0.998
	4.0	0.872	0.878	1.131	0.887	0.688	0.651	1.010	1.590	0.708	0.824
P值P-value
维生素A Vitamin A		0.054	0.169	0.632	0.040	0.454	0.031	0.870	0.041	0.085	0.067
维生素K₃ Vitamin K₃		0.740	0.820	0.306	0.385	0.187	0.469	0.852	0.443	0.320	0.655
维生素A×维生素K₃ Vitamin A×vitamin K₃		0.386	0.527	0.509	0.227	0.182	0.673	0.221	0.693	0.352	0.215

3 讨论

老龄蛋鸡面临免疫抑制、肠道功能紊乱、生产性能和蛋品质下降等问题，严重影响经济效益。脂溶性维生素对家禽生产性能和蛋品质的报道较多，但结果并不统一。Yuan等^[10]报道，30 000 IU/kg维生素A对肉种鸡产蛋性能无显著影响，但Gan等^[1]研究发现，饲粮中添加2倍推荐量的脂溶性维生素能提高85周龄蛋鸡产蛋率，但对蛋品质无显著影响。Fernandes等^[11]研究表明，2、8、32 mg/kg维生素K对67周龄蛋鸡料蛋比、蛋重和产蛋率均有改善作用。NRC(1994)蛋鸡维生素A和维生素K₃推荐添加水平分别为1 500~4 000 IU/kg和0.5~1.0 mg/kg，说明1500 IU/kg维生素A和0.5 mg/kg维生素K₃可能就能满足老龄蛋鸡产蛋营养需要。本试验结果表明，饲粮中添加4~8倍维生素A和维生素K₃对90~97周龄蛋鸡生产性能和蛋品质无显著影响。蛋鸡体内维生素代谢效率随周龄增加而下降，这可能是造成结果不一致的主要原因^[12]。

肝脏指数能够体现蛋鸡肝脏功能、健康状态等情况，产蛋后期蛋鸡肝脏指数过高会引起脂肪肝，危害蛋鸡健康^[13]。王利华^[14]研究指出，饲粮中添加15 000 IU/kg维生素A能显著提高47日龄肉鸡肝脏指数。董以雷等^[15]研究发现，饲粮维生素A添加水平从1 000 IU/kg增加到18 000 IU/kg，对21和42日龄肉鸡肝脏指数无显著影响。本研究中，饲粮添加7 000和14 000 IU/kg维生素A显著降低了肝脏指数。这可能是由于肉鸡和蛋鸡维生素A需要量不同，肉鸡对饲粮高水平维生素A更耐受导致。

肝脏是TC和TG合成的主要场所，近年发现，维生素A可抑制动物的脂肪合成。Ayuso等^[16]研究表明，饲粮中添加维生素A能降低猪体内脂肪含量。研究发现，大鼠饲粮中添加维生素A能够降低肝脏TC含量^[17]。本研究中，饲粮添加14 000 IU/kg维生素A显著提高了蛋鸡血清HDL、VLDL含量，降低了肝脏TG含量，添加4.0 mg/kg维生素K₃和14 000 IU/kg维生素A降低了血清TG含量，具有降低血脂的效果。与本试验相反，临床试验证明过量摄入维生素A会提高人血清TG和低密度脂蛋白(LDL)含量^[18]。Ahmad等^[19]研究发现，饲粮添加3 000 IU/kg维生素A对40周龄蛋鸡血清HDL、VLDL和TG含量没有显著影响。本试验结果表明，高剂量维生素A和维生素K₃有利于防止产蛋后期蛋鸡脂肪肝的产生，这可能与产蛋后期对维生素A需要量增加引起^[20-21]。

肝脏PPARγ和FAS对脂肪合成有关键作用^[22-26]。研究发现，饲粮添加维生素A能够有效下调肉鸡FAS和肉牛肝脏PPARγ mRNA相对表达量^{[3, 27]}。本研究中，饲粮添加14 000 IU/kg维生素A显著降低了肝脏PPARγ和FAS mRNA相对表达量，有助于抑制脂质代谢，减少肝脏脂肪生成，但维生素A调控肝脏PPARγ mRNA相对表达量的机制尚不清楚。

SGLT1参与机体葡萄糖吸收，对维持血糖平衡有重要作用，当SGLT1 mRNA相对表达量升高时会导致肝脏血糖水平升高^[28-29]。本试验中，饲粮添加14 000 IU/kg维生素A可增加蛋鸡肝脏SGLT1 mRNA相对表达量。目前研究维生素A和维生素K对肝脏SGLT1表达影响的研究较少。Tomimatsu等^[30]发现棕榈酸视黄酯对大鼠小肠刷状缘膜SGLT1表达无显著影响，但有利于钠离子(Na⁺)依赖型D-葡萄糖的转运。因此，本研究中肝脏SGLT1 mRNA相对表达量升高可能和维生素A增加了产蛋后期蛋鸡体内SGLT1的周转有关。

4 结论

在本试验条件下，添加14 000 IU/kg维生素A和4.0 mg/kg维生素K₃不影响产蛋后期蛋鸡生产性能和蛋品质，但可以降低肝脏指数，调控肝脏脂质代谢相关基因表达，改善脂质代谢，对防止产蛋后期脂肪肝具有一定效果。

参考文献

[1]	GAN L P, ZHAO Y Z, MAHMOOD T, et al. Effects of dietary vitamins supplementation level on the production performance and intestinal microbiota of aged laying hens[J]. Poultry Science, 2020, 99(7): 3594-3605. DOI:10.1016/j.psj.2020.04.007
[2]	LITWAC K G. Vitamins and the immune system[J]. Elsevier Ltd Oxford, 2011, 17(1): 455-456.
[3]	CHEN F, JIANG Z Y, JIANG S Q, et al. Dietary vitamin A supplementation improved reproductive performance by regulating ovarian expression of hormone receptors, caspase-3 and Fas in broiler breeders[J]. Poultry Science, 2016, 95(1): 30-40. DOI:10.3382/ps/pev305
[4]	TOKITA H, TSUCHIDA A, MIYAZAWA K, et al. Vitamin K₂-induced antitumor effects via cell-cycle arrest and apoptosis in gastric cancer cell lines[J]. International Journal of Molecular Medicine, 2006, 17(2): 235-243.
[5]	夏兆飞, 蒋国文, 潘庆山, 等. 大剂量维生素A、K及其互作对AA肉鸡骨骼的影响[J]. 中国兽医杂志, 1997, 23(2): 13-15. XIA Z F, JIANG G W. Effects of high dose vitamin A, K and their interaction on bone of AA broilers[J]. Chinese Journal of Veterinary Medicine, 1997, 23(2): 13-15. (in Chinese)
[6]	李慧莲, 王晓洁, 张养东, 等. 维生素A在脂质过氧化和抗氧化功能上的研究进展[J]. 饲料博览, 2008(9): 24-26. LI H L, WANG X J, ZHANG Y D. Research progress of vitamin A on lipid peroxidation and antioxidant function[J]. Feed Review, 2008(9): 24-26 (in Chinese). DOI:10.3969/j.issn.1001-0084.2008.09.008
[7]	KNAPEN M H J, JARDON K M, VERMEER C. Vitamin K-induced effects on body fat and weight: results from a 3-year vitamin K₂ intervention study[J]. European Journal of Clinical Nutrition, 2018, 72(1): 136-141. DOI:10.1038/ejcn.2017.146
[8]	夏兆飞, 金久善. 大剂量维生素A、K及其互作对AA肉鸡生产性能和凝血机能的影响[J]. 中国兽医学报, 2005, 25(1): 104-107. XIA Z F, JIN J S. Effects of high dose vitamin A, K and their interaction on production performance and coagulation function of AA broilers[J]. Chinese Journal of Veterinary Medicine, 2005, 25(1): 104-107 (in Chinese). DOI:10.3969/j.issn.1005-4545.2005.01.034
[9]	郝二英, 黄晨轩, 孙浩政, 等. 外源褪黑素对产蛋后期蛋鸡生产性能、血清指标及体内褪黑素含量的影响[J]. 动物营养学报, 2020, 32(5): 177-188. HAO E Y, HUANG C X, SUN H Z, et al. Effects of exogenous melatonin on performance, serum indexes and melatonin content of laying hens during later laying period[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2020, 32(5): 177-188 (in Chinese).
[10]	YUAN J M, ROSHDY A R, GUO Y M, et al. Effect of dietary vitamin A on reproductive performance and immune response of broiler breeders[J]. PLoS One, 2014, 9(8): e105677. DOI:10.1371/journal.pone.0105677
[11]	FERNANDES J I M, MURAKAMI A E, SCAPINELLO C, et al. Effect of vitamin K on bone integrity and eggshell quality of white hen at the final phase of the laying cycle[J]. Revista Brasileira de Zootecnia, 2009, 38(3): 488-492. DOI:10.1590/S1516-35982009000300013
[12]	GAN L P, FAN H, NIE W, et al. Ascorbic acid synthesis and transportation capacity in old laying hens and the effects of dietary supplementation with ascorbic acid[J]. Journal of Animal Science and Biotechnology, 2018, 9: 71. DOI:10.1186/s40104-018-0284-7
[13]	徐昌领, 左建军, 冯定远. 组合型木聚糖酶对21日龄黄羽肉鸡器官指数、内源消化酶活性以及肠道吸收功能的影响[J]. 饲料工业, 2011(增刊): 49-53. XU C L, ZUO J J, FENG D Y. Effect of combination xylanase on organ index, endogenous digestive enzyme activity and absorptive function of intestinal tract for yellow-feather broilers[J]. Feed Industry, 2011(Suppl.): 49-53 (in Chinese).
[14]	王利华. 不同维生素A添加量对肉鸡生产性能、免疫器官指数及血清酶活性的影响[J]. 中国饲料, 2009(8): 24-25, 28. WANG L H. Effects of different vitamin A supplementation on growth performance, immune organ index and serum enzyme activity of broilers[J]. China Feed, 2009(8): 24-25, 28 (in Chinese). DOI:10.3969/j.issn.1004-3314.2009.08.009
[15]	董以雷, 井庆川, 刘雪兰, 等. 维生素A对罗斯308×海兰褐肉杂鸡生长性能、钙磷代谢和免疫功能的影响[J]. 动物营养学报, 2019, 31(2): 629-637. DONG Y L, JIN Q C, LIU X L, et al. Effects of vitamin A on growth performance, calcium and phosphorus metabolism and immune function of Ross 308×Hyline brown hybrid broilers[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2019, 31(2): 629-637 (in Chinese). DOI:10.3969/j.issn.1006-267x.2019.02.019
[16]	AYUSO M, FERNÁNDEZ A, ISABEL B, et al. Long term vitamin a restriction improves meat quality parameters and modifies gene expression in Iberian pigs[J]. Journal of Animal Science, 2015, 93(6): 2730-2744. DOI:10.2527/jas.2014-8573
[17]	SOLOMON L W, ERDMAN J W, J r. Vitamin A induced hypertriglyceridemia in cholesterol-fed rats[J]. Lipids, 1980, 15(3): 157-162. DOI:10.1007/BF02540962
[18]	YEHYA A, BAER J T, SMILEY W, et al. Hypervitaminosis A altering the lipid profile in a hypercholesterolemic patient[J]. Journal of Clinical Lipidology, 2009, 3(3): 205-207. DOI:10.1016/j.jacl.2009.03.001
[19]	AHMAD S, AHSAN-UL-HAQ, YOUSAF M, et al. Production of n-3 PUFA enriched eggs by feeding various dietary ratios of n-6 to n-3 fatty acids and vitamin A levels to the laying hens in hot climate[J]. The Journal of Poultry Science, 2014, 51(2): 213-219. DOI:10.2141/jpsa.0120169
[20]	MAXFIELD F R, TABAS I. Role of cholesterol and lipid organization in disease[J]. Nature, 2005, 438(7068): 612-621. DOI:10.1038/nature04399
[21]	NRC. Nutrient requirements of poultry[S]. 9th ed. Washington, D.C. : National Academies Press, 1994.
[22]	BROWN J D, PLUTZKY J. Peroxisome proliferator-activated receptors as transcriptional nodal points and therapeutic targets[J]. Circulation, 2007, 115(4): 518-533. DOI:10.1161/CIRCULATIONAHA.104.475673
[23]	MULLEN G E, YET L. Progress in the development of fatty acid synthase inhibitors as anticancer targets[J]. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2015, 25(20): 4363-4369.
[24]	KNOBLOCH M, BRAUN S M G, ZURKIRCHEN L, et al. Metabolic control of adult neural stem cell activity by Fasn-dependent lipogenesis[J]. Nature, 2013, 493(7431): 226-230. DOI:10.1038/nature11689
[25]	SEMENKOVICH C F. Regulation of fatty acid synthase (FAS)[J]. Progress in Lipid Research, 1997, 36(1): 43-53. DOI:10.1016/S0163-7827(97)00003-9
[26]	RONCARI D A K. Abnormalities of adipose cells in massive obesity[J]. International Journal of Obesity, 1990, 14 Suppl.3: 187-192.
[27]	张幸开. 维生素A对肉牛肌内脂肪沉积及ACC/HSL、PPARγ基因表达的影响[D]. 硕士学位论文. 杨凌: 西北农林科技大学, 2005. ZHANG X K. The influence of intramuscular fat deposit and gene expression of ACC/HSL and PPARγ with the supplemetation of vitamin A in beef cattle[D]. Master's Thesis. Yangling: Northwest A&F University, 2005. (in Chinese)
[28]	WRIGHT E M, HIRAYAMA B A, LOO D F. Active sugar transport in health and disease[J]. Journal of Internal Medicine, 2007, 261(1): 32-43. DOI:10.1111/j.1365-2796.2006.01746.x
[29]	POLIDORI D, SHA S, MUDALIRA S, et al. Canagliflozin lowers postprandial glucose and insulin by delaying intestinal glucose absorption in addition to increasing urinary glucose excretion: results of a randomized, placebo-controlled study[J]. Diabetes Care, 2013, 36(8): 2154-2161. DOI:10.2337/dc12-2391
[30]	TOMIMATSU T, HORIE T. Increased Na⁺-dependent D-glucose transport in small intestine of retinyl palmitate treated rats[J]. In Vivo, 2001, 15(1): 81-86.