2. 重庆市畜牧科学院, 重庆 402460;
3. 青岛普兴生物科技有限公司, 青岛 266113
2. Chongqing Academy of Animal Sciences, Chongqing 402460, China;
3. Qingdao Puxing Biotechnology Co., Ltd., Qingdao 266113, China
叶酸又名喋酰谷氨酸，是参与动物生长发育的一种重要水溶性维生素。叶酸在机体营养代谢中发挥重要生理作用，为机体细胞生长和繁殖所必需的物质，帮助蛋白质的代谢，缺乏叶酸可导致机体同型半胱氨酸代谢和营养物质利用率下降[1-2]。缺乏叶酸还会导致高同型半胱氨酸血症，进而影响血管功能，增加卒中风险。研究发现，缺乏叶酸影响机体营养代谢，从而导致机体生长缓慢，母鸡缺乏叶酸会引起产蛋量和孵化率下降，且死亡率升高[3]。试验表明，缺乏叶酸可加重大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)和再灌注后的DNA氧化损伤，增大缺血病灶体积[4]。Abas等[5]研究发现，饲粮添加适宜水平的叶酸可提高罗曼蛋鸡的产蛋量和蛋品质。El-Husseiny等[6]研究表明，饲粮添加适宜水平的叶酸可以降低血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性，并能提高肉鸡的生长性能。夏伟光等[7]研究发现，饲粮添加1.0 mg/kg叶酸显著提高了山麻鸭的蛋壳相对重量，且获得较高的蛋壳厚度。饲粮中添加适宜水平的叶酸可降低育雏期仔鹅的死淘率[8]。目前，我国在种鸡、种鸭叶酸需要量方面已有报道，但有关种鹅的叶酸需要量还未见报道。因此，本试验通过研究饲粮叶酸添加水平对初产种鹅繁殖性能、蛋品质及血清生殖激素和抗氧化指标的影响，旨在确定叶酸在初产种鹅饲粮中的适宜添加水平，为完善我国种鹅营养需要量数据库提供理论依据。
1 材料与方法 1.1 试验材料和试验设计试验鹅(五龙鹅)由高密市银河润雁鹅业有限公司提供。叶酸由青岛某生物科技有限公司提供，有效成分含量为98.0%。
选择健康、体重相近的34周龄种鹅180只，随机分成6个组，每组6个重复，每个重复5只鹅(1公4母)。各组(Ⅰ~Ⅵ组)种鹅分别饲喂叶酸添加水平为0、0.25、0.50、0.75、1.00和1.25 mg/kg的试验饲粮。预试期1周，饲喂基础饲粮；正试期10周。
1.2 试验饲粮基础饲粮参照NRC(1994)家禽营养需要量中推荐的种鹅饲粮营养水平设计配方，其组成及营养水平见表 1。采用高效液相色谱法[9]测定基础饲粮中叶酸含量为0.50 mg/kg。
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表 1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) |
试验种鹅采用地面饲养方式，自由采食，自由饮水。试验前鹅舍进行充分冲洗和严格消毒，试验期内每周消毒2次。每天08：00捡蛋，记录产蛋数、蛋重、耗料量和合格蛋数。
1.4 测定指标及方法 1.4.1 繁殖性能和蛋品质指标的测定繁殖性能和蛋品质指标的测定与计算方法按照农业部推荐标准NY/T 823—2004进行。
1.4.2 血清生殖激素指标的测定饲养试验结束后采血，采血前断料24 h，从6个组中每个重复随机选择2只种鹅，采用抗凝管翅静脉采血，3 000 r/min离心15 min制备血清，分装成3份，放入-40 ℃冰箱保存。血清孕酮、雌二醇、促卵泡素、催乳素含量采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验测定，试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
1.4.3 血清抗氧化指标的测定血清总蛋白(TP)含量采用考马斯亮蓝法测定，血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性采用羟胺法测定，血清丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸反应(TBA)法测定，血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性采用比色法测定，以上指标均用试剂盒(南京建成生物工程研究所)测定。
1.5 数据处理与统计分析采用SPSS 22.0软件对数据进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，差异显著者进行Duncan氏法多重比较。数据均以平均值和均值标准误(SEM)表示。P < 0.05表示差异显著，P < 0.01表示差异极显著，并采用二次曲线模型拟合叶酸需要量。
2 结果与分析 2.1 饲粮叶酸添加水平对初产种鹅繁殖性能的影响由表 2可知，饲粮叶酸添加水平对初产种鹅的产蛋率、合格率、健雏率和料蛋比影响不显著(P>0.05)，但对种鹅蛋的受精率和孵化率有显著或极显著影响(P < 0.05或P < 0.01)。Ⅴ和Ⅵ组种鹅蛋的受精率显著高于Ⅰ组(P < 0.05)，Ⅵ组种鹅蛋的孵化率显著高于Ⅰ、Ⅱ组(P < 0.05)。
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表 2 饲粮叶酸添加水平对初产种鹅繁殖性能的影响 Table 2 Effects of dietary folic acid supplemental level on reproductive performance of primiparous breeding geese |
通过对受精率和孵化率(Y)分别与饲粮叶酸添加水平(X)进行二次曲线拟合，建立回归方程：Y(受精率)=92.093+1.241X-0.516X2 (R2=0.637，PQ < 0.001)，Y(孵化率)=95.578+0.914X-0.415X2 (R2=0.586，PQ=0.006)。根据回归方程可以得出饲粮叶酸添加水平为1.22 mg/kg时受精率最高，饲粮叶酸添加水平为1.10 mg/kg时孵化率最高。Ⅳ组与Ⅴ组孵化率没有显著差异(P>0.05)，虽然从经济效益来看，饲粮叶酸添加水平为0.75 mg/kg时最好；但是，从繁殖性能考虑，建议饲粮叶酸添加水平为1.00~1.25 mg/kg。
2.2 饲粮叶酸添加水平对初产种鹅蛋品质的影响由表 3可知，饲粮叶酸添加水平对初产种鹅的蛋重、蛋形指数、蛋壳厚度、蛋白高度、蛋黄颜色和蛋黄比率影响不显著(P>0.05)，但对蛋壳强度有显著影响(P < 0.05)。Ⅴ组蛋壳强度显著高于Ⅰ、Ⅳ、Ⅵ组(P < 0.05)。
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表 3 饲粮叶酸添加水平对初产种鹅蛋品质的影响 Table 3 Effects of dietary folic acid supplemental level on egg quality of primiparous breeding geese |
通过对蛋壳强度(Y)与饲粮叶酸添加水平(X)进行二次曲线拟合，建立回归方程：Y(蛋壳强度)=5.058+0.014X-0.007X2 (R2=0.441，PQ=0.008)，根据回归方程可以得出饲粮叶酸添加水平为1.01 mg/kg时蛋壳强度最大。以上结果表明，饲粮叶酸添加水平与蛋壳强度密切相关，且在叶酸添加水平为1.01 mg/kg时达到最大。
2.3 饲粮叶酸添加水平对初产种鹅血清生殖激素和抗氧化指标的影响由表 4可知，饲粮叶酸添加水平对初产种鹅血清雌二醇、促卵泡素和催乳素含量影响不显著(P>0.05)，但对血清孕酮含量有极显著影响(P < 0.01)。Ⅴ组血清孕酮含量显著或极显著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组(P < 0.05或P < 0.01)。
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表 4 饲粮叶酸添加水平对初产种鹅生殖激素指标的影响 Table 4 Effects of dietary folic acid supplemental level on serum reproductive hormone parameters of primiparous breeding geese |
通过对血清孕酮含量(Y)与饲粮叶酸添加水平(X)进行二次曲线拟合，建立回归方程：Y(血清孕酮含量)=141.565+0.235X-0.124X2 (R2=0.648，PQ=0.009)，根据回归方程可以得出饲粮叶酸添加水平为1.05 mg/kg时血清孕酮含量最高。以上结果表明，叶酸有提高初产种鹅血清孕酮含量的效果，但Ⅳ组和Ⅴ组血清孕酮含量没有显著差异，从经济效益上来看，建议饲粮叶酸添加水平为0.75 mg/kg。
由表 5可知，饲粮叶酸添加水平对初产种鹅血清T-SOD和GSH-Px活性无显著影响(P>0.05)，但对血清TP和MDA含量有显著或极显著影响(P < 0.05或P < 0.01)。Ⅴ组血清TP含量显著或极显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅵ组(P < 0.05或P < 0.01)，Ⅵ组血清MDA含量显著低于Ⅰ和Ⅱ组(P < 0.05)。
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表 5 饲粮叶酸添加水平对初产种鹅血清抗氧化指标的影响 Table 5 Effects of dietary folic acid supplemental level on serum antioxidant parameters of primiparous breeding geese |
通过对血清TP和MDA含量(Y)分别与饲粮叶酸添加水平(X)进行二次曲线拟合，建立回归方程：Y(血清TP含量)=59.315+0.123X-0.061X2 (R2=0.438，PQ=0.017)，Y(血清MDA含量)=52.172-6.564X+3.647X2 (R2=0.606，PQ=0.003)，根据回归方程可以得出饲粮叶酸添加水平为1.12 mg/kg时抗氧化性能最好。Ⅴ组和Ⅳ组血清MDA含量没有显著差异(P>0.05)，但从经济效益上来看，饲粮叶酸添加水平为0.75 mg/kg时最好。以上结果表明，饲粮叶酸添加水平为1.00~1.25 mg/kg时，可显著提高初产种鹅血清TP含量，显著降低初产种鹅血清MDA含量。
3 讨论 3.1 饲粮叶酸添加水平对初产种鹅繁殖性能的影响支丽慧[10]研究发现，肉仔鸡孵化期不同胚龄注射叶酸极显著影响了各组种蛋孵化率。刘安之等[11]研究表明，饲粮叶酸添加水平为1.5 mg/kg时可极显著提高48周龄星杂579蛋鸡受精率和孵化率。Roth-Maier等[12]和Ryu等[13]研究表明，饲粮叶酸添加水平为3.6 mg/kg时白莱航母鸡的生产性能最好，饲粮叶酸添加水平为2.0 mg/kg时白莱航母鸡的受精率达到最大值。本试验结果表明，随饲粮叶酸添加水平的提高初产种鹅蛋的受精率和孵化率有上升趋势，表明饲粮添加叶酸可提高初产种鹅蛋的受精率和孵化率。饲粮叶酸添加水平对初产种鹅的产蛋率、合格率、健雏率和料蛋比的影响不显著。由二次拟合曲线得出当饲粮叶酸添加水平分别为1.22和1.10 mg/kg时初产种鹅的受精率和孵化率最高，建议饲粮叶酸添加水平为1.00~1.25 mg/kg。这表明初产种鹅蛋的受精率和孵化率受饲粮中叶酸添加水平的影响，可能是叶酸添加水平影响了种鹅的生殖激素的分泌。本试验结果与前人研究结果基本一致，但是叶酸添加水平存在差异，是否与鹅种品种和饲养方式有关，还有待于进一步研究证实。
3.2 饲粮叶酸添加水平对初产种鹅蛋品质的影响Hebert等[14]研究表明，在大麦-豆粕型饲粮中添加不同水平(0、2、4、8、16、32、64、128 mg/kg)的叶酸，对蛋鸡的蛋重、采食量和料蛋比均无显著影响。Tactacan等[15]在小麦-豆粕型饲粮中分别添加10和100 mg/kg的叶酸饲喂蛋鸡21 d，结果发现添加10和100 mg/kg的叶酸对蛋鸡的蛋重和产蛋量均无显著影响。本试验结果表明，饲粮叶酸添加水平对初产种鹅蛋重、蛋形指数、蛋壳厚度、蛋白高度、蛋黄颜色和蛋黄比率影响不显著，蛋壳强度随叶酸添加水平的增加有增加趋势，说明饲粮添加适宜水平叶酸可以提高初产种鹅蛋的蛋壳强度。初产种鹅蛋的蛋壳强度的增加可能是叶酸影响了初产种鹅血清孕酮含量，孕酮不仅能够增加蛋壳厚度，而且可以增强蛋壳强度[16]。由二次拟合曲线得出，当饲粮叶酸添加水平为1.01 mg/kg时初产种鹅的蛋壳强度最大。
3.3 饲粮叶酸添加水平对初产种鹅血清生殖激素和抗氧化指标的影响Yang等[17]研究表明，随时间的变化各个阶段血清生殖激素含量不同，血清孕酮含量在四季鹅产蛋最高期达到最高[18]。夏伟光[7]等研究发现，随饲粮叶酸添加水平的提高，血清孕酮含量有升高趋势，且在饲粮叶酸添加水平为2.0 mg/kg时血清孕酮含量最高。本研究表明，初产种鹅饲粮添加叶酸可以提高血清孕酮含量，初产种鹅的产蛋量与血清孕酮含量有关。研究发现，孵化期3、11胚龄注射不同水平叶酸对肉仔鸡血浆白蛋白含量无显著影响，但是显著升高了血浆TP含量[10]。叶酸可显著降低小鼠血清MDA含量[19]，血清TP通过限制自由基的产生从而在机体内具有一定的抗氧化力[20]。饲粮添加15 mg/kg的叶酸可以显著提高山羊血清TP、白蛋白含量[21]。研究发现，如果机体内有大量的氧化自由基，会造成血清T-SOD活性下降，抗氧化能力下降，生成大量的MDA，造成机体的损伤[22]。因此血清MDA含量也可反映机体的抗氧化能力。GSH-Px是机体抗氧化能力指标之一[23]。本试验中，虽然饲粮叶酸添加水平对初产种鹅血清T-SOD和GSH-Px活性无显著影响，但血清T-SOD和GSH-Px活性有增加趋势。这可能是饲粮叶酸添加水平降低了初产种鹅血清MDA含量，从而影响了血清T-SOD和GSH-Px活性。饲粮添加叶酸提高了初产种鹅血清TP含量，血清TP在机体内有一定的抗氧化能力；饲粮添加叶酸降低了初产种鹅血清MDA含量，从而反映出初产种鹅的抗氧化能力随饲粮叶酸添加水平的增加而提高。根据二次拟合曲线，初产种鹅的抗氧化能力在饲粮叶酸添加水平为1.00~1.25 mg/kg时较大。这表明饲粮叶酸添加水平与初产种鹅抗氧化能力密切相关，叶酸对抗氧化能力的影响机理目前尚未明确，其有关分子调控机理有待于继续研究。
4 结论饲粮添加叶酸有利于提高初产种鹅的受精率、孵化率、蛋壳强度和抗氧化能力。初产种鹅的饲粮叶酸适宜添加水平为1.00~1.25 mg/kg。
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