2. 江西农业大学动物营养与饲料安全创新团队, 南昌 330045;
3. 江西农业大学林学院, 国家林草局木本香料(华东) 工程技术研究中心, 南昌 330045;
4. 新余市渝水区农业农村和粮食局, 新余 338000
2. Animal Nutrition and Feed Safety Innovation Team, Jiangxi Agricultural University, Nanchang 330045, China;
3. Woody Spice (East China) Engineering Technology Research Center of National Forestry and Grass Administration, Forestry College of Jiangxi Agricultural University, Nanchang 330045, China;
4. Agriculture, Rural and Grain Bureau of Yushui District, Xinyu City, Xinyu 338000, China
芳樟(Cinnamomum camphora var. linaloolifera Fujita.)为樟科(Lauraceae)樟属(Cinnamomum)常绿阔叶乔木,是我国重要的天然香料树种,其枝、叶、根中都富含精油,其中以叶中含量最高[1]。为了获取较高的芳樟枝叶生物量,便于人工采收作业,获取更大的经济效益,近些年我国已经大面积推广应用了矮化密植技术培育芳樟油用原料林——矮化芳樟人工林[2]。矮化芳樟枝叶在被大量用于精油提取的同时,脱油后产生的副产物——去油芳樟枝叶的处理也是一个问题。一直以来去油芳樟枝叶的处理方式主要有晒干后充当燃料、还田沤肥充当肥料,这些处理方式不仅造成资源的浪费,同时也会造成环境污染。研究表明,去油芳樟枝叶的干物质(DM)含量为40.50%,可溶性碳水化合物(WSC)含量为8.06%,粗蛋白质(CP)含量为15.22%,粗脂肪(EE)含量为5.63%,中性洗涤纤维(NDF)含量为55.38%,酸性洗涤纤维(ADF)含量为40.12%,淀粉(Starch)含量为3.22%,均在优良牧草的标准范围内[3],这为去油芳樟枝叶更具经济价值的利用提供了可能。在实际生产中,芳樟枝叶提炼精油受季节性的影响,春季和夏季的产量较多,加之水分含量较高,易变质腐败,加工、保存是去油芳樟枝叶饲料化利用必须要关注的问题。目前,去油芳樟枝叶主要通过自然晾晒的方法制作成饲料,但是自然晾晒容易造成营养物质的损失,且受天气条件的影响较大。一般来讲,对于牧草的加工方式有青贮、草粉、草颗粒、草饼等,这些方法均能有效地克服牧草季节性生长所带来的加工储存的限制。因此,本试验希望通过将去油芳樟枝叶进行人工干燥、天然干燥、制粒以及青贮4种加工方式,比较不同加工方式对取油芳樟枝叶饲料营养价值的影响,探讨去油芳樟枝叶适宜的加工、保存方式,以达到充分利用去油芳樟枝叶作为反刍动物粗饲料的目的。
康奈尔净碳水化合物-蛋白质体系(CNCPS)[4-5]是一种评价反刍动物饲料营养价值的方法,是一种基于瘤胃消化功能、微生物生长以及饲料消化规律建立起的反刍动物饲料评价体系[6]。同时结合体外发酵法[7]对各加工方式造成的差异性进行验证,为去油芳樟枝叶在饲料生产上的进一步有效利用提供理论依据。
1 材料与方法 1.1 试验材料去油芳樟枝叶来自江西抚州金溪县芳樟基地种植的矮化芳樟经高温水蒸气蒸馏法提取精油后的副产物,其营养成分检测结果:WSC含量为10.05%,CP含量为8.53%,EE含量为3.26%,NDF含量为51.21%,ADF含量为35.80%,Starch含量为5.02%。
1.2 试验设计及方法本试验共分成4个组,每组4个重复,具体分组及制作方法如下。
天然干燥组(对照组):将收集的去油芳樟枝叶自然晾干,晾干后用剪刀剪成2 cm左右,放入粉碎机中粉碎并过40目筛,于自封袋中保存待待测。
人工干燥组:将收集的去油芳樟枝叶用剪刀剪成2 cm左右小段后放入烘箱,调节温度为65 ℃,烘48 h,之后放入粉碎机中粉碎过并过40目筛,于自封袋中保存待待测。
颗粒饲料组:将人工干燥完粉碎后的去油芳樟枝叶按1 ∶ 1的比例与水进行混合,放入颗粒机中制成颗粒,之后将颗粒放入65 ℃烘箱中烘干48 h,过40目筛,于自封袋中保存待测。
青贮发酵组:将收集的去油芳樟枝叶用剪刀剪成2 cm左右小段,之后取500 g封装于1 L的青贮桶中,压实保证排尽桶内的空气,置于避光干燥的室温环境下进行45 d的青贮发酵,青贮结束后将青贮原料放入烘箱65 ℃烘干48 h,之后放入粉碎机中粉碎过并过40目筛,于自封袋中保存待测。
1.3 体外发酵将各组的烘干粉碎待测样品称取500 mg于事先烘干的100 mL培养瓶中,每组5个重复。按照Menke等[8]的方法配制人工唾液,配制好的人工唾液39 ℃水浴保温;瘤胃液取自3头带有永久瘤胃瘘管的锦江黄牛,于晨饲前分别从3头牛瘤胃背囊、背盲囊、腹囊、腹盲囊4个不同位点采集500 mL瘤胃液,混合均匀保存于事先39 ℃预热的保温瓶中,迅速转入实验室,4层纱布过滤瘤胃液,将39 ℃预热的人工唾液与瘤胃液按照2 ∶ 1的比例混合后,准确量取60 mL混合液体分装入培养瓶中,参照卢德勋[9]和程茂基[10]的方法连接体外培养装置,在39 ℃恒温水浴摇床中进行48 h振荡培养。培养结束后,立即测定培养液的pH,将培养瓶内滤渣全部转移至事先称重的尼龙网布(孔径200目)中,使用恒重干燥法测定体外干物质消化率(IVDMD),将滤液收集于离心管中-20 ℃保存,用于测定瘤胃发酵参数的氨态氮(NH3-N)、微生物蛋白(MCP)以及挥发性脂肪酸(VFA)浓度。
1.4 测定方法参照Van Soest等[11]洗涤纤维法,采用全自动纤维分析仪(ANKOMA200i Fiber Analyzer,美国ANKOM公司)和滤袋(F57,美国ANKOM公司)测定NDF、ADF、酸性洗涤木质素(ADL)及中性洗涤不溶蛋白(DNIP)含量;Starch含量采用试剂盒测定,试剂盒由南京建成生物工程研究所提供;采用索氏提取法测定EE含量;采用凯氏定氮法测定CP含量;采用蒽酮法[12]测定WSC含量;采用苯酚次氯酸钠比色法[13]测定NH3-N浓度;采用试剂盒测定MCP浓度,试剂盒由南京建成生物工程研究所提供;采用Waters-Baseline520型高效液相色谱仪测定VFA浓度。
1.5 CNCPS中碳水化合物(CHO)组分计算CNCPS将饲料的CHO分为快速降解碳水化合物(CA)、中速降解碳水化合物(CB1)、慢速降解碳水化合物(CB2,可利用纤维)和不可降解碳水化合物(CC,不可利用纤维)。相关组分计算公式如下:
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式中:NDIP为酸性洗涤不溶蛋白;NSC为非结构性碳水化合物。
1.6 统计分析各项测定数据先采用Excel 2019进行初步整理,之后采用SPSS 26.0进行单因素方差分析(one-way ANOVA),当存在显著性时进一步采用Duncan氏法进行多重比较,结果用平均值±标准误表示,P < 0.05表示差异显著。
2 结果 2.1 不同加工方式对去油芳樟枝叶营养成分的影响由表 1可知,天然干燥组的Ash含量显著低于其余各组(P < 0.05);各组之间EE含量无显著差异(P>0.05);天然干燥组的CP含量显著低于其余各组(P < 0.05),颗粒饲料组的CP含量显著高于其余各组(P < 0.05);天然干燥组的NDF、ADF和ADL含量显著高于其余各组(P < 0.05),颗粒饲料组的NDF、ADF和ADL含量显著低于其余各组(P < 0.05);天然干燥组的酸性洗涤不溶蛋白(NDIP)含量显著低于其余各组(P < 0.05),颗粒饲料组的NDIP含量显著高于其余各组(P < 0.05);天然干燥组的Starch含量显著低于其余各组(P < 0.05);天然干燥组的WSC含量显著低于其余各组(P < 0.05),青贮发酵组的WSC含量显著高于其余各组(P < 0.05)。
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表 1 不同加工方式对去油芳樟枝叶营养成分的影响(干物质基础) Table 1 Effects of different processing methods on nutritional components of degreasing camphor branches and leaves (DM basis) |
由表 2可知,天然干燥组的CHO含量显著高于其余各组(P < 0.05),颗粒饲料组的CHO含量显著低于其余各组(P < 0.05);天然干燥组的CA、CB1和非结构性碳水化合物(NSC)含量显著低于其余各组(P < 0.05),颗粒饲料组的CA、CB1和NSC含量显著高于其余各组(P < 0.05);天然干燥组的CB2含量显著低于其余各组(P < 0.05);天然干燥组的CC含量显著高于其余各组(P < 0.05),颗粒饲料组的CC含量显著低于其余各组(P < 0.05)。
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表 2 不同加工方式对去油芳樟枝叶CNCPS中CHO组分的影响 Table 2 Effects of different processing methods on CHO component in CNCPS of degreasing camphor branches and leaves |
由表 3可知,各组之间体外发酵液pH无显著差异(P>0.05);天然干燥组的IVDMD显著低于其余各组(P < 0.05),颗粒饲料组的IVDMD显著高于其余各组(P < 0.05);天然干燥组的NH3-N浓度显著低于其余各组(P < 0.05);天然干燥组和颗粒饲料组的MCP浓度显著低于其余各组(P < 0.05),人工干燥组的MCP浓度显著高于其余各组(P < 0.05);天然干燥组的AA和VA浓度显著低于其余各组(P < 0.05),且颗粒饲料组的AA和VA浓度显著高于其余各组(P < 0.05);天然干燥组的IBA浓度显著低于其余各组(P < 0.05),颗粒饲料组的IBA浓度显著高于其余各组(P < 0.05);天然干燥组的PA、BA、IVA以及总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度均显著低于其余各组(P < 0.05);天然干燥组的乙酸/丙酸(A/P)值显著高于其余各组(P < 0.05)。
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表 3 不同加工方式对去油芳樟枝叶体外发酵参数的影响 Table 3 Effects of different processing methods on in vitro fermentation parameters of degreasing camphor branches and leaves |
与天然干燥组相比,人工干燥组、颗粒饲料组以及青贮发酵组的EE和CP含量均不同程度地提高,这与徐生阳等[14-15]的研究结果一致,EE作为饲料中重要组成成分,能够为机体提供大部分的能量,用于各项生命活动[16]。NDF与ADF是经过酸性洗涤溶液与中性洗涤溶液充分分解后剩余的物质,其含量与反刍动物对粗饲料的消化率有很大的关联,NDF、ADF含量越高,表明该饲料中可被消化吸收的部分越少[17]。ADL即使被反刍动物瘤胃微生物降解后仍不能被机体消化吸收[18],与天然干燥组相比,其余各组的ADL含量均降低,其中颗粒饲料组的ADL含量最低。青贮发酵组的WSC含量显著高于其余各组,可能是因为在天然干燥、人工干燥和制粒过程中,去油芳樟枝叶的青绿汁液大量流失,而青贮发酵能较好地保存去油芳樟枝叶的青绿汁液,使WSC被较多地保留下来。本试验结果表明,相比于天然干燥,人工干燥、制粒以及青贮均能提高去油芳樟枝叶的CP、Starch和WSC含量, 同时降低NDF、ADF和ADL的含量,其中制粒的效果最好,表明制粒对提高去油芳樟枝叶营养价值的效果较好。
3.2 不同加工方式对去油芳樟枝叶CNCPS中CHO组分的影响CNCPS体系在牧草营养价值评估中已得到大量的应用[19-21]。植物性饲料中CHO是反刍动物的主要能量来源,CHO对反刍动物的营养价值主要取决于NSC含量和结构性碳水化合物(SC)在瘤胃中降解程度[22]。NSC为CHO中可被瘤胃微生物快速降解的糖类,其含量越高则CC含量越低[23],CC主要为植物性饲料中植物细胞细胞壁的成分,因此其不能被机体所利用,其含量与营养成分中ADL含量有关[17]。本试验中,与天然干燥组相比,其余各组CC含量均显著降低,且颗粒饲料组CC含量最低,这与其营养成分中ADL含量最低相吻合。CA是CHO中可被快速降解的部分,CB1是CHO中可被中速降解的部分,CA和CB1含量均是在制粒后显著增加。CA、CB1、CB2、NSC含量均是在颗粒饲料组中最高,根据CNCPS对CHO的分类可知,CA、CB1、CB2、NSC均为较易被瘤胃微生物降解的部分,因此我们推测,颗粒饲料组在反刍动物体内会有较其他组更优的消化率,这点在体外发酵试验中得到了验证。
3.3 不同加工方式对去油芳樟枝叶体外发酵参数的影响当瘤胃pH在一个合适的范围内时,瘤胃内丰富的瘤胃微生物可以将CHO降解为VFA等成分,从而为机体供应能量。有研究表明,当反刍动物瘤胃内正常pH为5.5~7.5时,瘤胃微生物可以正常生长[24]。本试验各组发酵液pH在6.66~6.80,均在合理范围内。IVDMD可以反映瘤胃微生物对采食的饲料的降解能力的强弱[25]。王莹[26]研究了内蒙古地区13种有代表性的牧草,发现其IVDMD为25.88%~76.62%。本研究中,各加工方法处理后的去油芳樟枝叶体的IVDMD均在该范围中。与天然干燥组相比,其余各组的IVDMD均显著提高,其中颗粒饲料组的IVDMD最高,这与其组分含量中CA、CB1、CB2、NSC含量差异结果一致。可能是制粒过程中添加的水分以及制粒机器运行中温度的升高使得原料的结构与质地发生了变化,使得原本不易消化的物质得以消化吸收,从而提高了其营养物质消化率,这与于忠升等[27]的研究结果相符。对应的,IVDMD的提高使得NH3-N、MCP以及VFA浓度均有不同程度地提高,这对反刍动物的生长是有益的。瘤胃微生物能够利用NH3-N合成MCP供机体吸收,MCP浓度能够反映出反刍动物瘤胃微生物对NH3-N的利用能力的大小。研究表明,反刍动物瘤胃微生物的正常生长适宜NH3-N浓度为5~28 mg/dL[28-30],本试验中各组的NH3-N浓度均在这个范围内。有体外研究发现,A/P值与饲料氮的沉积能力有关;同时熊本海等[31]和Blaxter等[32]的研究发现,瘤胃内AA浓度的升高会降低代谢能转化为体沉积能的效率,PA浓度的升高可提高机体饲料氮的沉积能力和增加胰高血糖素的浓度,A/P值与代谢能的利用呈负相关。本试验中,相较于天然干燥组,其余各组AA和PA浓度均升高,其中颗粒饲料组的AA和PA浓度最高。同时人工干燥、制粒和青贮处理均降低了A/P值,且青贮发酵组的A/P值最低。
TVFA含量反映了饲料在瘤胃内发酵的情况,是反刍动物生长发育的主要能量来源,反刍动物体内碳代谢碳流量的2/3是由瘤胃发酵产生的VFA提供的,达到机体总能需要量的70%~80%[33]。本试验结果表明,相比于天然干燥,人工干燥、制粒以及青贮处理均能提高去油芳樟枝叶的IVDMD以及NH3-N、MCP、TVFA浓度,且制粒处理的效果最佳。本研究中,天然干燥组的TVFA含量最低,而A/P值却最高,颗粒饲料组的TVFA含量最高,但是A/P值却低于天然干燥组,说明将去油芳樟枝叶制作成颗粒饲料不仅可以提高去油芳樟枝叶的消化利用率,提高发酵液中TVFA浓度,还改善了瘤胃体外发酵培养的瘤胃发酵模式,促进其向丙酸型发酵转变,提高反刍动物的能量利用效率。由此可以说明,制粒和青贮处理均能较好地提高去油芳樟枝叶的营养价值。
4 结论综合常规营养成分、CNCPS中CHO组分以及体外发酵参数的研究结果可知,人工干燥、制粒以及青贮处理均能提高去油芳樟枝叶的营养价值,且以制粒处理效果最优。
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