2. 广西大学农学院, 南宁 530000
2. College of Agriculture, Guangxi University, Nanning 530000, China
甘蔗尾是甘蔗工业的副产物之一,由叶片、叶鞘和未成熟的部分甘蔗茎组成,它占甘蔗生物量的15%~25%,占甘蔗产量的25%~30%,水溶性碳水化合物(water-soluble carbohydrates,WSC)含量丰富,含消化能约5.6 MJ/kg DM,含粗蛋白质(CP)3%~6%,并含有20多种氨基酸、多酚化合物以及叶酸、烟酸等维生素,在青贮饲料方面有很大的应用前景[1]。青贮是一种通过保持厌氧条件和酸性环境来保存饲料的方法,3~4周的青贮时间足以进行青贮发酵,玉米青贮饲料的完全发酵需要4个月[2],青贮6个月会发生蛋白质水解导致营养物质损失[3],因此,探究中长期青贮对青贮饲料品质的影响有重要意义。WSC是青贮过程中的发酵底物,是决定青贮品质的重要因素之一。青贮过程中乳酸菌将WSC转化为乳酸、乙酸等有机酸,随后酸性环境促进青贮发酵,抑制不良微生物的生长繁殖。WSC含量和自然产生的活性乳酸菌共同决定了青贮早期pH的下降速度,这对稳定青贮饲料的生产非常重要。甘蔗根据蔗糖分含量分为高糖、中糖、低糖品种,高糖品种蔗糖分含量在15.0%以上,中糖品种蔗糖分含量在12.5%~15.0%,低糖品种蔗糖分含量在12.5%以下[4],不同蔗糖分含量甘蔗的甘蔗尾WSC含量不同,这可能进一步影响青贮品质。Adesogan等[5]研究发现,增加青贮原料中WSC含量能够提高有氧稳定性,并且能够改善饲料的青贮品质[6],但高WSC含量青贮饲料有氧稳定性较差[7]。Davies等[8]研究表明,高WSC含量黑麦草青贮90 d时pH低于3.7且青贮品质始终优于低WSC含量黑麦草和三叶草混合青贮原料的青贮品质。崔卫东等[9]研究发现,增加青贮原料中WSC含量导致青贮中乳酸、乙酸含量升高,青贮评分等级升高。大量研究也证实,在相同处理下高WSC含量牧草青贮过程中乳酸产生速度更快,蛋白质不易发生水解[10-11]。Ávila等[12]研究发现,在高糖全株甘蔗青贮过程中存在大量酒精酵母。广西糖料甘蔗种植广泛,富含WSC的甘蔗尾资源丰富。甘蔗尾收获期为冬季,玉米秸秆等粗饲料收获期为夏季,因此甘蔗尾青贮可以缓解广西地区冬季到夏季粗饲料短缺的问题,在实际生产中甘蔗尾青贮时间会长达4~6个月。目前,富含WSC的青贮原料长时间青贮后发酵品质变化有待研究,针对广西地区不同WSC含量甘蔗尾青贮品质差异的研究未见报道。因此,对广西地区不同WSC含量的甘蔗尾进行青贮,探究中长期青贮对不同WSC含量甘蔗尾青贮品质的影响,可为广西地区青贮饲料制备和提高甘蔗尾利用率提供理论依据和实践经验。
1 材料与方法 1.1 试验材料2020年1月11日在广西大学扶绥试验基地牧草良种繁殖场收获3种处于成熟期的不同糖分含量甘蔗的尾叶,分别为低糖品种桂糖15-6049、中糖品种ROC-22、高糖品种GUC-34,其WSC含量实测值分别为143.35、177.95、258.42 g/kg DM。3种甘蔗尾原料的化学组成及主要微生物数量见表 1。
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表 1 不同WSC含量甘蔗尾青贮前化学组成及主要微生物数量 Table 1 Chemical composition and main microbial number of sugarcane tops with different WSC contents before silage |
用铡草机分别将3种WSC含量的甘蔗尾切割为2~3 cm,各自混合均匀,分装于45个2.5 L(内径15 cm×高22 cm)圆柱形带外盖的耐压聚乙烯塑料瓶中,压实,依次用实验室封口膜和聚乙烯薄膜对瓶盖缝隙处进行密封,室温避光放置。每个塑料桶的压实密度在600 kg/m3 FM以上。分别在青贮的第125天、第155天、第185天开罐取样分析发酵品质。分别在青贮125、155、185 d后进行有氧暴露,采样时间为开罐后2、4、6、8 d。
1.3 指标测定及方法 1.3.1 常规营养成分含量测定干物质(DM)含量参考张丽英[13]的方法测定,干物质含量测定完成后将样品用粉碎机粉碎至过40目筛,存于塑封袋中用于其他常规营养成分测定。WSC含量采用硫酸-蒽酮比色法[14]测定;粗蛋白质含量采用Gerhardt全自动凯氏定氮仪测定;中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)含量根据Van Soest等[15]提出的方法测定;粗纤维(CF)含量根据GB/T 6434—2006[16]中的方法测定。缓冲容量(BC)根据Playne等[17]提出的盐酸-氢氧化钠法测定;半纤维素(HC)含量为中性洗涤纤维含量与酸性洗涤纤维含量的差值。
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制备发酵液:青贮甘蔗尾开罐后,称取20 g青贮样品,放入180 mL已灭菌的林格氏液中,混合均匀,充分浸泡,用双层纱布过滤并收集滤液,用离心管进行分装,用于后续发酵参数的测定以及微生物计数。
使用pH计(型号:DELTA 320)在过滤滤液后立即测定pH;采用苯酚-次氯酸盐法[19]测定氨态氮含量;采用对羟基联苯法[20]测定乳酸含量;乙酸、丙酸、丁酸和乙醇含量使用Agilent-7890A气相色谱仪测定,毛细管色谱柱为HP-INNOwax(30.0 m×320 μm×0.5 μm,Catalog No.:19091N-213),氮气为载气[21]。
1.3.3 青贮品质评定参照郭旭生等[22]介绍的弗氏评分法进行青贮品质评定,80分以上为优等,80~61分为良好,60~41分为尚可,40~21分为中等,20~0分为劣等。
1.3.4 微生物计数采用平板计数法测定乳酸菌(LAB)、肠杆菌(EB)、酵母菌、霉菌数量。
1.4 数据统计数据使用Excel 2010整理,微生物数量数据转换为lg(CFU/g FM)。采用SPSS 19.0软件中的一般线性模型(GLM)对WSC含量、青贮时间进行双因素方差分析,采用Duncan氏法进行多重比较,并用平均值和均值标准误(SEM)表示,显著水平设为P < 0.05,当不同因素间存在显著的交互作用时讨论组间差异。
2 结果与分析 2.1 青贮时间对不同WSC含量甘蔗尾青贮常规营养成分含量的影响由表 2可知,青贮时间与WSC含量的交互作用对除酸性洗涤纤维、半纤维素含量之外的其他指标均有显著影响(P < 0.05)。在青贮时间方面,青贮125 d组干物质、WSC、粗纤维含量显著低于青贮155和185 d组(P < 0.05),而粗蛋白质、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维含量以及干物质损失率显著高于青贮155和185 d组(P < 0.05)。在WSC含量方面,低WSC含量组粗灰分含量、干物质损失率显著高于中和高WSC含量组(P < 0.05)。
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表 2 青贮时间对不同WSC含量甘蔗尾青贮常规营养成分含量的影响 Table 2 Effects of ensiling time on conventional nutrient contents of sugarcane tops silage with different WSC contents |
由表 3可知,青贮时间与WSC含量的交互作用对除乳酸菌数量之外的其他指标均有显著影响(P < 0.05)。在青贮时间方面,青贮125 d组乳酸含量、乳酸菌数量显著高于青贮155和185 d组(P < 0.05)。在WSC含量方面,低WSC含量组氨态氮、丁酸含量显著高于中和高WSC含量组(P < 0.05)。各组均未检测到霉菌。
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表 3 青贮时间对不同WSC含量甘蔗尾青贮发酵参数和微生物数量的影响 Table 3 Effects of ensiling time on fermentation parameters and microbial number of sugarcane tops silage with different WSC contents |
采用弗氏评分法[22],利用乳酸、乙酸和丁酸占总酸的比例对不同WSC含量和青贮时间的处理进行青贮品质评定,结果(表 4)显示,随着青贮时间的增加,低、中、高WSC含量甘蔗尾青贮品质评定等级均逐渐下降,以高WSC含量甘蔗尾青贮125 d时品质最佳。
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表 4 青贮时间对不同WSC含量甘蔗尾青贮品质评定的影响 Table 4 Effects of ensiling time on quality assessment of sugarcane tops silage with different WSC contents |
由表 5可知,有氧暴露时间对各组氨态氮、乳酸含量以及pH均有显著影响(P < 0.05),青贮时间与WSC含量的交互作用对有氧暴露过程中氨态氮、乳酸含量以及pH均有显著影响(P < 0.05)。有氧暴露第2天,在青贮时间方面,青贮125 d组pH显著低于青贮155和185 d组(P < 0.05);在WSC含量方面,低WSC含量组氨态氮含量显著高于中和高WSC含量组(P < 0.05),乳酸含量显著低于中和高WSC含量组(P < 0.05)。有氧暴露第4天,在青贮时间方面,青贮125 d组乳酸含量显著高于青贮155和185 d组(P < 0.05);在WSC含量方面,中WSC含量组pH和氨态氮含量显著高于高WSC含量组(P < 0.05),低WSC含量组乳酸含量显著高于中和高WSC含量组(P < 0.05)。有氧暴露第8天,在WSC含量方面,高WSC含量组乳酸和氨态氮含量显著低于中和低WSC含量组(P < 0.05)。
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表 5 青贮时间对不同WSC含量甘蔗尾青贮有氧暴露过程中发酵参数的影响 Table 5 Effects of ensiling time on fermentation parameters during aerobic exposure of sugarcane tops silage with different WSC contents |
由表 6可知,有氧暴露时间对各组乙酸、丁酸含量有显著影响(P < 0.05),青贮时间与WSC含量的交互作用对有氧暴露过程中丙酸、丁酸、乙醇含量有显著影响(P < 0.05)。有氧暴露第2天,在青贮时间方面,青贮125 d组丁酸含量显著低于青贮155和185 d组(P < 0.05);在WSC含量方面,高WSC含量组乙酸含量显著高于中和低WSC含量组(P < 0.05),低WSC含量组丁酸含量显著高于中和高WSC含量组(P < 0.05)。有氧暴露第4天,在青贮时间方面,青贮125 d组乙酸含量显著高于青贮155和185 d组(P < 0.05),青贮185 d组丁酸含量显著高于青贮125和155 d组(P < 0.05)。有氧暴露第6天,在WSC含量方面,高WSC含量组丙酸、丁酸含量显著高于中和低WSC含量组(P < 0.05)。
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表 6 青贮时间对不同WSC含量甘蔗尾青贮有氧暴露过程中挥发性有机物含量的影响 Table 6 Effects of ensiling time on volatile organic compound contents during aerobic exposure of sugarcane tops silage with different WSC contents g/kg DM |
由表 7可知,有氧暴露时间对各组乳酸菌、酵母菌、霉菌数量有显著影响(P < 0.05),青贮时间与WSC含量的交互作用对有氧暴露过程中肠杆菌数量有显著影响(P < 0.05)。有氧暴露第2天,在青贮时间方面,青贮185 d组乳酸菌数量显著低于青贮125和155 d组(P < 0.05);在WSC含量方面,高WSC含量组酵母菌、霉菌数量显著高于中和低WSC含量组(P < 0.05)。有氧暴露第4天,在青贮时间方面,青贮185 d组乳酸菌数量显著低于青贮125和155 d组(P < 0.05);在WSC含量方面,高WSC含量组霉菌数量显著高于中和低WSC含量组(P < 0.05)。有氧暴露第6天,在青贮时间方面,青贮155 d组乳酸菌数量显著高于青贮125和185 d组(P < 0.05),肠杆菌数量显著高于青贮125和155 d组(P < 0.05);在WSC含量方面,低WSC含量组乳酸菌数量显著高于中和高WSC含量组(P < 0.05),高WSC含量组霉菌、酵母菌数量显著高于中和低WSC含量组(P < 0.05)。有氧暴露第8天,在WSC含量方面,低WSC含量组乳酸菌数量显著高于中和高WSC含量组(P < 0.05),肠杆菌数量显著低于中和高WSC含量组(P < 0.05),高WSC含量组霉菌、酵母菌数量显著高于中和低WSC含量组(P < 0.05)。
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表 7 青贮时间对不同WSC含量甘蔗尾青贮有氧暴露过程中微生物数量的影响 Table 7 Effects of ensiling time on microbial number during aerobic exposure of sugarcane tops silage with different WSC contents |
足够的WSC含量对于生产高品质青贮饲料是必不可少的。在生产青贮饲料时,青贮原料WSC含量需为60 g/kg DM以上[23]。李国栋等[24]认为,青贮原料干物质含量达到200 g/kg FW以上才能保证青贮发酵成功进行。本试验中,3种甘蔗尾青贮原料中干物质含量均超过200 g/kg FW,WSC含量分别143.35、177.95、258.42 g/kg DM,达到良好青贮所需的WSC含量最低水平。青贮时间是影响青贮品质的重要因素之一,青贮饲料营养成分随着青贮时间变化而变化[25]。反刍动物的消化率和饲料饲用价值随酸性洗涤纤维含量的升高而降低[26]。本试验中,青贮125 d组酸性洗涤纤维含量低,表明饲用价值较高。吴水金等[27]研究了青贮时间对香茅青贮品质的影响,发现青贮90 d时感官评价最佳,饲料营养成分损失较少,青贮品质最好。本试验中,随着青贮时间的增加,甘蔗尾青贮相对饲喂价值逐渐降低,青贮125 d时氨态氮含量较高,干物质损失率大,营养物质损失最大。青贮原料中较高的WSC含量为乳酸菌发酵增加了底物,乳酸菌利用WSC产生大量的乳酸,导致pH迅速下降,限制了蛋白质水解速度[28]。Hassanat等[29]报道了饲料原料WSC含量对青贮期间蛋白质水解有抑制作用。本试验中,高WSC含量甘蔗尾青贮氨态氮含量低,表明高WSC抑制了植物蛋白酶的活性,抑制了蛋白质水解速度。反刍动物对青贮饲料中粗灰分的利用率低,因此粗灰分含量越低青贮品质越好。本试验中,青贮前后高WSC含量甘蔗尾粗灰分含量始终低于中、低WSC含量甘蔗尾,表明高WSC含量甘蔗尾青贮品质较好;随着青贮时间的增加,粗灰分含量小幅升高后保持稳定,表明随青贮时间的增加青贮饲料可利用营养成分降低。
3.2 青贮时间对不同WSC含量甘蔗尾青贮发酵参数和微生物数量的影响青贮饲料的pH是衡量青贮内部环境酸度的指标,表明WSC发酵为有机酸,主要为乳酸、乙酸和丙酸的程度。Davies等[8]研究表明,WSC含量低的牧草青贮品质较差,核酮糖-1, 5-二磷酸羧化酶活性较低,氨态氮含量较高。本试验中,随着青贮时间的增加,3种甘蔗尾青贮pH逐渐升高,但是均保持在3.82以下,青贮125、155、185 d时高WSC含量组pH始终低于中WSC含量组。氨态氮和乙醇含量分别反映青贮过程中蛋白质降解和能量浪费的程度,氨态氮含量的增加导致青贮饲料的缓冲容量增加,从而降低了pH的下降速度[30]。本试验中,低WSC含量甘蔗尾青贮原料缓冲容量较高,且青贮后氨态氮含量高于中、低WSC含量甘蔗尾,这与前人研究结果相同,并且在青贮过程中,饲料中霉菌和酵母菌的数量增加,这可能是乙醇含量增加的原因之一。此外,异源发酵乳酸菌也有可能表现出高的活性,将可利用底物转化为乙醇[30]。青贮饲料中有机酸的含量在一定程度上决定着青贮品质的优劣,乳酸与丁酸含量负相关性越大青贮品质越好[31]。梁辛等[32]发现,甘蔗尾青贮过程中乳酸和乙酸的含量随青贮时间的增加而增加,发酵类型以异质型发酵为主。本试验中,青贮125 d时乳酸含量较高,丁酸含量较低,表明3种甘蔗尾青贮125 d时青贮品质较好。丁酸是由不良微生物产生的,能分解氨基酸,造成营养损失。本试验中,丁酸含量随青贮时间的增加而增大,表明长时间青贮易造成营养物质损失。
3.3 青贮时间对不同WSC含量甘蔗尾青贮有氧暴露过程中发酵参数和微生物数量的影响青贮保存能量和营养物质的关键是维持酸性和厌氧的环境,然而,当青贮饲料有氧暴露后,空气促进了好氧微生物的生长进而消耗青贮饲料中的有机底物并导致饲料变质[33]。WSC含量是决定青贮饲料有氧稳定性的主要因素之一。在有氧暴露过程中,WSC可以为酵母菌、霉菌等好氧微生物的生长繁殖提供可利用底物,造成营养物质损失,因此,青贮饲料有氧稳定性会随着WSC含量的升高而降低[34]。本试验中,有氧暴露过程中,高WSC含量甘蔗尾青贮酵母菌和霉菌数量高于中、低WSC含量甘蔗尾青贮,表明充足的发酵底物会为酵母菌和霉菌的生长提供有利条件,使有氧稳定性降低。邱小燕等[35]研究发现,向秸秆中添加糖蜜青贮35 d后,WSC和乳酸含量相比于对照组升高,但有氧稳定性降低。有氧变质通常由酵母菌引发,它将WSC和有机酸氧化成二氧化碳和水,使pH和温度升高,为霉菌等不良微生物的生存创造了有利条件。本试验中,在有氧暴露第2天,不同WSC含量甘蔗尾青贮酵母菌数量均有所增加,乳酸含量降低,导致pH增加;在有氧暴露第4天,除青贮125 d高WSC含量甘蔗尾青贮外,其他各组pH升至4.49以上,各组均检测到霉菌。在有氧暴露的初始阶段,温度和pH的上升促进了氨态氮的挥发,随着蛋白质逐渐降解,氨态氮含量增加并转化为硝酸盐氮[36],一些微生物如肠杆菌可以将硝酸盐氮转化为亚硝酸盐氮和二氧化氮,导致氮损失[37]。本试验中,随着有氧暴露时间的增加,氨态氮含量、肠杆菌数量出现波动性变化,且高WSC含量甘蔗尾青贮氨态氮含量低于中、低WSC含量甘蔗尾青贮。在有氧暴露后,乙酸可以由醋酸菌产生,使得乙酸不会被消耗完全[37],并且低水平的抗真菌有机酸乙酸和丙酸表明了青贮饲料的有氧不稳定性[38-39]。本试验中,乙酸含量在有氧暴露过程中呈降低趋势,在有氧暴露第8天,高WSC含量甘蔗尾青贮乙酸、丙酸含量低,表明有氧稳定性降低。
4 结论本试验条件下,不同WSC含量甘蔗尾青贮125 d时品质最佳。不同WSC含量甘蔗尾青贮品质存在差异,从营养物质损失来看,低WSC含量甘蔗尾青贮>中WSC含量甘蔗尾青贮>高WSC含量甘蔗尾青贮。高WSC含量甘蔗尾发酵后品质较好,但在有氧暴露过程易发生变质。
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