瘤胃液、血浆及牛奶中奇链支链脂肪酸含量与其前体物含量的相关性

引用本文

孙玲玲, 高胜涛, 马露, 沈旖帆, 温万, 卜登攀. 瘤胃液、血浆及牛奶中奇链支链脂肪酸含量与其前体物含量的相关性[J]. 动物营养学报, 2022, 34(6): 3645-3656.

SUN Lingling, GAO Shengtao, MA Lu, SHEN Yifan, WEN Wan, BU Dengpan. Correlation between Content of Odd- and Branched-Chain Fatty Acids in Rumen Fluid, Plasma and Milk and Their Precursors Content[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2022, 34(6): 3645-3656.

瘤胃液、血浆及牛奶中奇链支链脂肪酸含量与其前体物含量的相关性

孙玲玲¹ , 高胜涛¹ , 马露^1,2 , 沈旖帆¹ , 温万³ , 卜登攀^1,2

1. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 动物营养学国家重点实验室, 北京 100193;
2. 中国农业科学院与世界农用林业中心农用林业与可持续畜牧业联合实验室, 北京 100193;
3. 宁夏畜牧工作站, 银川 750001

收稿日期: 2021-11-14

基金项目: 宁夏回族自治区重点研发计划项目(2021BEF02018);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2020-YWF-YB-07);中国农业科学院科技创新工程(ASTIP-IAS07-1);奶牛产业技术体系北京市创新团队(BAIC06-2021)

作者简介: 孙玲玲(1993—), 女, 黑龙江哈尔滨人, 博士研究生, 从事反刍动物营养研究。E-mail: sunlingling114289@163.com.

通信作者: 卜登攀, 研究员, 博士生导师, E-mail: burdenpan@126.com.

摘要: 本试验旨在探究瘤胃中合成奇链支链脂肪酸(OBCFA)的前体物与瘤胃液、血浆及牛奶中OBCFA含量的相关性。选择体重、胎次、泌乳日龄和产奶量相近的健康荷斯坦奶牛27头, 所有奶牛饲养在同一圈舍中饲喂相同饲粮4周, 于最后3 d采集奶牛的瘤胃液、血液及牛奶样品, 分别测定瘤胃液中支链氨基酸(BCAA)、挥发性脂肪酸(VFA)及OBCFA含量以及血浆、牛奶中OBCFA含量。结果表明: 1)瘤胃液中丙酸和戊酸含量与奇链脂肪酸含量的相关性较弱, 瘤胃液中支链VFA和BCAA均能在瘤胃液中找到与之具有显著(P < 0.05)或极显著(P < 0.01)相关关系的OBCFA, 以上相关关系多属于中等强度相关。2)瘤胃液中丙酸和戊酸含量与血浆中十七烷酸(n-17 ∶ 0)含量呈显著正相关(P < 0.05), 瘤胃液中支链VFA和BCAA均能在血浆中找到与之具有显著(P < 0.05)或极显著(P < 0.01)相关关系的OBCFA, 以上相关关系多属于弱相关或中等强度相关。3)瘤胃液中丙酸含量与牛奶中奇链脂肪酸含量无显著相关性(P>0.10), 而瘤胃液中戊酸含量与牛奶中n-17 ∶ 0含量趋于显著正相关(P < 0.10)。瘤胃液中支链VFA和BCAA与牛奶中OBCFA存在较弱的相关关系。4)瘤胃液与牛奶中的OBCFA含量具有中等强度的相关关系。由此可见, 改变瘤胃中合成OBCFA前体物的含量是一种提高牛奶中OBCFA含量的潜在营养调控策略。

关键词: 奶牛奇链支链脂肪酸支链氨基酸挥发性脂肪酸相关性

Correlation between Content of Odd- and Branched-Chain Fatty Acids in Rumen Fluid, Plasma and Milk and Their Precursors Content

SUN Lingling¹ , GAO Shengtao¹ , MA Lu^1,2 , SHEN Yifan¹ , WEN Wan³ , BU Dengpan^1,2

1. State Key Laboratory of Animal Nutrition, Institute of Animal Science, Chinese Academia of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China;
2. Chinese Academy of Agricultural Sciences and World Agroforestry Center Joint Lab on Agroforestry and Sustainable Animal Husbandry, Beijing 100193, China;
3. Animal Husbandry Extension Station, Yinchuan 750001, China

Corresponding author: BU Dengpan, professor, E-mail: burdenpan@126.com.

Abstract: This experiment aimed to explore the correlation between the synthetic precursors of odd- and branched-chain fatty acids (OBCFA) in rumen and the content of OBCFA in rumen fluid, plasma and milk. Twenty-seven healthy Holstein dairy cows with similar body weight, parity, lactation age and milk yield were selected, all cows were kept in the same house and fed the same diet for 4 weeks. The rumen fluid, blood and milk samples of the cows were collected on the last 3 days, and the contents of branched-chain amino acids (BCAA), volatile fatty acids (VFA) and OBCFA in rumen fluid and the content of OBCFA in plasma and milk were determined. The results showed as follows: 1) the correlation between propionic acid and valeric acid contents and odd-chain fatty acids content in rumen fluid was weak, both branched-chain VFA and BCAA in rumen fluid could find the OBCFA in rumen fluid with significant (P < 0.05) or extremely significant (P < 0.01) correlation in rumen fluid, and the above correlations were mostly medium-strength correlations. 2) The contents pf propionic acid and valeric acid in rumen fluid were significantly positively correlated with plasma n-heptadecanoic acid (n-17:0) content, both branched chain VFA and BCAA in rumen fluid could find the OBCFA in plasma with significant (P < 0.05) or extremely significant (P < 0.01) correlation in the plasma, and the above correlations were mostly weak or moderately strong. 3) The content of propionic acid in rumen fluid and the content of odd-chain fatty acids in milk were not significant correlation (P>0.10), and the content of valeric acid in rumen fluid and the content of n-17:0 in milk tended to be significantly positively correlated (P < 0.10). There was a weak correlation between the contents of branched-chain VFA and BCAA in rumen fluid and the content of OBCFA in milk. 4) There was a moderately strong correlation of content of OBCFA in rumen fluid and milk. In conclusion, changing the content of synthetic OBCFA precursors in rumen is a potential nutritional regulation strategy to increase the content of OBCFA in milk.

Key words: dairy cows odd- and branched-chain fatty acids branched-chain amino acids volatile fatty acids correlation

奇链支链脂肪酸(odd- and branched-chain fatty acids，OBCFA)是一类在植物中含量很少^[1]，普遍存在于牛、羊的乳脂和脂肪组织中的脂肪酸^[2]。牛奶中OBCFA主要来自于离开瘤胃的微生物的膜脂^[3]，其含量常被用来预测瘤胃的发酵功能，如瘤胃挥发性脂肪酸(volatile fatty acids，VFA)^[4]和微生物蛋白(microbial protein，MCP)^[5]产量的预测等。有研究表明，支链脂肪酸(branched-chain fatty acids，BCFA)包括异构十四烷酸(iso-tetradecanoic acid，iso-14∶0)、异构十五烷酸(iso-pentadecanoic acid，iso-15∶0)和异构棕榈酸(iso-hexadecanoic acid，iso-16∶0)等，均具有抑制癌细胞脂肪酸合成的功效^[6]。同时，流行病学研究表明，血浆中奇链脂肪酸(odd-chain fatty acids，OCFA)的含量与降低冠心病和Ⅱ型糖尿病的发病风险有关^[7-8]。因此，通过营养调控手段生产富含OBCFA的功能性乳制品受到越来越多研究学者的关注。

牛奶中OBCFA的含量并不是恒定的，受到许多因素的影响，饮食是影响乳脂中OBCFA含量的一个主要因素^[9]。饲粮中高比例的粗饲料有利于瘤胃细菌中BCFA的合成，因此可提高奶牛乳脂中OBCFA含量^[10]。例如，Zhang等^[11]研究表明，饲粮的粗精比为70∶30时，奶牛乳脂中iso-15∶0、iso-16∶0、异构十七烷酸(iso-heptadecanoic acid，iso-17∶0)和十七烷酸(n-heptadecanoic acid，n-17∶0)含量要显著高于粗精比为30∶70和50∶50时。饲粮中补充脂质可通过增加瘤胃微生物对膳食脂肪酸的吸收而改变牛奶中脂肪酸的分布^[12]。然而，Rego等^[13]研究表明，奶牛饲粮中添加植物油包括菜籽油、葵花籽油和亚麻籽油均使乳脂中iso-14∶0、十五烷酸(n-pentadecanoic acid, n-15∶0)和iso-15∶0等含量降低。Vazirigohar等^[14]研究发现，用葵花油(富含18∶2n-6)完全取代奶牛饲粮中的棕榈油(富含n-16∶0)不是一种提高乳脂中OBCFA含量的有效方法。因此，提高乳脂中OBCFA含量的营养调控策略仍需进一步探究。

瘤胃微生物以丙酸和戊酸为前体物合成OCFA，而BCFA则是以支链氨基酸(branched-chain amino acid，BCAA)(亮氨酸，异亮氨酸和缬氨酸)和与之相对应的支链羧酸(异戊酸、2-甲基丁酸和异丁酸)为前体进行合成^[15]。改变前体物的供应模式也可以改变乳脂中脂肪酸的含量^[16]。然而，瘤胃中OBCFA前体物含量与瘤胃、血浆及牛奶中OBCFA含量是否具有相关关系，目前尚未有研究报道。因此，本试验旨在探究瘤胃中合成OBCFA前体物含量与瘤胃、血浆及牛奶中OBCFA含量的相关性，以期为通过营养调控策略提高乳脂中OBCFA含量提供建议。

1 材料与方法 1.1 试验设计、饲养管理和样品采集

本试验在北京中地畜牧科技有限公司奶牛场进行。选取27头体重[(630±27) kg/d]、胎次[(3.6±0.3)胎]、泌乳日龄[(170±18) d]及产奶量[(25.7±3.1) kg/d]相近的健康荷斯坦奶牛。所有奶牛饲养在同一圈舍中饲喂相同饲粮4周，饲养管理按照牧场的常规管理程序进行，奶牛每天饲喂3次(07:00、14:00和22:00)基础饲粮，基础饲粮的各种营养成分能够满足或略超过NRC(2001)中推荐的泌乳奶牛营养需要量，其组成及营养水平见表 1。试验期间奶牛自由采食及饮水，每天挤奶3次(06:30、14:30和22:30)。

表 1 基础饲粮组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (DM basis)

%
项目 Items	含量 Content
原料 Ingredients
玉米青贮 Corn silage	29.12
豆粕 Soybean meal	13.93
蒸汽压片玉米 Steam-flaked corn	15.98
玉米 Corn	11.01
苜蓿 Alfalfa hay	9.57
棉籽绒 Cottonseed linter	5.96
大豆皮 Soybean hull	3.97
糖蜜 Molasses	1.43
达农威益康 XP Diamond V XP¹⁾	0.10
小苏打 NaHCO₃	0.66
百事美 Bergafat²⁾	1.31
苜蓿青贮 Alfalfa silage	1.76
玉米蛋白粉 Corn gluten meal	2.42
预混料 Premix³⁾	2.78
合计 Total	100.00
营养水平 Nutrient levels⁴⁾
泌乳净能 NE_L/(MJ/kg)	7.21
中性洗涤纤维 NDF	32.13
酸性洗涤纤维 ADF	17.34
粗蛋白质 CP	17.58
粗脂肪 EE	4.65
粗灰分 Ash	7.82
钙 Ca	0.70
总磷 TP	0.39
1)一种微生态制剂产品，是由酵母细胞外代谢产物、变性培养基和酵母细胞等纯天然物质构成的酵母发酵产物。A probiotic product, which was yeast fermentation products composed of pure natural substances such as yeast extracellular metabolites, denatured medium and yeast cells. 2)一种反刍动物脂肪粉，主要成分为分馏棕榈脂肪和天然甘油，棕榈酸含量为75%~90%，天然甘油含量为10%，粗脂肪含量为99.5%。A ruminant fat powder, the main components were fractionated palm fat and natural glycerin, the palmitic acid content was 75% to 90%, the natural glycerol content was 10%, and the crude fat content was 99.5%. 3)每千克预混料含 One kilogram of premix contained the following: VA 250 000 IU，VD 65 000 IU，VE 2 100 IU，Fe 400 mg，Cu 540 mg，Zn 2 100 mg，Mn 560 mg，Se 15 mg，I 35 mg，Co 68 mg。 4)泌乳净能为计算值，由CPM-Dairy 3.8.0.1 V软件计算得出，其他营养水平为实测值。NE_L was a calculated value, which was calculated by CPM-Dairy 3.8.0.1V software, while the other nutrient levels were measured values.

表 1 基础饲粮组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (DM basis)

于试验第4周的最后3 d每天采集9头牛的牛奶、瘤胃液及血液样品。挤奶时采集牛奶样品，并按照4∶3∶3的比例将早、中、晚采集的牛奶样品混合，-20 ℃保存，用于测定牛奶中OBCFA含量。晨饲前，尾静脉采集血液于10 mL添加肝素钠的真空采血管中，加冰块保存，3 000×g、4 ℃离心15 min获取血浆，-20 ℃保存，用于测定血浆中OBCFA含量。采集完血液样品后，用瘤胃采集器经奶牛口腔采集晨饲前瘤胃液样品，为消除唾液污染，弃掉初始50 mL液体，剩余瘤胃液经4层纱布过滤后收集于10 mL离心管中，-20 ℃保存，用于测定瘤胃液中合成OBCFA的前体物(丙酸、戊酸、异丁酸、异戊酸、亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)含量以及OBCFA含量。于采样日07:00、14:00和22:00分别采集等量饲粮样品并混合，在65 ℃烘箱中干燥48 h制成风干样品，粉碎后用于后续营养成分的分析。

1.2 样品测定与分析 1.2.1 饲粮样品营养成分的测定

将风干饲粮样品在105 ℃烘箱内烘干4 h，参照AOAC(1990)^[17]方法测定干物质(DM)含量。粗蛋白质(CP)含量参照AOAC(1990)^[17]方法，使用凯氏定氮仪(K1100，山东海能科学仪器有限公司)进行测定。中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)含量参照Van Soest等^[18]的方法使用FOSS Fibertec纤维分析仪(Fibertec 2010，FOSS集团，丹麦)进行测定，测定中使用热稳定的α-淀粉酶。粗脂肪含量参照AOAC(1990)^[17]的方法使用FOSS索氏脂肪提取仪(Soxtec^TM2050，FOSS集团，丹麦)进行测定。在电炉炭化后放入高温电阻炉[(550±20) ℃]内灰化2~4 h测定饲粮粗灰分含量。

1.2.2 瘤胃液中VFA和BCAA含量的测定

解冻后的瘤胃液10 000×g离心10 min，移取1.5 mL上清液至离心管中，加入0.15 mL 25%偏磷酸溶液，静置30 min，10 000×g离心15 min，取上清液用气相色谱仪(6890N，安捷伦公司，美国)测定VFA含量^[19]。取瘤胃液800 μL，加入等量8%磺基水杨酸溶液，4 ℃冰箱过夜，取500 μL过夜后的悬浮液加500 μL甲醇振荡混匀后，10 000×g离心10 min，取上清过0.22 μm滤膜到上机瓶中，用液相色谱-质谱联用仪(6470A，安捷伦公司，美国)测定BCAA含量^[20]。

1.2.3 牛奶、瘤胃液及血浆中OBCFA含量的测定

牛奶、瘤胃液及血浆中OBCFA含量参照王加启^[21]的方法进行测定。牛奶样品操作步骤如下：称取2 g牛奶样品于10 mL带盖离心管中，加入4 mL正己烷-异丙醇溶液(正己烷∶异丙醇=3∶2，体积比)，涡旋振荡2 min。加入2 mL硫酸钠溶液(66.7 g/L)，于4 ℃、2 500×g离心10 min。将上层正己烷相移至耐高温试管中，加入2 mL 2%氢氧化钠甲醇溶液，于50 ℃水浴皂化30 min。冷却至室温后，加入2 mL 10%盐酸甲醇溶液，90 ℃水浴酯化2 h。冷却后加入2 mL水，用2 mL正己烷浸提3次，合并正己烷层并定容至10 mL。加入约0.5 g无水硫酸钠，涡旋振荡30 s，取上清液待测。

按上述步骤取3 mL瘤胃液样品加5 mL正己烷-异丙醇溶液提取脂肪。将上层正己烷相移至耐高温试管中，用氮气吹干，加入0.5 mL正己烷和1 mL甲醇及2 mL氢氧化钠甲醇溶液，同上进行皂化和酯化后，加入3 mL水和5 mL正己烷，振荡，静置分层。取上层液体，氮气吹至近干，加入0.5 mL正己烷和0.1 g无水硫酸钠，干燥后取上清待测。

血浆样品取样量为1 mL，氢氧化钠甲醇和盐酸甲醇用量为3 mL，其他同瘤胃液样品的操作步骤。

所有上清液用配有HP-88色谱柱(100 m×0.25 mm×0.2 μm，安捷伦公司，美国)的气相色谱仪(6890N，安捷伦公司，美国)测定脂肪酸含量，测定条件为：分流比50∶1，注射体积2 μL。进样口和检测器温度为280 ℃，柱温箱升温程序为：起始温度120 ℃维持10 min，以1.5 ℃/min提高到230 ℃维持30 min，再提高到250 ℃维持10 min。压力为190 kPa，高纯氮气作为载气。总运行时间为113.3 min。

1.2.4 脂肪酸和氨基酸数据处理

使用MassHunter B.07.01工作站软件对脂肪酸和BCAA下机数据进行处理。通过与已知标准品的保留时间对比，定性各脂肪酸甲酯和BCAA，并通过标准曲线对其进行定量。本研究中进行定性和定量的OBCFA包括iso-14∶0、n-15∶0、iso-15∶0、iso-16∶0、n-17∶0、iso-17∶0和反式异构十七烷酸(anteiso-17∶0)，BCAA包括亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸。牛奶、瘤胃液及血浆样品中OBCFA含量表达为各OBCFA占总脂肪酸含量的比例。反式异构十五烷酸(anteiso-15∶0)和顺-9-十四碳烯酸(cis-9-14∶1)共洗脱，因此结果中未报告anteiso-15∶0含量。

1.3 统计分析

所有数据使用Excel 2019进行初步分析，计算各指标的最大值、最小值、平均值、标准差及变异系数。使用SAS 9.4软件中的PROC CORR程序对数据进行相关性分析，并用Pearson方法进行检验，P≤0.10表示趋于相关，P < 0.05表示显著相关，P < 0.01表示极显著相关。相关强度的判断标准为：相关系数(r)=0.8~1.0为极强相关，r=0.6~0.8为强相关，r=0.4~0.6为中等程度相关，r=0.2~0.4为弱相关，r=0~0.2为极弱相关或无相关。

2 结果 2.1 牛奶、血浆及瘤胃液中OBCFA含量和瘤胃液VFA及BCAA含量

由表 2可知，牛奶中n-15∶0含量最高，iso-14∶0含量最低且变异系数最大。血浆中iso-17∶0含量最高，iso-14∶0含量最低且变异系数相对较大。瘤胃液中OBCFA含量与牛奶中相近，n-15∶0含量最高，但低于牛奶中n-15∶0含量；iso-14∶0含量最低，且变异系数相对较大。合成瘤胃OBCFA的VFA前体物中，丙酸含量最高，其他几种酸含量较少，所有VFA的变异系数均在20%~30%。瘤胃液中BCAA含量相近，在0.01~0.03 mmol/L，变异系数较大。

表 2 用于相关性分析数据的描述性统计 Table 2 Descriptive statistics of correlation analysis data

项目 Items	平均值 Mean	标准差 SD	最小值 Min	最大值 Max	变异系数 CV/%
牛奶中OBCFA含量 OBCFA content in milk/%
异构十四烷酸 iso-14∶0	0.16	0.05	0.09	0.30	30.19
十五烷酸 n-15∶0	1.08	0.17	0.80	1.49	15.48
异构十五烷酸 iso-15∶0	0.33	0.03	0.28	0.40	9.30
异构棕榈酸 iso-16∶0	0.35	0.10	0.20	0.62	28.73
十七烷酸 n-17∶0	0.54	0.04	0.47	0.63	7.82
异构十七烷酸 iso-17∶0	0.73	0.08	0.57	0.93	11.34
反式异构十七烷酸 anteiso-17∶0	0.36	0.04	0.29	0.42	11.49
总奇链脂肪酸 ΣOCFA	1.62	0.16	1.29	1.96	10.16
总支链脂肪酸 ΣBCFA	1.91	0.20	1.46	2.45	10.72
总奇链支链脂肪酸 ΣOBCFA	3.45	0.46	1.43	4.23	13.38
血浆中OBCFA含量 OBCFA content in plasma/%
异构十四烷酸 iso-14∶0	0.18	0.07	0.10	0.28	28.17
十五烷酸 n-15∶0	0.51	0.10	0.24	0.68	19.17
异构十五烷酸 iso-15∶0	0.33	0.03	0.28	0.40	8.81
异构棕榈酸 iso-16∶0	0.36	0.08	0.18	0.62	28.52
十七烷酸 n-17∶0	0.44	0.10	0.00	0.52	21.86
异构十七烷酸 iso-17∶0	0.75	0.09	0.55	0.93	11.83
反式异构十七烷酸 anteiso-17∶0	0.33	0.03	0.27	0.42	10.09
总奇链脂肪酸 ΣOCFA	0.95	0.13	0.56	1.17	13.23
总支链脂肪酸 ΣBCFA	1.90	0.13	1.55	2.09	6.94
总奇链支链脂肪酸ΣOBCFA	2.84	0.16	2.40	3.06	5.46
瘤胃液中OBCFA含量 OBCFA content in rumen/%
异构十四烷酸 iso-14∶0	0.23	0.10	0.12	0.41	41.31
十五烷酸 n-15∶0	0.87	0.11	0.70	1.11	12.59
异构十五烷酸 iso-15∶0	0.41	0.09	0.27	0.58	21.58
异构棕榈酸 iso-16∶0	0.52	0.24	0.29	1.03	46.23
十七烷酸 n-17∶0	0.55	0.03	0.51	0.62	5.82
异构十七烷酸 iso-17∶0	0.45	0.08	0.36	0.61	16.85
反式异构十七烷酸 anteiso-17∶0	0.40	0.15	0.25	0.89	38.29
总奇链脂肪酸 ΣOCFA	1.41	0.12	1.21	1.73	8.58
总支链脂肪酸 ΣBCFA	2.01	0.51	1.38	3.52	25.48
总奇链支链脂肪酸 ΣOBCFA	3.26	0.66	2.60	5.25	20.29
瘤胃液中挥发性脂肪酸含量 VFA content in rumen/(mmol/L)
丙酸 Propionate	16.98	4.53	7.22	26.61	26.67
戊酸 Valerate	1.03	0.26	0.42	1.58	25.32
异丁酸 Isobutyrate	0.75	0.16	0.39	1.14	21.52
异戊酸 Isovalerate	1.20	0.06	0.64	1.99	24.89
瘤胃液中支链氨基酸含量 BCAA content in rumen/(mmol/L)
亮氨酸 Leucine	0.02	0.01	0.01	0.03	37.51
异亮氨酸 Isoleucine	0.01	< 0.01	0.01	0.02	34.10
缬氨酸 Valine	0.02	0.01	< 0.01	0.03	37.83
总奇链脂肪酸=十五烷酸+十七烷酸。总支链脂肪酸=异构十四烷酸+异构十五烷酸+异构棕榈酸+异构十七烷酸+反异构十七烷酸。总奇链支链脂肪酸=异构十四烷酸+十五烷酸+异构十五烷酸+异构棕榈酸+十七烷酸+异构十七烷酸+反异构十七烷酸。下表同。 ΣOCFA=n-15∶0+n-17∶0. ΣBCFA=iso-14∶0+iso-15∶0+iso-16∶0+iso-17∶0+anteiso-17∶0. ΣOBCFA=iso-14∶0+n-15∶0+iso-15∶0+iso-16∶0+n-17∶0+iso-17∶0+anteiso-17∶0. The same as below.

表 2 用于相关性分析数据的描述性统计 Table 2 Descriptive statistics of correlation analysis data

2.2 瘤胃液中OBCFA前体物含量与OBCFA含量的相关性

由表 3可知，瘤胃液中丙酸含量与n-15∶0含量趋于显著正相关(P < 0.10)，与总奇链脂肪酸(ΣOCFA)和总奇链支链脂肪酸(ΣOBCFA)含量呈显著(P < 0.05)或极显著(P < 0.01)正相关。瘤胃液中戊酸含量与ΣOBCFA含量呈显著正相关(P < 0.05)。瘤胃液中异丁酸含量与anteiso-17∶0、总支链脂肪酸(ΣBCFA)和ΣOBCFA含量呈显著正相关(P < 0.05)。瘤胃液中异戊酸含量与iso-14∶0含量呈显著负相关(P < 0.05)，与iso-15∶0和ΣBCFA含量呈显著正相关(P < 0.05)。瘤胃液中亮氨酸含量与iso-14∶0、iso-17∶0、anteiso-17∶0、ΣBCFA和ΣOBCFA含量呈极显著正相关(P < 0.01)。瘤胃液中异亮氨酸含量与iso-17∶0、anteiso-17∶0、ΣBCFA和ΣOBCFA含量呈显著(P < 0.05)或极显著(P < 0.01)正相关。瘤胃液中缬氨酸含量与iso-14∶0、iso-16∶0和ΣOBCFA含量呈显著正相关(P < 0.05)，与ΣBCFA含量趋于正相关(P < 0.10)。上述相关性多属于中等强度相关。

表 3 瘤胃液中OBCFA前体物含量与OBCFA含量的相关性 Table 3 Correlation between rumen fluid OBCFA precursor content and OBCFA content

项目 Items	丙酸 Propionate		戊酸 Valerate		异丁酸 Isobutyrate		异戊酸 Isovalerate		亮氨酸 Leucine		异亮氨酸 Isoleucine		缬氨酸 Valine
项目 Items	相关系数 r	P值 P-value	相关系数 r	P值 P-value	相关系数 r	P值 P-value	相关系数 r	P值 P-value	相关系数 r	P值 P-value	相关系数 r	P值 P-value	相关系数 r	P值 P-value
奇链支链脂肪酸 OBCFA
异构十四烷酸 iso-14∶0	0.28	0.19	-0.03	0.89	0.21	0.34	-0.48	0.02	0.57	< 0.01	0.23	0.25	0.52	0.01
十五烷酸 n-15∶0	0.35	0.09	0.23	0.30	0.43	0.04	0.36	0.09	0.44	0.02	0.40	0.04	0.19	0.34
异构十五烷酸 iso-15∶0	0.03	0.89	0.43	0.04	0.28	0.20	0.50	0.01	0.24	0.24	0.32	0.16	0.24	0.23
异构棕榈酸 iso-16∶0	-0.12	0.58	-0.01	0.96	0.11	0.60	0.36	0.09	0.50	0.01	0.18	0.36	0.34	0.03
十七烷酸 n-17∶0	0.06	0.78	0.29	0.17	0.28	0.19	0.48	0.02	0.15	0.46	0.11	0.58	0.05	0.82
异构十七烷酸 iso-17∶0	0.12	0.59	0.05	0.84	0.25	0.24	0.04	0.86	0.55	< 0.01	0.49	0.01	0.20	0.32
反式异构十七烷酸 anteiso-17∶0	0.62	< 0.01	0.62	< 0.01	0.47	0.02	0.34	0.11	0.79	< 0.01	0.53	< 0.01	0.19	0.24
总奇链脂肪酸 ΣOCFA	0.44	0.04	0.29	0.17	0.46	0.03	0.42	0.05	0.52	0.01	0.49	0.01	0.24	0.23
总支链脂肪酸 ΣBCFA	0.29	0.18	0.42	0.05	0.52	0.01	0.47	0.02	0.70	< 0.01	0.51	0.03	0.36	0.07
总奇链支链脂肪酸 ΣOBCFA	0.65	< 0.01	0.44	0.04	0.49	0.02	0.20	0.37	0.71	< 0.01	0.46	0.02	0.44	0.02

表 3 瘤胃液中OBCFA前体物含量与OBCFA含量的相关性 Table 3 Correlation between rumen fluid OBCFA precursor content and OBCFA content

2.3 瘤胃液中OBCFA前体物含量与血浆中OBCFA含量的相关性

由表 4可知，瘤胃液中丙酸含量与血浆中n-17∶0含量呈显著正相关(P < 0.05)，与血浆中ΣOCFA和ΣOBCFA含量趋于显著正相关(P < 0.10)。瘤胃液中戊酸与血浆中n-17∶0含量呈显著正相关(P < 0.05)，与血浆中ΣOBCFA含量趋于显著正相关(P < 0.10)。瘤胃液中异丁酸含量与血浆中iso-17∶0、ΣBCFA和ΣOBCFA含量呈显著正相关(P < 0.05)。瘤胃液中异戊酸含量与血浆中anteiso-17∶0含量呈极显著正相关(P < 0.01)。瘤胃液中亮氨酸含量与血浆中iso-17∶0、anteiso-17∶0和ΣBCFA含量呈显著正相关(P < 0.05)，与血浆中iso-16∶0和ΣOBCFA含量趋于显著正相关(P < 0.10)。瘤胃液中异亮氨酸含量与血浆中anteiso-17∶0和ΣBCFA含量呈极显著(P < 0.01)或显著(P < 0.05)正相关，与血浆中iso-16∶0和ΣOBCFA含量趋于显著正相关(P < 0.10)。瘤胃液中缬氨酸含量与血浆中iso-14∶0和iso-17∶0含量趋于显著正相关(P < 0.10)。以上相关性多属于弱相关或中等强度相关。

表 4 瘤胃液中OBCFA前体物含量与血浆中OBCFA含量的相关性 Table 4 Correlation between rumen fluid OBCFA precursor content and plasma OBCFA content

项目 Items	丙酸 Propionate		戊酸 Valerate		异丁酸 Isobutyrate		异戊酸 Isovalerate		亮氨酸 Leucine		异亮氨酸 Isoleucine		缬氨酸 Valine
项目 Items	相关系数 r	P值 P-value	相关系数 r	P值 P-value	相关系数 r	P值 P-value	相关系数 r	P值 P-value	相关系数 r	P值 P-value	相关系数 r	P值 P-value	相关系数 r	P值 P-value
奇链支链脂肪酸 OBCFA
异构十四烷酸 iso-14∶0	0.18	0.42	0.35	0.10	0.13	0.56	0.26	0.22	0.19	0.34	0.27	0.18	0.38	0.05
十五烷酸 n-15∶0	-0.32	0.14	0.05	0.82	-0.21	0.31	0.11	0.62	0.03	0.89	0.05	0.82	0.11	0.57
异构十五烷酸 Iso-15∶0	0.28	0.20	0.50	0.02	0.20	0.36	0.25	0.25	-0.05	0.82	0.01	0.97	0.07	0.73
异构棕榈酸 iso-16∶0	-0.01	0.98	-0.36	0.14	-0.09	0.73	-0.19	0.44	0.41	0.06	0.30	0.07	-0.10	0.67
十七烷酸 n-17∶0	0.56	0.01	0.43	0.04	0.48	0.02	-0.18	0.42	0.55	< 0.01	0.01	0.52	0.28	0.15
异构十七烷酸 iso-17∶0	0.27	0.14	0.33	0.12	0.57	0.01	-0.06	0.77	0.46	0.01	0.40	0.04	0.39	0.05
反式异构十七烷酸 anteiso-17∶0	0.38	0.07	0.40	0.06	0.38	0.05	0.68	< 0.01	0.49	0.01	0.53	< 0.01	0.24	0.22
总奇链脂肪酸 ΣOCFA	0.26	0.06	0.22	0.31	-0.01	0.97	0.03	0.90	0.24	0.22	0.15	0.45	0.22	0.27
总支链脂肪酸 ΣBCFA	0.12	0.51	0.38	0.10	0.35	0.04	0.06	0.80	0.43	0.04	0.40	0.04	0.31	0.16
总奇链支链脂肪酸 ΣOBCFA	0.36	0.06	0.39	0.05	0.46	0.04	0.12	0.60	0.43	0.05	0.40	0.05	0.35	0.10

表 4 瘤胃液中OBCFA前体物含量与血浆中OBCFA含量的相关性 Table 4 Correlation between rumen fluid OBCFA precursor content and plasma OBCFA content

2.4 瘤胃液中OBCFA前体物含量与牛奶中OBCFA含量的相关性

由表 5可知，瘤胃液中丙酸含量与牛奶中iso-17∶0和anteiso-17∶0含量趋于显著正相关(P < 0.10)。瘤胃液中戊酸含量与牛奶中n-17∶0含量趋于显著正相关(P < 0.10)。瘤胃液中异丁酸含量与牛奶中iso-17∶0和anteiso-17∶0含量趋于显著正相关(P < 0.10)。瘤胃液中异戊酸含量与牛奶中anteiso-17∶0含量趋于显著正相关(P < 0.10)。瘤胃液中亮氨酸含量与牛奶中iso-15∶0、iso-17∶0、anteiso-17∶0和ΣBCFA含量趋于显著正相关(P < 0.10)。瘤胃液中异亮氨酸含量与牛奶中iso-17∶0、anteiso-17∶0和ΣBCFA含量趋于显著正相关(P < 0.10)。瘤胃液中缬氨酸与牛奶中iso-14∶0、iso-15∶0、iso-17∶0和ΣBCFA含量趋于显著正相关(P < 0.10)。以上相关性多属于弱相关。

表 5 瘤胃液中OBCFA前体物含量与牛奶中OBCFA含量的相关性 Table 5 Correlation between rumen fluid OBCFA precursor content and milk OBCFA content

项目 Items	丙酸 Propionate		戊酸 Valerate		异丁酸 Isobutyrate		异戊酸 Isovalerate		亮氨酸 Leucine		异亮氨酸 Isoleucine		缬氨酸 Valine
项目 Items	相关系数 r	P值 P-value	相关系数 r	P值 P-value	相关系数 r	P值 P-value	相关系数 r	P值 P-value	相关系数 r	P值 P-value	相关系数 r	P值 P-value	相关系数 r	P值 P-value
奇链支链脂肪酸 OBCFA
异构十四烷酸 iso-14∶0	-0.03	0.88	0.14	0.51	-0.09	0.68	0.26	0.23	0.24	0.23	0.27	0.18	0.33	0.09
十五烷酸 n-15∶0	-0.16	0.48	-0.02	0.92	-0.20	0.35	-0.43	0.04	-0.32	0.10	-0.30	0.13	0.01	0.99
异构十五烷酸 iso-15∶0	0.17	0.45	0.01	0.54	0.23	0.30	0.27	0.22	0.34	0.09	0.31	0.12	0.37	0.06
异构棕榈酸 iso-16∶0	-0.03	0.88	0.17	0.43	0.08	0.73	-0.11	0.61	0.14	0.48	0.16	0.44	0.24	0.22
十七烷酸 n-17∶0	0.15	0.48	0.34	0.06	0.37	0.09	0.67	<0.01	0.16	0.42	0.13	0.52	0.23	0.24
异构十七烷酸 iso-17∶0	0.37	0.08	0.02	0.48	0.36	0.09	0.21	0.35	0.36	0.07	0.38	0.05	0.33	0.08
反式异构十七烷酸 anteiso-17∶0	0.39	0.07	0.10	0.66	0.31	0.05	0.40	0.06	0.34	0.08	0.37	0.06	0.29	0.14
总奇链脂肪酸 ΣOCFA	-0.12	0.60	0.10	0.64	-0.11	0.63	-0.25	0.25	-0.28	0.15	-0.27	0.17	0.06	0.76
总支链脂肪酸 ΣBCFA	0.29	0.18	0.17	0.20	0.29	0.19	0.21	0.33	0.36	0.07	0.39	0.05	0.36	0.07
总奇链支链脂肪酸 ΣOBCFA	0.17	0.44	0.16	0.29	0.17	0.43	0.01	0.96	0.20	0.31	-0.23	0.24	-0.06	0.76

表 5 瘤胃液中OBCFA前体物含量与牛奶中OBCFA含量的相关性 Table 5 Correlation between rumen fluid OBCFA precursor content and milk OBCFA content

2.5 瘤胃液中OBCFA含量与牛奶中OBCFA含量的相关性

由表 6可知，瘤胃液中与牛奶中iso-14∶0、iso-15∶0和iso-16∶0含量趋于显著正相关(P < 0.10)。瘤胃液中与牛奶中n-15∶0含量呈极显著负相关(P < 0.01)，n-17∶0含量呈极显著正相关(P < 0.01)，然而17碳的BCFA含量无显著相关性(P>0.05)。瘤胃液中与牛奶中ΣOCFA含量呈显著负相关(P < 0.05)，而ΣBCFA含量趋于显著正相关(P < 0.10)。

表 6 瘤胃液中OBCFA含量与牛奶中OBCFA含量的相关性 Table 6 Correlation between rumen fluid OBCFA content and milk OBCFA content

项目 Items	牛奶 Milk
	异构十四烷酸 iso-14∶0			十五烷酸 n-15∶0			异构十五烷酸 iso-15∶0			异构棕榈酸 iso-16∶0			十七烷酸 n-17∶0
	相关系数 r	P值 P-value		相关系数 r	P值 P-value		相关系数 r	P值 P-value		相关系数 r	P值 P-value		相关系数 r	P值 P-value
瘤胃液 Rumen fluid
异构十四烷酸 iso-14∶0	0.32	0.08			-0.15		0.47			0.07	0.74			0.18	0.38	-0.38	0.05
十五烷酸 n-15∶0	0.33	0.09	-0.55		< 0.01	0.40	0.04		0.27	0.17	0.20	0.32
异构十五烷酸 iso-15∶0	0.38	0.05	-0.50		0.01	0.32	0.10		0.41	0.04	0.56	< 0.01
异构棕榈酸 iso-16∶0	0.24	0.22	-0.41		0.03	0.33	0.10		0.31	0.10	0.31	0.11
十七烷酸 n-17∶0	0.31	0.11	-0.27		0.18	0.27	0.18		-0.01	0.96	0.61	< 0.01
异构十七烷酸 iso-17∶0	0.28	0.16	-0.55		< 0.01	0.44	0.02		0.50	0.01	-0.01	0.98
反式异构十七烷酸 anteiso-17∶0	0.52	< 0.01	-0.18		0.36	0.53	0.01		0.34	0.08	0.06	0.76
总奇链脂肪酸 ΣOCFA	0.41	0.04	-0.53		< 0.01	0.42	0.03		0.24	0.23	0.20	0.31
总支链脂肪酸 ΣBCFA	0.38	0.05	-0.44		0.02	0.45	0.02		0.42	0.03	0.19	0.35
总奇链支链脂肪酸 ΣOBCFA	0.42	0.03	-0.34		0.09	0.40	0.04		0.36	0.06	-0.10	0.61

项目 Items	牛奶 Milk
	异构十七烷酸 iso-17∶0			反式异构十七烷酸 anteiso-17∶0			总奇链脂肪酸 ΣOCFA			总支链脂肪酸 ΣBCFA			总奇链支链脂肪酸 ΣOBCFA
	相关系数 r	P值 P-value		相关系数 r	P值 P-value		相关系数 r	P值 P-value		相关系数 r	P值 P-value		相关系数 r	P值 P-value
瘤胃液 Rumen fluid
异构十四烷酸 iso-14∶0	-0.03	0.87			0.03		0.88			-0.25	0.21			0.02	0.93	-0.38	0.05
十五烷酸 n-15∶0	0.32	0.11	0.20		0.32	-0.51	0.01		0.44	0.03	0.03	0.88
异构十五烷酸 iso-15∶0	0.23	0.25	0.13		0.51	-0.36	0.07		0.31	0.12	-0.21	0.30
异构棕榈酸 iso-16∶0	0.22	0.26	0.18		0.36	-0.34	0.09		0.26	0.20	-0.35	0.07
十七烷酸 n-17∶0	-0.04	0.84	0.13		0.53	-0.11	0.60		0.09	0.66	0.10	0.63
异构十七烷酸 iso-17∶0	0.10	0.62	-0.01		0.99	-0.56	< 0.01		0.27	0.18	-0.44	0.02
反式异构十七烷酸 anteiso-17∶0	0.30	0.13	0.13		0.51	-0.17	0.39		0.46	0.02	-0.22	0.28
总奇链脂肪酸 ΣOCFA	0.35	0.08	0.24		0.23	-0.48	0.01		0.48	0.01	0.07	0.74
总支链脂肪酸 ΣBCFA	0.24	0.22	0.15		0.44	-0.40	0.04		0.38	0.06	-0.40	0.04
总奇链支链脂肪酸 ΣOBCFA	0.39	0.04	0.24		0.23	-0.37	0.06		0.51	0.01	-0.28	0.16

表 6 瘤胃液中OBCFA含量与牛奶中OBCFA含量的相关性 Table 6 Correlation between rumen fluid OBCFA content and milk OBCFA content

3 讨论

瘤胃中的VFA主要来源于微生物对碳水化合物的消化，是反刍动物的主要能量来源^[22]。同时，瘤胃微生物可以利用VFA合成自身所必需的营养成分^[23]。OBCFA是瘤胃微生物细胞膜的特有成分，对维持膜结构的完整性及流动性具有重要作用^[24]。其中，OCFA包括n-15∶0和n-17∶0，可以通过脂肪酸合成酶介导，以丙酸和戊酸为前体重复缩合而成^[25]。本研究结果显示，瘤胃液中丙酸含量与n-15∶0含量趋于显著正相关，与n-17∶0含量没有显著相关性，瘤胃液中戊酸含量与n-15∶0和n-17∶0含量均没有显著相关性。这与刘鑫^[26]利用体外发酵技术探究发酵液中OBCFA含量与VFA含量相关关系的结果相类似。然而刘可园^[27]研究发现，瘤胃液中丙酸含量与n-15∶0含量呈显著负相关，与n-17∶0含量呈显著正相关。n-15∶0与n-17∶0合成途径相似，存在底物竞争关系^[25]，这可能是造成这一差异结果的原因。异丁酸和异戊酸分别是合成偶数异构脂肪酸和奇数异构脂肪酸的前体^[15]。本研究发现，瘤胃液中异丁酸含量与iso-14∶0和iso-16∶0含量并无显著相关性，然而与anteiso-17∶0含量呈显著正相关；瘤胃液中异戊酸含量与iso-15∶0含量呈显著正相关，同时与iso-16∶0含量趋于显著正相关。刘可园^[27]研究发现，瘤胃液中异丁酸含量与iso-16∶0含量呈显著正相关，异戊酸含量与iso-15∶0和iso-17∶0含量无显著相关性，然而与iso-16∶0含量呈显著正相关。这些研究结果表明，支链VFA前体物与其对应合成的BCFA具有一定的相关性，然而与其他BCFA也存在一定的相关关系，表明不同前体物与OBCFA的相关性不仅与底物利用率有关，可能还与瘤胃微生物组成等因素相关。瘤胃微生物在支链氨基酸氨基转移酶、支链α酮酸脱氢酶及支链脂肪酸合成酶的作用下以亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸为前体合成BCFA^[15]。本研究发现，瘤胃液中亮氨酸含量与iso-17∶0含量呈极显著正相关，异亮氨酸含量与anteiso-17∶0含量呈极显著正相关，缬氨酸含量与iso-14∶0和iso-16∶0含量呈显著正相关。Kaneda^[15]报道瘤胃微生物以BCAA为底物生成BCFA的合成途径更具有广泛性，这可能是BCAA与BCFA相关性更强的原因之一。

携带OBCFA的瘤胃微生物随食糜离开瘤胃到达十二指肠，OBCFA随后被空肠吸收，并先后在淋巴血液中形成乳糜微粒和极低密度脂蛋白，通过血液被转运到乳腺组织^[28]。血浆中n-15∶0和n-17∶0含量低于瘤胃液，可能与脂肪组织的沉积或脂肪酸的稀释作用有关^[29]。本研究中，瘤胃液中丙酸和戊酸含量与血浆中n-15∶0含量没有显著相关性，与n-17∶0含量呈显著正相关。与上述瘤胃液中丙酸和戊酸含量与OCFA含量的相关性存在差异，可能是n-15∶0和n-17∶0之间的相互转化造成的^[30]。瘤胃液中BCAA和支链VFA都有与之存在一定相关关系的BCFA，且与瘤胃液中这类前体物和BCFA的相关关系有一定的相似性，然而一些相关关系有所减弱，表明瘤胃液中BCFA的组成比例在血液中发生改变，但并未发生剧烈变化。

牛奶中ΣOBCFA含量与瘤胃液中相似，高于血浆中ΣOBCFA含量，主要是较高的OCFA含量所致。Dodds等^[31]报道，乳腺组织能够以丙酰-CoA替代乙酰-CoA内源性合成n-15∶0和n-17∶0等OCFA，使得牛奶中这类脂肪酸的含量高于血浆中的含量。与刘可园^[27]研究发现瘤胃液中丙酸含量与乳脂中n-15∶0和n-17∶0含量呈显著负相关不同，本研究结果显示，瘤胃中合成OCFA的前体物丙酸和戊酸含量与牛奶中OCFA含量相关性较弱或无显著相关性，同时本研究进一步分析了瘤胃液中和牛奶中OBCFA含量的相关性，发现瘤胃液中和牛奶中n-15∶0含量呈显著负相关，n-17∶0含量呈显著正相关。这一结果可能与OCFA在乳腺中的内源性合成有关^[31]，与前人研究的差异可能是饲粮结构的不同或动物的生理状态不同造成的。Gervais等^[32]研究表明，十二指肠中的BCFA几乎可以完全转化到牛奶中，这使得本研究中瘤胃液、血浆及牛奶中ΣBCFA含量相近。然而瘤胃液中BCFA前体物含量与牛奶中BCFA含量相关性较弱，可能是因为BCFA存在瘤胃后的一些修饰作用，如部分15碳BCFA可以在乳腺中转化为17碳的BCFA^[33]。我们进一步分析了瘤胃液中和牛奶中BCFA含量的相关性，发现瘤胃液中和牛奶中部分BCFA含量之间存在一定的相关关系，大多属于中等强度相关，此结果表明瘤胃液中BCFA的组成比例可以在牛奶中反映。

4 结论

瘤胃内合成OBCFA的前体物与瘤胃液、血浆及牛奶中OBCFA含量均存在不同程度的相关关系，以瘤胃液中的相关关系最强。瘤胃液中OBCFA含量与牛奶中OBCFA含量存在中等强度的相关关系。综上所述，改变瘤胃内合成OBCFA前体物的含量是提高牛奶中OBCFA含量的一种潜在营养调控策略。

参考文献

[1]	DIEDRICH M.HENSCHEL K P. The natural occurrence of unusual fatty acids.Part 1.Odd numbered fatty acids[J]. Nahrung, 1990, 34(10): 935-943. DOI:10.1002/food.19900341020
[2]	POLIDORI P, MAGGI G L, MORETTI V M, et al. A note on the effect of use of bovine somatotropin on the fatty acid composition of the milk fat in dairy cows[J]. Animal Science, 1993, 57(2): 319-322. DOI:10.1017/S0003356100006942
[3]	KEENEY M, KATZ I, ALLISON M J. On the probable origin of some milk fat acids in rumen microbial lipids[J]. Journal of the American Oil Chemists′ Society, 1962, 39(4): 198-201. DOI:10.1007/BF02635818
[4]	VLAEMINCK B, FIEVEZ V, TAMMINGA S, et al. Milk odd- and branched-chain fatty acids in relation to the rumen fermentation pattern[J]. Journal of Dairy Science, 2006, 89(10): 3954-3964. DOI:10.3168/jds.S0022-0302(06)72437-7
[5]	VLAEMINCK B, DUFOUR C, VAN VUUREN A M, et al. Use of odd and branched-chain fatty acids in rumen contents and milk as a potential microbial marker[J]. Journal of Dairy Science, 2005, 88(3): 1031-1042. DOI:10.3168/jds.S0022-0302(05)72771-5
[6]	WONGTANGTINTHARN S, OKU H, IWASAKI H, et al. Effect of branched-chain fatty acids on fatty acid biosynthesis of human breast cancer cells[J]. Journal of Nutritional Science and Vitaminology, 2004, 50(2): 137-143. DOI:10.3177/jnsv.50.137
[7]	KHAW K T, FRIESEN M D, RIBOLI E, et al. Plasma phospholipid fatty acid concentration and incident coronary heart disease in men and women: the EPIC-Norfolk prospective study[J]. PLoS Medicine, 2012, 9(7): e1001255. DOI:10.1371/journal.pmed.1001255
[8]	MOZAFFARIAN D. Saturated fatty acids and type 2 diabetes: more evidence to re-invent dietary guidelines[J]. The Lancet: Diabetes & Endocrinology, 2014, 2(10): 770-772.
[9]	VLAEMINCK B, FIEVEZ V, CABRITA A R J, et al. Factors affecting odd- and branched-chain fatty acids in milk: a review[J]. Animal Feed Science and Technology, 2006, 131(3/4): 389-417.
[10]	BAS P, ARCHIMÈDE H, ROUZEAU A, et al. Fatty acid composition of mixed-rumen bacteria: effect of concentration and type of forage[J]. Journal of Dairy Science, 2003, 86(9): 2940-2948. DOI:10.3168/jds.S0022-0302(03)73891-0
[11]	ZHANG Y, LIU K, HAO X, et al. The relationships between odd- and branched-chain fatty acids to ruminal fermentation parameters and bacterial populations with different dietary ratios of forage and concentrate[J]. Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition, 2017, 101(6): 1103-1114. DOI:10.1111/jpn.12602
[12]	BAUMANN E, CHOUINARD P Y, LEBEUF Y, et al. Effect of lipid supplementation on milk odd- and branched-chain fatty acids in dairy cows[J]. Journal of Dairy Science, 2016, 99(8): 6311-6323. DOI:10.3168/jds.2015-10746
[13]	REGO O A, ALVES S P, ANTUNES L M S, et al. Rumen biohydrogenation-derived fatty acids in milk fat from grazing dairy cows supplemented with rapeseed, sunflower, or linseed oils[J]. Journal of Dairy Science, 2009, 92(9): 4530-4540. DOI:10.3168/jds.2009-2060
[14]	VAZIRIGOHAR M, DEHGHAN-BANADAKY M, REZAYAZDI K, et al. Short communication: effects of diets containing supplemental fats on ruminal fermentation and milk odd- and branched-chain fatty acids in dairy cows[J]. Journal of Dairy Science, 2018, 101(7): 6133-6141. DOI:10.3168/jds.2017-14189
[15]	KANEDA T. Iso- and anteiso-fatty acids in bacteria: biosynthesis, function, and taxonomic significance[J]. Microbiological Reviews, 1991, 55(2): 288-302. DOI:10.1128/mr.55.2.288-302.1991
[16]	WEGNER G H, FOSTER E M. Incorporation of isobutyrate and valerate into cellular plasmalogen by Bacteroides succinogenes[J]. Journal of Bacteriology, 1963, 85(1): 53-61. DOI:10.1128/jb.85.1.53-61.1963
[17]	AO AC. Official methods of analysis[M]. Washington, D.C.: Association of Official Chemists, 1990.
[18]	VAN SOEST P J, ROBERTSON J B, LEWIS B A. Methods for dietary fiber, neutral detergent fiber, and nonstarch polysaccharides in relation to animal nutrition[J]. Journal of Dairy Science, 1991, 74(10): 3583-3597. DOI:10.3168/jds.S0022-0302(91)78551-2
[19]	HU W L, LIU J X, YE J A, et al. Effect of tea saponin on rumen fermentation in vitro[J]. Animal Feed Science and Technology, 2005, 120(3/4): 333-339.
[20]	王新朋. 阴外动脉灌注氨基酸和脂肪酸对奶牛乳腺蛋白质合成和氨基酸摄取规律的影响[D]. 硕士学位论文. 呼和浩特: 内蒙古农业大学, 2015. WANG X P. The effects of external pudendal artery infusion of amino acid and fatty acid on protein synthesis and amino acid uptake in mammary glands of dairy cows[D]. Master′s Thesis. Hohhot: Inner Mongolia Agricultural University, 2015. (in Chinese)
[21]	王加启. 反刍动物营养学研究方法[M]. 北京: 现代教育出版社, 2011: 389-392. WANG J Q. Methods in ruminant nutrition research[M]. Beijing: Modern Education Press, 2011: 389-392 (in Chinese).
[22]	VAN HOUTERT M F J. The production and metabolism of volatile fatty acids by ruminants fed roughages: a review[J]. Animal Feed Science and Technology, 1993, 43(3/4): 189-225.
[23]	ANDRIES J I, BUYSSE F X, DE BRABANDER D L, et al. Isoacids in ruminant nutrition: their role in ruminal and intermediary metabolism and possible influences on performances-a review[J]. Animal Feed Science and Technology, 1987, 18(3): 169-180. DOI:10.1016/0377-8401(87)90069-1
[24]	ANNOUS B A, BECKER L A, BAYLES D O, et al. Critical role of anteiso-C15∶0 fatty acid in the growth of Listeria monocytogenes at low temperatures[J]. Applied and Environmental Microbiology, 1997, 63(10): 3887-3894. DOI:10.1128/aem.63.10.3887-3894.1997
[25]	FULCO A J. Fatty acid metabolism in bacteria[J]. Progress in Lipid Research, 1983, 22(2): 133-160. DOI:10.1016/0163-7827(83)90005-X
[26]	刘鑫. 牛奶中奇链支链脂肪酸作为菌体蛋白标记物的研究[D]. 硕士学位论文. 哈尔滨: 东北农业大学, 2020. LIU X. Study on milk odd-and branched-chain fatty acids as marker of MCP[D]. Master′s Thesis. Harbin: Northeast Agricultural University, 2020. (in Chinese)
[27]	刘可园. 奇数和支链脂肪酸与奶牛瘤胃微生物及其发酵指标的关系[D]. 博士学位论文. 哈尔滨: 东北农业大学, 2016. LIU K Y. Odd-and branched-chain fatty acids profilesin relation to rumen microbial populations and fermentation patterns in dairy cows[D]. Ph. D. Thesis. Harbin: Northeast Agricultural University, 2016. (in Chinese)
[28]	DEMEYER D, DOREAU M. Targets and procedures for altering ruminant meat and milk lipids[J]. The Proceedings of the Nutrition Society, 1999, 58(3): 593-607. DOI:10.1017/S0029665199000786
[29]	CRANINX M, STEEN A, VAN LAAR H, et al. Effect of lactation stage on the odd- and branched-chain milk fatty acids of dairy cattle under grazing and indoor conditions[J]. Journal of Dairy Science, 2008, 91(7): 2662-2677. DOI:10.3168/jds.2007-0656
[30]	CRANINX M, FIEVEZ V, VLAEMINCK B, et al. Artificial neural network models of the rumen fermentation pattern in dairy cattle[J]. Computers and Electronics in Agriculture, 2008, 60(2): 226-238. DOI:10.1016/j.compag.2007.08.005
[31]	DODDS P F, GUZMAN M G, CHALBERG S C, et al. Acetoacetyl-CoA reductase activity of lactating bovine mammary fatty acid synthase[J]. The Journal of Biological Chemistry, 1981, 256(12): 6282-6290. DOI:10.1016/S0021-9258(19)69160-X
[32]	GERVAIS R, VLAEMINCK B, FANCHONE A, et al. Odd-and branched-chain fatty acids duodenal flows and milk yields in response to N underfeeding and energy source in dairy cows[J]. Journal of Dairy Science, 2011, 94(Suppl.1): 125-126.
[33]	VLAEMINCK B, GERVAIS R, RAHMAN M M, et al. Postruminal synthesis modifies the odd- and branched-chain fatty acid profile from the duodenum to milk[J]. Journal of Dairy Science, 2015, 98(7): 4829-4840. DOI:10.3168/jds.2014-9207