5-羟甲基糠醛对哺乳犊牛生长性能、营养物质表观消化率、抗氧化能力及红细胞功能的影响

引用本文

杨蒙, 沈宜钊, 李妍, 王美美, 张志宏, 李秋凤, 曹玉凤, 李艳琴, 李建国, 高艳霞. 5-羟甲基糠醛对哺乳犊牛生长性能、营养物质表观消化率、抗氧化能力及红细胞功能的影响[J]. 动物营养学报, 2022, 34(9): 5866-5878.

YANG Meng, SHEN Yizhao, LI Yan, WANG Meimei, ZHANG Zhihong, LI Qiufeng, CAO Yufeng, LI Yanqin, LI Jianguo, GAO Yanxia. Effects of 5-Hydroxymethylfurfural on Growth Performance, Nutrient Apparent Digestibility, Antioxidant Capacity and Erythrocyte Function of Sucking Calves[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2022, 34(9): 5866-5878.

5-羟甲基糠醛对哺乳犊牛生长性能、营养物质表观消化率、抗氧化能力及红细胞功能的影响

杨蒙¹ , 沈宜钊¹ , 李妍² , 王美美¹ , 张志宏³ , 李秋凤^1,4 , 曹玉凤^1,4 , 李艳琴¹ , 李建国^1,4,5 , 高艳霞^1,4,5

1. 河北农业大学动物科技学院, 保定 071001;
2. 河北农业大学动物医学院, 保定 071001;
3. 河北乐源牧业有限公司, 石家庄 050000;
4. 河北省牛羊胚胎技术创新中心, 保定 071001;
5. 河北省乳制品产业技术研究院, 石家庄 050000

收稿日期: 2022-03-13

基金项目: 财政部和农业农村部国家现代农业产业技术体系(CARS36);河北省现代农业产业技术体系奶牛创新团队项目(HBCT2018120203);河北省重点研发项目(20326606D); 河北农业大学精准畜牧学科群建设项目(1090064);承德市科技研究与发展项目(202001B026)

作者简介: 杨蒙(1996—), 女, 河北廊坊人, 硕士研究生, 研究方向为反刍动物营养需要。E-mail: 2825489175@qq.com.

通信作者: 李建国, 教授, 博士生导师, E-mail: 1181935094@qq.com;
高艳霞, 研究员, 硕士生导师, E-mail: yxgaohebau@126.com.

摘要: 本试验旨在探究不同添加量的5-羟甲基糠醛(5-HMF)对哺乳犊牛生长性能、营养物质表观消化率、抗氧化能力及红细胞功能的影响, 从而筛选出5-HMF的适宜添加量。采用完全随机试验设计, 将60头初生重相近的健康中国荷斯坦奶牛哺乳犊牛随机分为4组, 每组15头。4组哺乳犊牛牛乳中5-HMF产品(5-HMF含量为10%)的添加量分别为0(5-HMF0组)、1(5-HMF1组)、2(5-HMF2组)、3 g/(d·头)(5-HMF3组), 即5-HMF的添加量分别为0、100、200、300 mg/(d·头)。试验期56 d。结果显示: 1)添加5-HMF对犊牛56日龄体重和平均日采食量无显著影响(P>0.05), 但随5-HMF添加量的增加, 犊牛的平均日增重呈现二次曲线升高(P=0.02), 料重比呈现二次曲线降低(P=0.04)。2)与5-HMF0组相比, 5-HMF2组犊牛全期血清总蛋白含量显著升高(P < 0.05), 5-HMF2组56日龄犊牛血清尿素氮含量显著降低(P < 0.05), 5-HMF2组犊牛全期血清免疫球蛋白G含量显著升高(P < 0.05)。3)与5-HMF0组相比, 5-HMF2组56日龄犊牛血清总抗氧化能力显著升高(P < 0.05), 5-HMF2组28日龄犊牛及全期血清丙二醛含量显著降低(P < 0.05);5-HMF0组28日龄犊牛及全期血清谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶活性显著低于其他3组(P < 0.05)。4)与5-HMF0组相比, 5-HMF1组和5-HMF2组犊牛全期血清促红细胞生成素含量显著降低(P < 0.05)。综上可知, 通过牛乳添加5-HMF虽然对哺乳犊牛的平均日采食量影响不大, 但可以提高平均日增重和饲料效率, 同时还能提高机体的抗氧化和免疫能力。在本试验条件下, 哺乳犊牛5-HMF的适宜添加量为200 mg/(d·头)。

关键词: 哺乳犊牛 5-羟甲基糠醛生长性能抗氧化红细胞功能

Effects of 5-Hydroxymethylfurfural on Growth Performance, Nutrient Apparent Digestibility, Antioxidant Capacity and Erythrocyte Function of Sucking Calves

YANG Meng¹ , SHEN Yizhao¹ , LI Yan² , WANG Meimei¹ , ZHANG Zhihong³ , LI Qiufeng^1,4 , CAO Yufeng^1,4 , LI Yanqin¹ , LI Jianguo^1,4,5 , GAO Yanxia^1,4,5

1. College of Animal Science and Technology, Hebei Agricultural University, Baoding 071001, China;
2. College of Veterinary Medicine, Hebei Agricultural University, Baoding 071001, China;
3. Hebei Leyuan Animal Husbandry Co., Ltd., Shijiazhuang 050000, China;
4. Embryo Engineering and Technological Center of Cattle and Sheep of Hebei, Baoding 071001, China;
5. Hebei Dairy Industry Technology Research Institute, Shijiazhuang 050000, China

Corresponding author: LI Jianguo, professor, E-mail: 1181935094@qq.com;
GAO Yanxia, professor, E-mail: yxgaohebau@126.com.

Abstract: The purpose of this experiment was to explore the effects of different additive amounts of 5-hydroxymethylfurfural (5-HMF) on growth performance, nutrient apparent digestibility, antioxidant capacity and erythrocyte function of sucking calves, so as to select the appropriate additive amount of 5-HMF. Sixty healthy Chinese Holstein sucking calves with similar birth weight were randomly divided into 4 groups with 15 calves in each group. The additive amount of 5-HMF product (5-HMF content was 10%) in milk of 4 groups was 0 (5-HMF0 group), 1 (5-HMF1 group), 2 (5-HMF2 group) and 3 g/(d·head) (5-HMF3 group), respectively. The experiment lasted for 56 days. The results showed as follows: 1) the addition of 5-HMF had no significant effect on the body weight of the calves at 56 days of age (P>0.05), but with the increase of 5-HMF additive amount, the average daily gain of calves showed a quadratic curve increase (P=0.02), and the feed/gain showed a quadratic curve decrease (P=0.04). 2) Compared with the 5-HMF0 group, the serum total protein content of calves at whole period in the 5-HMF2 group was significantly increased (P < 0.05), the serum urea nitrogen content of calves at 56 days of age in the 5-HMF2 group was significantly decreased (P < 0.05), and the serum immunoglobulin G content of calves at whole period in the 5-HMF2 group was significantly increased (P < 0.05). 3) Compared with the 5-HMF0 group, the serum total antioxidant capacity of calves at 56 days of age in the 5-HMF2 group was significantly increased (P < 0.05), and the serum malondialdehyde content of calves at 28 days of age and whole period was significantly decreased (P < 0.05); the activities of serum glutathione peroxidase and catalase of calves at 28 days of age and whole period in 5-HMF0 group were significantly lower than those in the other three groups (P < 0.05). 4) Compared with the 5-HMF0 group, the serum erythropoietin content of calves at whole period in 5-HMF1 and 5-HMF2 groups was significantly decreased (P < 0.05). In conclusion, although the addition of 5-HMF to milk has little effect on average daily feed intake, it can improve the average daily gain and feed efficiency of calves. In addition, 5-HMF can improve the body's antioxidant and immune capacity. Under the experimental conditions, the appropriate additive amount of 5-HMF for sucking calves is 200 mg per head per day.

Key words: sucking calves 5-hydroxymethylfurfural growth performance antioxidation erythrocyte function

哺乳犊牛机体发育不健全，容易发生多种疾病，从而影响其正常生长发育，严重者会造成终身发育受阻，甚至死亡^[1]。哺乳期犊牛生长发育将决定奶牛的配种日龄甚至终生的生产性能^[2-3]，因此，哺乳犊牛饲养管理是奶牛生产中至关重要的环节。现代集约化养殖模式下，犊牛容易发生氧化应激，此时血液被重新分配，造成肠道血流量明显减少^[4]，而肠道黏膜组织对缺氧、缺血异常敏感，在短时间内就会造成肠道黏膜功能损伤，使得肠道黏膜屏障发生破坏^[5]，造成肠炎等胃肠道疾病，降低机体对营养物质的消化吸收能力，严重时甚至会造成犊牛死亡^[6]。5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural，5-HMF)广泛存在于地黄、党参、山茱萸等中药中，是其发挥药理作用的重要成分。大鼠和小鼠上的研究表明，5-HMF有促采食、促生长及提高机体抗氧化能力的作用。李利芬^[7]在大鼠上的研究发现，饲粮中添加5-HMF能够提高采食量。给小鼠灌胃五味子中的活性成分5-HMF，发现其能够显著降低小鼠肝脏中丙二醛(MDA)含量，提高过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性^[8]。宋玉蓉等^[9]研究也发现，添加5-HMF能够显著提高采食高脂饲粮小鼠血浆总抗氧化能力(T-AOC)，说明添加5-HMF可能对动物机体的氧化应激有一定的缓解作用。而Jeong等^[10]则发现，将富含5-HMF的地黄混合中草药添加到生长猪饲粮中可以提高生长猪的日增重，说明5-HMF可能对动物生长发育有一定促进作用。此外，5-HMF的毒性很低，其半数致死量为小鼠口服1 910 mg/kg BW，大鼠口服3 100 mg/kg BW^[11]。在动物试验中显示，即使添加量高达每天80~100 mg/kg BW也未观察到急性和亚急性中毒症状^[12]。因此，5-HMF可能有改善哺乳犊牛生长性能和提高其抗氧化能力的作用，然而相关研究未见报道。鉴于此，本试验将通过动物试验，研究不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛生长性能、营养物质表观消化率、抗氧化能力及红细胞功能的影响，以期筛选出5-HMF的适宜添加量，为犊牛的高效培育提供理论依据。

1 材料与方法 1.1 试验时间与地点

试验于2021年4月至2021年6月在河北省乐源君享牧业威县有限公司完成。

1.2 试验设计

试验选取初生重相近、健康的中国荷斯坦母新生母犊牛60头，采用完全随机试验设计，随机分为4组，每组15头。于2日龄开始在犊牛饲喂的牛乳中分别添加0(5-HMF0组)、1(5-HMF1组)、2(5-HMF2)、3 g/(d·头)(5-HMF3组)的5-HMF产品，分早、晚2次添加。5-HMF产品购自某农牧有限公司，5-HMF含量为10%。试验期为56 d。

1.3 试验饲粮与饲养管理

犊牛出生后2 h内保证饲喂充足的初乳，初乳饲喂量保持一致，均为4 L/头。2日龄后于每日07:30、17:30饲喂常乳。犊牛2~7日龄每头每天饲喂常乳6 L，8~25日龄每头每天饲喂常乳8 L，26~50日龄每头每天饲喂常乳11 L，51~56日龄每头每天饲喂常乳10 L，常乳经巴氏消毒后饲喂。犊牛自由饮水。犊牛于3日龄开始自由采食颗粒型开食料，各组犊牛饲喂相同的开食料。开食料由石家庄博瑞正诚饲料有限公司提供。常乳和开食料营养水平见表 1。

表 1 常乳及开食料营养水平(风干基础) Table 1 Nutrient levels of milk and starter (air-dry basis)

1.4 样品采集与处理 1.4.1 开食料与粪便样品的采集与处理

每2周采集1次开食料，-20 ℃冰箱保存，于试验结束后混匀样品并带回实验室，65 ℃烘干，粉碎分别过10、40目筛，待测。于试验第54、55、56天连续采集粪便样品3 d，采集粪便时饲喂新鲜常乳。每组随机选择8头犊牛，通过直肠采粪法，每头牛每天采集粪便样品300 g，混匀后分成2份，一份65 ℃烘干，粉碎分别过10、40目筛，待测粗脂肪(EE)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)、粗灰分(Ash)、钙(Ca)、磷(P)含量；另一份按每100 g粪便加10%的H₂SO₄进行处理，65 ℃烘干，粉碎分别过10、40目筛，待测粗蛋白质(CP)含量。

1.4.2 血液样品采集与处理

于犊牛饲喂初乳后48 h内以及试验第28、56天晨饲前，每组随机选择8头犊牛，通过颈静脉采集血液，用5 mL促凝管收集，室温静置30 min后，3 500×g离心15 min，分离血清，分装于离心管中，存于-20 ℃冰箱中，待测。

1.5 样品分析与测定 1.5.1 体重与体尺测定

犊牛出生当天和试验第56天晨饲前空腹称重，计算平均日增重(ADG)，并进行体尺测量。体尺测量指标包括体高、体斜长、胸围、腹围、管围。体高为鬐甲最高处距水平地面的垂直高度，用测杖测量；体斜长为肩关节前端到坐骨结节的直线距离，用硬尺测量；胸围是肩胛骨后角处体躯的垂直周径，腹围是后腿前部腹部的最大垂直周径，管围是左前肢最细处的水平周径，均用卷尺测量。

1.5.2 采食量测定

准确记录每天每头犊牛的牛乳饲喂量、开食料投喂量和剩料量，计算平均日采食量(ADFI)及料重比(F/G)。开食料投喂量根据前1天采食量设定，保证料槽中剩料不低于5%。

1.5.3 营养物质表观消化率测定

开食料及粪便中CP、EE、Ash、Ca、P含量分别参照GB/T 6432—1994、GB/T 6433—2006、GB/T 6438—2007、GB/T 6436—2002、GB/T 6437—2002测定，NDF和ADF含量参照Van Soest等^[13]的方法测定。参考酸不溶灰分法(GB/T 23742—2009)测定营养物质表观消化率，计算公式如下：

式中：a为饲粮中该营养物质含量(%)；b为粪中该营养物质的含量(%)；c为饲粮中酸不溶灰分含量(%)；d为粪中酸不溶灰分含量(%)。

1.5.4 血清指标测定

用深圳迈瑞BS-420型全自动生化分析仪检测血清葡萄糖(GLU)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(UN)含量，检测试剂为深圳迈瑞配套生化试剂盒。用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定血清免疫球蛋白G(IgG)、MDA、2，3-二磷酸甘油酸(2，3-DPG)、促红细胞生成素(EPO)含量及T-AOC与SOD、CAT、GSH-Px活性，试剂盒购自北京华悦昌生物科技有限公司，严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.6 统计分析

犊牛ADG、F/G、体尺指标、营养物质表观消化率数据用SAS 9.4软件的MIXED模型进行分析，试验处理为固定效应，犊牛为随机效应，用Turkey法进行多重比较检验，用contrast语句对5-HMF添加量的线性、二次和三次效应进行分析。将1日龄犊牛血清生化、免疫、抗氧化和红细胞携氧功能指标数据作为协变量参与到MIXED模型中。试验结果以平均值和均值标准误(SEM)表示，P < 0.05表示差异显著，0.05≤P < 0.10表示差异有显著趋势。

2 结果与分析 2.1 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛生长性能的影响 2.1.1 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛体重指标的影响

由表 2可知，添加5-HMF对犊牛56日龄体重和平均日采食量无显著影响(P>0.05)，有提高ADG的趋势(P=0.08)，且随5-HMF添加量的增加，犊牛ADG呈现先升高后降低的二次曲线变化(P=0.02)，F/G呈现先降低后升高的二次曲线变化(P=0.04)。

表 2 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛体重指标的影响 Table 2 Effects of different additive amounts of 5-HMF on body weight indices of sucking calves

2.1.2 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛体尺指标的影响

由表 3可知，1日龄时，各组犊牛的体高、体斜长、胸围、腹围、管围均差异不显著(P>0.05)。添加5-HMF对56日龄犊牛的体高、体斜长、胸围、腹围、管围均无显著影响(P>0.05)。

表 3 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛体尺指标的影响 Table 3 Effects of different additive amounts of 5-HMF on body size indices of sucking calves

cm
项目 Items	组别Groups				SEM	P值P-value
项目 Items	5-HMF0	5-HMF1	5-HMF2	5-HMF3	SEM	处理 Treatment	线性 Linear	二次 Quadratic	三次 Cubic
体高Body height
1日龄1 day of age	76.0	75.5	75.5	75.3	1.25	0.98	0.69	0.92	0.92
56日龄56 days of age	90.7	91.5	90.8	91.4	0.80	0.87	0.71	0.93	0.46
体斜长Body length
1日龄1 day of age	69.5	69.4	70.1	70.2	0.98	0.90	0.50	0.95	0.74
56日龄56 days of age	91.8	90.5	90.1	91.7	1.81	0.87	0.95	0.42	0.91
胸围Hearth girth
1日龄1 day of age	76.6	76.5	76.0	75.8	2.11	0.99	0.76	0.99	0.95
56日龄56 days of age	104	103	102	103	1.4	0.89	0.51	0.75	0.80
腹围Abdominal circumference
1日龄1 day of age	74.1	74.2	74.5	73.5	0.54	0.62	0.60	0.30	0.53
56日龄56 days of age	108	108	110	110	3.9	0.98	0.72	0.97	0.80
管围Cannon circumference
1日龄1 day of age	10.1	10.1	10.1	10.0	0.08	0.90	0.56	0.67	0.85
56日龄56 days of age	12.9	13.1	12.8	12.5	1.85	1.00	0.85	0.91	0.96

表 3 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛体尺指标的影响 Table 3 Effects of different additive amounts of 5-HMF on body size indices of sucking calves

2.2 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛营养物质表观消化率的影响

由表 4可知，虽然添加5-HMF对哺乳犊牛DM、CP、EE、NDF、ADF、Ca和P的表观消化率无显著影响(P>0.05)，但添加5-HMF组犊牛除EE外的其他营养物质的表观消化率均高于5-HMF0组。

表 4 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛营养物质表观消化率的影响 Table 4 Effects of different additive amounts of 5-HMF on apparent digestibility of nutrients of sucking calves

2.3 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛血清生化、免疫、抗氧化和红细胞携氧功能指标的影响 2.3.1 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛血清生化及免疫指标的影响

由表 5可知，添加5-HMF对28、56日龄犊牛及全期血清GLU、ALB及GLB含量无显著影响(P>0.05)。在犊牛28和56日龄时，添加5-HMF对血清TP含量有显著影响的趋势(P=0.07、P=0.08)。与5-HMF0组相比，5-HMF2组犊牛全期血清TP含量显著升高(P < 0.05)。添加5-HMF对28日龄犊牛血清UN含量无显著影响(P>0.05)；与5-HMF0组相比，5-HMF2组56日龄犊牛血清UN含量显著降低(P < 0.05)；添加5-HMF对犊牛全期血清UN含量有显著影响的趋势(P=0.07)。添加5-HMF对56日龄犊牛血清IgG含量无显著影响(P>0.05)，对28日龄犊牛血清IgG含量有显著影响的趋势(P=0.07)；与5-HMF0组相比，5-HMF2组犊牛全期血清IgG含量显著升高(P < 0.05)。

表 5 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛血清生化及免疫指标的影响 Table 5 Effects of different additive amounts of 5-HMF on serum biochemical and immune indexes of sucking calves

项目 Items	组别Groups				SEM	P值P-value
项目 Items	5-HMF0	5-HMF1	5-HMF2	5-HMF3	SEM	处理 Treatment	线性 Linear	二次 Quadratic	三次 Cubic	日龄 Day of age	处理×日龄 Treatment×day of age
葡萄糖GLU/(mmol/L)
1日龄1 day of age	9.17	8.93	10.13	9.22	0.771	0.71	0.70	0.67	0.31
28日龄 28 days of age	9.12	9.95	10.16	9.30	0.510	0.42	0.74	0.11	0.84
56日龄 56 days of age	7.74	8.68	8.87	8.56	0.616	0.59	0.34	0.32	0.92
全期Overall	8.43	9.31	9.52	8.93	0.480	0.41	0.43	0.14	0.96	< 0.01	0.86
总蛋白TP/(g/L)
1日龄1 day of age	71.2	71.4	73.8	68.3	2.21	0.39	0.52	0.21	0.32
28日龄 28 days of age	69.8	72.2	74.4	70.9	1.55	0.22	0.44	0.07	0.43
56日龄 56 days of age	69.4	71.5	74.1	70.7	1.49	0.18	0.35	0.08	0.33
全期Overall	69.6^b	71.8^ab	74.3^a	70.8^b	1.12	0.04	0.24	0.01	0.23	0.70	0.92
白蛋白ALB/(g/L)
1日龄1 day of age	46.6	45.8	45.6	45.5	1.62	0.96	0.65	0.82	0.93
28日龄 28 days of age	41.9	44.3	44.6	42.7	1.65	0.63	0.72	0.21	0.99
56日龄 56 days of age	44.8	45.3	46.3	45.5	1.69	0.94	0.68	0.71	0.75
全期Overall	43.4	44.8	45.4	44.1	1.26	0.69	0.61	0.29	0.84	0.06	0.92
球蛋白GLB/(g/L)
1日龄1 day of age	24.6	25.7	28.1	22.7	2.40	0.46	0.77	0.19	0.39
28日龄 28 days of age	27.6	27.9	30.0	28.3	2.92	0.94	0.76	0.73	0.67
56日龄 56 days of age	24.8	26.1	27.4	25.9	3.14	0.95	0.73	0.66	0.85
全期Overall	26.2	27.0	28.7	27.1	2.18	0.88	0.65	0.58	0.68	0.27	0.97
尿素氮UN/(mmol/L)
1日龄1 day of age	4.46	4.87	4.64	4.21	0.507	0.83	0.67	0.42	0.85
28日龄 28 days of age	4.23	4.15	4.01	4.15	0.328	0.97	0.79	0.74	0.81
56日龄 56 days of age	4.88^a	4.37^ab	3.56^b	4.51^a	0.301	0.03	0.16	0.02	0.14
全期Overall	4.56	4.26	3.78	4.33	0.223	0.11	0.25	0.07	0.23	0.39	0.32
免疫球蛋白G IgG/(g/L)
1日龄1 day of age	27.9	25.9	27.0	27.7	1.07	0.55	0.93	0.21	0.48
28日龄 28 days of age	25.2	27.5	28.9	26.4	1.24	0.21	0.36	0.07	0.58
56日龄 56 days of age	27.6	28.5	31.1	28.1	1.24	0.21	0.48	0.13	0.19
全期Overall	26.4^b	28.0^ab	30.0^a	27.3^b	0.87	0.03	0.24	0.02	0.18	0.04	0.97
全期数据为28和56日龄的平均值。下表同。 Data of the whole period were the average values of 28 and 56 days of age. The same as below.

表 5 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛血清生化及免疫指标的影响 Table 5 Effects of different additive amounts of 5-HMF on serum biochemical and immune indexes of sucking calves

2.3.2 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛血清抗氧化指标的影响

由表 6可知，添加5-HMF对28日龄犊牛血清T-AOC无显著影响(P>0.05)，但与5-HMF0相比，5-HMF2组56日龄犊牛血清T-AOC显著升高(P < 0.05)；此外，添加5-HMF对犊牛全期血清T-AOC有显著影响的趋势(P=0.05)。添加5-HMF对56日龄犊牛血清MDA含量无显著影响(P>0.05)，但与5-HMF0组相比，5-HMF2组28日龄犊牛及全期血清MDA含量显著降低(P < 0.05)。添加5-HMF对56日龄犊牛血清GSH-Px活性无显著影响(P>0.05)，但5-HMF0组28日龄犊牛及全期血清GSH-Px、CAT活性显著低于其他3组(P < 0.05)；此外，添加5-HMF对56日龄犊牛血清CAT活性有显著影响的趋势(P=0.08)。添加5-HMF对28、56日龄犊牛及全期血清SOD活性无显著影响(P>0.05)。

表 6 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛血清抗氧化指标的影响 Table 6 Effects of different additive amounts of 5-HMF on serum antioxidant indexes of sucking calves

项目 Items	组别Groups				SEM	P值P-value
项目 Items	5-HMF0	5-HMF1	5-HMF2	5-HMF3	SEM	处理 Treatment	线性 Linear	二次 Quadratic	三次 Cubic	日龄 Day of age	处理×日龄 Treatment×day of age
总抗氧化能力T-AOC/(U/mL)
1日龄1 day of age	6.31	6.35	6.39	6.44	0.447	1.00	0.83	0.99	0.99
28日龄 28 days of age	6.62	6.84	7.04	6.74	0.451	0.93	0.78	0.57	0.81
56日龄 56 days of age	5.67^b	6.62^ab	7.26^a	6.43^ab	0.350	0.03	0.07	0.02	0.47
全期Overall	6.14	6.73	7.15	6.58	0.285	0.11	0.18	0.05	0.52	0.28	0.53
丙二醛MDA/(nmol/mL)
1日龄1 day of age	6.41	6.16	6.90	6.27	0.436	0.64	0.86	0.67	0.23
28日龄 28 days of age	7.27^a	6.46^ab	5.84^b	6.58^ab	0.325	0.04	0.07	0.02	0.44
56日龄 56 days of age	6.72	6.09	5.86	6.24	0.373	0.43	0.32	0.19	0.91
全期Overall	7.00^a	6.27^ab	5.85^b	6.41^ab	0.258	0.03	0.07	0.02	0.57	0.19	0.90
谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px/(U/mL)
1日龄1 day of age	283	270	270	288	17.0	0.83	0.85	0.37	0.94
28日龄 28 days of age	211^b	280^a	283^a	270^a	17.9	0.03	0.03	0.03	0.53
56日龄 56 days of age	236	264	277	257	14.8	0.28	0.25	0.13	0.77
全期Overall	224^b	272^a	280^a	264^a	11.5	0.01	0.02	0.01	0.76	0.83	0.57
过氧化氢酶CAT/(U/mL)
1日龄1 day of age	45.6	48.7	50.3	45.6	3.69	0.76	0.94	0.30	0.78
28日龄 28 days of age	41.4^b	53.7^a	56.1^a	51.5^a	2.21	< 0.01	< 0.01	< 0.01	0.76
56日龄 56 days of age	46.7	56.3	60.2	55.6	3.83	0.12	0.09	0.08	0.87
全期Overall	44.1^b	55.0^a	58.1^a	53.5^a	2.19	< 0.01	< 0.01	< 0.01	1.00	0.07	0.98
超氧化物歧化酶SOD/(U/mL)
1日龄1 day of age	152	156	161	157	11.6	0.96	0.71	0.75	0.86
28日龄 28 days of age	151	158	183	154	14.0	0.39	0.61	0.22	0.27
56日龄 56 days of age	166	168	168	166	11.4	1.00	0.99	0.84	0.98
全期Overall	159	163	175	160	9.9	0.62	0.72	0.32	0.42	0.51	0.58

表 6 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛血清抗氧化指标的影响 Table 6 Effects of different additive amounts of 5-HMF on serum antioxidant indexes of sucking calves

2.3.3 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛血清红细胞携氧功能指标的影响

由表 7可知，添加5-HMF对28、56日龄犊牛及全期血清2，3-DPG含量无显著影响(P>0.05)。与5-HMF0组相比，5-HMF1组28日龄犊牛血清EPO含量显著降低(P < 0.05)，5-HMF1组和5-HMF2组犊牛全期血清EPO含量显著降低(P < 0.05)；此外，添加5-HMF对56日龄犊牛血清EPO含量有显著影响的趋势(P=0.06)。

表 7 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛血清红细胞携氧功能指标的影响 Table 7 Effects of different additive amounts of 5-HMF on oxygen-carrying function indexes of erythrocytes in serum of sucking calves

项目 Items	组别Groups				SEM	P值P-value
项目 Items	5-HMF0	5-HMF1	5-HMF2	5-HMF3	SEM	处理 Treatment	线性 Linear	二次 Quadratic	三次 Cubic	日龄 Day of age	处理×日龄 Treatment×day of age
2，3-二磷酸甘油酸2, 3-DPG/(nmol/L)
1日龄1 day of age	405	395	428	398	33.2	0.90	0.93	0.77	0.49
28日龄 28 days of age	433	411	414	412	23.7	0.90	0.57	0.66	0.79
56日龄 56 days of age	386	384	371	386	26.3	0.97	0.91	0.74	0.75
全期Overall	410	397	392	399	17.9	0.92	0.65	0.59	0.96	0.05	0.98
促红细胞生成素EPO/(pg/mL)
1日龄1 day of age	404	397	405	406	31.1	1.00	0.92	0.90	0.88
28日龄 28 days of age	441^a	354^b	383^ab	410^ab	20.6	0.04	0.49	0.01	0.21
56日龄 56 days of age	421	330	334	351	27.6	0.10	0.11	0.06	0.52
全期Overall	431^a	342^b	358^b	381^ab	19.0	0.02	0.13	0.01	0.26	0.02	0.76

3 讨论

研究表明，5-HMF具有抗氧化、抗炎、抗缺氧等多种生物学功能^[14]。5-HMF不在《饲料添加剂品种目录》中，但其广泛存在于多种中药及中药炮制品中，是中药发挥其药理作用的物质基础之一^[15]，对动物具有安全性。

3.1 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛生长性能的影响

犊牛生长发育直接影响奶牛的配种月龄及生产性能^[2-3]，因此提高犊牛生长性能是奶牛培育的重要目标。本研究发现，虽然各组犊牛断奶体重差异不大，但是随着5-HMF添加量的增加，ADG二次升高，说明5-HMF可能有促进犊牛生长的作用，这与前人在猪^[10]、牦牛^[16]和鲤鱼^[17]上的研究结果一致。本研究中犊牛的ADG与F/G变化趋势一致，因此ADG的提高可能是通过提高饲料效率实现的。前人在大鼠和猪上的研究都发现5-HMF有提高动物采食量的作用^{[7, 10]}，与本研究的结果一致。采食调节是一个非常复杂的过程，受多种因素调节，其中机体抗氧化能力是影响动物采食量的重要因素之一。王艳明^[18]在围产期奶牛上的研究发现，提高机体的抗氧化能力能提高奶牛的采食量，因此5-HMF提高犊牛采食量可能是通过提高犊牛抗氧化能力实现的。

本试验中，虽然添加5-HMF提高了犊牛的ADG，但是对犊牛的体尺指标没有显著影响。犊牛的体型与其骨骼的生长发育有关，犊牛的体尺指标不仅能够反映犊牛各个部位及整体发育情况，还可以体现机体营养水平^[19]。一般情况下，犊牛体尺的发育主要由遗传因素决定^[20]，当营养物质的摄入量能够满足机体的营养需要时，犊牛体尺一般差异不大^[21]。本试验中，犊牛自由采食开食料，保证了充足的营养摄入，因此体尺指标无显著变化可能与试验牧场犊牛的饲养水平较高有关。

3.2 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛营养物质表观消化率的影响

营养物质表观消化率能够直接反映动物对饲粮中营养物质的消化利用情况，是影响动物生长发育的重要因素。DM表观消化率能够反映动物机体对饲料的利用效果，犊牛胃肠道生长发育程度、采食量、饲粮组成、环境条件等是影响DM表观消化率的主要因素^[22-23]。本试验中，各组犊牛DM表观消化率差异不显著，原因可能是各组犊牛的试验饲粮和环境条件相同。CP表观消化率能够反映机体对饲粮中含氮营养物质的消化利用情况，NDF和ADF表观消化率则是反映机体对饲粮中纤维消化利用情况的主要指标^[24]。本研究发现，添加5-HMF对哺乳犊牛的DM、CP、NDF、ADF表观消化率无显著影响，与犊牛饲料效率的提高结果不一致，这可能是由于营养物质表观消化率数据是在犊牛56日龄时测定的，反映的是测定日的情况，而F/G为全期计算值，仅用56日龄当天的结果可能无法全面反映犊牛整个试验期的消化率。

3.3 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛血清生化及免疫指标的影响

血清中的GLU含量能够反映反刍动物机体能量平衡动态水平^[25]。王丽华等^[26]研究表明，即使犊牛有较高的ADG，其血清GLU含量也无显著变化，与本试验结果一致，这可能与动物机体复杂的血糖调节机制有关。王聪聪等^[27]用5-HMF灌胃小鼠，发现血清TP含量升高，与本试验结果一致。血清中TP含量升高表明机体蛋白质的合成作用增强，在羔羊上的研究发现，较高的血清TP含量与生长性能升高有关，这可能是因为机体中氨基酸的脱羧基作用加强，促进了蛋白质的消化吸收。本试验中，添加5-HMF可提高犊牛血清TP含量，说明犊牛可能利用这部分蛋白质用于肌肉合成，从而提高犊牛的ADG。血清UN含量是反映动物蛋白质代谢的重要指标，较低的UN含量往往意味着较高的蛋白质利用效率^[28]。本试验中，添加5-HMF的犊牛血清UN含量降低，与王聪聪等^[27]在小鼠上的试验结果一致，说明添加5-HMF有提高犊牛蛋白质利用率的作用。本试验中，虽然添加5-HMF对CP表观消化率无显著影响，但使血清UN含量降低，且UN含量的变化规律与饲料效率的变化规律一致，意味着5-HMF提高犊牛的蛋白质利用效率可能是提高饲料效率的原因之一。

谷巍等^[29]用富含5-HMF的党参灌胃免疫抑制小鼠，结果表明模型组小鼠血清中IgG含量显著升高，与本试验结果一致，说明5-HMF可能有提高犊牛免疫能力的作用。Liu等^[30]研究发现，血清MDA含量降低能够提高小鼠血清中IgG含量，这可能是本试验中犊牛血清IgG含量升高的原因。

3.4 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛血清抗氧化指标的影响

机体抗氧化功能是反映动物健康状况的重要指标之一，机体过多的活性氧会导致氧化应激，从而造成组织损伤和机体炎症。T-AOC由酶促和非酶促抗氧化防御体系共同组成，代表机体真正的抗氧化能力，MDA则是脂质过氧化物的代谢产物之一。作为一种抗氧化酶，SOD能够促进阴离子超氧化物转化为过氧化氢(H₂O₂)，而CAT是清除机体内H₂O₂的重要酶，GSH-Px则可防止自由基对磷脂膜、酶和其他重要分子的破坏^[31]。在高脂饲粮中添加5-HMF能够显著降低小鼠血浆MDA含量，显著提高T-AOC和CAT活性^[9]。Li等^[8]研究也发现，给小鼠灌胃5-HMF能够显著降低小鼠肝脏中MDA含量，提高肝脏中CAT、SOD和GSH-Px活性，与本试验结果一致。5-HMF能够提高机体抗氧化能力可能与其结构中的不饱和键有关，而抗氧化能力的提高能够增强机体的抗应激能力。王栋等^[32]的研究发现，抗氧化能力较强的犊牛在断奶期有更高的生长性能、饲料效率和较低的断奶应激，因此添加5-HMF可能有降低犊牛断奶应激的潜力。

3.5 不同添加量的5-HMF对哺乳犊牛血清红细胞携氧功能指标的影响

血液中的2，3-DPG能够与血红蛋白结合，从而改变血红蛋白构象，导致其与氧的亲和力下降^[33]。研究表明，2，3-DPG含量升高是机体缺氧的代偿反应之一^[34]。而EPO是一种由肾脏和肝脏产生的糖蛋白激素，能够调节机体骨髓中红细胞的产生^[35]，当机体感知到红细胞中血红蛋白携氧能力下降或处于缺氧状态时，其分泌量会升高，从而刺激机体产生更多的红细胞来应对缺氧状态^[36]。本试验中，添加5-HMF使犊牛血清中EPO含量降低，原因可能是5-HMF具有很高的红细胞膜通透性，能通过稳定血红蛋白的R-态来增加血红蛋白与氧的亲和力^[37]，从而提高血红蛋白的携氧能力。

4 结论

本试验中，每头哺乳犊牛每天添加2 g 5-HMF产品(HMF含量为10%)对其平均日采食量、体尺指标和营养物质表观消化率无显著影响，但可以提高ADG和饲料效率，还能增强机体抗氧化和免疫能力。综合分析，在本试验条件下，哺乳犊牛的5-HMF适宜添加量为200 mg/(d·头)。

参考文献

[1]	刁其玉. 营养调控技术在犊牛培育中的应用[J]. 饲料工业, 2020, 41(7): 1-7. DIAO Q Y. The application of nutrition regulation technology in calf rearing[J]. Feed Industry, 2020, 41(7): 1-7 (in Chinese).
[2]	KRPÁLKOVÁ L, CABRERA V E, KVAPILÍK J, et al. Associations between age at first calving, rearing average daily weight gain, herd milk yield and dairy herd production, reproduction, and profitability[J]. Journal of Dairy Science, 2014, 97(10): 6573-6582. DOI:10.3168/jds.2013-7497
[3]	SOBERON F, VAN AMBURGH M E. Lactation biology symposium: the effect of nutrient intake from milk or milk replacer of preweaned dairy calves on lactation milk yield as adults: a Meta-analysis of current data[J]. Journal of Animal Science, 2013, 91(2): 706-712. DOI:10.2527/jas.2012-5834
[4]	徐建雄. 关注氧化应激提高动物健康水平[J]. 饲料与畜牧, 2012(8): 1. XU J X. Focus on oxidative stress to improve animal health[J]. Feed and Husbandry, 2012(8): 1 (in Chinese).
[5]	田丹, 田苗, 张蕾蕾, 等. 丙泊酚对兔小肠缺血再灌注损伤的影响[J]. 长春中医药大学学报, 2019, 35(4): 727-730, 735. TIAN D, TIAN M, ZHANG L L, et al. Influence of propofol on intestinal ischemia-reperfusion injury in rabbits[J]. Journal of Changchun University of Traditional Chinese Medicine, 2019, 35(4): 727-730, 735 (in Chinese).
[6]	RAO R, CHAUDHRY K. Glutamine protects GI epithelial tight junctions[M]//RAJENDRAM R, PREEDY V R, PATEL V B. Glutamine in clinical nutrition. New York: Humana Press, 2015: 323-337.
[7]	李利芬. 酵母菌发酵对熟地黄生物活性的影响研究[D]. 硕士学位论文. 济南: 山东大学, 2017. LI L F. Effect of yeast fermentation on the biological activity of steamed Rehmannia root[D]. Master's Thesis. Jinan: Shandong University, 2017. (in Chinese)
[8]	LI W, QU X N, HAN Y, et al. Ameliorative effects of 5-hydroxymethyl-2-furfural (5-HMF) from Schisandra chinensis on alcoholic liver oxidative injury in mice[J]. International Journal of Molecular Sciences, 2015, 16(2): 2446-2457. DOI:10.3390/ijms16022446
[9]	宋玉蓉, 刘云, 乐国伟, 等. 低聚蔗果糖及其5-羟甲基糠醛抗氧化能力研究[J]. 食品工业科技, 2010, 31(4): 342-345. SONG Y R, LIU Y, LE G W, et al. Study on antioxidation capability of fructose-oligosaccharide and 5-hydroxymethylfurfural[J]. Science and Technology of Food Industry, 2010, 31(4): 342-345 (in Chinese). DOI:10.3969/j.issn.1673-9078.2010.04.003
[10]	JEONG J S, KIM I H. Effect of probiotic bacteria-fermented medicinal plants (Gynura procumbens, Rehmannia glutinosa, Scutellaria baicalensis) as performance enhancers in growing pigs[J]. Animal Science Journal, 2015, 86(6): 603-609. DOI:10.1111/asj.12331
[11]	SIMONIAN T A. Toxico-hygienic characteristics of oxymethylfurfural[J]. Voprosy Pitaniia, 1969, 28(1): 54-58.
[12]	ABRAHAM K, GVRTLER R, BERG K, et al. Toxicology and risk assessment of 5-hydroxymethylfurfural in food[J]. Molecular Nutrition & Food Research, 2011, 55(5): 667-678.
[13]	VAN SOEST P J, ROBERTSON J B, LEWIS B A. Methods for dietary fiber, neutral detergent fiber, and nonstarch polysaccharides in relation to animal nutrition[J]. Journal of Dairy Science, 1991, 74(10): 3583-3597. DOI:10.3168/jds.S0022-0302(91)78551-2
[14]	姜哲轶, 吴婷月, 沈传斌, 等. 5-羟甲基糠醛的药理作用研究进展[J]. 新乡医学院学报, 2022, 39(1): 92-95. JIANG Z Y, WU T Y, SHEN C B, et al. Research progress on pharmacological effects of 5-hydroxymethylfurfural[J]. Journal of Xinxiang Medical University, 2022, 39(1): 92-95 (in Chinese).
[15]	王梅, 王越欣, 武英茹, 等. 5-羟甲基糠醛在中药加工过程中的变化及药理作用研究概况[J]. 药物评价研究, 2020, 43(11): 2319-2327. WANG M, WANG Y X, WU Y R, et al. Research progress on content changes of 5-hydroxymethyl furfural during processing of Chinese medicine and it's pharmacological effects[J]. Drug Evaluation Research, 2020, 43(11): 2319-2327 (in Chinese).
[16]	JIANG C X, DING L M, DONG Q M, et al. Effects of root extracts of three traditional Chinese herbs as dietary supplements on dry matter intake, average daily gain, rumen fermentation and ruminal microbiota in early weaned yak calves[J]. Animal Feed Science and Technology, 2021, 278: 115002. DOI:10.1016/j.anifeedsci.2021.115002
[17]	WANG J L, MENG X L, LU R H, et al. Effects of Rehmannia glutinosa on growth performance, immunological parameters and disease resistance to Aeromonas hydrophila in common carp (Cyprinus carpio L.)[J]. Aquaculture, 2015, 435: 293-300. DOI:10.1016/j.aquaculture.2014.10.004
[18]	王艳明. 日粮脂肪和能量水平对奶牛氧化应激、生产性能的影响及抗氧化剂添加效果研究[D]. 博士学位论文. 杭州: 浙江大学, 2010. WANG Y M. Effects of dietary fat and energy density on oxidative stress and lactation performance in dairy cows, in the absence or presence of antioxidant[D]. Ph. D. Thesis. Hangzhou: Zhejiang University, 2010. (in Chinese)
[19]	周怿. 酵母β-葡聚糖对早期断奶犊牛生长性能及胃肠道发育的影响[D]. 博士学位论文. 北京: 中国农业科学院, 2010. ZHOU Y. Effects of dietary yeast β-glucan on growth performance and gastrointestinal development in pre-ruminant calves[D]. Ph. D. Thesis. Beijing: Chinese Academy of Agricultural Sciences, 2010. (in Chinese)
[20]	刘云龙. 不同蛋白源组合代乳品对哺乳期犊牛生长性能和肠道发育的影响[D]. 硕士学位论文. 北京: 中国农业科学院, 2020. LIU Y L. Effects of different protein source combinations in milk replacer on growth performance and intestinal development of suckling calves[D]. Master's Thesis. Beijing: Chinese Academy of Agricultural Sciences, 2020. (in Chinese)
[21]	NUGENT R A 3rd, NOTTER D R, BEAL W E. Body measurements of newborn calves and relationship of calf shape to sire breeding values for birth weight and calving ease[J]. Journal of Animal Science, 1991, 69(6): 2413-2421. DOI:10.2527/1991.6962413x
[22]	张垄菲, 林波, 周芳芳, 等. 不同粗饲料来源对荷斯坦公犊生长性能、血清生化指标及营养物质表观消化率的影响[J]. 饲料研究, 2022, 45(2): 1-5. ZHANG L F, LIN B, ZHOU F F, et al. Effect of different roughage sources on growth performance, serum biochemical indexes and nutrient apparent digestibility of Holstein calves[J]. Feed Research, 2022, 45(2): 1-5 (in Chinese).
[23]	CHEN Y H, PENNER G B, LI M J, et al. Changes in bacterial diversity associated with epithelial tissue in the beef cow rumen during the transition to a high-grain diet[J]. Applied and Environmental Microbiology, 2011, 77(16): 5770-5781. DOI:10.1128/AEM.00375-11
[24]	张一为, 赵国先, 孙少华, 等. 全株玉米青贮与花生秧间组合效应的研究[J]. 饲料研究, 2015(9): 38-41. ZHANG Y W, ZHAO G X, SUN S H, et al. Study on combination effect between whole plant corn silage and peanut seedling[J]. Feed Research, 2015(9): 38-41 (in Chinese).
[25]	蔡健森. 蛋白来源对早期断奶羔羊生产性能和器官发育及血清生化指标的影响[D]. 硕士学位论文. 北京: 中国农业科学院, 2007. CAI J S. Effect of protein sources on performance and organ development and serum biochemical indexes in early-weaned lambs[D]. Master's Thesis. Beijing: Chinese Academy of Agricultural Sciences, 2007. (in Chinese)
[26]	王丽华, 徐宏建, 张全宇, 等. 不同剂量25羟基维生素D₃对断奶前犊牛生长性能、营养物质表观消化率、血浆代谢物及粪便菌群的影响[J]. 动物营养学报, 2022, 34(1): 404-412. WANG L H, XU H J, ZHANG Q Y, et al. Effects of different doses of 25-hydroxyvitamin D₃ on growth performance, nutrient apparent digestibility, plasma metabolites and fecal flora of pre-weaning calves[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2022, 34(1): 404-412 (in Chinese). DOI:10.3969/j.issn.1006-267x.2022.01.038
[27]	王聪聪, 郑振佳, 卢晓明, 等. 黑蒜中5-羟甲基糠醛的生成规律及安全性评价[J]. 食品科学, 2022, 43(3): 100-105. WANG C C, ZHENG Z J, LU X M, et al. Formation and safety evaluation of 5-hydroxymethylfurfural in black garlic[J]. Food Science, 2022, 43(3): 100-105 (in Chinese).
[28]	LIU H, JI H F, ZHANG D Y, et al. Effects of Lactobacillus brevis preparation on growth performance, fecal microflora and serum profile in weaned pigs[J]. Livestock Science, 2015, 178: 251-254. DOI:10.1016/j.livsci.2015.06.002
[29]	谷巍, 孙明杰, 王丽荣, 等. 4味常见中药对免疫抑制小鼠免疫功能及肠道菌群的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2019, 46(1): 147-156. GU W, SUN M J, WANG L R, et al. Effects of four kinds of traditional Chinese medicine on immune performance and intestinal flora in immunosuppressed mice[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2019, 46(1): 147-156 (in Chinese).
[30]	LIU J Y, FENG C P, LI X, et al. Immunomodulatory and antioxidative activity of Cordyceps militaris polysaccharides in mice[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2016, 86: 594-598. DOI:10.1016/j.ijbiomac.2016.02.009
[31]	MA J, WANG C, WANG Z S, et al. Active dry yeast supplementation improves the growth performance, rumen fermentation, and immune response of weaned beef calves[J]. Animal Nutrition, 2021, 7(4): 1352-1359. DOI:10.1016/j.aninu.2021.06.006
[32]	王栋, 杜垣逸, 郑铎, 等. 饲粮中添加凹凸棒土对荷斯坦犊牛生长性能、腹泻率、血清生化指标和肠道菌群的影响[J]. 动物营养学报, 2021, 33(12): 6843-6852. WANG D, DU Y Y, ZHENG D, et al. Effects of palygorskite supplementation on growth performance, diarrhea incidence, serum biochemical indexes and intestinal microflora of Holstein calves[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2021, 33(12): 6843-6852 (in Chinese).
[33]	TILTON R G, CHANG K C, LEJEUNE W S, et al. Role for nitric oxide in the hyperpermeability and hemodynamic changes induced by intravenous VEGF[J]. Investigative Ophthalmology & Visual Science, 1999, 40(3): 689-696.
[34]	张曼, 周爱儒, 汤健. 血管再狭窄的基因治疗[J]. 中国介入心脏病学杂志, 1999, 7(1): 46-48. ZHANG M, ZHOU A R, TANG J. Gene therapy for vascular restenosis[J]. Chinese Journal of Interventional Cardiology, 1999, 7(1): 46-48 (in Chinese).
[35]	MOORE E, BELLOMO R. Erythropoietin (EPO) in acute kidney injury[J]. Annals of Intensive Care, 2011, 1(1): 3.
[36]	姜继宗. 氧感知机制的揭示有助于多种疾病的治疗——解读2019年诺贝尔生理学或医学奖[J]. 自然杂志, 2019, 41(6): 401-406. JIANG J Z. The revealing of oxygen sensing mechanism is conductive to fighting many diseases: the interpretation of Nobel Prize in physiology or medicine 2019[J]. Chinese Journal of Nature, 2019, 41(6): 401-406 (in Chinese).
[37]	ABDULMALIK O, SAFO M K, CHEN Q K, et al. 5-hydroxymethyl-2-furfural modifies intracellular sickle haemoglobin and inhibits sickling of red blood cells[J]. British Journal of Haematology, 2005, 128(4): 552-561.