2. 中国农业科学院饲料研究所, 生物饲料开发国家工程研究中心, 北京 100081
2. National Engineering Research Center of Biological Feed, Feed Research Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China
二十二碳六烯酸(DHA，C22∶ 6 ω-3)是一种ω-3系长链多不饱和脂肪酸(PUFA)，必须由食物摄入。DHA能促进脑、视网膜形成和延缓脑的衰老，具有降血脂、预防和治疗心血管疾病、抗炎等多种生理功能[1]。因此，富含DHA的食品引起了人们的广泛关注。研究表明，蛋鸡饲粮中添加ω-3 PUFA可增加DHA在蛋黄中的沉积，如饲粮中添加3%鱼油，蛋黄中二十碳五烯酸(EPA)+DHA的含量超过180 mg/枚[2]。常用于饲料的ω-3 PUFA源有鱼油、亚麻籽、海洋藻类等，但因鱼油的特殊腥味可能影响畜禽产品的风味等，开发富含ω-3 PUFA的新原料作为鱼油替代品已经成为研究的热点[3]。微藻是海洋食物链中的初级生产者，富含DHA，是ω-3 PUFA的原始生产者[4]，裂殖壶菌(Schizochytrium，SL)是微藻中较为重要的DHA生产者，SL粉中的DHA与鱼油中的DHA形式完全一致，且EPA含量较低，更易于人接受[5]。SL粉在蛋鸡中的应用较少，因此，本试验拟研究SL粉对商品蛋鸡生产性能、蛋品质、血清生化指标和蛋黄脂肪酸组成的影响，以期为生产实践提供指导。
SL粉购自厦门金达威集团股份有限公司，DHA含量占总脂肪酸的41.36%(实测值)，SL粉中DHA含量为137.09 mg/g。
试验选择29周龄体况良好、体重相近的海兰褐商品蛋鸡288只，随机分为4个组，每组6个重复，每个重复12只鸡。预试期1周，正试期6周。
基础饲粮参照NRC(1994)和我国《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004)，并结合海兰褐蛋鸡饲养手册配制，设计分别添加0、1%、2%和3%SL粉的4种试验饲粮，并用能量、蛋白质含量与SL粉相近的玉米干酒糟及其可溶物(DDGS)补足。试验饲粮组成及营养水平见表1，试验饲粮及SL粉脂肪酸组成见表2。
 | 表1 试验饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) % |
| 表2 试验饲粮及SL粉脂肪酸组成 Table 2 Fatty acids composition in experimental diets and SL powder % |
采用半开放式鸡舍3层立体笼养，自然光照加人工补光，光照时间为16 h/d。人工饲喂粉料，每日喂料2次，自由采食和饮水，每周消毒1次，常规免疫。
正试期以重复为单位，记录每天产蛋数、蛋重，每7天清料1次，记录该周耗料量。计算平均日采食量、料蛋比、产蛋率和平均蛋重。
分别于试验的第0、3、7、14、28和42天，每个重复取5枚鸡蛋，用于测定蛋壳强度、蛋白高度、蛋黄颜色、哈氏单位和蛋壳厚度等蛋品质指标。
试验结束后，于次日早晨空腹采血，每组随机抽取1只鸡，翅静脉采血5 mL，促凝管收集血液，3 500 r/min，离心30 min，制备血清，-20 ℃保存待测。
分别于正试期的第9、15、28和42天，每个重复取5枚鸡蛋，将蛋黄充分混匀，经过冻干机真空干燥后，-20 ℃保存，待分析脂肪酸含量。
蛋品质：采用SONOVA蛋品质自动分析仪(Egg AnalyzerTM, Orka Technology Ltd.)测定鸡蛋浓蛋白高度、哈夫单位和蛋黄颜色；蛋壳强度分析仪(Egg Force Reader，Orka Technology Ltd.)测定蛋壳强度；蛋壳厚度测定仪(Egg Shell Thickness Gauge, Orka Technology Ltd.)分析蛋壳厚度。
血清生化指标：采用北京北化康泰临床试剂有限公司试剂盒测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量。
蛋黄脂肪酸：1)准确称取蛋黄试样0.45~0.55 g于10 mL容量瓶中，添加正己烷并定容，振荡使其完全溶解，取1 mL溶液于20 mL试管中，加0.5 mol/L的氢氧化钾-甲醇(KOH-CH3OH)溶液3 mL，充分振荡，65 ℃水浴15 min，加入三氟化硼(BF3)-乙醚-甲醇溶液3 mL，振荡，65 ℃水浴5 min。冷却至室温，加饱和氯化钠(NaCl)溶液2 mL及正己烷1 mL，离心取上清，用于气相色谱分析。2)气相色谱测定条件：GC-2010色谱柱(60 mm×0.25 mm×0.25 μm)，载气为高纯度氮气(N2)，柱流速3.0 mL/min，氢气(H2)：40 mL/min，空气：400 mL/min。汽化室250 ℃，检测器280 ℃，色谱柱初始为100 ℃，以25 ℃/min升至200 ℃，再以4 ℃/min升至230 ℃，保持9 min。进样量1 μL。
采用SPSS 15.0软件的ANOVA程序进行统计分析，用Polynomial程序下的Quadratic进行线性和二次分析，用Duncan氏法进行差异显著性检验。P<0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著。同时采用GLM模块分析不同添加水平下蛋黄DHA含量随时间变化的规律，结果以平均值和标准误(SEM)表示。
由表3可知，蛋鸡饲粮添加SL粉对平均蛋重影响不显著(P＞0.05)，随饲粮SL粉添加水平增加，平均蛋重有降低的趋势，但降低幅度较小，试验期内，平均蛋重稳定在62 g左右，料蛋比稳定在2.3上下，均未到达显著水平(P＞0.05)；随饲粮SL粉添加水平的提高，产蛋率有增高的趋势，但未到达显著水平(P＞0.05)；饲粮SL粉添加水平对蛋鸡平均日采食量有显著影响(P＜0.05)，随饲粮SL添加水平的提高，平均日采食量提高趋势明显，2%和3%SL粉组分别比对照组高6.18%和6.59%(P＜0.05)。结果提示，饲粮添加SL粉对平均蛋重、料蛋比均没有影响，产蛋率有增长的趋势，提高了蛋鸡平均日采食量。
| 表3 SL粉对蛋鸡生产性能的影响 Table 3 Effects of SL powder on performance of laying hens |
由表4可知，饲粮添加SL粉显著影响蛋鸡血清TG含量(P＜0.05)。随饲粮SL粉添加水平的增加，血清TC含量先降低后升高，1%和2%SL粉组分别比对照组降低了29.84%和31.72%(P<0.05)；3%SL粉组略有升高，与其他各组均差异不显著(P＞0.05)。1%、2%和3%SL粉组血清TG含量分别比对照组降低了46.12%、34.07%和32.16%(P<0.05)，3组之间差异不显著(P＞0.05)。随饲粮SL粉添加水平增加，血清LDL-C含量先降低后升高，1%和2%SL粉组血清LDL-C含量分别比对照组降低了42.91%和42.5%(P<0.05)。结果提示，饲粮添加SL粉可降低蛋鸡血清TC、TG和LDL-C含量，但SL粉添加水平为3%时，血清TC、TG和LDL-C含量略有升高趋势。
| 表4 SL粉对蛋鸡血清生化指标的影响 Table 4 Effects of SL powder on serum biochemical indices of laying hens mmol/L |
由表5可知，在整个试验期内，饲粮添加SL粉对鸡蛋蛋形指数、蛋壳厚度、蛋壳强度、哈氏单位、蛋白高度的影响均不显著(P＞0.05)。蛋黄颜色与饲粮SL粉添加水平有密切的关系，但蛋黄颜色与饲粮SL粉添加水平也不是简单的线性关系，当饲粮SL粉添加水平为1%时，蛋黄颜色显著高于其他各组(P＜0.05)，比对照组提高了9.72%，其他各组与对照组差异不显著(P＞0.05)。结果提示，蛋鸡饲粮添加1%SL粉会加深蛋黄颜色，不影响其他蛋品质指标。
| 表5 SL粉对蛋鸡蛋品质的影响 Table 5 Effects of SL powder on egg quality of laying hens |
由表6可知，蛋黄脂肪酸组成受SL粉的影响较大。与对照组相比，2%和3%SL粉组蛋黄中PUFA含量显著升高(P＜0.05)，分别比对照组提高了18.20%和12.15%；1%SL粉组也提高了9.62%，但与对照组差异不显著(P＞0.05)。
| 表6 SL粉对蛋黄脂肪酸组成的影响 Table 6 Effects of SL powder on fatty acid composition of egg yolk % |
1%、2%和3%SL粉组ω-3 PUFA含量显著高于对照组(P＜0.05)，分别比对照组提高了39.2%、85.2%和76.7%；2%和3%SL粉组又显著高于1%SL粉组(P＜0.05)；2%和3%SL粉组之间差异不显著(P＞0.05)。其中DHA含量随着饲粮SL粉添加水平的提高而升高，1%、2%和3%SL粉组显著高于对照组(P＜0.05)，分别比对照组提高了66.1%、116.5%和122.9%；2%和3%SL粉组显著高于1%SL粉组(P＜0.05)，2%和3%SL粉组之间差异不显著(P＞0.05)。蛋黄中EPA含量虽有所提高，但因原料中EPA含量有限，使其在蛋黄中所占总量有限。
1%、2%和3%SL粉组ω-6 PUFA含量分别比对照组提高了6.4%、11.1%和5.2%，2%SL粉组显著高于对照组(P＜0.05)，其余各组之间差异不显著(P＞0.05)。其中2%和3%SL粉组蛋黄中亚油酸(C18∶ 2 ω-6)含量显著升高(P＜0.05)，分别比对照组高了12.64%和9.15%，但2组之间差异不显著(P＞0.05)；1%SL粉组也提高了7.97%，但与其他各组均差异不显著(P＞0.05)。因原料中C18∶ 3 ω-6含量有限，使其在蛋黄中所占总量有限。随着饲粮SL粉添加水平的提高，花生四烯酸(C20∶ 4 ω-6)含量均有所降低，其中3%SL粉组比对照组降低了23.92%(P＜0.05)。
虽然ω-3 PUFA和ω-6 PUFA含量均因饲粮SL粉添加水平升高而升高，但因SL粉中ω-3 PUFA(尤其是DHA)含量更丰富，仍显著降低了ω-6/ω-3(P＜0.05)。1%、2%和3%SL粉组ω-6/ω-3分别比对照组显著降低了23.9%、40.2%和39.8%，2%和3%SL粉组显著低于1%SL粉组(P＜0.05)，2组之间差异不显著(P＞0.05)。
由表6可知，与PUFA在蛋黄中的含量相反，MUFA含量随饲粮SL粉添加水平增加明显降低，其中2%SL粉组显著低于对照组(P<0.05)。饲粮添加SL粉对SFA含量的影响有限。计算MUFA+PUFA的含量可以得出，各组(0、1%、2%和3%SL粉组分别为64.22%、64.02%、63.67%和64.85%)基本一致，这提示我们，PUFA含量的增加是因为MUFA含量减少导致。MUFA中，因为C18∶ 1 ω-9含量较高，所以降低明显，尤其是2%SL粉组，显著低于对照组和3%SL粉组(P<0.05)；C16∶ 1 ω-7含量的变化没有规律；C20∶ 1 ω-9含量比较保守，未因饲粮改变而变化。
结果提示，饲粮添加SL粉能线性增加蛋黄中PUFA含量，但SL粉添加水平超过2%时，蛋黄中PUFA含量不会继续增加；PUFA含量的增加是因为MUFA含量减少导致。
由表7可知，随饲粮SL粉添加水平的增加，蛋黄DHA含量有不同程度的提高。在第9、15和28天时，SL粉组蛋黄DHA含量显著高于对照组(P＜0.05)，随饲粮SL粉添加水平的提高，蛋黄DHA含量显著升高(P＜0.05)。在第42天时，1%、2%和3%SL粉组蛋黄DHA含量显著高于对照组(P＜0.05)；2%和3%SL粉组蛋黄DHA含量差异不显著(P＞0.05)，显著高于1%SL粉组(P＜0.05)。第15天后蛋黄DHA含量基本达到稳定，延长试验期蛋黄DHA含量变化不大。
结果提示，DHA在鸡蛋中富集率呈线性下降，方程为y=-11.61x+58.13，1%SL粉组DHA富集率最高，为18.34%，2%SL粉组为16.44%，3%SL粉组为15.03%。
| 表7 SL粉对蛋黄DHA含量的影响 Table 7 Effects of SL powder on DHA content of egg yolk mg |
本试验结果表明，饲粮添加SL粉对料蛋比、产蛋率和平均蛋重的影响不显著。Hargis等[2]在饲粮中添加鱼油或全脂亚麻籽，结果显示鱼油或全脂亚麻籽对料蛋比、产蛋率和平均蛋重无明显影响，与本试验结果一致。但本试验中随着饲粮SL粉添加水平的增高，平均蛋重呈现下降趋势，未达到显著水平。原因是饲喂蛋鸡富含ω-3 PUFA的饲粮，可增加机体ω-3 PUFA含量，抑制ω-6 PUFA的吸收，而后者的不足可导致脂质向卵巢转运速度减慢，脂蛋白合成降低，血浆雌二醇水平降低，从而抑制卵泡发育，降低蛋重[6]。饲粮中添加25%整粒亚麻籽、1%亚麻油和1%鱼油能显著提高蛋鸡采食量[7]；饲粮中添加5%微藻粉粕肉鸡采食量也显著增加[8]，这都与本研究结果相似，原因可能是冬天气温低，蛋鸡维持需要的能量较高，导致蛋鸡提高采食量来维持自身代谢。研究表明，随着饲粮中鱼油用量提高，鸭蛋蛋黄颜色加深[9]。本试验饲粮添加SL粉同样能增加鸡蛋蛋黄颜色，与1%SL粉组相比，对照组和2%、3%SL粉组的蛋黄颜色有不同程度的降低，分析其原因可能为饲粮SL粉中PUFA氧化，而增加了机体抗氧化功能的脂溶性色素如β-胡萝卜素和叶黄素的消耗，导致蛋黄颜色的变浅。1%SL粉组蛋黄颜色最深，原因是SL粉中含有类胡萝卜素、角黄素，其中β-胡萝卜素是一种强抗氧化剂和着色剂，它可以显著增加蛋黄颜色[10]，同时也可抑制PUFA氧化。由此可见，饲粮SL粉添加水平不宜大于2%。
胆固醇在体内有着广泛的生理作用，过量会导致高胆固醇血症，其中，低密度脂蛋白是导致心脑血管疾病的元凶，对机体产生不利影响，TG过高直接体现在动脉粥样硬化上。大量研究发现，饲粮中添加ω-3 PUFA能明显改变蛋鸡血清中脂类物质的含量。ω-3 PUFA和ω-6 PUFA都能显著降低血清TC和TG含量，同时ω-3 PUFA还能降低蛋黄TC和TG含量[7]。有研究表明，在蛋鸡饲粮中添加不同比例的鱼油和菜油，各组能显著降低血清中TC、TG和LDL-C的含量[11]，这与本试验结果类似。因为ω-3 PUFA抑制肝脏中编码脂肪合成酶和糖酵解酶的基因转录，从而抑制了肝脏中脂类物质的合成，提高HDL-C的含量，从而降低组织中胆固醇的沉积，加快胆固醇从体内的排泄[12]；ω-3 PUFA通过影响低密度脂蛋白的合成与分解速度，改变脂蛋白的脂肪酸组成，增加其流动性，同时抑制肝脏中脂肪酸和TG的形成，进而降低了血清TG含量[13]。本试验表明，蛋鸡饲粮中添加SL粉也可降低血清TC、TG和LDL-C含量，其中1%SL粉组血清中TC、TG和LDL-C含量最低。
蛋黄中脂肪酸组成反映原料的脂肪酸组成，鸡蛋中85%或78%的DHA和EPA来自于它们在饲粮中相应的含量[14]。本试验表明，随着饲粮SL粉添加水平的提高，ω-3 PUFA含量升高，其中DHA和EPA均有不同程度提高，这与邓兴照等[7]的报道一致。用海藻饲喂蛋鸡，可显著增加蛋黄中ω-3 PUFA含量，并伴随着ω-6 PUFA含量的下降，本试验中ω-6 PUFA含量反而呈现上升趋势，原因可能是蛋鸡品种、饲喂海藻不同及饲喂方式有区别。饲粮中添加ω-3 PUFA原料能竞争抑制花生四烯酸在鸡蛋中的沉积，提高鸡蛋中ω-3 PUFA含量，降低ω-6/ω-3[15]，本试验也得出了类似结果，随着饲粮SL粉添加水平的增加，鸡蛋中ω-6/ω-3下降，显著增加了鸡蛋的营养价值。
改变饲粮脂肪酸组成和含量将会改变鸡蛋中脂肪酸的组成。本试验中1%、2%和3%SL粉组中蛋黄DHA含量并不是成倍数增长。蛋鸡饲粮中添加2.4%和4.8%SL粉，鸡蛋中ω-3 PUFA含量分别为9.5和11.5 mg/g，最高沉积量在4.8%SL粉组，4.8%SL粉组ω-3 PUFA含量并不是2.4%SL粉组的2倍[6]，这与本试验结果相似。本试验表明，蛋黄中DHA含量随着饲粮SL粉添加时间的延长均有不同程度提高，这与Milinsk等[16]的报道一致。添加SL粉第15天时，DHA可快速沉积到蛋黄中，并在蛋黄中沉积量达到稳定。2%SL粉组表现出较好的沉积效果，随着添加时间的延长，其上升幅度趋缓。第42天时，当饲粮SL粉添加水平超过2%时，继续增加饲粮SL粉添加水平蛋黄中DHA含量也不会继续增加，表明DHA并不会在蛋鸡中无限富集，DHA在蛋黄中的沉积有一定的剂量效应，添加水平过高反而会抑制其在蛋黄中的沉积，SL粉添加水平越高其沉积效率也越低。
① 饲粮添加SL粉对蛋鸡产蛋率、料蛋比和平均蛋重的影响不显著，可增加蛋鸡采食量；饲粮添加SL粉对蛋鸡蛋品质的影响不显著，可降低血清TC、TG和LDL-C含量。
② 饲粮添加SL粉会增加蛋中ω-3 PUFA和DHA含量，降低ω-6/ω-3。
③ 饲粮SL粉添加水平超过2%时，蛋黄中DHA含量不会继续增加。DHA在鸡蛋中富集15 d即可饱和。
④ 综上所述，本试验条件下在蛋鸡饲粮中添加2%SL粉可有效促进DHA在蛋黄中沉积，并且对蛋鸡生产性能和蛋品质无不良影响。
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