目前，抗生素、促长素、酸化剂、重金属及诱食剂等饲料添加剂普遍应用于饲料行业，虽然这在一定程度上促进了畜牧业的发展，但也带来了畜产品肉品质下降、畜产品药物和重金属残留、细菌耐药性增强及环境污染等不良后果[1,2,3]。在畜禽养殖过程中使用的抗生素，绝大多数以母体药物及代谢产物的形式通过粪尿排到土壤中[4]，这些排到土壤中的抗生素因不能有效降解而长期存留在土壤中[5]，是对生物和环境的潜在威胁。姜萍等[6]研究发现，饲粮中铜(Cu)、锌(Zn)、铅(Pb)、镉(Cd)含量与猪粪中对应元素的含量呈显著正相关，而用该猪粪施肥的疏菜中重金属含量也与土壤中重金属含量呈显著正相关。鉴于此，现如今的饲料企业和营养学家都在寻找既具有增强动物机体免疫力、抗菌和抗应激等作用，还具有毒副作用小、畜禽体内无残留等特点的新型饲料添加剂[7]。其中，从陈皮中提取出来的黄酮类化合物——陈皮苷(也称作橙皮苷)，具有促进胃肠道运动、增强消化酶活性、增强机体免疫力、抗菌抗过敏及抗氧化等作用，在国内外已较为广泛地运用于营养调控的研究中。陈皮是用芸香科小乔木橘及其变种的成熟果实的果皮经过干燥处理制成的，主产于福建、四川、江苏、江西、浙江、湖南及广东等地，主要成分是黄酮类化合物[8,9]以及D-柠檬烯、β-松油烯、β-月桂烯、间-伞花烯和β-蒎烯等53种挥发油，还包括钾(K)、钠(Na)、钙(Ca)、镁(Mg)、Cu、Zn、铁(Fe)、锶(Sr)在内的多种微量元素[10,11]。陈皮苷便是陈皮中提取的黄酮类化合物中的一种，是橙皮素与双糖芸香糖形成的二氢黄酮苷类化合物[12]。研究发现，陈皮及陈皮苷具有调节胃肠运动、保肝、利胆、祛痰等“理气健脾、燥湿化痰”的作用[13,14,15]。Pereira-Lorenzo等[16]认为，陈皮提取物黄酮类物质具有多种生物活性因子，具有很强的抗氧化、抗应激的能力。虽然目前有不少研究提及陈皮及其提取物作为饲料添加剂对肉鸡的作用，但有关陈皮苷在实际生产中的应用却鲜有研究。本试验拟以陈皮苷制剂为研究对象，探讨其对爱拔益加(AA)肉鸡生长性能、免疫器官指数及小肠黏膜形态结构的影响，以期为陈皮苷制剂在肉鸡生产中的合理应用提供一定的理论依据和参考。
试验所用陈皮苷制剂由北京生泰尔生物科技有限公司提供，其商品名为健壮素(其中陈皮苷的有效含量为80%)。
选用200羽1日龄体重相近的健康AA肉鸡，随机分为5个处理，每个处理4个重复，每个重复10羽。5个处理分别饲喂在基础饲粮中添加0(对照组)、50、100、150、200 mg/kg陈皮苷制剂的试验饲粮。基础饲粮为玉米-豆粕型饲粮，按照我国《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004)推荐的营养水平分阶段配制，其组成及营养水平见表1。
 | 表1 基础饲粮组成及营养水平(饲喂基础) Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (as fed-basis) % |
试验在江西农业大学肉鸡代谢室进行。所有鸡只在带有集粪盘的代谢笼(50 cm×45 cm×37 cm)内饲养。在试验开始前1周鸡舍用甲醛和高锰酸钾进行彻底熏蒸消毒，舍内温度、湿度和光照按常规饲养管理要求控制，鸡只免疫按鸡场常规程序执行。整个试验期间自由采食和饮水。试验期为42 d。
在试验第2、4、6周称取试验鸡的个体重，并记录各组试验鸡在不同生长阶段的采食量，用于计算各组试验鸡的平均日增重、平均日采食量及料重比。
分别在试验第2、4、6周从每个重复中随机选取2羽试验鸡进行屠宰，摘取肝脏、脾脏、法氏囊，计算肝脏、脾脏及法氏囊指数。由于家禽后期法氏囊退化萎缩，其重量维持较平衡水平，个体之间差异不大，故本试验没有计算后期(第6周)法氏囊指数。
取十二指肠、空肠、回肠段，用10%甲醛固定液固定，常规苏木精-伊红(HE)染色后制成5 μm石蜡切片，观察绒毛形态，计算绒毛高度、隐窝深度及绒毛高度/隐窝深度(V/C)。
基本数据处理采用Excel 2003，试验结果分析采用SPSS 17.0中的one-way ANOVA程序进行方差、线性和二次项分析，多重比较用Duncan氏法，结果以平均值和平均标准误(SEM)表示。
由表2可知，饲粮中陈皮苷制剂添加水平对1～14日龄AA肉鸡的平均日增重、平均日采食量以及料重比均没有显著影响(P>0.05)。饲粮中陈皮苷制剂添加水平对15～28日龄AA肉鸡的平均日采食量没有显著影响(P>0.05)，但随着陈皮苷制剂添加水平的增加，平均日增重、料重比分别呈线性增加和线性降低(P<0.05)，陈皮苷制剂添加水平达200 mg/kg时AA肉鸡的平均日增重为43.03 g，显著高于对照组的40.63 g(P<0.05)，此时AA肉鸡的料重比为1.72，显著低于对照组及50、100 mg/kg组(P<0.05)，但与150 mg/kg组差异不显著(P>0.05)。29～42日龄平均日采食量在各组AA肉鸡之间没有显著差异(P>0.05)，但随着陈皮苷制剂添加水平的增加，AA肉鸡的平均日增重、料重比分别呈线性增加和线性降低(P<0.05)。
| 表2 陈皮苷制剂对AA肉鸡生长性能的影响
Table 2 Effects of hesperidin preparation on growth performance of AA broilers
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由表3可知，饲粮中陈皮苷制剂添加水平对14日龄AA肉鸡的肝脏指数没有显著影响(P>0.05)；当陈皮苷制剂添加水平达到200 mg/kg时，其脾脏指数达到0.089%，显著高于对照组及100、150 mg/kg组(P<0.05)，但与50 mg/kg组差异不显著(P>0.05)；当陈皮苷制剂添加水平达到200 mg/kg时，其法氏囊指数达到0.284%，显著高于对照组及50、100、150 mg/kg组(P<0.05)。对于28日龄AA肉鸡，肝脏指数以对照组最低，仅有2.131%，显著低于50、100、150 mg/kg组(P<0.05)，但与200 mg/kg组差异不显著(P>0.05)；在脾脏指数方面，100 mg/kg组显著高于对照组(P<0.05)，50、150、200 mg/kg组相比对照组分别增加了12.5%、19.8%和16.7%(P>0.05)。饲粮中陈皮苷制剂添加水平对42日龄AA肉鸡的肝脏指数没有显著影响(P>0.05)，但对照组的脾脏指数显著低于100 mg/kg组(P<0.05)，且50、150、200 mg/kg组脾脏指数相比对照组分别增加了21.6%、20.1%和17.2%(P>0.05)。
| 表3 陈皮苷制剂对AA肉鸡免疫器官指数的影响
Table 3 Effects of hesperidin preparation on immune organ indexes of AA broilers %
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由表4可知，28日龄时，100、150、200 mg/kg组AA肉鸡各肠段绒毛高度相比对照组和50 mg/kg组均获得提高，其中以150、200 mg/kg组效果较佳，与对照组和50 mg/kg组差异显著(P<0.05)。饲粮中陈皮苷制剂添加水平对28日龄AA肉鸡的十二指肠隐窝深度没有显著影响(P>0.05)；对于空肠隐窝深度，各添加组均显著小于对照组(P<0.05)，且以100 mg/kg组为最小；对于回肠隐窝深度，100、150、200 mg/kg组相比对照组分别减少了21.1%、21.4%和20.2%(P<0.05)。对于十二指肠和回肠的V/C，随着陈皮苷制剂添加水平的增加呈线性增加(P<0.05)，当添加水平为150、200 mg/kg时显著高于对照组及50 mg/kg组(P<0.05)，此外，100 mg/kg组回肠的V/C也显著高于对照组及50 mg/kg组(P<0.05)，但与150、200 mg/kg组差异不显著(P>0.05)；对于空肠的V/C，各添加组均显著高于对照组(P<0.05)，且当陈皮苷制剂添加水平达到100 mg/kg时，其V/C达到47.59，比对照组增加了79.2%。
| 表4 陈皮苷制剂对AA肉鸡小肠黏膜形态结构的影响
Table 4 Effects of hesperidin preparation on small intestinal mucosal morphology of AA broilers
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42日龄时，随着陈皮苷制剂添加水平的增加，AA肉鸡各肠段的绒毛高度均呈线性增加(P<0.05)。对于十二指肠的绒毛高度，各添加组相比对照组均显著增加(P<0.05)，且当陈皮苷制剂添加水平达到200 mg/kg时绒毛高度达到1 541.05 μm，比对照组高出18.3%；对于空肠的绒毛高度，100、150、200 mg/kg组显著高于对照组(P<0.05)；对于回肠的绒毛高度，对照组最低，显著低于150 mg/kg组(P<0.05)，但与其他组差异不显著(P>0.05)。饲粮中陈皮苷制剂添加水平对42日龄AA肉鸡的十二指肠隐窝深度没有显著影响(P>0.05)；对于空肠及回肠，对照组隐窝深度均为最大，且显著大于100、150、200 mg/kg组(P<0.05)，但与50 mg/kg组差异不显著(P>0.05)。随着陈皮苷制剂添加水平的增加，各肠段的V/C均呈线性增加(P<0.05)。对于十二指肠，对照组的V/C最低，较50、200 mg/kg组显著降低(P<0.05)；50、100、150、200 mg/kg组的空肠V/C相比对照组分别增加了41.9%、70.2%、65.1%和76.3%(P<0.05)；对于回肠，仅150、200 mg/kg组的V/C显著高于对照组(P<0.05)。
动物的生长依赖机体对食物的有效消化和吸收。陈皮及陈皮苷对动物的物理消化及化学消化过程均具有一定的促进作用。研究发现，陈皮和陈皮苷能有效增强鼠的物理消化过程，在促进鼠胃排空、减少胃残留率和加快小肠对食物推进率方面效果非常显著[17,18]。陈皮和陈皮苷也能显著提高人的离体唾液淀粉酶[19]，罗非鱼胃中脂肪酶、胰蛋白酶及各消化场所中淀粉酶等消化酶的活性[20]，并能有效提高猪对蛋白质的消化率[21]和人肝细胞对葡萄糖的利用[22]。本试验结果表明，饲粮中添加150、200 mg/kg陈皮苷制剂能显著提高15～28日龄及29～42日龄AA肉鸡的平均日增重和料重比，但对其平均日采食量无显著影响，这与张耀等[23]的研究结果一致。从本试验来看，陈皮苷制剂对AA肉鸡生长的促进作用可能是由于陈皮中的挥发油刺激机体分泌胃液，促进了胃肠道的运动，也可能是由于对唾液淀粉酶分泌的促进作用提高了饲料转化效率，从而提高了生长性能。
AA肉鸡是目前我国肉鸡养殖的主打品种。与我国地方鸡种相比，AA肉鸡的抗应激能力和自身免疫力明显不足，这已成为肉鸡生产的一个先天制约因素。在现代肉鸡生产中，为了降低疾病风险，提高养殖效益，往往在肉鸡饲粮中添加抗生素。抗生素的长期使用往往导致鸡群自身免疫力进一步下降，甚至引起免疫抑制[24]。研究表明，陈皮及陈皮苷能有效增强机体特异性免疫，迅速形成对抗原的免疫应答。金治萃等[25]在对豚鼠注射橘皮液后发现，豚鼠血清中溶菌酶活性和血凝抗体含量均显著提高。陈皮苷还能有效提高大鼠的免疫力，抑制炎症的发生[26]。机体免疫器官指数是衡量机体免疫功能的初步指标，免疫器官的发育状况直接反映出机体的免疫应答水平。研究显示，陈皮提取物及陈皮苷可有效促进肉鸡中枢免疫器官的生长，一定量的陈皮苷可以提高脾脏指数和胸腺指数，并且表现出一定的量效关系[27,28]。从本试验的结果来看，饲粮中添加陈皮苷制剂对AA肉鸡免疫器官的生长均有一定的促进作用，其中，100 mg/kg添加水平的效果最明显。这种作用的产生可能是因为陈皮苷是从陈皮里提取出的黄酮类化合物，而黄酮类物质对促进机体免疫器官的发育具有非常有效的作用，这在包括梁英等[29]和戴汉慧等[30]等的许多研究中均有表述，但其作用机制尚不明确，有待进一步研究。
小肠作为肉鸡营养成分吸收的主要场所，在肉鸡营养物质消化吸收过程中发挥着至关重要的作用，而正常小肠黏膜形态结构的形成是其发挥理想吸收作用的基础。肉鸡小肠由十二指肠、空肠和回肠组成，肠段管壁分为黏膜层、肌层和浆膜层3层。由绒毛、微绒毛和皱襞等特殊结构构成的黏膜层，显著增加了小肠吸收营养物质的表面积，特别是黏膜结构的主要组成部分——小肠绒毛，其高度、宽度是反映小肠消化和吸收营养物质能力的特有指标[31,32]。隐窝是肠上皮细胞分化的部位，直接反映肠上皮细胞成熟率。隐窝变浅说明细胞成熟率高，分泌功能强，反之亦然。而V/C则是肠道功能的风向标。当肠道黏膜受损时，V/C下降，就会影响机体对营养物质的消化吸收[33]。肉鸡肠管结构随年龄逐渐发育成熟，其发育状况与营养物质吸收利用乃至畜禽生产性能都息息相关[34]。陈皮作为一味补益药，具有改善虚症患者的物质代谢低下或紊乱及改善消化系统等药效[35]。沈水宝等[36]研究发现，向仔猪饲粮中添加淀粉酶和蛋白酶能有效降低空肠中段肠绒毛的损伤，并能使十二指肠绒毛由扁平变为指状，大大改善小肠黏膜结构的完整性。张小莲[20]在对罗非鱼的试验中也发现，罗非鱼饲料中添加黄橙素(主要成分是陈皮苷)后，小肠的绒毛高度、肌层厚度均得到显著提高。本研究结果显示，当饲粮中陈皮苷制剂的添加水平为100、150、200 mg/kg时，能显著提高28及42日龄AA肉鸡小肠各段的绒毛高度，降低隐窝深度，升高V/C。而前面提到，陈皮苷有助于提高脂肪酶、胃蛋白酶、淀粉酶等消化酶的活性，由此作者推测，饲粮中添加陈皮苷制剂能提高小肠黏膜形态结构的完整性，促进小肠绒毛的生长发育，增加肠道吸收营养物质的有效面积，进而促进动物的生长。
① AA肉鸡饲粮中添加一定量的陈皮苷制剂可促进其小肠绒毛的生长和发育，提高其生长性能，并在一定程度上增强免疫力。
② 综合考虑生长性能、免疫器官指数及小肠黏膜形态结构指标，AA肉鸡饲粮中陈皮苷制剂的添加水平以150 mg/kg为宜。
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