试验用鱼为购自湖南农业大学水产基地同龄同批的草鱼，蚕豆和去皮蚕豆为来自同一公司的同一品种。养殖试验在室外水泥池中进行，水泥池规格为14 m×10 m，水深1.5 m。试验分为3个组，分别为对照组、蚕豆组和去皮蚕豆组，每组设置3个重复，每个重复放养50尾平均初始重为(860±40) g的草鱼，所用试验草鱼体质健壮活泼、规格均匀。

试验饲料组成及营养水平见表1。其中，对照饲料参考草鱼商品饲料配方，以豆粕、菜籽粕及棉籽粕为主要蛋白质源配制，粗蛋白质含量为28.75%；蚕豆饲料和去皮蚕豆饲料分别用蚕豆和去皮蚕豆部分替代对照饲料中的豆粕、菜籽粕及棉籽粕，蚕豆和去皮蚕豆的用量均为80%，粗蛋白质含量分别为28.28%和28.36%。饲料原料经粉碎过40目筛，微量成分采用逐级扩大法混合均匀，于湖南省畜牧研究所饲料厂加工成粒径为4 mm的饲料颗粒，颗粒加工时经过80 ℃蒸汽调制。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 试验饲料组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (DM basis) % 项目 Items 对照饲料 Control diet 蚕豆饲料 Broad bean diet 去皮蚕豆饲料 Dehulling broad bean diet 原料 Ingredients 豆粕 Soybean meal 8.00 2.00 2.00 菜籽粕 Rapeseed meal 24.00 6.00 6.00 棉籽粕 Cottonseed meal 24.00 6.00 6.00 蚕豆 Broad bean 80.00 去皮蚕豆 Dehulling broad bean 80.00 次粉 Wheat midding 29.30 0.79 0.79 豆油 Soybean oil 2.00 2.51 2.51 统糠 Chaff 10.00 磷酸二氢钙 Ca(H2PO4)2 1.50 1.50 1.50 氯化胆碱 Choline chloride 0.20 0.20 0.20 预混料 Premix 1.00 1.00 1.00 合计 Total 100.00 100.00 100.00 营养水平 Nutrient levels 粗蛋白质 Crude protein 28.75 28.28 28.36 粗脂肪 Crude lipid 4.17 4.07 4.77 粗灰分 Ash 5.73 5.76 5.81 总能 Gross energy/(MJ/kg) 17.11 16.85 16.96 预混料可为每千克饲料提供Premix provides the following per kg of diets：VA 6 000 IU，VD 2 000 IU，VE 50 mg，VK 5 mg，VB1 15 mg，VB2 15 mg，VB3 25 mg，VB5 30 mg，VB6 10 mg，VB7 0.2 mg，VB11 3 mg，VB12 0.03 mg，VC 100 mg，肌醇 inositol 100 mg，Zn 80 mg，Fe 150 mg，Cu 4 mg，Mn 20 mg，I 0.4 mg，Co 0.1 mg，Se 0.1 mg，Mg 100 mg。

表1 试验饲料组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (DM basis) %

每天投喂2次(08:00—09:00、17:00—18:00)，日投饵量为体重的3%~5%，并根据实际摄食情况调整。试验期间水温21~29 ℃，pH 6.7~7.7，日开增氧机6 h，溶解氧>5 mg/L。每天记录投喂量并观察试验鱼活动状况。养殖试验持续20周。

试验数据采用SPSS 13.0软件进行单因素方差分析处理，当差异显著(P<0.05)时，则采用Duncan氏法进行多重比较。分析结果用平均值±标准差(mean±SD)表示。

由表2可知，与对照组相比，蚕豆组和去皮蚕豆组草鱼的增重率和饲料系数均无显著变化(P>0.05)；蚕豆组和去皮蚕豆组草鱼的脏体指数和肝体指数均较对照组显著降低(P<0.05)，但蚕豆组和去皮蚕豆组之间差异不显著(P>0.05)。

由表3可知，与对照组相比，蚕豆组和去皮蚕豆组草鱼的血液红细胞和白细胞数量以及血清葡萄糖、总胆固醇和尿素氮含量均显著增加(P<0.05)，而血清甘油三酯含量在各组之间则无显著差异(P>0.05)；投喂蚕豆饲料和去皮蚕豆饲料对草鱼的血清溶菌酶活性无显著影响(P>0.05)，但显著降低了血清超氧化物歧化酶活性(P<0.05)；投喂蚕豆饲料和去皮蚕豆饲料均能使草鱼的血清谷草转氨酶活性显著升高(P<0.05)，同时，投喂去皮蚕豆饲料后草鱼的血清谷丙转氨酶活性亦显著升高(P<0.05)。

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 投喂蚕豆饲料和去皮蚕豆饲料对草鱼血液生理生化指标的影响 Table 3 Effects of feeding broad bean and dehulling broad bean diets on blood physiological-biochemical indices of grass carp (n=3) 项目 Items 组别 Groups 对照 Control 蚕豆 Broad bean 去皮蚕豆 Dehulling broad bean 红细胞 RBC/1012L-1 2.89±0.38a 4.08±0.32c 3.35±0.10b 白细胞 WBC/109L-1 7.75±0.35a 8.93±0.22b 9.13±0.06b 葡萄糖 GLU/(mmol/L) 7.61±0.25a 8.13±0.05b 9.76±0.19b 甘油三酯 TG/(mmol/L) 0.77±0.13 0.85±0.16 0.83±0.11 总胆固醇 TC/(mmol/L) 5.39±0.33a 6.61±0.25b 6.89±0.76b 尿素氮 UN/(mmol/L) 0.89±0.05a 1.32±0.15b 1.31±0.25b 溶菌酶 LSZ/(U/mL) 33.29±0.27 34.85±1.55 34.23±0.24 超氧化物歧化酶 SOD/(U/L) 102.21±0.40b 88.47±5.60a 93.65±4.35a 谷草转氨酶 GOT/(U/L) 822.28±15.42a 1 095.80±73.27b 1 222.50±18.01b 谷丙转氨酶 GPT/(U/L) 308.02±20.62a 301.44±11.21a 354.97±26.51b

表3 投喂蚕豆饲料和去皮蚕豆饲料对草鱼血液生理生化指标的影响 Table 3 Effects of feeding broad bean and dehulling broad bean diets on blood physiological-biochemical indices of grass carp (n=3)

由表4可知，与对照组相比，蚕豆组和去皮蚕豆组草鱼的肌肉失水率和水分含量显著降低(P<0.05)，且去皮蚕豆组草鱼的肌肉失水率还显著低于蚕豆组(P<0.05)；蚕豆组和去皮蚕豆组草鱼的肌肉粗脂肪含量均较对照组显著升高(P<0.05)，且去皮蚕豆组草鱼的肌肉粗脂肪含量还显著高于蚕豆组(P<0.05)；各组草鱼的肌肉粗蛋白质和粗灰分含量均差异不显著(P>0.05)；蚕豆组和去皮蚕豆组草鱼的肌原纤维长度(肌原纤维耐折力)和肌纤维直径较对照组显著提高(P<0.05)，而蚕豆组和去皮蚕豆组之间则差异不显著(P>0.05)。

由表5可知，与对照组相比，蚕豆组和去皮蚕豆组草鱼的肌肉总氨基酸、鲜味氨基酸和必需氨基酸含量均显著提高(P<0.05)，其中总氨基酸含量分别提高了10.90%和9.13%，鲜味氨基酸含量分别提高了13.64%和12.80%，必需氨基酸含量分别提高了7.55%和7.97%。

本试验结果表明，投喂蚕豆饲料和去皮蚕豆饲料对草鱼的增重率和饲料系数均无显著影响，这与伦峰等^[13]得出的直接投喂蚕豆降低草鱼生长性能的结果不一致。分析其原因:一方面，与蚕豆作为单一饲料源相比，蚕豆与豆粕、菜籽粕和棉籽粕等混合在一起配制成饲料可使饲料的氨基酸更加平衡，如蚕豆中赖氨酸、精氨酸含量较丰富，而蛋氨酸、苏氨酸含量较低^[14]，而豆粕、菜籽粕和棉籽粕含有相对较高的蛋氨酸、苏氨酸；另一方面，蚕豆中的抗营养因子能与鱼体肠道消化酶结合，降低其活性，而本试验中蚕豆饲料中的植物凝集素、胰蛋白酶抑制剂、脲酶等热敏性抗营养因子^[15]经过高温调制后大部分被消除，从而提高了肠道对营养物质的消化吸收^[16]。此外，氯化胆碱、磷酸二氢钙等物质的添加也可能是草鱼生长效果得到改善的因素之一。

李宝山等^[3]研究发现，直接投喂蚕豆将导致草鱼内脏指数显著降低，这可能与蚕豆中某些毒素或抗营养因子使肝脏脆化、肝细胞膜破裂、细胞核浓缩或溶解消失、肝细胞坏死等有关，其具体原因还有待进一步研究。在本试验中，蚕豆饲料和去皮蚕豆饲料均显著降低了草鱼的脏体指数和肝体指数，但降低的幅度远不如李宝山等^[3]的研究结果，可能与本试验所用饲料中的热敏性抗营养因子经高温调制后大部分被消除有关。

血细胞是反映鱼类免疫能力的一个重要指标，在鱼类防御反应中发挥重要作用^[17]，其中，红细胞具有运输营养物质和氧气的功能，可反映机体代谢水平，白细胞在吞噬异物产生抗体、抵抗病原入侵等防御反应中发挥着重要的作用。本研究结果显示，蚕豆饲料和去皮蚕豆饲料均能使草鱼血液中红细胞和白细胞数量显著升高，这与唐湘北等^[7]的研究结果相似。谭乾开等^[9]认为，投喂蚕豆会导致草鱼耐低氧能力降低，机体一方面通过增加红细胞数量来加强供养量，另一方面通过提高白细胞数量来增强机体免疫功能。本试验中草鱼红细胞数量的增加可能与草鱼摄食蚕豆饲料和去皮蚕豆饲料后机体的内环境处于缺氧状态，机体需要通过“代偿”作用增加红细胞的数量来加强氧合血红蛋白(HbO₂)对水体溶解氧的亲和力有关。同时，白细胞数量的增加可能是为了保护机体免疫系统不被破坏或者防止机体进入生理病态。血清葡萄糖、甘油三酯和总胆固醇含量的变化与机体新陈代谢、机能状态和营养状况密切相关，在机体生命活动中起着重要作用^[18]。本试验中，蚕豆饲料和去皮蚕豆饲料均能不同程度地提高血清葡萄糖、甘油三酯和总胆固醇的含量，分析其原因可能与蚕豆饲料和去皮蚕豆饲料与对照饲料的成分不同有关，这与李忠铭等^[19]的研究结果相反，说明投喂蚕豆饲料与直接投喂蚕豆对草鱼的糖脂代谢会有不同的影响。血清尿素氮是蛋白质代谢的终末产物，由肾小球滤过，大部分排泄出体外，小部分可被肾小管重吸收返回血液，是反映肾小球滤过功能的重要指标^[20]。在本试验中，蚕豆组和去皮蚕豆组草鱼的血清尿素氮含量显著高于对照组，可能与草鱼肾功能受到一定程度的损伤有关。

溶菌酶是一种能水解致病菌细胞壁黏多糖的碱性酶，具有抗菌、抗病毒的作用。超氧化物歧化酶是广泛分布在各种生物体中重要的抗氧化酶，能阻断与修复机体内氧自由基对细胞的损伤，增强吞噬细胞的吞噬能力、促进免疫球蛋白的产生^[21]。在本试验中，蚕豆饲料和去皮蚕豆饲料对草鱼血清溶菌酶活性无显著影响，但显著降低了血清超氧化物歧化酶活性，说明摄食蚕豆饲料和去皮蚕豆饲料降低了草鱼的抗氧化反应，且蚕豆皮不是影响草鱼抗氧化反应的关键因子，其具体原因有待进一步研究。

血清中谷草转氨酶和谷丙转氨酶是反映肝功能状态的重要指标^[22,23]。在正常情况下，肝细胞内的转氨酶仅有少量被释放到血浆中，当肝脏发生坏死或破坏时，会有大量的谷草转氨酶和谷丙转氨酶从细胞内逸出进入血液，使血清中转氨酶的活性升高^[24]。在本试验中，蚕豆组和去皮蚕豆组草鱼血清谷草转氨酶活性显著高于对照组，谷丙转氨酶活性在去皮蚕豆组中亦显著升高，说明蚕豆饲料对草鱼肝功能产生了一定程度的损伤，而这种现象在李忠铭等^[19]的研究中也得到了证实。这可能与蚕豆中的抗营养因子对草鱼肝细胞膜结构的破坏有关，因为很多抗营养因子可以氧化膜结构中的不饱和脂肪酸^[25]。

草鱼肌肉基本营养成分的组成和含量在一定程度上可反映其肌肉的营养价值。在本试验中，摄食蚕豆饲料和去皮蚕豆饲料的草鱼肌肉粗脂肪含量显著高于对照组，这与本课题组前期开展的试验^[4]以及伦峰^[26]对草鱼、秦志清等^[27]对罗非鱼的研究结果一致，但与李宝山等^[28,29]在草鱼和异育银鲫、朱耀强等^[30]在斑点叉尾 上的研究结果相反，这种差异一方面可能与鱼的种类及食性有关，另一方面可能与养殖时间的长短及养殖方式有关。

通常情况下，肌肉失水率、肌原纤维耐折力和肌纤维直径可在一定程度上反映肌肉的特性。肌肉失水率是肌原纤维之间及肌质之间致密性的一个间接指标，可反映肌肉水分的保持度和所存在的状态^[31]；肌原纤维耐折力可反映肌原纤维韧性和强度，肌原纤维的长度越大，其耐折力就越强，韧性越好^[32]；肌纤维直径的增加可使肌纤维束变粗，肌肉硬度增大，弹性增大^[33]。本试验中，蚕豆组和去皮蚕豆组草鱼的肌原纤维长度和肌纤维直径与对照组相比有了显著增加，但肌肉失水率显著降低，以去皮蚕豆组肌肉失水率降低更为明显，说明投喂蚕豆饲料和去皮蚕豆饲料可增强草鱼肌肉的耐折力和韧性，同时提高肌肉的硬度，改善草鱼的品质。同时，蚕豆组和去皮蚕豆组之间草鱼肌肉品质无显著差异，说明缩合单宁(蚕豆皮的主要成分)可能不是影响草鱼肌肉品质的主要因子。

从肌肉氨基酸含量的变化可以看出，摄食蚕豆饲料和去皮蚕豆饲料的草鱼肌肉总氨基酸含量显著提高，这与本课题组前期开展的试验^[5,6,7]所测得的脆化草鱼的肌肉、肝胰脏和血清游离氨基酸含量的变化趋势一致。有研究认为，肌肉中游离氨基酸含量的增加可能是蚕豆中氨基酸不平衡所致，但作者认为，一般来说鱼体氨基酸的组成及含量与饲料氨基酸的组成无相关性^[34]，本试验中肌肉氨基酸含量的改变可能是由于蚕豆中的某种因子使得氨基酸的代谢途径发生了改变，从而肌肉中氨基酸含量发生了变化，而蚕豆组和去皮蚕豆组肌肉总氨基酸含量差异不显著，说明缩合单宁并非影响氨基酸代谢的关键因子。同时，摄食蚕豆饲料和去皮蚕豆饲料的草鱼肌肉鲜味氨基酸含量也显著高于对照组，这与别鹏等^[35]的研究结果相似，表明草鱼肌肉的风味在一定程度上得到了改善。