紫苏籽(Perilla frutescens seed)为唇形科一年生草本植物紫苏[Perilla frutescens(L) Britt]的干燥成熟果实，是一味传统的药食两用类中药材。其性辛、温，归肺经，无毒，具有平喘、润肠、降气消痰之功效^[1]。紫苏籽提取物的主要化学成分为α-亚麻酸、黄酮、迷迭香酸、咖啡酸、乌索酸、齐墩果酸等^{[2, 3, 4, 5, 6]}。现代药理学研究发现，α-亚麻酸有提高机体免疫力、抑制炎性细胞增殖的作用^[7]，黄酮及迷迭香酸等活性成分有很强的抗氧化、抑菌、抑制癌细胞增殖、增强机体免疫力等生物学功能^[8]，黄酮类化合物又被称为植物雌激素，它可以与机体内雌激素受体结合，对动物的生产性能有双向调节作用^[9]。研究表明，在肉仔鸡、育肥牛等动物饲粮中添加紫苏籽提取物可以促进动物生长、提高其免疫力、改善动物性产品品质等作用，在蛋鸡饲粮中添加紫苏籽提取物能够显著提高169日龄蛋鸡的产蛋率、饲料转化率和单枚蛋重^[10]。蛋鸡在产蛋高峰后期生产性能、免疫功能下降，因此探讨提高蛋鸡产蛋高峰后期生产性能和免疫功能的天然植物提取物饲料添加剂具有重要的意义。目前，紫苏籽提取物对蛋鸡产蛋高峰后期生产性能、生殖激素和免疫功能的影响尚未见报道，本试验旨在为紫苏籽提取物在蛋鸡生产中的应用提供理论依据。

紫苏籽提取物由河南科技大学动物科技学院中心实验室制备，提取方法参照文献^{[6, 11]}，有效成分为α-亚麻酸 53.25 mg/g、黄酮 30.41 mg/g、迷迭香酸 10.184 mg/g。

试验动物为48周龄海兰褐蛋鸡。

将480只体重、产蛋率相近的48周龄健康海兰褐蛋鸡，采用单因素完全随机分组试验设计，随机分为4组，每组6个重复，每个重复20只鸡。4个组分别为对照组(基础饲粮)、试验Ⅰ组(基础饲粮＋0.01％紫苏籽提取物)、试验Ⅱ组(基础饲粮＋0.02％紫苏籽提取物)、试验Ⅲ组(基础饲粮＋0.03％紫苏籽提取物)，在相同的饲养管理条件下，预试期7 d，正试期30 d。

试验蛋鸡采用常规的阶梯式3层笼养，每天定时饲喂3次(07:00、10:00、16:00)，17:00准时收蛋，自由采食和饮水。按照鸡场常规饲养管理程序进行，定时清理粪便和栏舍消毒。参照NRC(1994)蛋鸡营养需要配制基础饲粮，其饲粮组成及营养水平见表1。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) % 原料 Ingredients 含量 Content 营养水平 Nutrient levels2) 含量 Content 玉米 Corn 63.80 代谢能 ME/(MJ/kg) 11.25 豆粕 Soybean meal 21.90 粗蛋白质 CP 16.11 食盐 NaCl 0.30 蛋氨酸 Met 0.37 磷酸氢钙 CaHPO4 1.11 赖氨酸 Lys 0.83 石粉 Limestone 9.84 钙 Ca 3.93 玉米蛋白粉 Corn gluten meal 1.60 总磷 TP 0.69 豆油 Soybean oil 0.20 有效磷 AP 0.40 小麦麸 Wheat bran 0.25 预混料 Premix1) 1.00 合计 Total 100.00 1)预混料为每千克饲粮提供The premix provides the following per kg of diet:VA 1 500 IU，VD3 200 IU，VE 10 IU，VK 0.50 mg，VB12 0.01 mg，生物素 biotin 0.15 mg，叶酸 folic acid 0.55 mg，烟酸 nicotinic acid 30 mg，泛酸 pantothenic 10 mg，吡哆醇 pyridoxine 3.5 mg，核黄素 riboflavin 3.6 mg，硫胺素 thiamine 1.8 mg，Cu 8 mg，I 0.35 mg，Fe 80 mg，Mn 60 mg，Se 0.30 mg，Zn 80 mg。 2)营养水平为计算值。Nutrient levels are calculated values.

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis)

每天以重复为单位准确记录采食量、产蛋数量、破软蛋数量，计算蛋均重、破软蛋率、日均产蛋量、产蛋率、料蛋比和日均采食量。

分别在试验的第15和30天，每个重复随机抽取5只鸡，翅下静脉采血3 mL，静置后3 000 r/min离心10 min，分离后血清放置在-20 ℃冰箱备用。用全自动生化分析仪(日立7600-020，日本)测定血清中睾酮(T)、孕酮(P)和雌二醇(E2)含量。

用BN ProSpec分析系统(西门子，德国)透射比浊法测定血清中免疫球蛋白(Ig)A、IgG、IgM的含量；用双抗夹心酶联免疫吸附法测定血清中白细胞介素-2(IL-2)含量，用Multiskan FC酶标仪(Thermo，美国)进行分析，试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。

试验数据通过Excel 2003整理后，采用SPSS 20.0统计软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，用Duncan氏法进行多重比较，结果均以“平均值±标准差”表示。P<0.05表示差异显著，P<0.01表示差异极显著。

由表2可知，随着添加紫苏籽提取物水平的增加，产蛋率呈升高趋势，与对照组相比，0.03%组 产蛋率极显著提高(P<0.01)，0.01%、0.02%组产 蛋率升高但差异不显著(P>0.05)；3个试验组料蛋比与对照组相比均无显著差异(P>0.05)，但都略微降低；日均采食量随着添加紫苏籽提取物水平的增加呈先降低后升高趋势，但各组间差异不显著(P>0.05)；与对照组相比，0.03%组日均产蛋量极显著升高(P<0.01)，0.01%、0.02%组日均产蛋量有所升高但差异不显著(P>0.05)；与对照组相比，添加0.02%紫苏籽提取物可显著升高蛋均重(P<0.05)，其他各组间差异不显著(P>0.05)；各组间破软蛋率差异不显著(P>0.05)。

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 紫苏籽提取物对产蛋高峰后期蛋鸡生产性能的影响 Table 2 Effects of Perilla frutescens seed extracts on performance of laying hens during the late laying peak period 项目Items 紫苏籽提取物添加水平 Perilla Frutescens seed extracts supplemental levels/% 0 0.01 0.02 0.03 产蛋率 Laying rate/% 84.62±3.72Aa 85.00±4.03Aa 85.25±3.61Aa 89.74±4.73Bb 料蛋比 The ratio of feed to egg 2.34±0.26 2.29±0.28 2.31±0.27 2.23±0.24 日均采食量 Average daily feed intake/(g/只) 125.88±1.97 124.33±1.78 125.62±1.89 127.56±1.61 日均产蛋量 Average daily egg production/(个/组) 101.54±2.83Aa 102.00±2.42Aa 102.31±3.97Aa 107.69±3.44Bb 蛋均重 Averageegg weight/g 63.75±1.53a 64.05±2.68a 64.96±1.13b 63.93±1.04a 破软蛋率 Broken egg rate/% 0.36±0.82 0.28±0.92 0.53±1.36 0.68±1.25 同行数据肩标有相同字母或无字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，肩标不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。下表同。 In the same row,values with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05),while with the different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05),while with the different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01). The same as below．

表2 紫苏籽提取物对产蛋高峰后期蛋鸡生产性能的影响 Table 2 Effects of Perilla frutescens seed extracts on performance of laying hens during the late laying peak period

由表3可知，第15天，0.02%、0.03%组的血清睾酮含量与对照组相比均有不同程度的降低；对比第15天，第30天各组睾酮含量均降低；第30天，0.02%、0.03%组与对照组相比差异极显著(P<0.01)。第15天，3个试验组血清孕酮含量与对照组相比均极显著升高(P<0.01)，0.01%组孕酮含量最高；第30天，3个试验组孕酮含量比对照组略高，差异不显著(P>0.05)，并且各组孕酮含量均比第15天的低。第15和30天，3个试验组血清雌二醇含量与对照组相比均极显著升高(P<0.01)，其中0.02%组含量最高，各组第30天雌二醇的含量均比第15天的低。

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 紫苏籽提取物对产蛋高峰后期蛋鸡血清生殖激素含量的影响 Table 3 Effects of Perilla frutescens seed extracts on contents of serum reproductive hormones of laying hens during the late laying peak period 项目Items 紫苏籽提取物添加水平 Perilla Frutescens seed extracts supplemental levels/% 0 0.01 0.02 0.03 第15天 Day 15 睾酮 T/(pmol/L) 0.300±0.030Bc 0.290±0.010ABbc 0.287±0.012ABab 0.273±0.006Aa 孕酮 P/(μg/L) 0.744±0.035Aa 1.041±0.025Dd 0.994±0.021Cc 0.901±0.010Bb 雌二醇 E2/(pmol/L) 180.710±0.017Aa 247.337±0.021Cc 275.410±0.085Dd 206.337±0.148Bb 第30天 Day30 睾酮 T/(pmol/L) 0.240±0.010Cc 0.224±0.006BCc 0.212±0.005ABb 0.172±0.008Aa 孕酮 P/(μg/L) 0.183±0.006 0.190±0.010 0.200±0.008 0.187±0.015 雌二醇 E2/(pmol/L) 178.470±1.017Aa 186.653±1.163Bbc 189.370±1.135Bc 185.097±1.506Bb

表3 紫苏籽提取物对产蛋高峰后期蛋鸡血清生殖激素含量的影响 Table 3 Effects of Perilla frutescens seed extracts on contents of serum reproductive hormones of laying hens during the late laying peak period

由表4可知，第15天，与对照组相比，3个试验组的IgA、IgG、IgM、IL-2含量均有升高，其中0.02%、0.03%组IgG含量极显著升高(P<0.01)，IgM含量略有升高，但差异不显著(P>0.05)，3个试验组IL-2含量极显著升高(P<0.01)。第30天，与对照组相比，3个试验组IgA、IgG、IL-2含量极显著升高(P<0.01)，0.03%组IgM含量与对照组相比显著升高(P<0.05)。与第15天相比，第30天对照组IgA、IgG、IgM、IL-2含量均有所下降，但3个试验组IgA、IgG、IgM含量均有不同程度升高，其中IgA含量升高最多，但IL-2含量有所下降。

表4

Table 4

表4(Table 4)

表4 紫苏籽提取物对产蛋高峰后期蛋鸡免疫功能的影响 Table 4 Effects of Perilla frutescens seed extracts on immune function of laying hens during the late laying peak period 项目Items 紫苏籽提取物添加水平 Perilla Frutescens seed extracts supplemental levels/% 0 0.01 0.02 0.03 第15天 Day 15 免疫球蛋白A IgA/(g/L) 2.96±0.01Aa 3.15±0.05Aa 4.24±0.10ABab 5.13±0.11Bb 免疫球蛋白G IgG/(g/L) 2.14±0.02Aa 2.38±0.06Aa 3.57±0.11Bb 4.80±0.10Cc 免疫球蛋白M IgM/(g/L) 3.29±0.65 3.31±0.48 3.42±0.56 3.48±0.28 白细胞介素-2 IL-2/(pg/mL) 110.25±1.17Aa 152.64±1.23Dd 132.36±0.93Cc 125.47±0.91Bb 第30天 Day 30 免疫球蛋白A IgA/(g/L) 2.56±0.14Aa 6.19±0.12Bb 8.17±0.47Cc 10.08±0.48Dd 免疫球蛋白G IgG/(g/L) 2.05±0.09Aa 3.14±0.06Bb 4.03±0.12Bc 5.13±0.11Cd 免疫球蛋白M IgM/(g/L) 3.19±0.90a 3.37±0.67ab 3.44±0.97ab 3.58±0.77b 白细胞介素-2 IL-2/(pg/mL) 97.66±1.73Aa 147.21±1.83Cd 124.02±1.56Bc 119.67±2.02Bb

表4 紫苏籽提取物对产蛋高峰后期蛋鸡免疫功能的影响 Table 4 Effects of Perilla frutescens seed extracts on immune function of laying hens during the late laying peak period

紫苏籽提取物作为一种天然的饲料添加剂对动物的生产性能具有良好的促进作用^[10]。王君荣等^[12]给169日龄的父母代海兰褐蛋种鸡饲喂添加250、350 mg/kg紫苏籽提取物饲粮16周后发现，其产蛋率和日产蛋量显著提高。陈勇等^[13]在55周龄海兰褐蛋鸡基础饲粮中添加0.6%亚麻籽(富含多不饱和脂肪酸)可显著提高蛋鸡产蛋率，对料蛋比、日采食量无显著影响。本试验结果与以上报道相似，本试验显示，在48周龄的海兰褐蛋鸡基础饲粮中添加0.01%、0.02%、0.03%紫苏籽提取物30 d，对其料蛋比、日采食量均无显著影响，添加0.03%紫苏籽提取物能极显著提高其产蛋率和日均产蛋量。添加紫苏籽提取物能提高蛋鸡产蛋率，其原因可能包括3个方面：1)紫苏籽提取物中含有的植物类黄酮物质具有弱雌激素活性，适量添加可以与机体内雌激素受体结合，促进蛋鸡卵泡的发育和排卵，利于产蛋^[9]；2)紫苏籽提取物中富含α-亚麻酸，α-亚麻酸系ω-3系列多不饱和脂肪酸，在动物体内不能够直接合成，必须靠饲粮供给才能获得，是促进动物体生长发育必需脂肪酸^[14]。同时，α-亚麻酸的衍生物能调控机体的生理生化反应，促进脂类等营养物质的消化代谢^[15]；3)紫苏籽提取物活性成分中的黄酮、迷迭香酸等物质具有较强的抗氧化、清除体内自由基的功效^[16]，适量添加可以提高机体的抗氧化能力、改善肠道环境、延缓蛋鸡衰老、提高产蛋率、延长其产蛋期^[17]。Lee等^[18]通过对紫苏籽提取物的抗氧化特性进行分析得出，其抗氧化能力的强弱与提取物中酚类物质的含量成正比。潘存霞等^[19]报道，在基础饲粮中添加150 mg/kg的紫苏籽提取物具有提高肉鸡生长性能的作用。胡如久等^[20]在蛋鸡饲粮中适量添加含有黄酮和多酚类活性物质的葡萄籽提取物可提高其产蛋率、降低料蛋比，但是高水平的添加有降低产蛋率的趋势。中草药饲料添加剂对动物的生产性能有双向调节的作用，本试验随着紫苏籽提取物添加水平的增加，产蛋率不断提高，0.03%组达极显著水平，更高添加水平对蛋鸡生产性能的影响，有待于进一步试验研究。

目前紫苏籽提取物对蛋鸡产蛋高峰后期生殖激素的影响尚未见报道。生殖激素在禽类产蛋性能的调控过程中起主导作用，下丘脑分泌促性腺激素释放素(GnRH)，GnRH与垂体受体结合调节促性腺激素：卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)的释放，LH和FSH协同促进卵泡成熟^[21]。动物机体卵泡的生长发育不但受以上激素的影响，而且还受自身卵巢分泌的性腺激素(睾酮、雌二醇和孕酮)调控。雌二醇是禽类血液中的主要雌激素，其含量是衡量禽类生殖性能的重要指标之一，孕酮可加快卵泡成熟、促进排卵从而提高产蛋率，雄激素睾酮可经芳香化转变为雌二醇而起作用^[22]。刘家国等^[23]通过给130日龄的罗曼蛋鸡添加不同水平的中药组方，饲喂30 d，可显著提高蛋鸡血清中雌二醇含量，随着鸡群血样中雌二醇含量的提高，其产蛋率和平均蛋重也升高。顾欢等^[24]给56周龄的海兰褐蛋鸡饲喂添加50、100 mg/kg大豆黄酮的饲粮，试验12周后发现，蛋鸡血清中雌二醇和孕酮的含量提高。本试验的结果与以上报道相似，在蛋鸡基础饲粮中添加0.01%、0.02%紫苏籽提取物可以显著提高蛋鸡血清中孕酮和雌二醇的含量，降低睾酮的含量。因此，饲粮中添加紫苏籽提取物可提高产蛋率有可能是由于紫苏籽提取物中的黄酮类物质发挥了雌激素样作用，适量添加可以与机体内雌激素受体结合，提高机体内雌激素和孕酮含量，从而促进卵泡发育和排卵，提高产蛋率。添加0.03%的紫苏籽提取物有降低血清中雌二醇和孕酮含量的趋势，这可能与添加高水平黄酮类物质对动物生殖系统的发育有一定的抑制作用有关^[9]。

免疫球蛋白是动物机体免疫系统中最关键的组成之一，主要存在于外分泌液、组织液、血液及淋巴液中的一类具有抗体活性，其化学结构与抗体相似，并能与相应的抗原发生特异性结合的球蛋白，在机体体液免疫中起主导作用的物质^[25]。血清免疫球蛋白的检测主要测定IgA、IgG和IgM这3种。IL-2能够刺激T淋巴细胞的增值其他淋巴细胞因子的产生，刺激自然杀伤(NK)细胞的生长，诱导淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)的产生，激活巨噬细胞。IL-2还是一种生长因子，能够刺激B细胞生成抗体，具有增强抵抗病毒感染、抗病毒、抗肿瘤等生物学作用，是一类重要的免疫增强剂^{[26, 27]}。宋代军等^[28]给1日龄肉仔鸡基础饲粮中添加1.0 g/kg紫苏籽提取物可提高血清中IgG含量、肉仔鸡免疫器官指数以及淋巴细胞转化率等，且与基础饲粮中添加0.05 g/kg金霉素效果相当。本试验结果表明，添加紫苏籽提取物均可不同程度提高免疫球蛋白IgA、IgG、IgM和IL-2含量，且0.03%组IgA、IgG和IgM含量最高。随着添加紫苏籽提取物含量增加血清中IL-2含量有降低趋势。这种促进机体免疫功能的作用，可能是因为紫苏籽提取物中的α-亚麻酸通过对免疫细胞膜上的分子和受体表达的调节作用、对树突状细胞的调控作用以及增加肠系膜淋巴结和血液中免疫球蛋白的含量来发挥对机体免疫系统的增强作用^[29]。Fritsche等^[30]认为，ω-3多不饱和脂肪酸能够增强家禽机体抗病能力和免疫性能是因为其能够减少动物体内的类二十烷酸，特别是前列腺素E2(PGE2)的生成；迷迭香酸可以通过抑制T淋巴细胞系统增殖、抑制花生四烯酸代谢途径中5-脂氧合酶、抑制核细胞因子κB信号通路等对机体免疫系统起到调节作用^[31]；植物类黄酮具有增强机体体液免疫和非特异性免疫的功能^[9]。张荣庆等^[32]以妊娠后期母猪为试验对象，连续饲喂大豆黄酮可显著增强母猪体液免疫功能，显著提高母猪初乳及血清中生长激素(GH)和催乳素(PRL)含量，降低GH释放抑制激素含量。说明植物类黄酮提高动物免疫功能的机制可能为：1)直接作用于免疫器官；2)可通过调节垂体分泌的GH和PRL间接发挥免疫促进作用，也可以降低体内GH释放抑制激素含量，抑制激素含量的降低解除其对免疫系统的抑制作用，同时又促进了GH的分泌，从而提高了动物机体免疫功能^[33]。添加0.02%~0.03%紫苏籽提取物降低蛋鸡血清中IL-2含量的原因：一方面可能是紫苏籽提取物中的迷迭香酸特异地抑制Lck SH2结构域和配体多肽的结合，从而抑制了IL-2等细胞活素的表达^[34]；另一方面，可能是α-亚麻酸在动物体内的代谢物二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)可以改变IL-2受体在细胞膜上的分布以及膜表面脂筏的脂肪酸组成，从而降低了T淋巴细胞分泌IL-2的含量^[35]。

① 添加0.03%紫苏籽提取物能极显著提高蛋鸡产蛋高峰后期产蛋率、日均产蛋量，在本试验条件下，0.03%紫苏籽提取物添加水平效果最好。

② 添加紫苏籽提取物可不同程度地升高血清中孕酮、雌二醇的含量，降低睾酮含量，在本试验条件下，0.02%~0.03%紫苏籽提取物添加水平效果最好。

③ 添加紫苏籽提取物可不同程度地提高血清中IgA、IgG、IgM、IL-2含量，在本试验的条件下，添加0.03%紫苏籽提取物效果最佳。

感谢河南科技大学动物科技学院余祖华博士和李晓霞博士对文稿所提的宝贵意见。