动物营养学报    2017, Vol. 29 Issue (8): 2808-2816    PDF    
引用本文
刘强强, 陈旭, 谢家俊, 张琳, 牛津. 饲料或养殖水体中添加地衣芽孢杆菌对凡纳滨对虾生长性能和免疫力的影响[J]. 动物营养学报, 2017, 29(8): 2808-2816.  
LIU Qiangqiang, CHEN Xu, XIE Jiajun, ZHANG Lin, NIU Jin. Effects of Adding Baclicus lincheniformi to Diet or Aquaculture Water on Growth Performance and Immunity of Litopenaeus vannamei[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2017, 29(8): 2808-2816.  
饲料或养殖水体中添加地衣芽孢杆菌对凡纳滨对虾生长性能和免疫力的影响
刘强强1,2, 陈旭2, 谢家俊2,3, 张琳4, 牛津1,5     
1. 天津农学院, 天津 300384;
2. 中国水产科学院南海水产研究所, 广州 510300;
3. 上海海洋大学, 上海 201306;
4. 帝斯曼(中国)有限公司, 上海 201203;
5. 中山大学, 广州 510300
收稿日期: 2017-02-01
基金项目: 荷兰DSM公司国际合作项目（33000-42990024）
作者简介: 刘强强(1988—), 男, 河南焦作人, 硕士研究生, 研究方向水产动物营养与饲料。E-mail:scxylqq@163.com
通信作者: 牛津, 副教授, 硕士生导师, E-mail:gzniujin2003@163.com
摘要: 本试验通过2个子试验来研究饲料或养殖水体中添加地衣芽孢杆菌对凡纳滨对虾生长性能和免疫力的影响。2个子试验所用凡纳滨对虾的初始均重均为1.06 g左右。在试验1中，5组对虾分别饲喂在基础饲料中添加0（D1组，作为空白对照组）、0.3（D2组）、3.0（D3组）、30.0 mg/kg地衣芽孢杆菌（D4组）和80.0 mg/kg益生菌A（为市售复合益生菌制剂；D5组，作为阳性对照组）的5种试验饲料；在试验2中，4组对虾全部投喂试验1中D1组饲料，并在试验开始前向1 m×1 m×1 m水泥池（有效水深0.7 m）的水体中分别投入0（d1组，即D1组）、0.4（d2组）、4.0 mg地衣芽孢杆菌（d3组）和40.0 mg益生菌B（为市售复合益生菌净水剂；d4组，作为阳性对照组），此后每隔7 d再分别补充0、0.2、2.0 mg地衣芽孢杆菌和20.0 mg益生菌B。每组均设6个水泥池，每个水泥池放养80尾对虾。试验1和试验2饲养时间均为8周。试验1结果表明：D1~D4组对虾的终末均重显著高于D5组（P < 0.05），但D1~D4组之间没有显著差异（P > 0.05）；D2组对虾的增重率和特定生长率显著高于D5组（P < 0.05）但与D1、D3和D4组没有显著差异（P > 0.05）；D2、D3、D4组对虾的饲料系数显著低于D1组（P < 0.05），但与D5组没有显著差异（P > 0.05）；D4组对虾的成活率显著高于其他各组（P > 0.05）。对虾肝胰腺超氧化物歧化酶（SOD）活性在D2和D5组较高，且显著高于其他各组（P < 0.05）；对虾肝胰腺总抗氧化能力（T-AOC）在D4组最高，且显著高于其他各组（P < 0.05）；对虾肝胰腺丙二醛（MDA）含量随着饲料中地衣芽孢杆菌添加量的增加而降低，以D4组对虾肝胰腺MDA含量最低，且显著低于D1、D2、D3组（P < 0.05），但与D5组没有显著差异（P > 0.05）。试验2结果表明：养殖水体中补充地衣芽孢杆菌对对虾的终末均重、增重率、特定生长率和饲料系数均没有产生显著影响（P > 0.05）；d3组对虾肝胰腺碱性磷酸酶（AKP）、SOD活性和T-AOC最高，且显著高于其他各组（P < 0.05）；d2组对虾肝胰腺溶菌酶（LZM）活性最高，且显著高于其他各组（P < 0.05）；d1组对虾肝胰腺MDA含量最高，且显著高于其他各组（P < 0.05）。上述结果表明，地衣芽孢杆菌无论是添加在饲料中还是泼洒在养殖水体中都能提高凡纳滨对虾的免疫力；综合考虑凡纳滨对虾的生长性能和免疫力，地衣芽孢杆菌在饲料或养殖水体中的添加效果优于益生菌A或益生菌B；综合试验1和试验2的结果，地衣芽孢杆菌在凡纳滨对虾饲料中的添加量应控制在0.3~3.0 mg/kg。
关键词: 地衣芽孢杆菌     凡纳滨对虾     生长性能     免疫力    
Effects of Adding Baclicus lincheniformi to Diet or Aquaculture Water on Growth Performance and Immunity of Litopenaeus vannamei
LIU Qiangqiang1,2, CHEN Xu2, XIE Jiajun2,3, ZHANG Lin4, NIU Jin1,5     
1. Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China;
2. South China Sea Fishieres Research, Chinese Academy of Fishery Sciences, Guangzhou 510300, China;
3. Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China;
4. DSM (China) Co., Ltd., Shanghai 201203, China;
5. Sun Yat-Sen University, Guangzhou 510300, China
Corresponding author: NIU Jin, associate professor, E-mail:gzniujin2003@163.com
Abstract: Two trials were conducted to investigate the effects of adding Baclicus lincheniformi to diet or aquaculture water on growth performance and immunity of Litopenaeus vannamei. The average initial body weight of Litopenaeus vannamei in the two trials was about 1.06 g. In trial 1, shrimps in five groups were fed five experimental diets with different levels of Baclicus lincheniformi or probiotics A (D1 group, as blank control group: not adding probiotics; D2 group: adding 0.3 mg/kg Baclicus lincheniformi; D3 group: adding 3.0 mg/kg Baclicus lincheniformi; D4 group: adding 30.0 mg/kg Baclicus lincheniformi; D5 group, as positive control group: adding 80.0 mg/kg probiotics A, probiotics A was market complex-probiotics-preparation). In trial 2, shrimps in four groups were all fed the diet of D1 group in trial 1. Before the trial started, added 0 (d1 group, that was D1 group), 0.4 (d2 group), 4.0 mg Baclicus lincheniformi (d3 group) and 40.0 mg probiotics B (probiotics B was market complex-probiotics-water purifying agent; d4 group, as positive control group) to the aquaculture water in concrete tank (1 m×1 m×1 m, and effective water depth was 0.7 m), and then added 0, 0.2, 2.0 mg Baclicus lincheniformi and 20.0 mg probiotics B to the aquaculture water every 7 days, respectively. Each group had six concrete tanks and each concrete tank had eighty shrimps. The feeding time of trials 1 and 2 were all 8 weeks. The results of trial 1 were showed as follows: the final average body weight (FBW) of shrimps from D1 to D4 groups was significantly higher than that from D5 group (P < 0.05), and no significant differences were found among D1 to D4 groups (P > 0.05). The specific growth ratio (SGR) and weight gain rate (WGR) of shrimps from D2 group were significantly higher than those from D5 group (P < 0.05), but without significant differences compared with D1, D3 and D4 groups (P > 0.05). The feed conversion ratio (FCR) of shrimps from D2, D3 and D4 groups was significantly lower than that from D1 group (P < 0.05), but without significant difference compared with D5 group (P > 0.05). The survival rate (SR) of shrimps from D4 group was significantly higher than that from other groups (P < 0.05). The hepatopancreas superoxide dismutase (SOD) activity of shrimps from D2 and D5 groups was higher, and significantly higher than that from other groups (P < 0.05). The hepatopancreas total antioxidant capacity (T-AOC) of shrimps from D4 group was the highest, and significantly higher than that from other groups (P < 0.05). The hepatopancreas malondialdehyde (MDA) content was decreased with the dietary Baclicus lincheniformi supplemental amount increasing, the hepatopancreas MDA content from D4 group was the lowest, and significantly lower than that from D1, D2 and D3 groups (P < 0.05), but without significant difference compared with D5 group (P > 0.05). The results of trial 2 showed as follows: adding Baclicus lincheniformi to aquaculture water had no significant effects on FBW, WGR, SGR and FCR (P < 0.05). The hepatopancreas alkaline phosphatase (AKP), SOD activities and T-AOC of shrimps from d2 group were the highest, and significantly higher than those from other groups (P < 0.05). The hepatopancreas lysozyme (LZM) activity of shrimps from d2 group was the highest, and significantly higher than that of shrimps from other groups (P < 0.05). The hepatopancreas MDA content of shrimps from d1 group was the highest, and significantly higher than that of shrimps from other groups (P < 0.05). In conclusion, the Baclicus lincheniformi can improve the immunity of Litopenaeus vannamei by means of adding Baclicus lincheniformi to diet or aquaculture water; the Baclicus lincheniformi adding to diet or aquaculture water has better effect than probiotics A or probiotics B with considering the growth performance and immunity of Litopenaeus vannamei; moreover, the supplemental amount of Baclicus lincheniformi in the diet of Litopenaeus vannamei should be controlled to 0.3 to 3.0 mg/kg base on consider the results of trials 1 and 2.
Key words: Baclicus lincheniformi     Litopenaeus vannamei     growth performance     immunity    

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)又称南美白对虾，是当今世界养殖产量最高的三大虾类之一，由于其良好的经济效益，2001年以来在我国的养殖面积不断扩大，但随着人们追求经济效益而开发出的高密度、集约化等养殖模式大规模普及，随之而来的是病害的大规模的爆发，传统治疗方法大量使用抗生素导致抗药菌株的产生[1], 并对水体造成二次污染，水产动物身上抗生素的残留更是引起人们对食品安全的担心。至此，寻找绿色、安全、环保的抗生素替代品成了研究热点[2-4]。

益生菌是一种活的微生物添加剂，适当的浓度可以通过影响与动物相关的微生物群落来改善动物对营养物质的利用和对疾病的抗性或者通过改善水质而有益于动物健康与生长。地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)是芽孢杆菌属的一种益生菌，因其良好的耐高温高压性，而在水产益生菌领域被大量研究。曹煜成等[5-6]研究发现，在水体中添加地衣芽孢杆菌可以显著提高凡纳滨对虾肝胰腺热休克蛋白70(HSP70) mRNA的表达量，显著降解凡纳滨对虾的粪便；Li等[7]研究发现，饲料中添加地衣芽孢杆可以显著降低凡纳滨对虾肠道弧菌的数量，之后胡毅等[8]的研究也证实了这一点。对于地衣芽孢杆菌的研究，国内外目前主要集中在鱼类上，如曹煜成等[9-10]对黄鳍鲷(Acanthopagrus latus)、草鱼(Ctenopharyngodon idellusp)的研究，Avella等[11]对海鲷(Sparus sarba)的研究以及李卓佳等[12]对尖吻鲈(Lates calcarifer)的研究。因此，本试验设计了2个子试验，其中试验1是将4个地衣芽孢杆菌梯度添加到饲料中且与市售同类益生菌产品在提高凡纳滨对虾生长性能和免疫力方面进行效果比较，试验2是将3个地衣芽孢杆菌梯度添加到养殖水体中且与市售同类益生菌产品在提高凡纳滨对虾生长性能和免疫力方面进行效果比较，以期为凡纳滨对虾饲料添加剂的研究提供一定的参考。

1 材料与方法 1.1 试验材料

本试验使用的地衣芽孢杆菌制剂为荷兰帝斯曼(DSM)公司提供的高浓度水产专用益生菌，每克地衣芽孢杆菌数量不少于1×1011 CFU。市售益生菌A为丹麦科汉森公司产品，主要成分为地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌，为匀质、喷雾干燥后混合的复合益生菌制剂，在陆地动物猪上已得到广泛应用，还未有在水产动物中应用的报道。市售益生菌B为丹麦维诺信生物公司产品，是由7种不同芽孢杆菌按一定比例配制成的复合益生菌净水剂，已经在中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)[13]、河蟹(Eriocheir japonica)[14]和日本对虾(Penaeus japonicus)[15]等水产动物上取得不错的效果，可以在一定程度上改善养殖水体的水质。

1.2 试验方法

选取初始均重为1.06 g左右的凡纳滨对虾作为试验动物。在试验开始前将试验虾放入1 m×1 m×1 m水泥池(有效水深0.7 m)中暂养1周，以便它们适应试验条件，暂养期间投喂商品饲料。暂养结束后开始正式试验。挑选规格一致的3 840尾健康凡纳滨对虾，放养在48个上述水泥池中，每6个水泥池为1组，每池放养80尾。本试验共进行2个子试验。在试验1中，随机选取5组试验虾，分别饲喂在基础饲料中添加0(D1组，作为空白对照组)、0.3(D2组)、3.0(D3组)、30.0 mg/kg地衣芽孢杆菌(D4组)和80.0 mg/kg益生菌A(D5组，作为阳性对照组)的5种试验饲料；在试验2中，随机选取3组试验虾，全部投喂试验1中D1组饲料，并在试验开始前向1 m3养殖水泥池的水体中分别投入0.4(d2组)、4.0 mg地衣芽孢杆菌(d3组)和40.0 mg益生菌B(d4组，作为阳性对照)，此后每隔7 d再分别补充0、0.2、2.0 mg地衣芽孢杆菌和20.0 mg益生菌B于水体中。试验1和试验2为共同空白对照组，因此试验1中D1组也为试验2的空白对照组，在试验2中命名为d1组。

1.3 试验饲料

基于试验1要求配制5种试验饲料，其组成及营养水平如表 1所示。所有饲料原料先经粉碎，再过80目筛过滤，随后按表 1中配方的比例准确称重并初步混合后，在商用饲料搅拌机(A-200T Mixer Bench Model Unit，加拿大)中搅拌15 min，之后加入预先混匀的鱼油、豆油和大豆卵磷脂，再搅拌15 min，再加入大约40%的蒸馏水(体积/重量)，继续搅拌15 min，用双螺杆挤条机(华南理工大学机械工程研究所制作)挤压成粒径为1.2 mm的饲料颗粒，经打磨后在60 ℃的烘箱中烘2 h，每0.5 h翻1次，然后在空调房中抽干至水分含量少于10%，而后用封口塑料袋分装，标记储存于-20 ℃的冰柜中备用。

表 1 试验饲料组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (DM basis)
1.4 饲养管理

试验期间每天投喂3次(投喂时间分别为07:00、15:00和22:00)，前3周不换水，之后每周换水1次(每次换水量为总水量的2/7)；初始投喂量按初始体重的6%计算，之后根据实际吃料情况每天进行调整。饲养期间水温(27±2) ℃，盐度32±2，连续充气，试验期间测定水温、盐度、pH、溶氧浓度、氨氮浓度等水质指标，使其在正常范围内。试验1和试验2饲养时间均为8周。

1.5 指标测定与计算 1.5.1 生长指标

饲养试验结束后，饥饿处理24 h，然后称量每池虾的终末总体重并记录存活数，用以计算增重率、特定生长率、成活率和饲料系数，计算公式如下：

增重率(%)=100×(终末均重-初始均重)/初始均重;

特定生长率(%/d)=100×(ln终末均重-ln初始均重)/试验天数;

成活率(%)=100×终末虾尾数/初始虾尾数;

饲料系数=摄食饲料干重/(终末体重-初始体重)。

1.5.2 常规营养成分

饲养试验结束后，饥饿处理24 h，然后每池随机取3尾虾，-80 ℃冰箱中保存待测全虾常规营养成分；每池另随机取3尾虾，-80 ℃冰箱中保存待测肌肉常规营养成分。饲料、全虾和肌肉常规营养成分参照AOAC(1995)[16]的方法测定。

1.5.3 肝胰腺免疫指标

饲养试验结束后，饥饿处理24 h，然后每池随机取6尾虾，取出肝胰腺后置于2 mL离心管中，立刻放于液氮中保存，全部取完后从液氮罐中取出置于-80 ℃冰箱中保存，待测。

测定前，准确称取肝胰腺重量，按重量(g) :体积(mL)=1 : 9的比例加入已预冷的生理盐水，冰水浴条件下制成10%的组织匀浆液，4 ℃、2 500 r/min离心10 min，取上清待测。肝胰腺总蛋白、丙二醛(MDA)含量，总抗氧化能力(T-AOC)，超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(AKP)、碱性磷酸酶(ACP)、溶菌酶(LZM)活性测定所用试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。

1.6 数据分析

全部试验数据采用SPSS 21.0软件进行单因素方差分析，当有显著差异时再用Duncan氏法进行多重比较，P < 0.05表示差异显著。数据用平均值±标准误表示。

2 结果与分析 2.1 饲料中添加地衣芽孢杆菌或益生菌A对凡纳滨对虾生长性能、体组成和肝胰腺免疫指标的影响 2.1.1 饲料中添地衣芽孢杆菌或益生菌A对凡纳滨对虾生长性能的影响

由表 2可知，随着地衣芽孢杆菌添加量的升高，凡纳滨对虾的终末均重、增重率和特定生长率呈现先升高后降低的趋势。D2组凡纳滨对虾的终末均重、增重率和特定生长率在各组间最高，且显著高于D5组(P < 0.05)，但与其他组之间没有显著差异(P > 0.05)。与D1组相比，饲料中添加地衣芽孢杆菌的D2、D3和D4组凡纳滨对虾的饲料系数显著降低(P < 0.05), 且成活率也有不同程度提高，成活率在D4组达到最高(94.25%)并显著高于D1组(P < 0.05)。

表 2 饲料中添加地衣芽孢杆菌或益生菌A对凡纳滨对虾生长性能的影响 Table 2 Effects of adding Baclicus lincheniformis or probiotics A to diet on growth performance of Litopenaeus vannamei
2.1.2 饲料中添加地衣芽孢杆菌或益生菌A对凡纳滨对虾体组成的影响

由表 3可知，D1~D4组的全虾粗蛋白质含量显著高于D5组(P < 0.05)，且D1~D4组之间差异不显著(P > 0.05)；D2组的全虾粗脂肪含量显著高于D1和D4组(P < 0.05)，但与D3和D5组没有显著差异(P > 0.05)；D2和D3组全虾粗灰分含量显著高于D1、D4和D5组(P < 0.05)；D2和D3组之间差异不显著(P > 0.05)；全虾粗灰分含量各组之间没有显著差异(P > 0.05)。从凡纳滨对虾肌肉常规营养成分可以看出，D2、D3和D5组的肌肉粗蛋白质含量显著高于D1和D4组(P < 0.05)，而肌肉水分、粗脂肪和粗灰分含量各组之间没有显著差异(P > 0.05)。

表 3 饲料中添加地衣芽孢杆菌或益生菌A对凡纳滨对虾体组成的影响 Table 3 Effects of adding Baclicus lincheniformis or probiotics A to diet on body composition of Litopenaeus vannamei
2.1.3 饲料中添加地衣芽孢杆菌或益生菌A对凡纳滨对虾肝胰腺免疫指标的影响

由表 4可知，D4组凡纳滨对虾肝胰腺AKP活性显著低于D1和D5组(P < 0.05)；D3组凡纳滨对虾肝胰腺ACP活性显著低于其他各组(P < 0.05)；D1和D4组凡纳滨对虾肝胰腺LZM活性显著高于其他各组(P < 0.05)，且D3和D5组也显著高于D2组(P < 0.05)；饲料中添加地衣芽孢杆菌的D2、D3和D4组和添加益生菌A的D5组凡纳滨对虾肝胰腺SOD活性相比D1组均显著提高(P < 0.05)，且D2、D5组还显著高于D3、D4组(P < 0.05)；随着地衣芽孢杆菌添加量的增加，凡纳滨对虾肝胰腺MDA含量随之降低，而肝胰腺T-AOC则升高，其中D3和D4组的肝胰腺MDA含量显著低于其他各组(P < 0.05)，D4组的肝胰腺T-AOC显著高于其他各组(P < 0.05)。

表 4 饲料中添加地衣芽孢杆菌或益生菌A对凡纳滨对虾肝胰腺免疫指标的影响 Table 4 Effects of adding Baclicus lincheniformis or probiotics A to diet on hepatopancreas immune indices of Litopenaeus vannamei
2.2 养殖水体中添加地衣芽孢杆菌或益生菌B对凡纳滨对虾生长性能和肝胰腺免疫指标的影响 2.2.1 养殖水体中添加地衣芽孢杆菌或益生菌B对凡纳滨对虾生长性能的影响

由表 5可知，养殖水体中添加地衣芽孢杆菌或益生菌B对凡纳滨对虾的终末均重、增重率、特定生长率、饲料系数、总摄食量均没有产生显著影响(P > 0.05)。养殖水体中添加益生菌B的d4组凡纳滨对虾的成活率显著高于添加地衣芽孢杆菌的d2组(P < 0.05)，但与其他各组没有显著差异(P > 0.05)。

表 5 养殖水体中添加地衣芽孢杆菌或益生菌B对凡纳滨对虾生长性能的影响 Table 5 Effects of adding Baclicus lincheniformis or probiotics B to aquaculture water on growth performance of Litopenaeus vannamei
2.2.2 养殖水体中添加地衣芽孢杆菌或益生菌B对凡纳滨对虾肝胰腺免疫指标的影响

由表 6可知，d3组凡纳滨对虾肝胰腺AKP活性显著高于其他各组(P < 0.05)，而各组凡纳滨对虾肝胰腺ACP活性无显著差异(P＞0.05)；d2组凡纳滨对虾肝胰腺LZM活性显著高于其他各组(P < 0.05)；d2和d3组凡纳滨对虾肝胰腺SOD活性显著高于d1和d4组(P < 0.05)；随着养殖水体中地衣芽孢杆菌添加量的增加，凡纳滨对虾肝胰腺MDA含量随之降低，而肝胰腺T-AOC则升高，且养殖水体中添加地衣芽孢杆菌的d2和d3组凡纳滨对虾肝胰腺MDA含量显著低于其他各组(P < 0.05)，同时d3组凡纳滨对虾肝胰腺T-AOC显著高于d1和d4组(P < 0.05)，但与d2组没有显著差异(P＞0.05)。

表 6 养殖水体中添加地衣芽孢杆菌或益生菌B对凡纳滨对虾肝胰腺免疫指标的影响 Table 6 Effects of adding Baclicus lincheniformis or probiotics B to aquaculture water on hepatopancreas immune indices of Litopenaeus vannamei
3 讨论

本试验共进行了2个子试验，分别在饲料和养殖水体中添加地衣芽孢杆菌，其中试验1研究结果表明，饲料中添加地衣芽孢杆菌的D2、D3、D4组凡纳滨对虾的终末均重、特定生长率和增重率显著高于添加益生菌A的D5组，较空白对照组有不同程度的提高但差异不显著，但D2、D3、D4组的饲料系数均显著低于空白对照组。刘泓宇等[17]的研究表明，饲料中添加益生菌对凡纳滨对虾的增重率和特定生长率均有不同程度的提高，但与对照组无显著差异；而丁贤等[18]和胡毅等[8]的研究结果同样是饲料中添加益生菌组凡纳滨对虾的特定生长率同对照组相比有提高但差异不显著。上述研究结果与本试验的研究结果相一致，在其他水产动物如暗纹东方鲀(Fugu obscurus)[19]、鲤鱼(Cyprinus carpio)[20]上的研究也有类似结果。饲料中添加益生菌促进凡纳滨对虾生长应该与益生菌可以分泌消化酶并提高水产动物体内的消化酶的活性有关，这得到了国内外学者[17-19, 21-23]的证实。此外，地衣芽孢杆菌的添加能提高凡纳滨对虾的成活率，且地衣芽孢杆菌添加量最高的D4组的成活率显著高于其他各组。这应该是与通过饲料进入到凡纳滨对虾体内并定植的地衣芽孢杆菌通过与有害微生物竞争，从而抑制了有害微生物的生长繁殖有关[4]。另外，本试验中，饲料中添加益生菌A的D5组凡纳滨对虾的终末均重、增重率和特定生长率均低于空白对照组，这可能与产品的菌种纯度和质量有关。

在试验1中，相比D2组，地衣芽孢杆菌添加量较高的D3和D4组在终末均重、特定生长率和增重率上反而有所降低，这可能与所添加地衣芽孢杆菌的量过高有关。而试验2直接向养殖水体中添加地衣芽孢杆菌对凡纳滨对虾的生长性能无显著影响，这和曹煜成[21]的研究结果有差异，可能与试验动物和试验环境不同有关。此外，d2组的成活率低于空白对照组组，并且显著低于d4组，这可能和试验过程中d2组部分养殖池进入大量雨水有关。

病害防治是凡纳滨对虾养殖过程中非常重要的一环，而溶酶体酶是凡纳滨对虾体液免疫的重要组成部分，主要包括LZM、ACP、AKP、SOD等。据报道，饲料中添加益生菌可以有效改善水产动物的免疫机能，这在虹鳟(Oncorhynchus mykiss)[24]、乌颊鱼(Gilthead seabream)[25]、三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)[26]等动物上均已得到证实。在试验1中，相比空白对照组，饲料中添加0.3或3.0 mg/kg地衣芽孢杆菌使得凡纳滨对虾肝胰腺SOD活性得到了有效提高，并降低了肝胰腺中MDA的含量，这和胡毅等[8]与刘泓宇等[17]的研究结果相一致，说明饲料中添加适量的地衣芽孢杆菌可以提高凡纳滨对虾的抗应激能力[27]。据报道，养殖水体中添加地衣芽孢杆菌可以有效降解凡纳滨对虾的粪便，从而有效降低水体中的化学耗氧量(COD)和硝态氮(NO3--N)量[17]，张峰峰等[28]和曹煜成等[9]也有相似的结果。在试验2中，相比空白对照组，直接向养殖水体中添加地衣芽孢杆菌后凡纳滨对虾肝胰腺SOD活性和T-AOC均有得到提高，而肝胰腺MDA含量降低，这应该是添加在养殖水体中的益生菌通过对改善水环境因子，从而提高凡纳滨对虾自身的免疫能力。

4 结论

在本试验条件下：

① 地衣芽孢杆菌无论是添加在饲料中还是泼洒在养殖水体中都能够提高凡纳滨对虾的免疫力。

② 综合考虑凡纳滨对虾的生长性能和免疫力，地衣芽孢杆菌在饲料或养殖水体中的添加效果优于益生菌A或益生菌B。

③ 综合试验1和试验2的结果，地衣芽孢杆菌在凡纳滨对虾饲料中的添加量应控制在0.3~3.0 mg/kg。

参考文献
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