微藻油和鱼油对鸡蛋品质和蛋黄脂肪酸沉积的影响

引用本文

龙烁, 武书庚, 齐广海, 张海军, 王晶, 马友彪, 杨林林, 禹振军. 微藻油和鱼油对鸡蛋品质和蛋黄脂肪酸沉积的影响[J]. 动物营养学报, 2018, 30(5): 1713-1725. 复制到剪切板

LONG Shuo, WU Shugeng, QI Guanghai, ZHANG Haijun, WANG Jing, MA Youbiao, YANG Linlin, YU Zhenjun. Effects of Microalgae Oil and Fish oil on Egg Quality and Yolk Fatty Acid Deposition of Hens[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2018, 30(5): 1713-1725. 复制到剪切板

微藻油和鱼油对鸡蛋品质和蛋黄脂肪酸沉积的影响

龙烁¹, 武书庚¹, 齐广海¹, 张海军¹, 王晶¹, 马友彪¹, 杨林林¹, 禹振军²

1. 中国农业科学院饲料研究所, 农业部饲料生物技术重点开放实验室, 生物饲料开发国家工程研究中心, 北京 100081;
2. 北京市农业机械试验鉴定推广站, 北京 100081

收稿日期: 2017-10-16

基金项目: 家禽产业技术体系北京市创新团队（CARS-PSTP）

作者简介: 龙烁(1993-), 女, 山东临沂人, 硕士研究生, 从事家禽营养与饲料科学研究。E-mail:maplega@163.com

通信作者: 武书庚, 研究员, 硕士生导师, E-mail:wushugeng@caas.cn; 张海军, 副研究员, 硕士生导师, E-mail:fowlfeed@163.com.

摘要: 本试验旨在研究饲粮添加微藻油（MO）和鱼油（FO）对蛋黄脂肪酸沉积和蛋品质（鲜蛋与储存期）的影响，以期为高效生产富含二十二碳六烯酸（DHA）的鸡蛋提供依据。选取31周龄产蛋率接近的海兰褐蛋鸡630只，随机分为7个组，每组6个重复，每个重复15只鸡。对照组饲喂基础饲粮（不额外补充DHA），试验组以MO和FO分别作为DHA源添加1.35、2.70、5.40 mg/g的DHA，其中MO添加水平分别为0.25%、0.50%和1.00%，FO添加水平分别为添加1.08%、2.17%和4.34%。预试期1周，正试期12周。结果表明：1）试验末期各组蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋形指数和哈氏单位均无显著差异（P>0.05）；试验4周，1.35 mg/kg DHA组蛋白高度显著高于2.70和5.40 mg/g DHA组（P < 0.05）；试验8周，与对照组相比，试验组蛋黄颜色均显著升高（P < 0.05）。2）储存28 d，各组间蛋黄丙二醛（MDA）含量无显著差异（P>0.05）；随着储存时间延长，蛋黄MDA含量显著升高（P < 0.05）。3）储存14 d，MO组哈氏单位显著高于FO组（P < 0.05）；储存14 d，DHA源和添加水平的互作效应对蛋白高度影响显著（P < 0.05），MO组蛋白高度随DHA添加水平升高而升高，FO组蛋白高度随DHA添加水平升高呈现先升高后降低趋势；储存7和28 d，FO组蛋黄颜色显著高于MO组（P < 0.05）。4）与对照组相比，饲粮添加不同来源和水平DHA极显著提高蛋黄DHA、α-亚麻酸、二十碳五烯酸、单不饱和脂肪酸、ω-3多不饱和脂肪酸（PUFA）含量（P < 0.01），且FO组显著高于MO组（P < 0.05），极显著降低ω-6 PUFA/ω-3 PUFA值（P < 0.01）。鸡蛋DHA沉积效率随DHA添加水平升高而极显著降低（P < 0.01）。综上，在本试验条件下，相同DHA添加水平下，FO比MO更能促进蛋黄DHA的沉积，且添加水平为1.35 mg/g时DHA沉积效率最高。

关键词: 微藻油鱼油 DHA 蛋品质沉积效率蛋鸡

Effects of Microalgae Oil and Fish oil on Egg Quality and Yolk Fatty Acid Deposition of Hens

LONG Shuo¹, WU Shugeng¹, QI Guanghai¹, ZHANG Haijun¹, WANG Jing¹, MA Youbiao¹, YANG Linlin¹, YU Zhenjun²

1. Key Laboratory of Feed Biotechnology of Ministry of Agriculture, National Engineering Research Center of Biological Feed, Feed Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Science, Beijing 100081, China;
2. Beijing Municipal Agricultural Machinery Test And Identification Promotion Station, Beijing 100081, China

Corresponding author: WU Shugeng, professor, E-mail:wushugeng@caas.cn; ZHANG Haijun, associate professor, E-mail:fowlfeed@163.com.

Abstract: This experiment was conducted to investigate the effects of dietary microalgae oil (MO) and fish oil (FO) on yolk fatty acid deposition and egg quality (fresh and during storage period) of hens, with the aim to provide basis for the production of docosahexaenoic acid (DHA) enriched eggs. Six hundred and thirty Hy-Line Brown laying hens of 31-week-old with similar laying rate were randomly allotted into 7 groups with 6 replicates per group and 15 hens per replicate. The laying hens in the control group were fed a basal diet without adding exogenous DHA sources, and the other six groups were fed the basal diets supplemented with either MO or FO at three different doses of 1.35, 2.70 and 5.40 mg/g DHA, and the supplemental levels of MO were 0.25%, 0.50% and 1.00%, while the supplemental levels of MO were 1.08%, 2.17% and 4.34%, respectively. The feeding trial lasted for 12 weeks after 1 week of adaption. The results showed as follows:1) at the end of the experimental period, eggshell strength, eggshell thickness, egg shape index and Haugh unit were not significantly different among different groups (P>0.05), the albumen height in 1.35 mg/g DHA groups was significantly higher than that in 2.70 and 5.40 mg/g DHA groups at the end of the 4^th week (P < 0.05). Compared with the control group, yolk color was significantly increased in experimental groups at the end of the 8^th week (P < 0.05). 2) No differences were found for malondialdehyde (MDA) content in yolk among all groups when stored for 28 d. The storage period resulted in significantly linear increase of yolk MDA content (P < 0.05). 3) MO groups had a significantly higher Haugh unit than that in FO groups when stored for 14 d(P < 0.05). And after egg stored for 14 d, the interaction of DHA source and supplemental level showed significant effects on albumen height (P < 0.05), and the albumen height was increased as dietary DHA level was increased in MO groups, while the albumen height was initially increased and then decreased as dietary DHA level was increased in FO groups. The yolk color in FO groups was significantly higher than that in MO groups when stored for 7 and 28 d (P < 0.05). 4) Compared with the control group, dietary different sources and levels of DHA extremely significantly increased contents of DHA, α-linolenic acid, eicosapentaenoic acid, monounsaturated fatty acid and ω-3 polyunsaturated fatty acid (PUFA) in yolk (P < 0.01), and which in FO groups were significantly higher than those in MO groups (P < 0.05). Dietary different sources and levels of DHA extremely significantly decreased the ratio of ω-6 PUFA to ω-3 PUFA (P < 0.01). The DHA deposition efficiency in eggs was extremely significantly decreased as DHA supplemental level increasing (P < 0.01). In conclusion, compared with MO, FO is more effective to enhance the DHA enrichment in egg yolk and the 1.35 mg/g supplemental level has the highest deposition efficiency.

Key words: microalgae oil fish oil DHA egg quality deposition efficiency laying hens

二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid，DHA)是一种ω-3系列的长链多不饱和脂肪酸(PUFA)，是大脑中的主要功能物质之一。ω-3 PUFA还包括α-亚麻酸(ALA)、二十碳五烯酸(EPA)等，在脂质代谢及合成生物活性分子中发挥重要作用^[1]。DHA能促进视网膜和脑发育，预防和治疗心血管疾病，调节机体免疫机能，抑制炎症反应，对人和动物的生长和生产均有积极作用。目前人类所需的DHA主要有2种来源，一类是富含DHA的物质，如深海鱼油、鱼油(fish oil，FO)、微藻等，以及富含DHA的动物产品(鸡蛋、肉类)等；另一类是富含ALA的物质，如亚麻籽、紫苏籽等，在体内脱氢酶和延长酶的作用下转化为DHA^[2]。作为ω-3 PUFA的原始来源，微藻增加了海洋鱼类ω-3 PUFA含量，还能通过饲粮增加鸡蛋中ω-3 PUFA含量，补充人体膳食中ω-3 PUFA的不足。较微藻粉而言，微藻油(microalgae oil，MO)成分单一，影响蛋黄中脂肪酸沉积的其他因素较少。研究表明，饲粮中补充FO^[3]和微藻^[4]均能增加蛋黄DHA含量。但未见饲粮中添加相同DHA水平的MO和FO对蛋鸡脂肪酸沉积和蛋品质影响的报道。因此，本试验在高峰期产蛋鸡饲粮中添加相同DHA水平的MO和FO，探索2种DHA源对蛋鸡蛋黄脂肪酸沉积和蛋品质(鲜蛋与储存期)的影响，以期为生产富含DHA鸡蛋提供依据。

1 材料与方法 1.1 试验设计与试验饲粮

试验选用31周龄体况良好、产蛋率接近的海兰褐蛋鸡630只，随机分为7个组，每组6个重复，每个重复15只鸡。对照组饲喂基础饲粮(不额外补充DHA)，试验组以MO和FO作为DHA源添加1.35、2.70和5.40 mg/g的DHA，其中MO添加水平分别为0.25%、0.50%和1.00%(实测DHA含量分别为1.1、2.4和4.1 mg/g)，FO添加水平分别为1.08%、2.17%和4.34%(实测DHA含量分别为1.1、2.7和4.5 mg/g)，试验设计见表 1。MO购自厦门金达威集团股份有限公司，FO购自佛山市大茂饲料有限公司，实测DHA含量分别为543和125 mg/g。各组饲粮等氮等能，参照《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004)配制，其组成及营养水平见表 2，脂肪酸组成见表 3。

表 1 试验设计 Table 1 Experimental design

表 2 验饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 2 Composition and nutrient levels of the experimental diets (air-dry basis)

%
项目 Items	组别Groups
项目 Items	1	2	3	4	5	6	7
原料Ingredients
玉米Corn	55.45	57.18	56.55	55.82	55.75	54.88	51.20
豆粕Soybean meal	27.47	27.49	27.63	27.44	27.40	27.20	26.61
麦麸Wheat bran	1.00			0.90	1.00	2.00	4.00
微藻油Microalgae oil		0.25	0.50	1.00
鱼油Fish oil					1.08	2.17	4.34
棕榈油Palm oil	4.20	3.20	3.20	2.90	2.50	1.80
石粉Limestone	9.00	9.00	9.00	9.00	9.00	9.00	9.00
食盐NaCl	0.30	0.30	0.30	0.30	0.30	0.30	0.30
DL-蛋氨酸DL-Met	0.09	0.09	0.09	0.09	0.09	0.09	0.21
赖氨酸Lys							0.13
磷酸氢钙CaHPO₄	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00
预混料Premix¹⁾	1.46	1.46	1.46	1.46	1.46	1.46	1.46
抗氧化剂Antioxidant²⁾	0.03	0.03	0.03	0.03	0.03	0.03	0.03
沸石粉Zeolite powder			0.24	0.06	0.39	0.07	1.72
合计Total	100.00	100.00	100.00	100.00	100.00	100.00	100.00
营养水平Nutrient levels³⁾
代谢能ME/(MJ/kg)	11.49	11.49	11.49	11.49	11.49	11.49	11.49
粗蛋白质CP	16.81	16.81	16.81	16.81	16.81	16.81	16.81
钙Ca	3.37	3.37	3.37	3.37	3.37	3.37	3.37
有效磷AP	0.33	0.33	0.33	0.33	0.33	0.33	0.33
蛋氨酸Met	0.36	0.36	0.36	0.36	0.36	0.36	0.44
赖氨酸Lys	0.89	0.89	0.89	0.89	0.89	0.89	0.89
蛋氨酸+半胱氨酸Met+Cys	0.65	0.65	0.64	0.65	0.65	0.64	0.65
¹⁾预混料为每千克饲粮提供Premix provided the following per kg of diets:VA 12 500 IU，VD₃ 4 125 IU，VE 15 IU，VK 2 mg，硫胺素thiamine 1 mg，核黄素riboflavin 8.5 mg，泛酸钙calcium pantothenate 11 mg，烟酸niacin 32.5 mg，吡哆醇pyridoxine 8 mg，生物素biotin 0.5 mg，叶酸folic acid 1.25 mg，VB₁₂ 0.02 mg，Mn 65 mg，I 1 mg，Fe 60 mg，Cu 8 mg，Zn 66 mg，胆碱choline 1 000 mg，植酸酶phytase 300 mg，蒙脱石montmorillonite 1 000 mg，酵母培养物yeast culture 10 g。 ²⁾抗氧化剂为每千克饲粮提供Antioxidant provided the following per kg of diets:乙氧基喹啉ethoxyquin 150 mg，VE 100 mg，茶多酚tea polyphenols 50 mg。 ³⁾代谢能和有效磷为计算值，其余为实测值。ME and AP were calculated values, while the others were measured values.

表 2 验饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 2 Composition and nutrient levels of the experimental diets (air-dry basis)

表 3 饲粮脂肪酸组成(干物质基础) Table 3 Fatty acid composition of experimental diets (DM basis)

mg/g
项目 Items	组别Groups
项目 Items	1	2	3	4	5	6	7
C12:0	0.31	0.34	0.29	0.34	0.28	0.28	0.33
C14:0	0.51	0.47	0.60	0.66	1.12	2.24	3.27
C15:0	0.03	0.05	0.08	0.13	0.10	0.22	0.36
C16:0	24.47	19.46	22.39	19.47	18.61	20.60	14.59
C16:1	0.15	0.12	0.16	0.19	1.70	2.46	3.82
C17:0	0.09	0.09	0.13	0.16	0.16	0.31	0.44
C18:0	3.08	2.39	2.68	2.29	2.56	3.21	2.80
C18:1 n9c	28.87	21.94	24.50	20.93	20.61	21.20	13.00
C18:2 n6c	24.39	21.56	23.06	21.93	21.95	23.09	20.92
C18:3 n3	0.32	0.41	0.63	1.05	0.44	0.84	1.24
C20:0	0.06	0.27	0.31	0.28	0.30	0.38	0.39
C20:1	0.16	0.13	0.14	0.13	0.28	0.52	0.81
C21:0	0.02	0.02	0.02	0.02	0.04	0.07	0.12
C20:3 n6	0.00	0.02	0.04	0.07	0.02	0.05	0.08
C20:4 n6	0.00	0.04	0.04	0.07	0.15	0.33	0.50
C20:5 n3	0.02	0.02	0.03	0.06	1.13	2.79	4.51
C22:0	0.03	0.13	0.13	0.18	0.13	0.17	0.16
C24:0	0.17	0.15	0.17	0.18	0.30	0.57	0.76
C22:6 n3	0.03	1.09	2.37	4.14	1.13	2.73	4.55
C24:1	0.01	0.01	0.02	0.05	0.05	0.11	0.05
饱和脂肪酸SFA	28.75	23.37	26.81	23.70	23.59	28.03	23.23
多不饱和脂肪酸PUFA	25.88	24.10	26.95	27.62	25.81	29.03	30.61
ω-3多不饱和脂肪酸ω-3 PUFA	1.49	2.49	3.81	5.56	3.70	5.56	9.10
ω-6多不饱和脂肪酸ω-6 PUFA	24.39	21.62	23.14	22.07	22.11	23.47	21.51
ω-6多不饱和脂肪酸/ω-3多不饱和脂肪酸 ω-6 PUFA/ω-3 PUFA	16.36	8.69	6.07	3.97	5.97	4.22	2.36

表 3 饲粮脂肪酸组成(干物质基础) Table 3 Fatty acid composition of experimental diets (DM basis)

1.2 饲养管理

试验鸡采用三层立体笼养，每笼3只，采用随机编号安排组位，避免环境和位置影响。自由采食和饮水，自然光照加人工补光(16 h/d)，光照强度20 lx，舍温(20±2) ℃，相对湿度50%~60%，自然通风结合纵向负压通风；每天清粪2次，每周消毒1次，常规免疫。每天喂料3次(08：00、13：00和18：00)，捡蛋1次。试验预试期1周，正试期12周。

1.3 测定指标与方法 1.3.1 鸡蛋品质

试验第4、8和12周末，每重复随机取3个蛋，测定蛋品质。采用SONOVA蛋品质自动分析仪(Egg AnalyzerTM, Orka Technology Co.，Ltd.)测定蛋重、浓蛋白高度、哈氏单位、蛋黄颜色；蛋壳强度分析仪(Egg Force Reader, Orka Technology Co.，Ltd.)测定蛋壳强度；蛋壳厚度测定仪(PEACOCK P-1，日本)测定蛋壳厚度；蛋形指数测定仪(Egg Index Reader，Fujibira Industry Co., Ltd.)测量蛋形指数。蛋成分分析：全蛋、蛋壳和蛋黄分别称重，并统计蛋壳和蛋黄比例。

1.3.2 储存期鸡蛋品质

试验12周末，每重复取9枚蛋，共378枚，称重并记录鲜蛋重，置4 ℃、相对湿度65%，冷藏7、14和28 d后，分别测定不同储存时间失水率、鸡蛋品质。分离蛋黄并称重，混合搅拌均匀后，-20 ℃储存备用。

1.3.3 储存期蛋黄丙二醛(MDA)含量检测

取存于-20 ℃蛋黄，采用硫代巴比妥钠(TBA)法测定蛋黄MDA含量，测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

制备蛋黄匀浆：取0.1 mL蛋黄样品，加4.5 mL无水乙醇，样品研磨仪(上海静信科技有限公司)60 Hz混120 s，4 000 r/min离心10 min，取上清0.2 mL测定MDA含量。

1.3.4 饲粮、蛋黄中脂肪酸含量检测

饲粮粉碎至粉末状，取(100±10) mg样品，移至15 mL螺口玻璃试管，依次加入2 mL正己烷和1 mL内标液，再加入4 mL甲醇:氯乙酰混合液。混匀器混匀，80 ℃水浴2 h。冷却至室温，缓慢加入5 mL 7%碳酸钾，涡旋混匀，4 000 r/min离心10 min，取上层分析。使用GC-450气相色谱仪(天美科学仪器有限公司)，采用Agilent DB-23色谱柱(60 m×250 μm×0.25 μm)。氦气为载气，恒流量1.00 mL/min；检测器温度280 ℃；进样口温度270 ℃；程序性升温：100 ℃维持5min后，以4 ℃/min升温至240 ℃，进样量1.0 μL。正己烷为清洗液，进样前后各清洗3次。

试验12周末，每重复取2枚蛋，去壳，蛋黄混匀，冻干。取(90±10) mg蛋黄粉进行脂肪酸检测，检测方法同饲粮中脂肪酸检测方法。

1.3.5 蛋中DHA沉积效率

根据料蛋比，计算蛋中DHA沉积效率，计算公式：

1.4 统计分析

试验数据采用SPSS 19.0软件中一般线性模型(GLM)程序进行因子分析，对DHA源和剂量的主效应及互作效应进行多元方差分析，采用Duncan氏法进行多重比较和指标的相关分析，显著水平为P < 0.05，极显著水平为P < 0.01，结果以平均值和标准误表示。

2 结果与分析 2.1 不同DHA源和添加水平对鸡蛋品质的影响

由表 4可知，不同DHA源、水平及其互作效应对蛋壳厚度和蛋形指数均无显著影响(P>0.05)；第4周时，蛋壳强度受DHA源和水平的互作效应影响显著(P < 0.05)，MO组蛋壳强度随添加水平提高呈先下降后上升趋势，FO组呈先升高后下降趋势。第4周时，哈氏单位和蛋白高度受DHA水平影响显著(P < 0.05)，1.35 mg/kg DHA组显著高于5.40 mg/g DHA组(P < 0.05)，在第8和12周时各组无显著差异(P>0.05)。第8周时，与对照组相比，所有DHA组蛋黄颜色均显著升高(P < 0.05)，不同DHA源、添加水平及其互作效应对蛋黄颜色无显著影响(P>0.05)；蛋黄指数在第8周时受DHA水平影响显著(P < 0.05)，2.70 mg/g DHA组最高，显著高于1.35 mg/g DHA组(P < 0.05)，第12周时各组间蛋黄指数无显著差异(P>0.05)。综上，本试验条件下，除哈氏单位、蛋白高度、蛋黄颜色和蛋黄指数外，饲粮添加DHA对试验全期鸡蛋内部其他品质无显著影响。

表 4 不同DHA源和添加水平对鸡蛋品质的影响 Table 4 Effects of different sources and supplemental levels of DHA on egg quality

项目 Items	时间 Time/周	组别Groups							标准误 SEM	P值 P-value	来源 Sources		添加水平 Supplemental levels/(mg/kg)			标准误 SEM	P值P-value
项目 Items	时间 Time/周	1	2	3	4	5	6	7	标准误 SEM	P值 P-value	微藻油 MO	鱼油 FO	1.35	2.70	5.40	标准误 SEM	来源 Source	添加水平 Supplemental level	互作 Interaction
蛋壳强度 Eggshell strength/(N/cm²)	4	42.41	41.96	38.97	40.36	38.40	42.74	38.86	0.517	0.081	40.43	40.00	40.18	40.86	39.61	0.515	0.679	0.617	0.020
	8	42.97	40.97	44.70	40.32	41.96	42.01	43.12	0.586	0.529	42.00	42.37	41.46	43.37	41.72	0.668	0.778	0.459	0.252
	12	42.82	41.77	43.82	43.31	40.82	41.08	41.83	0.406	0.362	42.97	41.24	41.29	42.45	42.57	0.444	0.061	0.442	0.702
蛋壳厚度 Eggshell thickness/mm	4	0.38	0.36	0.36	0.37	0.37	0.37	0.36	0.027	0.283	0.36	0.37	0.37	0.37	0.36	0.002	0.611	0.659	0.279
	8	0.37	0.38	0.37	0.37	0.37	0.36	0.37	0.009	0.304	0.37	0.37	0.37	0.37	0.37	0.001	0.059	0.269	0.595
	12	0.38	0.38	0.38	0.38	0.38	0.38	0.38	0.002	0.919	0.38	0.38	0.38	0.38	0.38	0.002	0.661	0.894	0.470
蛋形指数 Egg index	4	1.31	1.33	1.32	1.31	1.33	1.31	1.30	0.004	0.431	1.32	1.32	1.33	1.32	1.31	0.004	0.553	0.101	0.900
	8	1.33	1.34	1.32	1.34	1.34	1.34	1.33	0.004	0.871	1.33	1.34	1.34	1.33	1.33	0.004	0.740	0.638	0.431
	12	1.34	1.34	1.33	1.36	1.36	1.34	1.34	0.003	0.235	1.34	1.34	1.35	1.33	1.35	0.004	0.681	0.188	0.122
哈氏单位 Haugh unit	4	87.51	90.01	87.06	87.32	89.52	85.96	83.69	0.588	0.068	88.04	86.39	89.78^x	86.51^xy	85.50^y	0.593	0.147	0.017	0.534
	8	80.95	82.73	84.21	79.34	81.99	81.32	81.69	0.822	0.846	82.09	81.67	82.36	82.76	80.52	0.949	0.824	0.595	0.534
	12	85.76	84.68	83.65	84.34	85.51	83.27	87.97	0.534	0.281	84.22	85.59	85.09	83.46	86.16	0.580	0.249	0.178	0.363
蛋白高度 Albumen height/mm	4	7.86	8.22	7.69	7.69	8.12	7.47	7.66	0.076	0.066	7.84	7.75	8.16^x	7.59^y	7.67^y	0.068	0.390	0.003	0.852
	8	6.46	7.22	7.24	6.53	6.84	6.67	6.96	0.126	0.536	7.00	6.82	7.03	6.95	6.75	0.128	0.503	0.648	0.257
	12	7.52	7.35	7.02	7.19	7.41	6.88	7.80	0.092	0.123	7.19	7.36	7.38	6.95	7.49	0.097	0.374	0.071	0.287
蛋黄颜色 Egg yolk color	4	6.06	6.80	6.72	6.27	6.94	6.89	5.86	0.128	0.110	6.58	6.56	6.88^x	6.81^x	6.07^y	0.135	0.897	0.037	0.605
	8	7.17^b	8.11^a	8.61^a	8.33^a	8.67^a	8.44^a	8.22^a	0.103	< 0.001	8.35	8.44	8.39	8.53	8.27	0.083	0.581	0.476	0.159
	12	7.89	7.89	7.94	8.22	7.78	8.40	8.28	0.086	0.363	8.02	8.16	7.83	8.18	8.25	0.089	0.440	0.123	0.600
蛋黄指数 Egg yolk rate/%	4	25.78	25.84	25.58	24.68	25.72	25.64	25.16	0.143	0.290	25.34	25.51	25.78	25.61	24.92	0.161	0.665	0.085	0.745
	8	26.26	26.03	26.95	26.72	25.97	27.13	26.01	0.144	0.132	26.57	26.37	26.00^y	27.04^x	26.37^xy	0.149	0.517	0.025	0.470
	12	25.77	26.17	25.87	26.56	25.75	25.98	26.29	0.164	0.854	26.20	26.00	25.96	25.93	26.42	0.191	0.616	0.503	0.848
同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P < 0.05)，相同小写字母或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。 In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P < 0.05), while with the same small letter or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as blow.

表 4 不同DHA源和添加水平对鸡蛋品质的影响 Table 4 Effects of different sources and supplemental levels of DHA on egg quality

2.2 不同DHA源和添加水平对储存期蛋黄MDA含量的影响

由表 5可知，储存7和14 d，蛋黄MDA含量受DHA添加水平影响显著(P < 0.05)，5.40 mg/g DHA组蛋黄MDA含量显著高于1.35 mg/g DHA组(P < 0.05)；储存7 d时，7组蛋黄MDA含量最高；储存28 d，各组间蛋黄MDA含量差异不显著(P>0.05)。由表 6可知，蛋黄MDA含量随DHA添加水平提高而增加(P < 0.01)，7组最高；蛋黄MDA含量随储存时间延长而极显著增加(P < 0.01)。

表 5 不同DHA源和添加水平对储存期鸡蛋品质的影响 Table 5 Effects of different sources and supplemental levels of DHA on egg quality at storage period

项目 Items	时间 Time/周	组别Groups							标准误 SEM	P值 P-value	来源 Sources		添加水平 Supplemental levels/(mg/kg)			标准误 SEM	P值P-value
项目 Items	时间 Time/周	1	2	3	4	5	6	7	标准误 SEM	P值 P-value	微藻油 MO	鱼油 FO	1.35	2.70	5.40	标准误 SEM	来源 Source	添加水平 Supplemental level	互作 Interaction
蛋黄丙二醛 MDA in yolk/ (nmol/mL)	7	135.18^c	160.39^bc	184.35^abc	226.74^ab	142.19^c	194.26^bc	234.31^a	8.111	< 0.001	190.49	190.25	151.29^y	189.31^xy	230.53^x	7.121	0.987	< 0.001	0.674
	14	193.06	226.19	228.68	266.96	222.33	235.63	298.71	11.320	0.072	242.41	255.96	224.59^y	232.15^y	282.83^x	10.382	0.377	0.046	0.132
	28	217.73	230.65	247.79	271.58	258.12	272.64	305.82	10.070	0.307	250.12	278.86	244.36	261.35	288.70	10.767	0.250	0.263	0.984
失水率 Water lose rate/%	7	0.27	0.26	0.24	0.25	0.27	0.27	0.28	0.006	0.609	0.25	0.27	0.26	0.25	0.27	0.006	0.093	0.708	0.719
	14	0.65	0.58	0.49	0.63	0.64	0.57	0.31	0.012	0.170	0.57	0.60	0.61	0.58	0.62	0.018	0.375	0.082	0.406
	28	2.09	1.86	1.86	2.04	1.93	2.09	1.95	0.036	0.397	1.92	1.98	1.89	1.97	2.00	0.014	0.417	0.597	0.287
哈氏单位 Haugh unit	7	81.63	79.29	83.80	80.76	78.38	77.26	80.59	0.701	0.222	81.28	78.74	78.84	80.53	80.68	0.666	0.066	0.464	0.120
	14	77.63^ab	78.10^ab	78.76^ab	81.90^a	75.73^bc	76.99^ab	71.89^c	0.729	0.010	79.59	74.85	76.91	77.88	76.89	0.710	0.002	0.814	0.044
	28	76.37	75.39	74.29	72.40	73.20	73.92	74.59	0.527	0.516	74.03^m	73.90ⁿ	74.29	74.10	73.50	0.616	0.920	0.860	0.359
蛋白高度 Albumen height/mm	7	6.96	6.59	7.18	6.67	6.31	6.57	6.59	0.087	0.150	6.81	6.49	6.45	6.88	6.63	0.084	0.061	0.136	0.423
	14	6.27	6.01	6.36	6.92	6.16	6.50	5.22	0.141	0.052	6.43	5.96	6.08	6.43	6.07	0.145	0.116	0.521	0.019
	28	6.04	5.93	5.76	5.57	5.55	5.64	5.72	0.065	0.338	5.76	5.64	5.74	5.70	5.64	0.074	0.446	0.866	0.347
蛋黄颜色 Egg yolk color	7	8.11	8.00	7.94	7.94	8.33	8.33	8.38	0.074	0.440	7.96ⁿ	8.35^m	8.17	8.14	8.17	0.085	0.029	0.988	0.965
	14	8.00	7.91	8.50	8.25	8.17	8.25	8.67	0.105	0.522	8.22	8.36	8.04	8.38	8.46	0.118	0.562	0.328	0.497
	28	8.27	8.32	8.54	8.71	8.75	8.79	8.93	0.072	0.079	8.52ⁿ	8.82^m	8.53	8.67	8.82	0.061	0.020	0.180	0.753
蛋黄指数 Egg yolk rate/%	7	26.18	26.87	27.53	27.08	26.25	27.33	26.55	0.156	0.124	27.16	26.71	26.56	27.43	26.81	0.163	0.173	0.098	0.853
	14	26.57	26.34	26.75	26.99	26.83	26.79	26.54	0.177	0.978	26.70	26.72	26.59	26.78	26.77	0.197	0.956	0.905	0.628
	28	28.41	28.22	28.47	28.57	26.68	28.69	27.15	0.229	0.108	28.41	27.51	27.45	28.58	27.86	0.246	0.074	0.181	0.274

表 5 不同DHA源和添加水平对储存期鸡蛋品质的影响 Table 5 Effects of different sources and supplemental levels of DHA on egg quality at storage period

表 6 不同DHA添加水平和储存时间对存储期鸡蛋品质的影响 Table 6 Effects of different supplementation level of DHA and storage time on egg quality in storage period

项目 Items	蛋黄丙二醛 MDA in yolk/(nmol/mL)	失水率 Water lose rate/%	哈氏单位 Haugh unit	蛋白高度 Albumen height/mm	蛋黄颜色 Egg yolk color	蛋黄指数 Egg yolk rate/%
组别Groups
1	179.88^d	1.00	78.54^ab	6.43^a	8.12^b	27.05
2	203.17^cd	0.90	77.59^ab	6.18^ab	8.08^b	27.15
3	218.66^bcd	0.86	78.95^a	6.43^a	8.33^ab	27.58
4	255.09^ab	0.98	78.23^ab	6.39^a	8.30^ab	27.55
5	205.70^cd	0.95	75.76^b	6.01^ab	8.42^ab	26.58
6	234.18^bc	0.97	76.06^ab	6.24^ab	8.46^ab	27.61
7	279.61^a	0.95	75.69^b	5.84^b	8.66^a	26.74
储存时间Storage time/d
7	182.49^y	0.26^z	80.24^x	6.70^x	8.15^y	26.83
14	240.32^x	0.60^y	77.28^y	6.20^y	8.25^y	26.69
28	259.01^x	1.98^x	74.31^z	5.75^z	8.61^x	28.03
SEM	4.885	0.013	0.356	0.055	0.049	0.107
P值P-value
饲粮Diet	< 0.001	0.105	0.044	0.036	0.029	0.052
储存时间Storage time	< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001
饲粮×储存时间 Diet×storage time	0.986	0.606	0.050	0.050	0.897	0.510

表 6 不同DHA添加水平和储存时间对存储期鸡蛋品质的影响 Table 6 Effects of different supplementation level of DHA and storage time on egg quality in storage period

2.3 不同DHA源和添加水平对储存期鸡蛋品质的影响

由表 5可知，DHA源、添加水平及其互作效应对不同储存时间鸡蛋失水率、蛋黄指数无显著影响(P>0.05)；储存14 d时，哈氏单位受DHA源和互作效应影响显著(P < 0.05)，MO组哈氏单位显著高于FO组(P < 0.05)，但储存28 d时哈氏单位各组间无显著影响(P>0.05)。储存14 d时DHA源和添加水平的互作效应对蛋白高度的影响显著(P < 0.05)，MO组蛋白高度随添加水平升高而逐渐升高，而FO组蛋白高度随添加水平提高呈现先升高后降低趋势；储存28 d时，各组蛋白高度无显著差异(P>0.05)。储存7和28 d时，FO组蛋黄颜色显著高于MO组(P < 0.05)，不同DHA添加水平对蛋黄颜色无显著影响(P>0.05)。由表 6可知，随储存时间延长，鸡蛋失水率、蛋黄颜色和蛋黄指数极显著增加(P < 0.01)，哈氏单位和蛋白高度极显著降低(P < 0.01)。从整个储存期看，3组哈氏单位显著高于7组(P < 0.05)；7组蛋白高度显著低于对照组、3组和4组(P < 0.05)，蛋黄颜色显著高于对照组和1组(P < 0.05)。

2.4 不同DHA源和添加水平对蛋黄脂肪酸含量和组成的影响

由表 7可知，蛋黄DHA、EPA含量受DHA源、添加水平及互作效应影响极显著(P < 0.01)。FO组蛋黄DHA、EPA含量显著高于MO组(P < 0.05)，且随着添加水平提高，蛋黄DHA、EPA含量极显著增加(P < 0.01)。7组蛋黄DHA、EPA含量最高，显著高于其他各组(P < 0.05)；与对照组相比，各试验组蛋黄DHA含量分别增加了183.01%、286.10%、363.32%、231.66%、290.35%、410.81%。蛋黄ALA含量随添加水平提高极显著增加(P < 0.01)。

表 7 不同DHA源和添加水平对蛋黄脂肪酸含量和组成的影响(干物质基础) Table 7 Effects of different sources and supplemental levels of DHA on contents and composition of fatty acids in yolk (DM basis)

项目 Items	组别Groups							标准误 SEM	P值 P-value	来源 Sources		添加水平 Supplemental levels/(mg/kg)			标准误 SEM	P值P-value
项目 Items	1	2	3	4	5	6	7	标准误 SEM	P值 P-value	微藻油 MO	鱼油 FO	1.35	2.70	5.40	标准误 SEM	来源 Source	添加水平 Supplemental level	互作 Interaction
二十二碳六烯酸 DHA/(mg/g)	2.59^f	7.33^e	10.00^c	12.00^b	8.59^d	10.11^c	13.23^a	0.508	< 0.001	9.78ⁿ	10.65^m	7.96^z	10.05^y	12.62^x	0.089	< 0.001	< 0.001	0.005
α-亚麻酸 ALA/(mg/g)	0.96^d	1.01^cd	1.18^b	1.57^a	1.06^c	1.25^b	1.54^a	0.037	< 0.001	1.26	1.28	1.03^z	1.22^y	1.55^x	0.013	0.347	< 0.001	0.275
二十碳五烯酸 EPA/(mg/g)	0.12^f	0.15^f	0.36^e	0.52^d	0.82^c	1.48^b	3.01^a	0.152	< 0.001	0.34ⁿ	1.77^m	0.48^z	0.92^y	1.76^x	0.021	< 0.001	< 0.001	< 0.001
单不饱和脂肪酸 MUFA/(mg/g)	162.75^a	160.02^a	151.65^b	141.41^c	145.97^c	133.40^d	132.27^d	1.812	< 0.001	151.03^m	137.21ⁿ	152.99^x	142.53^y	136.84^z	0.500	< 0.001	< 0.001	0.008
多不饱和脂肪酸 PUFA/(mg/g)	52.30^b	52.29^b	57.82^b	64.71^a	52.27^b	56.56^b	57.42^b	0.789	< 0.001	58.27^m	55.38ⁿ	52.28^z	57.13^y	61.06^x	0.535	< 0.001	< 0.001	0.022
ω-3多不饱和脂肪酸 ω-3 PUFA/(mg/g)	3.84^g	8.48^f	11.50^d	14.12^b	10.48^e	12.86^c	17.81^a	0.642	< 0.001	11.38ⁿ	13.72^m	9.48^z	12.21^y	15.96^x	0.084	< 0.001	< 0.001	< 0.001
ω-6多不饱和脂肪酸 ω-6 PUFA/(mg/g)	47.80^a	47.17^a	47.03^a	47.65^a	40.79^bc	43.59^ab	38.94^c	0.752	< 0.001	47.28^m	41.11ⁿ	43.89	45.31	43.30	0.581	< 0.001	0.369	0.196
ω-6多不饱和脂肪酸/ω-3多不饱和脂肪酸 ω-6 PUFA/ω-3 PUFA	12.46^a	5.57^b	4.08^c	3.37^c	3.90^c	3.39^c	2.19^d	0.505	< 0.001	4.34^m	3.16ⁿ	4.74^x	3.73^y	2.78^z	0.063	< 0.001	< 0.001	0.013

蛋黄单不饱和脂肪酸(MUFA)受DHA源、添加水平及互作效应影响极显著(P < 0.01)。MO组显著高于FO组(P < 0.05)，且随着添加水平提高，蛋黄MUFA含量极显著降低(P < 0.01)。7组蛋黄MUFA含量最低，显著低于对照组(P < 0.05)。蛋黄PUFA含量受DHA源、添加水平及互作效应影响显著(P < 0.05)，MO组显著高于FO组(P < 0.05)，且随着添加水平提高，蛋黄PUFA含量极显著增加(P < 0.01)，5.40 mg/g DHA组分别比1.35和2.70 mg/g DHA组增加了9.28%和16.79%，4组PUFA含量最高，显著高于其他各组(P < 0.05)。

由表 7可知，蛋黄ω-3 PUFA含量受DHA源、添加水平及互作效应影响极显著(P < 0.01)。FO组蛋黄ω-3 PUFA含量显著高于MO组(P < 0.05)，5.40 mg/g DHA组显著高于1.35和2.70 mg/g DHA组(P < 0.05)；7组ω-3 PUFA含量最高，比对照组增加了363.80%(P < 0.05)，4组ω-3 PUFA含量比对照组增加了267.71%(P < 0.05)。蛋黄ω-6 PUFA含量受DHA源影响极显著(P < 0.01)，MO组显著高于FO组(P < 0.05)；5组和7组蛋黄ω-6 PUFA含量显著低于对照组(P < 0.05)。

ω-6 PUFA/ω-3 PUFA值受DHA源、添加水平及互作效应影响显著(P < 0.05)，FO组蛋黄ω-6 PUFA/ω-3 PUFA值显著低于MO组(P < 0.05)，且随着添加水平提高极显著降低(P < 0.01)，7组ω-6 PUFA/ω-3 PUFA值最低；与对照组相比，试验组蛋黄ω-6 PUFA/ω-3 PUFA值均显著降低(P < 0.05)。由图 1、图 2可知，鸡蛋DHA沉积效率随添加水平提高而极显著下降(P < 0.01)。

**代表差异极显著P＜0.01。图 2同。 ** mean extremely significantly different (P < 0.01). The same as Fig. 2. 图 1 MO组鸡蛋DHA沉积效率 Figure 1 Deposition efficiency of DHA in the egg for MO groups

图 2 FO组鸡蛋DHA沉积效率 Figure 2 Deposition efficiency of DHA in the egg for FO groups

3 讨论 3.1 不同DHA源和添加水平对鸡蛋品质的影响

本实验室之前的研究表明，0.5%的MO对蛋品质无显著影响^[5]。本研究表明，蛋鸡饲粮分别添加1.35、2.70和5.40 mg/kg的DHA(分别来自FO和MO)，第4周时，可能是7组FO添加水平过高(4.34%)，对蛋鸡机体产生一定的应激导致5.40 mg/kg DHA组哈氏单位和蛋白高度显著低于1.35 mg/g DHA组，不过，随着饲喂时间的延长，各组间差异逐渐消失。第8周时，各试验组蛋黄颜色显著高于对照组，表明饲粮中补充MO和FO促进β类胡萝卜素在蛋黄中沉积，这与卢元鹏等^[6]的研究结果一致，但也有研究表明添加5%的FO对蛋黄颜色没有显著影响^[7]。从试验全期来看，试验处理对高峰期鸡蛋内部品质无显著影响，这与添加微藻粉结果^[8]一致。Saleh^[3]在饲粮中添加1.25%、2.50%、3.75%和5.00%的FO不影响蛋形指数、蛋白高度、蛋黄指数和哈氏单位，与本试验结果一致；其中3.75%组蛋壳厚度显著高于对照组。另有报道，与豆油相比，FO降低了蛋壳厚度^[9]，3%FO降低蛋壳质量^[10]。蛋壳品质受蛋鸡饲粮中钙、磷、维生素D₃以及微量元素的影响，其中锰、锌、铜对蛋壳品质影响较大^[11]，所以饲粮中添加DHA对鸡蛋厚度的影响有别。蛋鸡饲粮补充DHA是否会影响蛋壳厚度，尚需进一步研究。

3.2 不同DHA源和添加水平对储存期蛋黄MDA含量的影响

饲粮中加入不饱和油脂显著影响生物膜的抗氧化力^[12]，通过饲粮中补充DHA，可增加生物膜DHA、降低ω-6 PUFA含量。蛋鸡饲粮中添加亚麻籽^[13]、FO^[14]均可升高蛋黄MDA含量，但添加3%的裂壶藻干粉未见影响蛋黄脂肪酸的氧化，且4 ℃储存30 d，与对照组氧化值仍无显著差异^[15]。本试验结果表明，储存7和14 d时，蛋黄MDA含量受DHA添加水平影响显著；储存28 d时，各组间MDA含量无显著差异。表明随储存时间的延长，各组蛋黄MDA含量均显著增加，表明储存时间越久蛋黄中过氧化产物越多。

3.3 不同DHA源和添加水平对储存期鸡蛋品质的影响

本试验结果表明，储存28 d，各组间哈氏单位和蛋白高度没有显著差异，但随着储存时间的延长哈氏单位和蛋白高度均降低。哈氏单位由浓蛋白高度和蛋重计算而得，蛋鸡的品种、年龄和鸡蛋的储存时间等均影响哈氏单位，哈氏单位高说明鸡蛋中蛋白高、蛋新鲜^[16]。本试验中，储存时间对鸡蛋蛋白高度和哈氏单位影响显著，且随着储存时间延长鸡蛋哈氏单位、蛋白高度不断降低，而哈氏单位与储存时间存在一定函数关系^[17]。

3.4 不同DHA源和添加水平对蛋黄脂肪酸含量和组成的影响

蛋黄脂肪酸组成与饲粮脂肪酸组成密切相关^[8]，饲喂14~15 d后蛋黄中DHA沉积量达到稳定^[18-19]。饲喂4周，饲粮中添加任何富含ω-3 PUFA的原料都会增加蛋黄中ω-3 PUFA的含量，且DHA会优先沉积于蛋黄中^[20]。饲粮中加入60 g/kg的鲱鱼油(11%EPA和9%DHA)使蛋中DHA达到每枚150~200 mg，EPA含量达到每枚40~60 g^[21]；饲粮中分别添加1.5%和3.0%FO，蛋黄中DHA占总脂肪酸的2.43%和3.16%^[22]；0.5%和2.0%的MO能显著提高蛋黄中DHA水平(18和31 mg/g)，DHA不仅沉积到蛋黄中，还能沉到到血浆和组织中^[23]。本试验研究表明，蛋黄DHA、PUFA和ω-3 PUFA含量均随DHA添加水平升高而极显著增加，其中7组蛋黄DHA含量最高达13.23 mg/g，ω-3 PUFA含量为17.81 mg/g。本试验中，相同DHA添加水平，FO组蛋黄DHA沉积量高于MO组，可能是因为FO组饲粮中不仅含有DHA，且EPA也较高，EPA在蛋鸡体内转化为DHA沉积于蛋黄中。试验结果表明补充MO和FO促进了蛋黄中ω-3 PUFA的沉积，同时降低了蛋黄中ω-6 PUFA/ω-3 PUFA值，优化了蛋黄脂肪酸组成。

MO中DHA主要为甘油三酯型DHA(TG-DHA)，吸收效率约50%^[24]。蛋中DHA沉积效率随饲粮中DHA添加水平的提高有降低趋势，当饲粮中添加1%、2%和3%的裂殖壶菌粉时，添加水平超过2%蛋黄中DHA含量不会继续增加^[25]；饲粮添加1.5%和3.0%的FO(ω-3 PUFA含量分别为0.462%和0.924%)，蛋黄ω-3 PUFA沉积效率分别为22%和18%，表明高剂量降低沉积效率^[26]；饲粮中分别添加5%和10%(0.076%和0.152% ω-3 PUFA)的微拟球藻，蛋中ω-3 PUFA沉积效率分别为25%和20%^[4]。研究表明，在蛋鸡饲粮中添加1.2 mg/g的ω-3 PUFA使蛋中沉积效率最高^[8]。本试验在DHA添加水平为1.35 mg/g时蛋黄中DHA沉积效率最高，与前人研究结果一致。

4 结论

① 饲粮中分别添加MO和FO对试验中(4和8周)蛋壳强度、哈氏单位、蛋白高度、蛋黄颜色、蛋黄指数有一定影响，但对试验末期(12周)各项蛋品质无显著影响。

② 储存时间对蛋黄MDA含量、鸡蛋失水率、哈氏单位、蛋白高度和蛋黄颜色有显著影响。

③ 相同DHA添加水平下，与MO相比，FO能促进蛋黄DHA、EPA的沉积，添加水平为1.35 mg/g时DHA沉积效率最高。

④ 随着DHA添加水平提高，蛋黄DHA、ALA、EPA和ω-3 PUFA含量均显著增加，表明蛋黄中脂肪酸含量受饲粮脂肪酸水平影响显著。

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