核黄素(又称维生素B₂)作为构成真核细胞中众多氧化酶和脱氢酶辅酶的黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)和黄素单核苷酸(FMN)的前体物质，广泛参与机体内糖、脂质和蛋白质的氧化代谢反应，提高饲料的消化利用率，进而促进动物生长发育^[1-3]。王鑫等^[4]研究表明，饲粮中添加维生素B₂对五龙鹅屠宰率、胸肌率、腿肌率和腹肌率有显著影响，且当饲粮中维生素B₂添加水平为5.73 mg/kg时屠宰率达到最大值。陈雷等^[5]研究发现，给产蛋鸡饲喂不同维生素B₂水平的饲粮时，鸡蛋中维生素B₂含量存在显著差异，且随着饲粮维生素B₂添加水平的提高而增加。陈俊宏等^[6]研究发现，随着维生素B₂摄入量的增加，伊犁马红细胞中谷胱甘肽还原酶活性系数逐渐降低。王雯慧等^[7]研究发现，核黄素缺乏会引起雏鸡外周神经病变，表现卷趾麻痹症状；给缺乏组补充核黄素后，缺乏症得到缓解，体重增加。饲粮中核黄素缺乏会导致怀孕母貂出现死胎现象，但对公貂生育能力影响较小；饲粮中核黄素含量不足时造成机体生长缓慢、血红蛋白内容物减少、下层绒毛出现灰色或者白色等病变^[8]。NRC(1982)^[9]推荐饲粮中维生素B₂添加水平为1.5 mg/kg，近年来随着水貂品种的不断选育，在体重和繁殖力等方面较前期都有所提高；又因国内与国外的饲养环境存在差异，该推荐量目前并不是水貂获得最佳生长性能的适宜添加水平。因此，本试验通过研究饲粮维生素B₂添加水平对冬毛期水貂生长性能、毛皮品质、营养物质消化率及氮代谢的影响，明确冬毛期水貂饲粮中维生素B₂适宜的添加水平，旨在为我国水貂饲养行业维生素营养需要量提供理论依据。

1 材料与方法 1.1 试验动物与试验设计

选取(135±5)日龄、体重相近的健康雄性短毛黑水貂90只，随机分成6组，每组15个重复，每个重复1只水貂，单笼饲养。采用单因素随机试验设计，每组水貂初始体重差异不显著(P＞0.05)，各组水貂分别饲喂在基础饲粮中添加0(Ⅰ组，对照组)、2.5(Ⅱ组)、5.0(Ⅲ组)、10.0(Ⅳ组)、20.0(Ⅴ组)、40.0 mg/kg(Ⅵ组)维生素B₂的试验饲粮。试验用维生素B₂购自浙江新和成股份有限公司，维生素B₂有效成分≥82.8%。预试期5 d，正试期63 d。

1.2 试验饲粮

根据NRC(1982)及相关水貂营养研究^[10-11]，以鱼粉、肉骨粉、肉粉、膨化玉米、玉米蛋白粉、豆粕等为主要原料，同时添加水貂生长发育所需的矿物质和维生素(不含维生素B₂)配制冬毛期水貂基础饲粮。基础饲粮组成及营养水平见表 1。

1.3 饲养管理

动物饲养试验在农业部长白山野生生物资源重点野外科学观测站开展。由饲养场经验丰富的饲养员于每天07:00、14:00各饲喂1次，保证自由采食和充足饮水。

1.4 消化代谢试验

于2017年10月17—20日进行消化代谢试验，共计3 d，采用全收粪法。采集尿液前向收集桶内注入10%的硫酸20 mL用于固氮，后期测定尿中氮含量。每天收集的粪便称重后按鲜重的5%加入10%硫酸溶液，并加少量甲苯防腐，保存于-20 ℃备用。将3 d的尿液和粪便分别混合均匀后取样，其中粪便先在80 ℃下杀菌2 h，然后降到65 ℃烘干至恒重，磨碎过40目筛，制成风干样本，以备实验室分析。

1.5 测定指标及方法 1.5.1 生长性能

预试期后，正试期第1天称重为水貂初重，试验结束后称重为末重，记录采食量，每隔15 d称重1次并记录，计算平均日增重、平均日采食量和料重比。

1.5.2 营养物质消化率及氮代谢

基础饲粮、粪和尿中的粗蛋白质、粗脂肪含量测定参照张丽英^[12]的方法，钙含量测定参照GB/T 6436—2002^[13]，磷含量测定参照GB/T 6437—2002^[14]，基础饲粮中维生素B₂含量在农业部特种经济动植物及产品质量监督检验测试中心采用高效液相色谱法测定。

营养物质消化率及氮代谢相关指标计算公式如下：

营养物质消化率(%)=[(营养物质摄入量-粪中营养物质总量)/营养物质摄入量]×100；

沉积氮(g/d)=食入氮-粪氮-尿氮；

净蛋白质利用率(%)=(氮沉积/食入氮)×100；

蛋白质生物学价值(%)=[沉积氮/ (食入氮-粪氮)]×100。

1.5.3 毛皮品质

取样部位及方法对于水貂针毛、绒毛长度的准确性有一定的影响，本试验参照梁东^[15]的取样和测量方法。屠宰试验前取每只水貂背中下部针毛、绒毛放入5号自封袋中以备实验室测定，取毛时需注意要连根拔起。测定时将每组水貂的针毛、绒毛用眼科镊子放于表面湿润的载玻片上，让其自然伸直后用游标卡尺进行测量，每只水貂针毛、绒毛测量35根。卷尺测量从水貂鼻尖到尾根的长度为体长。参照QB/T 4203—2011^[16]以及本课题组毛皮动物相关专家意见，在屠宰前对毛皮品质进行鉴定，品质评分1~12分，颜色1~5分，光泽度1~5分，平齐度1~5分，合计总分为毛皮品质评分。

1.6 数据分析及处理

试验结果以“平均值士标准差”表示，数据用Excel 2013进行整理并用SAS 9.4软件中的GLM程序进行单因素方差分析，采用Duncan氏法进行多重比较，P＜0.05为差异显著，P＜0.01为差异极显著。

2 结果 2.1 饲粮维生素B₂添加水平对冬毛期水貂生长性能的影响

由表 2可知，各组水貂末重、平均日增重、平均日采食量差异不显著(P>0.05)，Ⅴ组水貂平均日增重高于其他各组。Ⅴ和Ⅵ组水貂料重比极显著低于Ⅰ组(P＜0.01)，且Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组之间差异不显著(P>0.05)。

2.2 饲粮维生素B₂添加水平对冬毛期水貂毛皮品质的影响

由表 3可知，各组水貂毛皮品质评分和体长差异不显著(P>0.05)。Ⅳ和Ⅴ组水貂针毛长极显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅵ组(P＜0.01)，Ⅴ组水貂绒毛长极显著高于其他各组(P＜0.01)。

2.3 饲粮维生素B₂添加水平对冬毛期水貂营养物质消化率的影响

由表 4可知，各组水貂的干物质排出量、干物质消化率、蛋白质消化率和脂肪消化率均差异不显著(P>0.05)，Ⅵ组水貂的脂肪消化率高于其他各组。

2.4 饲粮维生素B₂添加水平对冬毛期水貂氮代谢的影响

由表 5可知，各组水貂的食入氮、粪氮、尿氮和沉积氮差异不显著(P>0.05)。Ⅴ组水貂的净蛋白质利用率显著高于对照组(P＜0.05)；在水貂蛋白质生物学价值方面，Ⅴ和Ⅵ组显著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组(P＜0.05)，且Ⅳ、Ⅴ和Ⅳ组之间差异不显著(P>0.05)。

3 讨论 3.1 饲粮维生素B₂添加水平对冬毛期水貂生长性能的影响

Zehra等^[17]研究发现，饲粮中添加不同水平的核黄素能显著影响蓝点石斑鱼苗的绝对体增重、采食量和饲料转化率，提高鱼苗的成活率；当饲粮核黄素添加水平为6 mg/kg(实际饲粮核黄素含量6.11 mg/kg)时，蓝点石斑鱼发挥最佳生长性能，鱼苗成活率达到100%，绝对体增重相比于对照组提高了19.7 g。Bhmer等^[18]试验得出，当饲粮维生素B₂添加水平为18.4 mg/kg时，显著提高了生长育肥猪的背膘厚度和饲料利用率，但对平均日增重影响不显著。阮栋等^[19]试验结果表明，与对照组相比，饲粮添加维生素B₂显著提高了22~42日龄和43~63日龄试验鸡平均日增重，并显著降低了22~42日龄试验鸡料重比。本试验中，饲粮维生素B₂添加水平对冬毛期水貂末重和平均日增重影响不显著，但能降低料重比；当饲粮维生素B₂添加水平为20.0 mg/kg时料重比最低，与对照组相比降低了24.95%，与上述研究结果基本一致。但20.0 mg/kg组与其他各组组间差异不显著。由于与育成期相比，冬毛期水貂由以骨骼发育、器官发育和体增长为主转变为以毛皮生长发育为主，主要是毛皮的生长和脂肪的沉积，致使体增长缓慢^[20]。

3.2 饲粮维生素B₂添加水平对冬毛期水貂毛皮品质的影响

毛皮品质是决定毛皮动物养殖经济效益的主要因素，水貂主要的经济价值是生产优质毛皮，毛皮品质的好坏受品种、饲养环境、饲料营养等多因素的影响，毛皮品质与绒毛色泽、长度、平齐度和针毛长度等相关^[21]。郑琛^[22]研究发现，饲粮核黄素添加水平对生长獭兔毛皮面积影响显著，毛皮重量及毛皮面积都随着核黄素添加水平的增加而增加，12 mg/kg组显著高于其他各试验组；饲粮核黄素添加水平对毛皮厚度和被毛长度影响不显著。本试验中，各组水貂体长差异不显著，这与饲粮维生素B₂添加水平对冬毛期水貂体重影响变化趋势基本一致。通过对水貂针毛长和绒毛长的测量发现，当饲粮维生素B₂添加水平为20.0 mg/kg时，绒毛长度达到最大，与对照组相比增加了1.49 mm；针毛长比对照组增加了2.22 mm。水貂在毛皮品质评分方面各组无显著差异。

3.3 饲粮维生素B₂添加水平对冬毛期水貂营养物质消化率的影响

营养物质消化率能直观体现动物体对饲料消化利用程度。蛋白质不仅是生物体的组成者，还是体内重要生命活动的承担者，冬毛期水貂处于毛皮生长发育时期，蛋白质作为其主要组成成分，是毛皮品质的主要影响因素之一^[23]。唐淑珍^[24]试验得出，高温季节饲粮添加核黄素能显著提高肉仔鸡对饲粮中蛋白质和脂肪的消化率，其中21.6 mg/kg添加组(实际饲粮核黄素含量为26.4 mg/kg)显著提高了肉仔鸡对蛋白质和脂肪的利用率，分别比对照组提高了11.24%和18.32%。本试验条件下，维生素B₂添加组水貂的干物质消化率、蛋白质消化率和脂肪消化率相比于对照组均有所提高，20.0 mg/kg维生素B₂添加组蛋白质消化率相比于对照组提高了3.31%，40 mg/kg维生素B₂添加组脂肪消化率相比对照组提高了0.56%，这与水貂针毛、绒毛生长趋势基本一致，间接说明了核黄素通过影响营养物质的消化率来影响冬毛期水貂针毛、绒毛的生长。唐静^[25]研究发现，核黄素缺乏会导致黄素酶类蛋白合成受阻，致使代谢关键蛋白表达量下调，通过GO聚类分析显示差异蛋白主要富集在脂肪酸β氧化和线粒体呼吸链电子传递过程，机体脂肪酸β氧化受损，脂肪分解减少；呼吸链电子传递过程受损，导致ATP生成不足，影响动物生长。

3.4 饲粮维生素B₂添加水平对冬毛期水貂氮代谢的影响

氮代谢指标反映动物体对饲粮中蛋白质消化利用的情况，机体摄入含氮饲粮，在体内分解利用和吸收，一部分氮用于合成相关蛋白质储存在体内；一部分则未被吸收利用，转变成粪氮、尿氮排出体外，维持体内氮代谢的平衡^[26]。本试验中，虽然饲粮维生素B₂添加水平对尿氮和氮沉积无显著影响，但当饲粮维生素B₂添加水平为20.0 mg/kg时，尿氮排出量最低，相比于对照组减少了16.46%；饲粮维生素B₂添加水平为40.0 mg/kg时氮沉积达到最大值，相比对照组增加了35.52%。氮沉积的提高说明了维生素B₂的添加使得蛋白质的合成利用速率大于降解排出速率。饲粮维生素B₂添加水平对净蛋白质利用率和蛋白质生物学价值有显著影响，这可能是由于核黄素的活性成分FAD参与脂肪酸的β氧化生成的还原型黄素腺嘌呤二核苷酸(FADH₂)随后进入呼吸链中生成供机体代谢所需要的ATP，ATP随即水解成二磷酸腺苷(ADP)，此时受到细胞能荷影响的氨基酸氧化脱氨过程中谷氨酸脱氢酶活性大大提高而加速氨基酸的氧化降解^[27]，进而提高饲粮蛋白质利用效率，具体机制还有待于进一步探索研究。

4 结论

综合各项指标，从提高生长性能和减少饲料成本角度考虑，冬毛生长期饲粮中维生素B₂适宜添加水平为2.5 mg/kg(饲粮中维生素B₂实际含量为5.49 mg/kg)。