2. 沈阳博睿农牧科技有限公司, 新民 110300
2. Shenyang Wisediligence Agri-Tech. Co., Ltd., Xinmin 110300, China
甘油三酯(TG)是动物机体脂肪的主要存在形式,其中脂肪酸占TG总量的94%~96%,脂肪酸是影响脂肪代谢和沉积的重要成分。猪在育肥期间沉积的大量脂肪是从饲粮中摄取的。因此,饲粮脂肪酸的种类和组成比例对猪肉脂肪酸组成、风味和食用价值具有重要作用[1]。因n-6不饱和脂肪酸(PUFA)和n-3 PUFA经消化道吸收后不经氧化可以直接合成胴体脂肪[2],并与人类的心血管疾病和炎性疾病密切相关而成为研究最多的PUFA。n-6 PUFA中的亚油酸(C18:2n-6,linoleic acid,LA)和n-3 PUFA中的α-亚麻酸(C18:3n-3,α-linolenic acid,ALA)是机体不能合成的脂肪酸,需要从食物中摄入,因此被称为必需脂肪酸[3]。在人类膳食和猪饲粮需求中均把LA和ALA作为营养研究的重点。必需脂肪酸比例对人类健康非常重要,按照中国居民营养膳食脂肪酸参考摄入量,健康人群摄入的LA和ALA占摄入能量的百分比分别为4.0%和0.6%,即LA/ALA约为6.6:1.0[4]。过多的LA会抑制ALA的分解和吸收。而我国居民摄入LA/ALA在(25~45):1。主要原因是人类膳食中绿色食叶蔬菜如卷心菜等ALA含量极低,再加上人们的日常饮食所用植物油的烹调方式(如加热、爆炒等)往往会破坏ALA,膳食LA/ALA偏高,必需脂肪酸构成比严重失衡,不能满足人体的需要。猪肉作为人类膳食中PUFA的主要来源,成为提高ALA、降低机体LA/ALA的重要途径。然而猪常用的饲料原料(如玉米和豆油等)均含较多的LA和较少的ALA,也不能满足猪的需求。因此,在猪饲粮中添加富含ALA的植物油来降低饲粮LA/ALA,可改善机体的各项生理功能和猪肉的脂肪酸组成。本试验旨在研究饲粮不同LA/ALA对育肥猪生长性能、脂类代谢和免疫功能的影响,为植物功能性油脂饲料的合理应用以及生产健康猪肉提供依据。
1 材料与方法 1.1 试验动物与植物油选择日龄和胎次相近、体重70 kg左右的杜×长×大三元杂交猪90头,由辽宁省昌图国美农牧集团绿色养殖有限公司猪场提供。亚麻籽油购自锡林郭勒盟红井源油脂有限责任公司,玉米油购于沈阳金龙鱼有限公司。
1.2 试验设计试验采用单因素完全随机设计。将90头肥育猪随机分为6组,每组5个重复,每个重复3头猪。第1组饲喂含2.0%玉米油的饲粮,第2组饲喂含1.9%玉米油和0.1%亚麻籽油的饲粮,第3组饲喂含1.7%玉米油和0.3%亚麻籽油的饲粮,第4组饲喂含1.5%玉米油和0.5%亚麻籽油的饲粮,第5组饲喂含1.2%玉米油和0.8%亚麻籽油的饲粮,第6组饲喂含1.5%玉米油和0.5%亚麻籽油的饲粮。6个组饲粮LA/ALA分别为32:1、22:1、13:1、9:1、6:1和3:1。试验的预试期为7 d,正试期为38 d。试验期间每组试验猪自由采食,自由饮水,并保持圈舍清洁,定期消毒,防疫等其他管理按猪场常规程序进行。试验饲粮参照NRC(1998)猪营养需要和中国瘦肉型猪饲养标准,并结合猪场实际情况配制。试验饲粮组成及营养水平见表 1。试验饲粮脂肪酸组成见表 2。
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表 1 试验饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) |
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表 2 试验饲粮脂肪酸组成 Table 2 Fatty acid composition of experimental diets |
试验开始与结束时08:00空腹称重,记录育肥猪初始体重、终末体重和试验猪每天的采食量,计算各试验组平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。
1.4 血清生化指标测定试验结束后,每个重复选择试验猪1头,共30头,空腹12 h后采血10 mL,于1 500 r/min下离心10 min,分离血清放于-20 ℃保存,用于血清指标测定。
总胆固醇(TC)和TG含量均采用酶法测定,试剂盒购自北京北化康泰临床试剂有限公司。高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)含量采用磷钨酸-镁沉淀法测定,低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)含量采用聚乙烯硫酸沉淀法测定,试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司。
免疫球蛋白M(IgM)含量采用免疫比浊法测定,340 nm波长比色,试剂盒购自浙江伊利康生物技术有限公司。白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-6(IL-6)含量采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法试剂盒测定,溶菌酶活性采用比浊法测定,试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
1.5 数据分析与处理数据采用SPSS 22.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)。若F检验差异显著, 则进行Duncan氏多重比较,P<0.05为差异显著性检验水平。结果用平均值(mean)和均值标准误(SEM)表示。
2 结果与分析 2.1 饲粮不同LA/ALA对肥育猪生长性能的影响由表 3可知,13:1组ADG最大,显著高于22:1和6:1组(P<0.05),但与9:1和32:1组间差异不显著(P>0.05);同时32:1、22:1、13:1和9:1组ADFI均显著高于6:1和3:1组(P<0.05);从F/G结果看,当LA/ALA较小时,即为6:1和3:1时,育肥猪的F/G显著低于其他组(P<0.05)。
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表 3 饲粮不同LA/ALA对育肥猪生长性能的影响 Table 3 Effects of dietary different LA/ALA on growth performance of finishing pigs |
由表 4可知,随着LA/ALA的降低,血清TG含量显著降低(P<0.05),其中3:1组TG含量最低,分别比32:1、13:1组降低16.9%(P<0.05)和19.2%(P<0.05)。各组间血清TC、HDL-C和LDL-C含量差异不显著(P>0.05),但HDL-C/LDL-C随着LA/ALA的降低而提高,且3:1组的HDL-C/LDL-C显著高于其他各组(P<0.05)。
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表 4 饲粮不同LA/ALA对育肥猪血脂水平的影响 Table 4 Effects of dietary different LA/ALA on serum lipid level of finishing pigs |
由表 5可知,随着饲粮LA/ALA的降低,血清IgM含量呈升高趋势,且IgM含量在3:1组最高,分别比32:1、22:1和13:1组高28%(P<0.05)、23%(P<0.05)和23%(P<0.05)。各组间血清IL-2和IL-6含量差异不显著(P>0.05)。随着饲粮LA/ALA的降低,溶菌酶活性呈先升高后降低的趋势,13:1组溶菌酶活性最高,且显著高于32:1、9:1、6:1和3:1组(P<0.05)。
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表 5 饲粮不同LA/ALA对育肥猪血清免疫指标的影响 Table 5 Effects of dietary different LA/ALA on serum immunity indices of finishing pigs |
饲粮脂肪酸平衡,特别是PUFA的平衡,可以影响猪的生长、免疫和肉质等。与鱼油相比,植物油(玉米油、豆油、花生油、菜籽油等)因其是物美价廉的PUFA来源而被广泛用于商品猪的饲粮中[5]。LA是主要的n-6 PUFA,含有18个碳原子和2个双键,在豆油、葵花籽油和红花油等植物油中含量较高。同时LA也是最早被认识的功能性脂肪酸,具有降低血液胆固醇含量、预防血管疾病的作用[6]。而ALA是主要的n-3 PUFA,含18个碳原子和3个双键,在亚麻籽和紫苏籽中含量较高。ALA具有降低血脂和胆固醇含量、增强免疫力、抗氧化等功效,使机体更加健康,有利于动物生产性能的提高[7]。本试验中,育肥猪饲粮选用富含ALA的亚麻籽油等量替代富含LA的玉米油配置了不同的比例的LA/ALA。结果表明,随着ALA添加量的升高,即LA/ALA降低,猪的ADG、ADFI和F/G均有显著的改善。这一试验结果与Duan等[8]和Li等[9]研究结果相似,即用亚麻籽油替代大豆油提高饲粮ALA含量后,改善了猪的ADG和饲料效率,且LA/ALA为1:1~5:1的改善效果优于LA/ALA(10:1)高的组。然而,饲粮中ALA对动物生产性能影响结果并不一致。De Tonnac等[10]认为,ALA对动物生产性能没有影响;而Tilton等[11]研究结果表明,饲粮LA/ALA升高会抑制生产性能的发挥。这些结果不一致的原因可能与饲粮成分(如饲粮脂肪酸的组成)、补充n-3 PUFA的时间以及猪的生理阶段有关[12]。
脂肪的代谢和沉积受脂肪酸转运的影响,且与脂蛋白胆固醇密切相关。高密度脂蛋白(HDL)是逆向转运的内源性胆固醇酯,可携带外周组织游离胆固醇形成HDL-C,将其转运到肝脏后再经胆汁排出,从而减少胆固醇含量。因此,HDL-C是抗动脉粥样硬化的胆固醇,可减少患冠状动脉心脏病的危险。血清TC中大约有25%是以HDL的形式转送的。而LDL-C是由肝脏转运胆固醇到周围组织和细胞的主要运输形式,它是造成血管栓塞的主要原因。同时,LDL-C含量的升高会增加患冠状动脉心脏病的危险性,是导致动脉粥样硬化的危险因素[6]。亚麻籽油富含人体必需脂肪酸ALA,ALA含量占总油脂的53%左右,是机体中形成长链n-3 PUFA[如二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)]的前体脂肪酸。玉米油富含LA,且LA含量占总油脂的36%~64%,适量的LA可以降低血液中胆固醇的含量。LA与ALA在体内是相互竞争和相互抑制的关系。如果LA摄入过量,会导致ALA无法吸收。研究认为,ALA可有效降低TG和TC的含量以及脂肪的沉积,降低高脂患者血脂水平,使血液中TC、TG含量分别下降68.2%和81.5%,并对患者无不良影响,且ALA的活性是LA的163倍[13]。体外试验也显示,ALA能减少细胞内TG的含量,而LA的作用则相反。本试验结果显示,降低LA/ALA,血清中的TG含量也显著降低,而HDL-C/LDL-C显著升高,说明ALA提高了胆固醇中HDL-C的比例,促进了胆固醇的清除并降低了TG含量。Liu等[1]也取得了类似的结果,即饲粮LA/ALA为5:1组猪的血清TG、TC和LDL-C含量显著低于LA/ALA为10:1和15:1的组。ALA降低血脂的原因可能是由于ALA促进了脂蛋白脂酶(LPL)和卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)的活性,抑制了肝脏内皮细胞脂酶(HEL)从而升高了血清HDL-C的含量[14]。同时,饲粮ALA的增加促进了体内DHA和EPA合成,而DHA在体内的主要作用是降低TC含量,EPA则降低TG含量。
免疫分子(如免疫球蛋白、白细胞介素等)是免疫系统的重要组成部分,它们在宿主防御中起着不同的作用。IL-2被称为T细胞生长因子(TCGF),它刺激许多受体,如铁蛋白受体(TfR)和胰岛素受体(IR),并产生IL-6等炎性细胞因子。IL-6含量与心血管疾病相关,因为IL-6刺激C-反应蛋白的产生,C-反应蛋白已被证明是心血管疾病较LDL-C更强的预测因子[15]。血清IgM是猪血清中主要的免疫球蛋白,其在血清中含量的升高被认为与猪的先天性反应有关[16-17]。炎性细胞因子基因的表达是在细胞核转录因子-κB(NF-κB)的调节下启动的,而NF-κB的活性受到过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的抑制,抑制NF-κB则可减轻炎症反应[18]。LA和ALA对细胞因子的影响相反。ALA能够促进PPARγ的活化,并下调NF-κB的活性,从而抑制肿瘤坏死因子、IL-1、IL-6等炎性细胞因子的转录及分泌[19],产生抗炎作用。而LA能降低前列腺素E2(PGE2)的生成量,促进IL-2的合成与T细胞的增殖,而具有促炎作用。因此保持ALA和LA之间的平衡有利于机体的免疫调控。本试验结果表明,IgM含量随着饲粮LA/ALA降低而升高,而LA/ALA对血清IL-2和IL-6含量没有显著影响。宋志刚等[20]和麻丽坤等[21]在饲喂扬州鹅和蛋鸡时发现,较低LA/ALA能显著提高机体的IgM含量。Duan等[8]报道了以3.0%亚麻籽油为ALA来源替代等量大豆油,使LA/ALA为1:1时可以抑制IL-6、IL-1β、TNF-α的表达。溶菌酶是血液中的一种黏液溶解酶,它能主动溶解细菌,在抵御细菌感染中发挥重要作用[22]。本试验中,随着LA/ALA降低,血清溶菌酶活性呈先上升后下降的趋势, 中等水平LA/ALA(13:1)溶菌酶活性最高。谭青等[23]在研究PUFA对大菱鲆幼鱼影响中也取得类似的变化趋势,即溶菌酶活性呈先上升后下降的趋势,LA/ALA为1.88:1.00时的溶菌酶活性最高,LA/ALA为2.65:1.00时最低。上述试验结果表明,ALA过高和过低都会对溶菌酶的免疫功能产生抑制作用,同时不同物种对LA和ALA的需要量不同,具有种属特异性。
饲粮中必需脂肪酸的组成可以影响猪的生长性能、免疫性能,但更大的意义在于它对猪肉肉质的影响,如猪肉中脂肪酸的组成、猪肉抗氧化性能、风味等。饲粮中适宜必需脂肪酸比例的确定,还要结合肉质指标综合分析。饲粮中LA/ALA对猪肉质的影响以及LA/ALA最适比例还需要进一步研究。
4 结论① 降低饲粮LA/ALA可提高育肥猪的ADG和ADFI,降低F/G,改善生长性能。
② 降低饲粮LA/ALA显著降低了育肥猪血清中TG含量,提高了HDL-C/LDL-C,降低了血脂水平。
③ 降低饲粮LA/ALA显著提高了血清中IgM含量和溶菌酶活性,增强了育肥猪的免疫功能。
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