生长发育快、胃肠道机能发育不完全、内源酶分泌不足、神经调节机能不健全、断奶应激、病原微生物侵入等因素共同导致幼兔发生腹泻^[1]。在生产中，对生长肉兔腹泻多以抗菌药物调控为主，随着抗生素的使用，诸多弊端逐渐显露。2020年我国将全面禁止饲粮中使用药物添加剂，因此绿色抗生素替代品的研究成为必然。饲料酸化剂作为一种无残留、无抗药性、无毒副作用的绿色饲料添加剂，逐渐被越来越多的研究者所关注。柠檬酸作为有机酸化剂中第一大酸，溶解性好，添加效果优于其他有机酸，是目前生产中应用较多的酸化剂^[2]。国内外关于柠檬酸在幼畜生产中的应用已有较多的研究报道，仔猪饲粮中添加柠檬酸可以改善仔猪生长性能，降低腹泻发生率，促进营养物质消化吸收；肉禽研究中发现添加柠檬酸对肉质的影响并不一致；而柠檬酸在生长幼兔方面的研究相对较少，一些研究表明，复合酸化剂可以显著降低幼兔腹泻、死亡率，但在饲料转化率、养分利用等方面结果并不一致，其在生长幼兔生产中的作用机制有待进一步的研究。因此，探讨柠檬酸在幼兔生产中的合理利用方式，进一步研究其对生长肉兔健康的作用机制，筛选出适宜的添加水平是十分必要的。而本试验旨在研究柠檬酸对生长肉兔生长性能、养分表观消化率、血清抗氧化指标及肉品质的影响，为幼兔生产中酸化剂的选择提供科学参考。

1 材料与方法 1.1 试验材料

试验所用柠檬酸购自日照某生化有限公司，为食品级一水柠檬酸。试验兔为300只体重相近的35日龄断奶伊拉商品兔。

1.2 试验饲粮

在测定玉米、豆粕、麸皮、葵花皮等原料的营养价值后，参考谷子林等^[3]推荐的家兔饲养营养推荐值配制基础饲粮，在预混料中分别添加不同水平的柠檬酸(0.5%、1.0%和1.5%)，试验饲粮均制成颗粒饲粮，储存在通风干燥避光处备用。基础饲粮组成及营养水平见表 1。

1.3 试验设计与饲养管理

选择300只体况良好、体重相近的35日龄断奶伊拉商品兔，按性别和体重随机分为5组，每组60个重复，每个重复1只兔。对照1组为空白对照组，对照2组为抗生素对照组(恩拉霉素20 g/t+金霉素300g/t)，3个试验组分别饲喂含0.5%(Ⅰ组)、1.0%(Ⅱ组)、1.5%(Ⅲ组)柠檬酸的试验饲粮。预试期5 d，正试期22 d。试验前对兔舍、笼具进行彻底清洗，消毒。按照兔场常规程序对试验兔进行免疫，兔舍自然采光、通风。试验兔单笼饲养，每日08：00、17:00进行饲喂，自由饮水。

1.4 测定指标 1.4.1 生长性能

试验开始后，每周同一时间早晨空腹对试验兔称重，统计饲喂量，用于计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。监测、记录每只试验兔的腹泻、死亡情况，用于计算腹泻率、死亡率。

1.4.2 养分表观消化率

在试验结束前6天采用全收粪法测定养分表观消化率，每组随机抽取8只试验兔，进行消化试验，连续采集粪样4 d，记录采食量、粪量。将4 d粪样混合均匀，烘干、粉碎、过筛，制得风干样，保存待测。饲粮和粪样中各养分含量的测定参照张丽英^[5]的方法进行。

养分表观消化率计算公式如下：

1.4.3 屠宰性能及肉品质

饲养试验结束后，每组抽取8只接近平均体重的试验兔禁食12 h进行屠宰，记录宰前活体重、胴体重及各内脏器官重。试验兔剥皮后，在腕关节处去除前肢，在跗关节处去除后肢，并移走肠道及内容物(保留头、胸腔器官、肝脏和肾脏及肾脏周围脂肪)称重，即为半净膛重，半净膛重去除头及所有内脏器官(保留肾脏及肾脏周围脂肪)即为全净膛重^[6]，分别计算半净膛率和全净膛率。宰后剥离两侧全部背腰最长肌，鲜样24 h内送至北京金牛伟业科技开发有限公司测定肉品质各项指标。

pH：于宰后24 h采用PHSJ-3F型pH计从肉样的上、中、下3个部分各取1个点测量pH，将探头插入肌肉3 mm读数，最后求平均值。

肉色：采用CR-10型色差仪，从肉样的上、中、下3个部分各取1个点分别测量亮度(L^*)、红度(a^*)、黄度(b^*)值，取平均值。

蒸煮损失：将新鲜肉样称重记为m₁(g)后，放入封口袋密封，袋口向上放入80 ℃恒温水浴锅内蒸煮1 h后，取出肉样，吊挂于室内，冷却30 min后，将袋内液体排出，取出肉样称重记为m₂(g)。

剪切力：将肉样装入封口袋密封放入80 ℃恒温水浴锅内水浴2 h后，取出肉样用流水冷却30 min，将肉样顺肌肉纤维方向截取长宽厚分别为1.5、1.0和0.5 cm的肉样，用TMS-Pro型质构仪测量剪切力。

肌肉化学成分：先对肉样进行冻干，粉碎后参照张丽英^[5]的方法进行粗蛋白质、粗灰分、粗脂肪含量的测定。

1.4.4 血清抗氧化指标

在正式试验第21天进行耳静脉采血10 mL，分离血清装于编号的Eppendorf管内，按照试剂盒(上海酶联生物科技有限公司)规定的方法检测血清抗氧化指标。

1.5 数据统计与分析

用Excel 2007对数据进行整理，采用SPSS 19.0中的one-way ANOVA进行单因素方差分析，Duncan氏法进行多重比较。腹泻率、死亡率采用卡方检验。除腹泻率、死亡率外，试验结果表示为平均值±标准差。P＜0.05为差异显著。

2 结果与分析 2.1 柠檬酸对生长肉兔生长性能的影响

由表 2可知，Ⅰ组平均日增重显著高于对照1组(P＜0.05)，与对照2组差异不显著(P＞0.05)；对照2组平均日增重显著高于对照1组(P＜0.05)，Ⅱ组、Ⅲ组平均日增重与Ⅰ组、2个对照组差异均不显著(P＞0.05)。Ⅰ组料重比和对照2组差异不显著(P＞0.05)，均显著低于对照1组，各试验组间料重比差异不显著(P＞0.05)。添加柠檬酸对试验兔平均日采食量影响不显著(P＞0.05)。经卡方分析，腹泻率和死亡率各组间未出现显著差异(P＞0.05)，腹泻率以Ⅱ组、Ⅲ组最低；死亡率以对照2组和Ⅲ组最低。

2.2 柠檬酸对生长肉兔养分表观消化率的影响

从表 3可知，对照2组各养分表观消化率均显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)高于对照1组及各试验组。添加柠檬酸后，各试验组粗蛋白质、粗灰分表观消化率极显著高于对照1组(P＜0.01)。各试验组能量、干物质、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维表观消化率均与对照1组差异不显著(P＞0.05)。

2.3 柠檬酸对生长肉兔屠宰性能和肉品质的影响

由表 4可知，与2个对照组相比，添加柠檬酸对屠宰性能及肉品质均没有显著影响(P＞0.05)。

由表 5可知，添加柠檬酸对肌肉化学成分没有显著影响(P＞0.05)。

2.4 柠檬酸对生长肉兔血清抗氧化指标的影响

由表 6可知，添加柠檬酸对血清总抗氧化能力的影响不显著(P＞0.05)。Ⅲ组血清超氧化物歧化酶活性显著高于对照1组、对照2组(P＜0.05)，Ⅰ组、Ⅱ组与2个对照组之间差异不显著(P＞0.05)，各试验组间血清超氧化物歧化酶活性差异不显著(P＞0.05)。

3 讨论 3.1 柠檬酸对生长肉兔的生长性能的影响

肉兔断奶后消化器官发育不完善，植物性饲料的摄入一定程度上破坏了肠道结构，使消化能力降低，同时植物性饲料对断奶幼兔胃中pH有一定的中和作用，消化酶活性受到影响，无法达到成年兔的水平^[7]。柠檬酸可以通过降低胃肠道pH、提高养分消化率、调控肠道微生态平衡来促进动物健康，提高生长性能^[8]。本试验中，添加0.5%柠檬酸较空白对照组显著提高了试验兔平均日增重，降低了料重比，与抗生素对照组差异不显著。朱克华^[7]通过给断奶幼兔提供酸化饮水得出与本试验一致的结论，添加含有复合酸化剂的饮水可以显著提高试验兔日增重，降低饲料转化率，显著降低试验兔腹泻率和死亡率。Debi等^[9]研究发现，新西兰白兔饲粮中添加2%柠檬酸可以显著提高体重，但是添加柠檬酸对饲料转化率没有显著影响；添加柠檬酸显著增加试验兔采食量，这与本试验结果不一致，这可能与试验饲粮的组成、试验原料的选择有关，Debi等^[9]的试验饲粮主要以玉米、豆粕及米粉为主。乔栋等^[10]通过试验得出，添加酸化剂能显著提高仔猪日增重，降低仔猪腹泻发生率。王晓青^[11]研究发现，饲粮中添加适量柠檬酸，可以提高断奶仔猪增重速度。林映才等^[12]研究发现，在断奶仔猪饲粮中添加有机酸化剂可使仔猪腹泻减少、生长加快，并且改善饲料转化率。Morrow等^[13]通过在断奶仔猪饲粮中添加含有柠檬酸的复合有机酸化剂发现，添加有机酸化剂可以极显著增加断奶仔猪的日增重，但是对料重比影响不显著。Valchev^[14]研究发现，生长猪饲喂有机酸化剂可以显著提高平均日增重及饲料报酬。Lynch等^[15]研究发现，在感染沙门氏菌的生长猪饲粮中添加甲酸和柠檬酸复合酸化剂，可以显著提高生长猪平均日增重。Upadhaya等^[16]研究发现，在断奶仔猪饲粮中添加有机酸化剂进行6周的试验，有机酸化剂可以显著提高断奶仔猪第6周平均日增重。这些研究总体表明，饲粮中添加有机酸化剂可以改善幼畜的生长性能，与本试验结果一致。

3.2 柠檬酸对生长肉兔养分表观消化率的影响

本试验结果得出，与空白对照组相比，添加柠檬酸极显著增加了粗蛋白质、粗灰分表观消化率。通常认为，柠檬酸可增强体内的酸性环境，有利于动物胃肠道无活性的胃蛋白酶原转化成有活性的胃蛋白酶，从而促进各种养分，特别是粗蛋白质的消化和吸收^[17]。许多学者通过研究也得出，酸化剂可以提高畜禽生长性能，提高饲料粗蛋白质的消化率。同时也有报道发现，柠檬酸促进养分消化吸收的作用更多地体现在其对矿物质利用的影响上^[18]。Debi等^[9]研究发现，添加柠檬酸显著提高了家兔干物质、粗蛋白质的消化率，但对粗纤维消化率影响不显著。王杰等^[19]研究发现，添加包含柠檬酸的复合酸化剂，可以提高仔猪粗蛋白质表观消化率。潘孝青等^[1]通过研究表明，在断奶仔兔饲粮中使用一定量的苹果酸，可以降低腹泻频率和死亡率，从而得出有机酸化剂有助于维系肠道微生物菌群正常生理环境，从而促进营养物质消化吸收。上述研究均与本研究结果一致。Upadhaya等^[16]通过在断奶仔猪饲粮中添加有机酸化剂进行6周试验发现，与未添加有机酸化剂相比，添加0.2%的有机酸化剂可以显著提高试验猪第3~6周的能量表观消化率。本试验中，添加柠檬酸对能量表观消化率没有显著影响，与上述试验结果不一致，这可能与Upadhaya等^[16]在有机酸化剂复合物中添加了中链脂肪酸有关。本试验同时得出，与空白对照组相比，添加柠檬酸对干物质、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维表观消化率没有显著影响。柠檬酸对不同养分消化率的作用不尽一致，其作用机制还有待于进一步研究。

3.3 柠檬酸对生长肉兔屠宰性能及肉品质的影响

屠宰率是衡量肉兔屠宰性能和肉品质的一项主要指标，相关文献研究结果并未发现柠檬酸对畜禽屠宰率有显著影响，本试验中添加柠檬酸对半净膛率和全净膛率的影响均不显著。肉品质作为肉兔的主要生产性能指标，反映了肉的消费性能和潜在价值，兔肉物理特性决定着人们对兔肉的喜好程度，兔肉化学成分则与兔肉营养价值关系密切^[20]。本研究结果表明，饲粮中添加柠檬酸对幼兔肉品质影响不显著。李建平等^[21]研究发现，饲粮中添加五味子与柠檬酸，对肌肉pH及肉色没有显著差异，这与本试验结果一致。酸化剂对肉品质的影响在肉兔上研究的较少，更多地集中在对肉禽的研究上，但报道结果不尽一致。马红艳^[22]研究发现，添加复合酸对肉仔鸡胸肌肉中干物质、粗蛋白质含量影响不显著。黄冠庆等^[23]通过研究发现，在肉仔鸡饲粮中添加酸化剂和益生素复合添加剂，对屠宰性能、肌肉pH、肉色及剪切力等无显著影响。这些研究与本试验结果基本一致。也有研究表明，添加酸化剂对肉质有一定的影响。陶强强等^[24]研究发现，添加复合酸化剂对鸡肉品质有显著的改善。孔令武等^[25]研究发现，肉鹅饲粮中添加复合酸化剂对扬州鹅屠宰性能无显著影响，但可显著改善腿肌率、胸肌率。这些研究表明，酸化剂对屠宰性能及肉品质的影响并不一致，这可能与动物品种、酸化剂的种类、剂量及配伍有关，其原因有待于进一步研究分析。

3.4 柠檬酸对生长肉兔血清抗氧化指标的影响

动物机体防御体系的抗氧化能力的强弱对动物健康有十分重要的影响，超氧化物歧化酶和总抗氧化能力是反映机体抗氧化能力强弱的重要指标^[7]。超氧化物歧化酶是一类广泛存在于机体各种组织的金属酶类，其功能为催化超氧离子自由基的歧化反应，过多的自由基如不能及时清除，会严重危害动物健康，因此超氧化物歧化酶是动物体内重要的抗氧化酶^[26]。总抗氧化能力则是反映机体总抗氧化水平的一个指标。本试验中，添加柠檬酸对血清总抗氧化能力影响不显著，但添加柠檬酸有增加血清中超氧化物歧化酶活性的趋势，当柠檬酸添加水平达到1.5%时，血清中超氧化物歧化酶活性显著高于空白及抗生素对照组，其原因可能是柠檬酸易于与铜、锌等抗氧化酶活性中心金属离子形成螯合物，促进抗氧化酶活性提高；另外，柠檬酸通过降低胃肠道pH，抑制有害微生物繁殖，提高幼兔对养分的消化利用能力，从而提高机体抗氧化能力。朱克华^[7]研究发现，酸化饮水可以提高断奶幼兔抗氧化能力。李建平等^[27]在断奶仔猪饲粮中添加1.5%柠檬酸，显著提高了血清超氧化物歧化酶活性和血清总抗氧化能力，有助于提高断奶仔猪的抗应激能力。由此可见，添加柠檬酸可以改善肉兔血清抗氧化能力，但对肉兔组织抗氧化能力的影响还有待进一步研究。

4 结论

饲粮中添加1.5%柠檬酸可以显著提高生长肉兔平均日增重，降低料重比，并能降低腹泻率、死亡率；此外，饲粮中添加柠檬酸可以提高饲粮粗蛋白质表观消化率，提高血清中超氧化物歧化酶活性，同时又对肉兔肉品质无不良影响。