饲粮添加25-羟基维生素D<sub>3</sub>、植物精油和苯甲酸对蛋鸡生产性能、蛋品质和肠道形态的影响

引用本文

弓浩杰, 丁雪梅, 白世平, 曾秋凤, 张克英, 申攀, 王建萍. 饲粮添加25-羟基维生素D₃、植物精油和苯甲酸对蛋鸡生产性能、蛋品质和肠道形态的影响[J]. 动物营养学报, 2020, 32(6): 2638-2649.

GONG Haojie, DING Xuemei, BAI Shiping, ZENG Qiufeng, ZHANG Keying, SHEN Pan, WANG Jianping. Effects of 25-Hydroxyvitamin D₃, Plant Essential Oil and Benzoic Acid on Performance, Egg Quality and Intestinal Morphology of Laying Hens[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2020, 32(6): 2638-2649.

饲粮添加25-羟基维生素D₃、植物精油和苯甲酸对蛋鸡生产性能、蛋品质和肠道形态的影响

弓浩杰 , 丁雪梅 , 白世平 , 曾秋凤 , 张克英 , 申攀 , 王建萍

四川农业大学动物营养研究所, 教育部动物抗病营养重点实验室, 动物抗病营养与饲料农业农村部重点实验室, 动物抗病营养四川省重点实验室, 成都 611130

收稿日期: 2019-12-13

基金项目: 国家十三五重点研发计划（2017YFD0500500）；国家自然科学基金项目（31872792）；四川省科技厅国际合作项目（2019YFH0062）；四川省蛋鸡产业链项目（2018NZ0009，2014NZ0002，2014NZ0043，2013NZ0054）

作者简介: 弓浩杰(1997-), 男, 山西太原人, 硕士研究生, 动物营养与饲料科学专业。E-mail:ghjie2904@163.com.

通信作者: 王建萍, 副教授, 硕士生导师, E-mail:wangjianping@sicau.edu.cn.

摘要: 本试验旨在研究饲粮添加25-羟基维生素D₃（HyD）、植物精油和苯甲酸对蛋鸡生产性能、蛋品质和肠道形态的影响。试验采用单因子试验设计，选取45周龄1 200只产蛋后期罗曼粉壳蛋鸡，随机分为5个组，每组10个重复，每个重复24只鸡。对照组饲喂玉米-豆粕型基础饲粮，试验组分别饲喂在基础饲粮中添加0.069 mg/kg HyD（HYD组）、0.069 mg/kg HyD+150 mg/kg植物精油（PEO组）、1 000 mg/kg苯甲酸（BA1组）和2 000 mg/kg苯甲酸（BA2组）的饲粮。试验预试期4周，正试期16周。结果表明：1）与对照组相比，PEO组、BA1组和BA2组蛋鸡第1~4周平均日采食量显著降低（P < 0.05），同时料蛋比也显著降低（P < 0.05）；BA2组蛋鸡第1~4周和第13~16周平均蛋重显著降低（P < 0.05）。2）与对照组相比，PEO组第4周蛋壳厚度显著提高（P < 0.05），试验组第8周蛋壳厚度均显著提高（P < 0.05），PEO组、BA1组和BA2组第16周蛋白高度和哈氏单位显著提高（P < 0.05）。3）与对照组相比，试验组鸡蛋破壳蛋率和暗斑蛋发生率降低。4）与对照组相比，HYD组、PEO组和BA1组蛋鸡十二指肠绒毛高度显著增加（P < 0.05），PEO组蛋鸡十二指肠绒毛高度/隐窝深度值显著增加（P < 0.05）；PEO组蛋鸡空肠绒毛高度显著高于对照组（P < 0.05）。5）与对照组相比，HYD组和PEO组蛋鸡胫骨强度显著提高（P < 0.05）。6）与对照组相比，HYD组和PEO组蛋鸡血清促卵泡素和钙含量显著增加（P < 0.05）。结果提示，蛋鸡饲粮中添加HyD或同时添加HyD和植物精油可以提高产蛋后期生产性能、蛋品质和胫骨质量并能改善肠道形态，而HyD、HyD+植物精油和低剂量的苯甲酸可以降低破壳蛋率和暗斑蛋的发生率，但短期（前4周）高剂量的苯甲酸会降低蛋鸡的采食量，从而影响蛋鸡产蛋性能。

关键词: 蛋鸡生产性能蛋品质肠道形态胫骨质量 25-羟基维生素D₃ 苯甲酸

Effects of 25-Hydroxyvitamin D₃, Plant Essential Oil and Benzoic Acid on Performance, Egg Quality and Intestinal Morphology of Laying Hens

GONG Haojie , DING Xuemei , BAI Shiping , ZENG Qiufeng , ZHANG Keying , SHEN Pan , WANG Jianping

Sichuan Key Laboratory of Animal Disease Resistance Nutrition, Key Laboratory of Animal Disease-Resistance Nutrition and Feed, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Key Laboratory of Animal Disease-Resistance Nutrition, Ministry of Education, Animal Nutrition Institute, Sichuan Agricultural University, Chengdu 611130, China

Corresponding author: WANG Jianping, associate professor, E-mail:wangjianping@sicau.edu.cn.

Abstract: The experiment was conducted to study the effects of 25-hydroxyvitamin D₃ (HyD), plant essential oil and benzoic acid on performance, egg quality and intestinal morphology of laying hens. Using a single-factor design, a total of 1 200 Lohmann Pink-eggshell layers during late-laying phase (45-week-old) were randomly allotted into 5 groups with 10 replicates for each group and 24 chickens for each replicate. Chicks in the control group were fed a corn-soybean meal basal diet, while those in the experimental groups were fed the basal diet supplemented with 0.069 mg/kg HyD (HYD group), 0.069 mg/kg HyD+150 mg/kg plant essential oil (PEO group), 1 000 mg/kg benzoic acid (BA1 group) and 2 000 mg/kg benzoic acid (BA2 group), respectively. The pre-trial period was 4 weeks and the trial period was 16 weeks. The results showed as follows: 1) compared with the control group, the average daily feed intake of laying hens from 1 to 4 weeks in PEO group, BA1 group and BA2 group was significantly decreased (P < 0.05), and the feed-to-egg ratio was also significantly decreased (P < 0.05). The average egg weight of laying hens from 1 to 4 weeks and 13 to 16 weeks in BA2 group was significantly decreased (P < 0.05). 2) Compared with the control group, the egg shell thickness in PEO group was significantly increased at week 4 (P < 0.05), the egg shell thickness in the experimental groups was significantly increased at week 8 (P < 0.05), and the albumen height and Haugh unit in PEO group, BA1 group and BA2 group were significantly increased at week 16 (P < 0.05). 3) Compared with the control group, the breaking egg rate and the incidence of translucent eggs in the experimental groups were decreased. 4) Compared with the control group, the villus height in duodenum of layers in HYD group, PEO group and BA1 group was significantly increased (P < 0.05), the villus height to crypt depth ratio in duodenum of layers in PEO group was significantly increased (P < 0.05), and the villus height in jejunum of layers in PEO group was significantly increased (P < 0.05). 5) Compared with the control group, the tibia strength of layers in HYD group and PEO group was significantly improved (P < 0.05). 6) Compared with the control group, the serum contents of follicle-stimulating hormone and calcium of layers in HYD group and PEO group were significantly increased (P < 0.05). The results indicate that dietary HyD or dietary HyD and plant essential oil can improve the performance, egg and tibia quality and intestinal morphology of laying hens during late laying period, while dietary HyD, HyD+plant essential oil and low dose of benzoic acid can reduce the breaking egg rate and the incidence of translucent eggs, but the high dose of benzoic acid can reduce the feed intake of laying hens in the first 4 weeks, thus affecting the egg production performance.

Key words: laying hens performance egg quality intestinal morphology tibia quality 25-hydroxyvitamin D₃ benzoic acid

我国是全世界最大的蛋鸡饲养、鸡蛋生产及消费大国，2019年我国蛋鸡的存栏量为11.50亿只，鸡蛋产量约为2 864万t。随着我国蛋鸡产业发展，为提高饲养效率，降低生产成本，集约化高密度饲养将成为养殖的主要方式。有研究表明，集约化高密度饲养会降低蛋鸡的生产性能和骨骼发育^[1-2]，同时易引起鸡群热应激，降低采食量，导致产蛋率降低^[3]。在集约化饲养方式下，来自高密度、高温、高产、饲料有毒有害物质等应激因素对蛋鸡生产性能和健康的影响，以及在产蛋后期钙沉积能力有限导致蛋壳变薄、易破损已成为了蛋鸡养殖中所面临的主要问题。

25-羟基维生素D₃(HyD)是维生素D₃的一种中间活性代谢产物，血液中的HyD是维持骨骼健康的重要因素^[4]。研究发现饲粮中添加HyD可以调节蛋鸡钙磷的吸收，促进其骨骼发育^[5]，提高蛋壳质量，降低破壳蛋率，提高其生产性能^[6]。苯甲酸是一种芳香族酸，存在于酸果蔓、肉桂和丁香中，广泛用作食品防腐剂^[7]，具有广谱抗菌的特性^[8]。有研究表明，有机酸具有调节肠道菌群结构、提高肠道消化酶活性的作用^[9]，饲粮中添加有机酸能够提高肉鸡的生长性能^[10-11]，但苯甲酸对蛋鸡生产性能和蛋品质的影响还不清楚。本试验所用植物精油主要成分是为百里香酚、香芩酚和胡椒碱。研究发现百里香酚可提高蛋鸡的产蛋率^[12-13]，并且植物精油作为促生长剂能够改善家禽的生产性能^[14-15]。此外，植物精油能够延缓鸡蛋的氧化^[16-17]，提高蛋品质和鸡蛋货架期，但饲粮中同时添加HyD和植物精油对蛋鸡的影响尚不清楚，有待进一步的研究。

为此，本试验通过在蛋鸡饲粮中添加HyD、植物精油和苯甲酸，研究其对蛋鸡生产性能、蛋品质和肠道形态的影响，为生产实践提供依据。

1 材料与方法 1.1 试验设计

试验采用单因子试验设计，选用1 200只45周龄产蛋后期罗曼粉壳蛋鸡，随机分为5个组，每组10个重复，每个重复24只鸡(6只/笼子，4个连续的笼子为1个重复)。试验开始前，先进行4周的预试验，预试期间蛋鸡饲喂玉米-豆粕型基础饲粮，调整使得各组间起始产蛋率一致。正试期16周。正试期间，对照组饲喂基础饲粮，试验组分别饲喂在基础饲粮中添加0.069 mg/kg HyD(HYD组)、0.069 mg/kg HyD+150 mg/kg植物精油(PEO组)、1 000 mg/kg苯甲酸(BA1组)和2 000 mg/kg苯甲酸(BA2组)的饲粮。基础饲粮根据NRC(1994)和我国《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004)配制，其组成及营养水平见表 1。

表 1 基础饲粮组成及其营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis)

%
项目Items	含量Content
原料Ingredients
玉米Corn	59.06
小麦麸Wheat bran	3.87
大豆油Soybean oil	1.50
豆粕Soybean meal (43% CP)	15.24
玉米蛋白粉Corn gluten meal (60% CP)	5.00
玉米干酒糟及其可溶物Corn DDGS	5.00
石粉(粒状) Limestone (granular)	6.10
石粉(粉状) Limestone (powder)	2.50
磷酸氢钙CaHPO₄	0.94
食盐NaCl	0.25
小苏打NaHCO₃	0.10
L-赖氨酸硫酸盐L-Lys·HCl	0.16
DL-蛋氨酸DL-Met	0.01
氯化胆碱Choline chloride	0.10
维生素预混料Vitamin premix¹⁾	0.02
矿物质预混料Mineral premix²⁾	0.15
合计Total	100.00
营养水平Nutrient levels³⁾
代谢能ME/(MJ/kg)	11.30
粗蛋白质CP	16.00
钙Ca	3.70
总磷TP	0.60
有效磷AP	0.36
可消化赖氨酸Digestible Lys	0.65
可消化蛋氨酸Digestible Met	0.33
可消化半胱氨酸Digestible Cys	0.23
1)维生素预混料为每千克饲粮提供Vitamin premix provided the following per kilogram of the diet：VA 9 950 IU，VB₁ 37.7 mg，VB₂ 12 mg，D-泛酸D-pantothenate 18.2 mg，VB₆ 7.55 mg，VB₁₂ 0.5 mg，VD₃ 5 000 IU，VE 70 IU，VK₃ 4.47 mg，生物素biotin 4 mg，VC 19.5 mg，烟酸nicotinic acid 70.35 mg。 2)矿物质预混料为每千克饲粮提供Mineral premix provided the following per kilogram of the diet：Cu (as copper sulfate) 9.6 mg，Fe (as ferrous sulfate) 64 mg，Mn (as manganese sulfate) 121.5 mg，Zn (as zinc sulfate) 57 mg，I (as potassium iodide) 0.60 mg，Se (as sodium selenite) 0.36 mg。 3)营养水平为计算值。Nutrient levels were calculated values.

表 1 基础饲粮组成及其营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis)

1.2 饲养管理

试验在四川绵阳圣迪乐村生态食品有限公司宏仁鸡场进行，饲养管理按常规饲养管理进行，每周进行严格消毒，室温保持在20~22 ℃，注意通风换气。每天记录产蛋率和蛋重，每周结算采食量。

1.3 测定指标与方法 1.3.1 生产性能

每天记录每个重复的蛋鸡产蛋率和蛋总重，每周统计1次采食量，计算产蛋率、平均蛋重、破壳蛋率和料蛋比。

1.3.2 蛋品质

分别于正试期第4、8、12和16周每组采集30枚鸡蛋(每个重复3枚鸡蛋)，共计150个鸡蛋测定鸡蛋品质(16：00点采集、19：00测定蛋品质)。蛋壳强度使用蛋壳强度测定仪(Robotmation Co., Ltd., Tokyo, 日本)测定；蛋壳颜色采用色差仪测定；蛋黄颜色、哈氏单位、蛋白高度采用蛋品质全自动测定仪(EMT-7300，日本)进行测定；使用游标卡尺测定蛋黄高度和蛋黄直径用以计算蛋黄指数(蛋黄指数=蛋黄高度/蛋黄直径)；另外，蛋壳厚度(钝端、尖端和赤道)使用蛋壳厚度测定仪进行测定(Robotmation Co., Ltd., Tokyo, 日本)；用分蛋器将蛋清和蛋黄分离，并对蛋黄重及蛋壳重进行测定。选择试验结束(第16周)的鸡蛋，储存10 d以后测定暗斑蛋发生率，评分标准见表 2。

表 2 暗斑蛋评分标准 Table 2 Grading standard for translucent eggs

1.3.3 骨骼质量

试验结束时每个重复选择接近平均体重的1只蛋鸡屠宰，采集左胫骨，去除肌肉和软骨，用质构仪(北京微讯超技仪器技术有限公司)测定胫骨强度以及胫骨灰分、钙和磷的含量。

1.3.4 肠道形态

试验结束时每个重复选择接近平均体重的1只蛋鸡屠宰，采集十二指肠、空肠和回肠中部肠段(1 cm×2 cm)，用数码摄像显微镜(BA400 Digital，麦克奥迪实业集团有限公司)观察切片，共测量10组数据，每组数据包括绒毛高度和隐窝深度，并计算绒毛长度/隐窝深度(V/C)值。

1.3.5 血清指标

试验结束时每个重复选择接近平均体重的3只蛋鸡采集蛋鸡血液，离心制备血清。然后使用全自动生化仪测定血清钙和磷含量。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒测定血清中雌二醇、促卵泡素、睾酮、抗缪勒管激素、皮质酮和孕酮含量。

1.4 数据处理

试验数据采用SAS 9.0软件GLM程序进行统计分析，采用Tukey检验比较不同组间的差异，结果用平均值和SEM表示，以P≤0.05为差异显著水平。

2 结果与分析 2.1 饲粮添加HyD、植物精油和苯甲酸对蛋鸡生产性能的影响

由表 3可知，与对照组相比，PEO组、BA1组和BA2组蛋鸡第1~4周平均日采食量显著降低(P < 0.05)，同时料蛋比也显著降低(P < 0.05)；试验组其他阶段平均日采食量和料蛋比与对照组相比无显著差异(P>0.05)；BA2组第1~4周和第13~16周平均蛋重显著低于对照组(P < 0.05)；此外，试验组第9~12周、第13~16周和第1~16周破壳蛋率显著低于对照组(P < 0.05)。

表 3 饲粮添加HyD、植物精油和苯甲酸对蛋鸡生产性能的影响 Table 3 Effects of HyD, essential oil and benzoic acid on performance of laying hens

项目 Items	产蛋率 Laying rate/%	平均蛋重 Average egg weight/g	平均日采食量 ADFI/ g	料蛋比 F/E/%	破壳蛋率 Breaking egg rate/%
第1~4周Weeks 1 to 4
对照组Control group	94.34	63.12^a	112.81^a	1.91^a	0.54
HYD组HYD group	94.12	63.29^a	111.36^ab	1.87^ab	0.97
PEO组PEO group	94.46	63.03^a	110.59^b	1.85^b	0.54
BA1组BA1 group	94.99	62.98^a	109.62^bc	1.84^b	0.72
BA2组BA2 group	94.11	62.13^b	108.29^c	1.84^b	0.59
SEM	0.73	0.28	0.89	0.02	0.16
P值P-value	0.75	< 0.01	< 0.01	0.04	0.06
第5~8周Weeks 5 to 8
对照组Control group	93.78	63.24	117.91^abc	1.97	0.73
HYD组HYD group	93.37	62.94	114.37^c	1.94	0.71
PEO组PEO group	93.58	63.58	118.86^ab	1.99	0.62
BA1组BA1 group	94.44	63.99	121.04^a	2.01	0.75
BA2组BA2 group	93.37	63.22	115.60^bc	1.97	0.46
SEM	0.78	0.39	2.07	0.03	0.15
P值P-value	0.64	0.10	0.02	0.24	0.34
第9~12周Weeks 9 to 12
对照组Control group	93.61	64.12^ab	117.73^ab	1.93	2.63^a
HYD组HYD group	91.77	63.81^b	115.63^b	1.98	0.81^b
PEO组PEO group	93.86	64.44^ab	115.95^ab	1.92	0.65^b
BA1组BA1 group	94.04	64.68^a	119.15^a	1.95	0.81^b
BA2组BA2 group	93.03	63.80^b	114.59^b	1.93	0.56^b
SEM	0.99	0.32	1.55	0.03	0.17
P值P-value	0.47	0.04	0.04	0.27	0.03
第13~16周Weeks 13 to 16
对照组Control group	92.36	64.92^a	120.42	2.01	2.71^a
HYD组HYD group	91.33	64.63^ab	117.28	1.99	0.73^b
PEO组PEO group	92.55	65.10^a	120.21	2.02	0.61^b
BA1组BA1 group	93.56	64.96^a	120.90	2.01	0.72^b
BA2组BA2 group	93.91	63.99^b	118.18	1.99	0.49^b
SEM	0.94	0.35	2.10	0.04	0.17
P值P-value	0.06	0.03	0.36	0.95	0.05
第1~16周Weeks 1 to 16
对照组Control group	93.37	63.86^ab	116.75	1.95	1.63^a
HYD组HYD group	92.21	63.60^ab	114.59	1.94	0.76^b
PEO组PEO group	93.47	63.97^a	116.30	1.95	0.63^b
BA1组BA1 group	94.03	64.16^a	117.64	1.94	0.81^b
BA2组BA2 group	93.60	63.33^b	114.14	1.92	0.72^b
SEM	0.70	0.28	1.33	0.02	0.10
P值P-value	0.14	0.04	0.06	0.79	0.05
同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P < 0.05)。下表同。 Values in the same column with different letter superscripts mean significant different (P < 0.05). The same as below.

表 3 饲粮添加HyD、植物精油和苯甲酸对蛋鸡生产性能的影响 Table 3 Effects of HyD, essential oil and benzoic acid on performance of laying hens

2.2 饲粮添加HyD、植物精油和苯甲酸对蛋鸡蛋品质的影响 2.2.1 常规蛋品质

由表 4可知，与对照组相比，PEO组第4周蛋壳厚度显著提高(P < 0.05)，试验组第8周蛋壳厚度均显著提高(P < 0.05)。与对照组相比，HYD组和BA1组第4周蛋壳颜色亮度(L^*)值显著降低(P < 0.05)，黄度(b^*)值显著提高(P < 0.05)；HYD组、PEO组和BA2组第16周蛋壳颜色L^*值显著降低(P < 0.05)，HYD组第16周蛋壳颜色b^*值显著提高(P < 0.05)；试验组各阶段蛋壳颜色红度(b^*)值与对照组相比无显著差异(P>0.05)。与对照组相比，PEO组和BA1组第4周蛋形指数显著降低(P < 0.05)，PEO组、BA1组和BA2组第16周蛋白高度和哈氏单位显著提高(P < 0.05)。与对照组相比，试验组第4周蛋黄颜色均显著提高(P < 0.05)；但在第8周时，仅PEO组的蛋黄颜色较对照组显著提高(P < 0.05)。此外，各组蛋壳强度、平均蛋重、蛋黄重、蛋黄指数和蛋壳重差异均不显著(P>0.05)。

表 4 饲粮添加HyD、植物精油和苯甲酸对蛋鸡常规蛋品质的影响 Table 4 Effects of HyD, essential oil and benzoic acid on common egg quality of laying hens

项目 Items	蛋壳颜色 Eggshell color			蛋形指数 Egg shape index	蛋壳强度 Eggshell strength/ (kg/cm³)	平均蛋重 Average egg weight/g	蛋白高度 Albumen height/ mm	蛋黄颜色 Yolk color	哈氏单位 Haugh unit	蛋黄指数 Yolk index	蛋黄重 Yolk weight/g	蛋壳重 Eggshell weight/g	蛋壳厚度 Eggshell thickness/ (×10^-2 mm)
项目 Items	亮度 L^*	红度 a^*	黄度 b^*	蛋形指数 Egg shape index	蛋壳强度 Eggshell strength/ (kg/cm³)	平均蛋重 Average egg weight/g	蛋白高度 Albumen height/ mm	蛋黄颜色 Yolk color	哈氏单位 Haugh unit	蛋黄指数 Yolk index	蛋黄重 Yolk weight/g	蛋壳重 Eggshell weight/g	蛋壳厚度 Eggshell thickness/ (×10^-2 mm)
第4周Week 4
对照组Control group	81.81^a	5.97^ab	18.21^b	1.33^a	4.25	62.97	6.98	12.93^b	82.45	0.52	17.91	6.70	40.47^bc
HYD组HYD group	80.32^b	6.98^a	20.08^a	1.31^ab	4.53	61.58	7.23	13.65^a	84.23	0.52	17.20	6.68	41.56^ab
PEO组PEO group	82.02^a	5.89^b	17.86^b	1.30^b	4.63	62.51	7.57	13.36^a	86.19	0.52	17.85	6.68	41.91^a
BA1组BA1 group	80.47^b	6.98^a	19.69^a	1.30^b	4.35	63.12	6.98	13.54^a	82.10	0.51	17.85	6.70	40.50^bc
BA2组BA2 group	81.97^a	6.03^ab	18.01^b	1.33^a	4.25	63.32	6.94	13.46^a	82.08	0.51	17.87	6.82	39.97^c
SEM	0.64	0.47	0.71	0.01	0.14	0.95	0.24	0.17	1.63	0.01	0.35	0.12	0.64
P值P-value	< 0.01	0.03	< 0.01	< 0.01	0.42	0.37	0.07	< 0.01	0.06	0.50	0.22	0.71	0.01
第8周Week 8
对照组Control group	80.88	6.33	16.67	1.34	4.31	64.76	6.67	13.28^b	79.88	0.53	18.20	7.10	33.97^b
HYD组HYD group	80.65	6.05	17.67	1.32	4.61	62.63	6.57	13.22^b	79.70	0.52	18.12	7.01	37.08^a
PEO组PEO group	80.70	6.13	17.44	1.33	4.67	64.70	6.54	13.63^a	78.66	0.53	19.06	7.01	38.60^a
BA1组BA1 group	80.16	6.33	17.87	1.33	4.36	63.67	6.72	13.49^ab	80.44	0.52	18.40	6.95	36.68^a
BA2组BA2 group	80.11	6.39	18.16	1.33	4.31	63.57	6.44	13.46^ab	77.65	0.53	18.37	7.01	35.10^a
SEM	0.77	0.58	0.87	0.01	0.13	1.07	0.24	0.15	1.72	0.01	0.37	0.13	0.61
P值P-value	0.81	0.97	0.49	0.65	0.94	0.25	0.78	0.05	0.49	0.53	0.10	0.87	< 0.01
第12周Week 12
对照组Control group	82.21	5.45	16.11	1.34	4.08	63.59	6.94	13.11	81.86	0.53	18.50	6.76	35.25
HYD组HYD group	81.16	6.31	17.22	1.33	4.26	64.81	6.60	13.27	79.46	0.52	18.37	6.98	35.89
PEO组PEO group	81.57	5.84	16.68	1.34	4.04	64.04	6.39	13.38	79.06	0.52	18.48	6.74	35.12
BA1组BA1 group	81.97	5.37	15.99	1.34	4.20	63.97	6.24	13.63	77.14	0.52	18.41	7.02	36.38
BA2组BA2 group	82.66	5.45	15.80	1.33	4.09	62.69	6.34	13.47	78.12	0.52	17.98	6.84	35.40
SEM	0.72	0.53	0.84	0.01	0.12	1.00	0.22	0.18	1.53	0.01	0.37	0.13	0.65
P值P-value	0.28	0.36	0.43	0.91	0.35	0.33	0.51	0.06	0.33	0.51	0.62	0.12	0.28
第16周Week 16
对照组Control group	83.23^a	5.56	16.30^b	1.32	4.05	65.10	7.13^b	13.30	82.66^b	0.52	18.28	7.06	36.73
HYD组HYD group	82.25^b	6.02	17.46^a	1.33	4.11	64.88	7.08^b	13.27	82.37^b	0.52	17.81	7.18	37.63
PEO组PEO group	82.39^b	5.96	16.86^ab	1.32	4.06	65.85	8.02^a	13.46	87.89^a	0.52	18.52	7.24	37.41
BA1组BA1 group	82.92^ab	5.50	16.50^b	1.33	4.20	64.66	7.59^a	13.54	85.75^a	0.51	18.37	7.28	37.54
BA2组BA2 group	82.39^b	5.57	16.55^b	1.32	4.21	65.77	7.67^a	13.65	86.19^a	0.52	18.43	7.30	38.14
SEM	0.32	0.22	0.35	0.01	0.14	0.81	0.23	0.15	1.38	0.01	0.38	0.12	0.61
P值P-value	< 0.01	0.06	0.01	0.66	0.67	0.48	< 0.01	0.06	< 0.01	0.64	0.36	0.28	0.25

表 4 饲粮添加HyD、植物精油和苯甲酸对蛋鸡常规蛋品质的影响 Table 4 Effects of HyD, essential oil and benzoic acid on common egg quality of laying hens

2.2.2 暗斑蛋发生率

由表 5可知，与对照组相比，HYD组和PEO组暗斑蛋的平均分均降低(分值越低，代表暗斑蛋发生率越低)，4分和5分暗斑蛋的比例也降低。同样的结果也在苯甲酸处理中发现，BA1组和BA2组暗斑蛋的平均分均低于对照组，而且BA1组的2分、4分和5分和BA2组5分暗斑蛋的比例也低于对照组。

表 5 饲粮添加HyD、植物精油和苯甲酸对蛋鸡暗斑蛋发生率的影响 Table 5 Effects of HyD, essential oil and benzoic acid on the incidence of translucent eggs of laying hens

2.3 饲粮添加HyD、植物精油和苯甲酸对蛋鸡肠道形态的影响

由表 6可知，与对照组相比，HYD组、PEO组和BA1组蛋鸡十二指肠绒毛高度显著增加(P < 0.05)，HYD组和BA1组蛋鸡十二指肠隐窝深度显著增加(P < 0.05)，PEO组蛋鸡十二指肠V/C值显著增加(P < 0.05)。PEO组蛋鸡空肠绒毛高度显著高于对照组(P < 0.05)，其余空肠和回肠形态指标各组蛋鸡无显著差异(P>0.05)。

表 6 饲粮添加HyD、植物精油和苯甲酸对蛋鸡肠道形态的影响 Table 6 Effects of HyD, essential oil and benzoic acid on intestinal morphology of laying hens

项目 Items	十二指肠Duodenum			空肠Jejunum			回肠Ileum
项目 Items	绒毛高度 Villus height/μm	隐窝深度 Crypt depth/μm	绒毛高度/ 隐窝深度 V/C	绒毛高度 Villus height/μm	隐窝深度 Crypt depth/μm	绒毛高度/ 隐窝深度 V/C	绒毛高度 Villus height/μm	隐窝深度 Crypt depth/μm	绒毛高度/ 隐窝深度 V/C
对照组 Control group	756.81^c	141.46^b	5.44^b	1 142.71^bc	178.71	6.57	1 202.31	196.08	6.17
HYD组 HYD group	832.46^b	154.74^a	5.53^b	1 106.36^d	211.14	5.35	1 290.57	202.23	6.59
PEO组 PEO group	900.06^a	142.45^b	6.57^a	1 233.84^a	201.11	6.31	1 478.62	216.56	7.00
BA1组 BA1 group	892.46^a	162.83^a	5.58^b	1 125.68^c	221.53	5.41	1 173.56	204.90	5.90
BA2组 BA2 group	704.44^d	141.84^b	5.18^b	1 191.25^ab	164.11	7.43	1 343.21	233.30	5.93
SEM	25.80	5.49	0.20	29.75	73.37	0.82	249.03	51.09	0.87
P值 P-value	< 0.01	< 0.01	< 0.01	< 0.01	0.32	0.25	0.54	0.67	0.17

表 6 饲粮添加HyD、植物精油和苯甲酸对蛋鸡肠道形态的影响 Table 6 Effects of HyD, essential oil and benzoic acid on intestinal morphology of laying hens

2.4 饲粮添加HyD、植物精油和苯甲酸对蛋鸡胫骨质量的影响

由表 7可知，与对照组相比，HYD组和PEO组蛋鸡胫骨强度显著提高(P < 0.05)，但对胫骨灰分、钙和磷含量没有显著差异(P>0.05)。此外，与对照组相比，饲粮添加苯甲酸对蛋鸡胫骨质量均没有显著影响(P>0.05)。

表 7 饲粮添加HyD、植物精油和苯甲酸对蛋鸡胫骨质量的影响 Table 7 Effects of HyD, essential oil and benzoic acid on tibia quality of laying hens

2.5 饲粮添加HyD、植物精油和苯甲酸对蛋鸡血清指标的影响

由表 8可知，与对照组相比，HYD组和PEO组蛋鸡血清促卵泡素含量显著增加(P < 0.05)，血清钙含量也显著增加(P < 0.05)；而BA1组和BA2组蛋鸡血清促卵泡素和钙含量无显著差异(P>0.05)。各组蛋鸡血清雌二醇、睾酮、抗缪勒管激素、皮质酮、孕酮和磷含量无显著差异(P>0.05)。

表 8 饲粮添加HyD、植物精油和苯甲酸对蛋鸡血清指标的影响 Table 8 Effects of HyD, essential oil and benzoic acid on serum indices of laying hens

3 讨论

HyD对家禽生产性能影响的报道较多，但并不统一。Keshavarz^[18-19]报道在蛋鸡饲粮中用HyD替代维生素D₃未能改善蛋鸡的生产性能，但贾洪阁等^[20]研究发现在饲粮中添加34.5 μg/kg HyD和1 380 IU/kg维生素D₃时，能有效提高肉鸡的生长性能和骨骼质量。梁彦明等^[21]研究发现在肉鸡饮水中添加18 μg/kg HyD可以提高肉鸡采食量，并显著提高饲料转化率，这可能与基础饲粮中HyD和维生素D₃的比例有关。本试验基础饲粮中维生素D₃的含量为5 000 IU/kg，根据NRC(1994)和我国《蛋鸡饲养标准》，这已经高于蛋鸡正常生长的维生素D₃需要量，导致额外添加HyD对蛋鸡生产性能没有显著影响。植物精油是芳香植物的高度浓缩提取物，其成分和比例不同对畜禽的影响也不同。王光富等^[22]研究表明饲粮中添加植物精油对21~35周龄蛋鸡生产性能无显著影响，Bölükbaşi等^[23]也发现百里香精油对蛋鸡的料蛋比无显著影响，但本试验发现PEO组蛋鸡第1~4周的平均日采食量和料蛋比显著降低。Józefiak等^[24-25]研究表明，饲粮中添加0.25%的苯甲酸对肉鸡生产性能没有显著影响，而且添加0.50%和0.75%苯甲酸抑制了肉鸡的生长。Amaechi等^[26]研究表明添加1.2%苯甲酸显著提高了肉鸡的生长性能。陈杰等^[27]研究发现，饲粮中添加1.5 g/kg酸化剂能显著降低蛋鸡料蛋比。本试验结果表明，与对照组相比，饲粮添加1 000 mg/kg苯甲酸显著降低了蛋鸡第1~4周平均日采食量和料蛋比；而饲粮添加2 000 mg/kg苯甲酸不仅显著降低了蛋鸡第1~4周平均日采食量和料蛋比，而且还降低了平均蛋重。研究结果不尽一致的原因可能是由于品种、生理阶段和饲粮等因素的差异。

蛋壳质量是影响鸡蛋运输和储存的重要因素，本试验发现饲粮添加HyD能显著增加蛋壳厚度。Kim等^[28]研究发现，HyD可以增加蛋壳的厚度和强度；McLoughlin等^[29]研究也显示饲粮中添加HyD能提高72周龄蛋鸡的蛋壳强度和厚度；而Keshavarz^[19]的研究结果表明饲粮中用添加HyD替代维生素D₃对蛋鸡的蛋壳质量没有影响。蛋鸡在形成蛋壳的过程中，约70%的钙源于饲粮，其余的钙源于骨骼中。蛋鸡的胫骨质量能够反映蛋鸡的生产性能和蛋品质^[30]。本试验结果显示，饲粮添加HyD和HyD+植物精油能够显著提高蛋鸡的胫骨强度，但饲粮中添加苯甲酸对蛋鸡胫骨质量没有显著影响。S ′ wiatkiewicz等^[31]研究表明饲粮中用HyD代替80%和100%维生素D₃时，会显著提高肉鸡的胫骨强度；韩进诚等^[32]也研究表明HyD提高了42日龄肉鸡胫骨质量和长度。这说明HyD对增强蛋鸡胫骨强度有积极作用。除此之外，本试验还发现饲粮添加HyD提高了蛋壳的颜色(降低L^*值，提高b^*值)，降低了暗斑蛋的发生率，其具体原因还不清楚。鉴于蛋壳颜色与蛋鸡机体健康状态和遭受应激密切相关^[33]，人和鼠上的研究表明HyD具有提高机体免疫功能的作用^[34]，说明HyD可能通过缓解蛋鸡应激，从而提高蛋壳的颜色。本试验发现，饲粮同时添加HyD和植物精油增加了蛋壳厚度，也降低了暗斑蛋的发生率，并且提高了蛋白高度和哈氏单位。植物精油可以促进家禽肠道对矿物质尤其是钙离子的吸收，利于蛋品质的提升。Bozkurt等^[35]研究发现植物精油混合物能够缓解蛋鸡对高温的应激并且提高蛋壳质量；张安等^[36]也研究表明饲粮中添加225 mg/kg精油混合物显著提高蛋壳比例并能够改善蛋白品质。这说明饲粮中添加植物精油利于蛋品质的提升，这可能与植物精油可以促进家禽肠道对矿物质尤其是钙离子的吸收。除此之外，植物精油也会影响输卵管腺体分泌的浓蛋白的含量以及成分。王文杰等^[37]研究发现，木醋酸对蛋形指数没有显著影响；赵旭等^[38]研究表明，饮水中添加有机酸对鸡蛋的蛋形指数、蛋白高度、哈氏单位、蛋壳比例和蛋壳强度均无显著影响。本研究发现，与对照组相比，BA1组第4周蛋形指数显著降低，BA1组和BA2组第16周蛋白高度和哈氏单位均显著提高，这与上述前人研究结果不一致，原因可能是有机酸的种类不同、添加形式不同、添加水平不同都会对蛋鸡蛋品质造成影响。目前关于苯甲酸对蛋品质的报道较少，有待进一步研究。

家禽的营养吸收与肠道绒毛形态密切相关，肠道绒毛高度越高，隐窝深度越小，V/C值越大，说明吸收营养物质的能力越强^[39]。Chou等^[40]研究发现饲粮添加HyD增加了肉鸡十二指肠和空肠的绒毛高度，本试验表明饲粮添加HyD显著增加了蛋鸡十二指肠的绒毛高度，十二指肠的V/C值也有增加的趋势，这与上述前人的研究结果一致。这说明HyD可以改善十二指肠肠道的形态，利于营养物质吸收。植物精油能够刺激肠道分泌内源消化液维并且持肠道上皮细胞结构^[41]，Yang等^[42]研究发现饲粮中添加肉桂精油对肉鸡十二指肠、空肠和回肠高度没有显著影响，但显著降低了十二指肠隐窝深度。本试验结果表明，饲粮添加HyD+植物精油显著增加蛋鸡十二指肠绒毛高度并且显著提高了V/C值。这说明植物精油有利于十二指肠的消化吸收功能。有机酸对家禽肠道的影响在肉鸡上研究较多，宋凡春^[43]研究发现饲粮添加0.25%的苯甲酸对肉鸡肠道形态没有显著影响，而添加0.50%的苯甲酸显著降低了小肠绒毛高度；Giannenas等^[44]研究表明，饲粮中添加0.3%苯甲酸对火鸡肠道形态无显著影响；黄灵杰等^[45]研究表明苯甲酸能够提高肉鸡空肠绒毛高度和V/C值。结果不一致的原因可能与动物品种、动物的生理阶段、饲养管理、苯甲酸添加形态和苯甲酸添加的水平有关。本试验结果表明，与对照组相比，BA1组蛋鸡十二指肠绒毛高度显著提高，BA1组和BA2组蛋鸡空肠和回肠形态均无显著差异，但BA2组蛋鸡十二指肠绒毛高度却显著降低。这说明适量的苯甲酸有利于蛋鸡改善肠道形态，促进其对营养物质的吸收，但苯甲酸添加过量会对肠道造成负面影响。

通过小肠黏膜吸收的维生素D₃和在皮肤合成的维生素D₃都要进入血液，维生素D₃在肝脏中转化成HyD也会进入血液。饲粮添加HyD通过调节钙和磷的吸收参与机体免疫调节，影响血清中的钙磷水平和骨骼的生长发育，对家禽的生长和繁殖具有重要意义^[5]。本试验结果表明，饲粮添加HyD和植物精油显著提高蛋鸡血清促卵泡素和钙含量，而贾洪阁等^[20]研究表明不同水平的HyD对血清钙、磷含量没有显著影响。研究结果不同可能与饲粮中维生素D₃和HyD的比例不同有关。另外，血清钙含量较高可能也是HyD提高蛋壳品质的原因。

4 结论

本试验结果表明，饲粮添加HyD及同时添加HyD和植物精油可以提高产蛋后期蛋鸡生产性能、蛋品质和胫骨质量，并能改善蛋鸡肠道形态，而饲粮添加苯甲酸、HyD及同时添加HyD和植物精油均可以降低破壳蛋率和暗斑蛋的发生率，但短时间(前4周)高剂量的苯甲酸则由于会降低蛋鸡的采食量，从而会导致蛋鸡的产蛋性能(蛋重)的降低。

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