热应激是畜牧业生产中常见的现象^[1]。热应激条件下，动物的生长、生产及健康均会受到不同程度的影响^[2-3]，引起绵羊采食量减少、日增重降低、动物基础代谢升高、机体的免疫能力减弱、生长性能下降等^[4]。近年来，集约化养羊业迅速发展，高密度养殖更易受热应激影响。此外，热应激还可通过降低动物的采食量和营养物质吸收率来改变机体的代谢水平^[5]。目前有关热应激在反刍动物中的研究多集中于其对行为、生理生化指标及瘤胃发育等方面的影响^[6-9]，缺乏饲料利用效率、生长及屠宰性能等方面的基础数据。

α-硫辛酸(α-lipoic acid，LA)是由Reed等^[10]从猪肝脏中分离得到的物质。因其具有的多种生理功能，在医学界和畜牧界得到广泛关注，成为近几十年科学研究的热点^[11]。多年来，国内外学者对LA的功能进行了大量研究表明，LA能够降低人或动物的采食量，平衡能量代谢，抑制肥胖症的发生。同时LA作为“万能抗氧化剂”能够降低由自由基带来的氧化损伤，减少动物的氧化应激^[12]。在畜牧业中，LA可作为饲料添加剂使用，对动物生产有明显的改善作用。对肉鸡的研究表明，分别给生长初期、快速生长期与生长全期3个阶段的肉鸡饲喂500 mg/kg LA，可以显著提高个体平均日采食量与增重率，对快速生长期肉鸡的促生长效果尤为突出^[13]。在奶牛干乳后期饲粮中补充5 g/(头·d)的LA可提高产奶量，改善血清氧化状态，降低丙二醛的含量^[14]。

酵母铬(YC)是以酵母菌作为载体，在一定的工艺条件下与无机铬培养基进行培养，促使无机铬被同化到有机生物大分子上，将生物活性及吸收率低的无机铬转化为更有效的有机铬的发酵产品，同时降低铬的毒性，使其被动物体更高效、安全地吸收利用。酵母有很高的营养价值，特别是含有较多蛋白质、维生素、矿物质及一些营养活性物质等，是较好的营养补充剂，其中的铬离子可促进胰岛素的分泌，发挥其调节葡萄糖代谢的功能^[15]，缓解抗热应激条件下动物体内葡萄糖的不足，增强育肥绵羊的免疫功能并提高抗应激能力^[16]。目前的研究较多的集中于禽类、牛和生长育肥猪，研究结果比较一致，在羊上的应用研究报道相对不多，结果也不尽一致。LA和YC的作用机理不同，二者配合使用的效果未见报道。因此，本试验旨在探讨LA、YC的添加剂量和添加方式对热应激绵羊生长性能和血浆生化指标的影响，为探索其作为饲料添加剂的应用价值提供理论依据, 也为优化饲粮的使用方法提供参考。

1 材料与方法 1.1 试验材料

LA由河南某有限公司提供，纯度99%。YC为河南某有限公司提供，铬含量0.002 25%，蛋白质含量47.6%，水分含量4.2%，粗灰分含量6.4%。

1.2 试验设计及动物

试验于2018年7月8日至2018年8月26日在河南省洛阳龙须坡农牧有限公司养殖基地进行。选择5~6月龄、体重相近、健康状况良好的杜湖杂交(杜泊♀×湖羊)绵羊28只，随机分成4组，分别为对照组(CTL组，饲喂基础饲粮)、LA组(基础饲粮中添加600 mg/kg LA)、YC组(基础饲粮中添加0.5 mg/kg YC)、混合组(MIX组，基础饲粮中添加600 mg/kg LA和0.5 mg/kg YC)，每组7只。预试期5 d，正试期45 d。

1.3 试验饲粮及饲养管理

饲养试验前对圈舍进行统一打扫并进行消毒，对羊只进行统一驱虫。各组分圈饲喂，参照NRC(2007)^[17]配制基础饲粮，其组成及营养水平见表 1。每天饲喂2次(07:00、16:30)，饲喂前清理料槽内的剩料，控制剩料量在3%~5%，记录每天的喂料量及剩料量。试验羊可以自由运动、保证充足的饮水。饲喂期间2周称重1次，每天早(07：00)、中(12:00)、晚(18:00)3次测量记录羊舍温湿度，其平均值为当天温湿度。

1.4 热应激的判断与评价

热应激程度用温湿度指数(THI)来衡量。每天记录温度和相对湿度，计算THI，以此来判断动物的热应激程度。计算公式如下：

式中：T为温度；RH为相对湿度。

1.5 生长性能测定

预试期后3 d，在每天早上(06:00)空腹状态下称重，平均值作为初始体重，正试期每隔2周称量1次体重，直至试验结束，结束当天称重为终末体重，用于计算平均日增重。

1.6 消化代谢试验

在试验的第3周，每组挑选5只体况接近、健康状况良好的羊放入特制的消化代谢笼(专利号：ZL200920314804)内，进行消化代谢试验。适应期3~4 d，饲粮与原试验组饲粮保持一致，记录每天的采食量及剩料量，使剩料量控制在5%以内，用于确定最佳给料量，适应期结束后，利用特制的集粪盘、集尿盘收集全部粪、尿样，称量后按10%采集粪、尿样品，每天采集2次(10:00、16：00)，密封保存(-20 ℃冰箱内)，该试验持续10 d。试验结束后羊称重后放入原试验组。采集的粪样混匀后，按照四分法取500 g左右；尿样融化混匀后取500 mL左右带回实验室，用于检测。

从带回的样品中(饲粮样、粪样)取适量样品(300 g左右)，称重后放入托盘内。置于65 ℃烘箱内烘48 h，进行称重，计算风干基础物质含量。将样品粉碎，过40目筛，放入自封袋内保存，测定样品中的能量、氮、钙、磷含量等指标。粪、尿样解冻后采用同样处理方式测定相同指标。

氮含量：采用凯氏定氮法^[18]测定(SKD-2000全自动凯氏定氮仪，上海海能仪器有限公司)。

总能:饲粮、粪样中总能采用氧弹式测热法^[19]测定。准确称取1.000 0 g样品，使用微机全自动量热仪(型号ZDHW-6000E，鹤壁市华诺电子科技有限公司)进行测定。尿中总能测定先取4张定量滤纸称重，放入坩埚中，测定4张定量滤纸的发热量(重复3次)，计算平均发热量；再取4张定量滤纸称重，放入坩埚中，精确称取尿样1.000 0 g，将尿样吸附在坩埚中的定量滤纸称上，在65 ℃烘箱中烘干，将坩埚连同烘干的滤纸置于微机全自动量热仪中进行测定。

钙含量:饲粮、粪样中磷含量采用乙二胺四乙酸二钠络合物滴定法^[18]进行测定。尿中磷含量采用乙二胺四乙酸二钠络合物滴定法(湿法消解)^[18]进行测定。

磷含量:饲粮、粪样中磷含量采用钼黄比色法^[18]进行测定。尿样中磷含量采用钼黄比色法(湿法消解)^[20]进行测定。

各种营养物质的消化率和沉积率计算公式如下：

1.7 血浆生化指标测定

屠宰试验当天早晨空腹进行颈静脉采血，用真空采血管采血5 mL, 缓慢翻转采血管几次，使抗凝剂(肝素钠)与血液充分混匀，血液置于4 ℃保温箱内静置1 h，血液凝固后用离心机离心(1 500 r/min离心15 min)，分离血浆，置于EP管，-20 ℃保存。全自动生化分析仪(Olympus AU640)检测血浆中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性及总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLOB)、尿素(UREA)、甘油三酯(TG)、葡萄糖(GLU)、胆固醇(CHOL)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)含量。

1.8 屠宰性能测定

试验结束后，试验羊禁食24 h，禁水12 h，称重(宰前活重)，屠宰。

胴体重：屠宰后去掉头、蹄、尾、内脏(保留肾脏和板油的重量)后剩下的部分。

1.9 数据统计分析

所测数据用Excel 2019进行初步整理，用SPSS 22.0进行统计分析。组间差异用单因素方差分析(one-way ANOVA)进行分析，当方差分析差异显著时(P < 0.05)，再用Duncan氏法进行多重比较，P < 0.05为差异显著，0.05≤P < 0.10为有显著差异趋势，结果以平均值±标准误表示。

2 结果与分析 2.1 热应激情况

从图 1可以看出，在整个试验过程中的大部分时间THI均大于72(最低74，最高85)，表明试验羊处于热应激状态。

2.2 LA和YC对热应激绵羊生长性能的影响

由表 2可以看出，各组试验羊的初始体重比较接近，各组间差异不显著(P＞0.05)。试验组终末体重、增重、平均日增重与CTL组相比均无显著差异(P＞0.05)，试验组各组之间无显著差异(P＞0.05)，LA、MIX组增重和平均日增重高于CTL组，但差异不显著(P＞0.05)。试验结束时，LA、YC、MIX组终末体重较CTL组分别增加了2.78%、5.06%、3.15%，但差异不显著(P＞0.05)。YC组增重和平均日增重与CTL组相比有所下降，但差异不显著(P＞0.05)。各试验组的平均日采食量与CTL组相比有所增加，但均无显著差异(P＞0.05)。

2.3 LA和YC对热应激绵羊营养物质消化利用的影响

由表 3可以看出，试验组与CTL组相比，各组之间能量、氮、钙、磷等与消化利用相关的指标均差异不显著(P>0.05)。

2.4 LA和YC对热应激绵羊血浆生化指标的影响

由表 4可以看出，试验组血浆中TP含量与CTL组相比有所降低，LA、YC组显著低于CTL组(P＜0.05)。试验组血浆中CHOL含量与CTL组相比有所降低，LA组显著低于CTL组(P＜0.05)，各试验组间差异不显著(P＞0.05)。试验组血浆LDL含量与CTL组相比有所降低，LA、YC组显著低于CTL组(P＜0.05)，MIX组显著低于LA组(P＜0.05)，其他各组差异不显著(P＞0.05)。与CTL组相比，血浆ALT活性各试验组有降低趋势(0.05＜P＜0.10)，其他各项指标(AST、ALB活性，GLOB、UREA、GLU、TG、HDL含量及A/G)均差异不显著(P＞0.05)。

2.5 LA和YC对热应激绵羊屠宰性能的影响

由表 5可以看出，试验组宰前活重、大网膜重、肾周脂肪重、脾脏重、屠宰率与CTL组之间差异不显著(P＞0.05)，各试验组之间差异不显著(P＞0.05)。宰前活重各组基本相近，LA、YC组与CTL组相比有所增加，MIX组与CTL组相比有所下降，但差异不显著(P>0.05)。YC组胴体重显著高于LA、CTL和MIX组(P＜0.05)。各试验组间屠宰率差异不显著(P>0.05)。

3 讨论 3.1 LA和YC对热应激绵羊生长性能的影响

高温应激严重地影响着畜禽的生长发育、生产、繁殖及肉品质等，不仅使畜牧业产生有较大的经济损失，而且近年来也已被认为是制约畜牧业发展的主要环境因子之一^[20]。缓解热应激是从业者需要面对和解决的问题，发现和使用功能性饲料添加剂是重要的措施，其中YC是较早报道的添加剂之一。铬对生长性能和胴体品质的影响可以归因于其对机体葡萄糖、脂肪和蛋白质代谢所具有的潜在的调节机制^[21]。作为胰岛素的协同因子，铬主要通过影响胰岛素敏感性而改变胴体性状^[22]。铬的吸收效率与动物的年龄、生理状况和饲粮成分等有关，更与铬的存在形式有关^[23]。大量研究表明，在动物饲粮中补充YC，促进动物生长，提高生产性能^[24]。王刚等^[25]在热应激肉仔鸡饲粮中添加2.0~10.0 mg/kg YC显著提高了肉仔鸡日增重。呙于明等^[26]试验表明，补充YC显著提高了14 d高温应激肉仔鸡的体重。但Van De Ligt等^[27]和Mostafa-Tehrani等^[28]则认为饲粮中添加铬对动物的生长性能无显著影响。目前关于铬对生长性能的试验结果差异可能是由于饲粮中铬含量和动物需要量的不同而引起的^[29]。YC本身富含营养，除提供蛋白质、糖类、有机铬等营养物质外，还有一定的抗氧化作用^[30]，对肝脏有一定的帮助。此外，酵母可以在一定程度上调节体内的酸碱度，保证机体酸碱平衡，能够增强动物的免疫力。本试验在饲粮中添加0.5 mg/kg YC与CTL组相比增重降低了3.94%，说明饲粮中添加YC对热应激绵羊的生长性能的效果不佳，具体原因还有待进一步进行研究。有研究表明，各种饲料成分在混合饲粮中可相互作用，产生不同的组合效应，在不同程度上影响动物的生长性能。在本试验中，MIX组绵羊平均日增重较CTL组增加了15.26%，尽管差异不显著，却有较大的提高。由此也说明YC与其他添加剂配合使用比单一使用效果好，具体原因还有待进一步研究。目前在畜禽饲粮中补铬对畜禽生产影响的报道差异较大，其原因可能与动物种类、日龄、生长环境、剂量等因素有关^[31]。

LA则是近几年才引起关注的添加剂。周璐丽等^[32]研究发现，饲粮中添加600 mg/kg LA可显著提高海南黑山羊的日增重，对日均养分采食量无显著影响。研究发现，LA提高了肉鸡的体增重^[33-35]，对断奶仔猪采食量无显著影响^[36]，这可能与动物种类、LA添加水平的不同有关。此前有关硫辛酸在绵羊方面的应用报道较少。本试验中添加600 mg/kg LA，热应激绵羊的增重有所增加，这可能与其抗氧化作用有关。至于LA对绵羊生长性能影响不一致的原因，可能与LA采食量以及动物种类的差异与单位代谢体重之间的关系有关。

3.2 LA和YC对热应激绵羊营养物质消化利用的影响

动物处于应激状态时，机体通过葡萄糖代谢增加产物来抵抗应激带来的负面影响，而葡萄糖代谢增加势必会引起铬的动员量增加，且被动员的铬不能被重吸收，随尿液从体内排出，因此给热应激动物补饲一定量的铬能够增强动物的抗应激能力^[37]。有研究表明，当动物受到各种应激时，机体糖代谢显著改变，增加铬的动员并最终导致铬随尿排出，引起动物对铬的需要量增加^[38]。本试验中，YC组与CTL组相比摄入能有所增加，尿能也增加，说明饲粮中添加YC对绵羊的代谢有一定的改善作用。粪能排出是饲粮能量中损失的主要部分，与饲料原料组成及特性有很大关系，采食低质粗饲料时粪能约占总能的60%^[39]。许贵善等^[40]报道指出，摄入总能的增加会造成粪能排出量的相应增加。本试验中，随着摄入能的增加，粪能(YC、MIX组)与CTL组相比呈现下降趋势，尿能(YC、MIX组)呈现上升的趋势，因饲喂饲粮的不同而造成了能量的利用率降低的情况。经口摄入的铬大部分经粪便排出，被吸收的铬主要由尿液排出。尿中排出的铬量可反映铬的代谢与消耗。应激会使尿铬排出量增加。各种形式的应激都能增加铬消耗，使尿铬含量明显上升，应激的程度与排出的尿铬量相关^[41]。饲粮中添加YC也是作为弥补铬流失的一种方式。LA组的尿能低于CTL组，说明添加LA对机体的能量代谢有一定的改善作用，使得能量的利用效率有所提高。综合可消化能、沉积能能量沉积率几个方面的因素，YC组的可消化能、沉积能显著高于其他3组，能量沉积率也最高，说明饲粮中添加YC增强了机体能量分解代谢，减少了能量的沉积，说明YC对热应激绵羊机体能量分解代谢的作用优于其他组，具体机制有待进一步研究。MIX组的可消化能、沉积能、能量沉积率较CTL组也有所增加，具体是何种成分起到了主要作用，还有待进一步研究。

本试验中各饲粮的粗蛋白质含量相近, 且干物质采食量差异不显著, 所以造成了氮的摄入量无显著差异。在消化过程中，饲粮中一部分未消化的氮、内源分泌物与微生物氮和代谢产生的尿素随粪排出体外，剩余部分为沉积氮。沉积氮能准确、直接地反映机体对饲粮氮的利用程度，是比氮表观消化率更重要的指标^[42]。本试验中，各试验组沉积氮与CTL组相比有升高的趋势。当饲粮中的蛋白质满足机体需要后, 摄入氮越多, 排泄氮就越多, 多余的氮主要通过尿氮的形式排出体外^[43]。本试验中由于组间摄入氮没有显著差异, 所以粪氮、尿氮排泄量变化差异不大。

3.3 LA和YC对热应激绵羊代谢的影响

肝脏细胞的健康与否, 受损程度可通过血液的ALT、AST活性直接反映，当动物处于应激状态或肝脏细胞受损的情况下，血液中的转氨酶活性会因为ALT、AST释放入血清中而升高^[44]。本试验中试验组与CTL组相比，血浆ALT、AST活性呈现下降的趋势，这与王定发等^[44]对LA的研究结果一致。这说明饲粮中添加LA、YC及其混合添加能够减缓热应激对绵羊肝脏造成的损害。动物饮水和饲粮中添加铬能够通过增强胰岛素的活性，降低血清CHOL、LDL等的含量，增加血清HDL含量来调节脂质代谢，还能增强血清中脂质代谢相关酶的活性和细胞因子含量^[45]。机体蛋白质代谢和免疫功能主要是通过血液中的TP、GLB、ALB含量来反映。本试验中试验组与CTL组相比，血浆TP含量下降，LA、YC组显著低于CTL组，说明LA、YC对动物机体蛋白代谢的合成有一定的抑制作用。脂类在机体内的分解、转运和肝脏脂肪代谢情况通过HDL、LDL含量来反映，本试验中LA、YC组血浆LDL含量与CTL组相比显著下降，说明LA、YC对动物机体脂肪代谢有显著影响。

3.4 LA和YC对热应激绵羊屠宰性能的影响

饲喂方式、日龄、宰前活重、膘情等均可能成为影响动物屠宰性能的因素^[46]。日龄和宰前活重的增加也会对屠宰率产生明显的影响^[47]。内脏器官的重量和指数在一定程度上反映了动物机体的机能状态^[48]。闫佰鹏等^[49]研究发现，在湖羊饲粮中添加1% YC对其屠宰率无显著影响。本试验中，LA组绵羊的大网膜重、肾周脂肪重与CTL组相比分别增加了24.28%、7.62%。屠宰率是衡量屠宰性能的重要指标，彭秀丽等^[50]报道，肉鸡饲粮补铬对屠宰率没有显著影响。胡忠泽等^[51]也报道，添加盐酸铬对肉鸡屠宰率未产生显著影响。本试验中，与CTL组相比，LA、MIX组热应激绵羊屠宰率无显著变化。本试验中LA组宰前活重与CTL组相比有所增加，说明添加LA对机体生长有一定的影响，具体的剂量与原因还需进一步研究。各组之间宰前活重差异不大，所以YC组屠宰率与CTL组相比有所增加，各组屠宰率差异并不显著，屠宰性能与YC添加水平的关系有待进一步研究。

4 结论

① 饲粮中添加LA、YC对热应激绵羊的蛋白质及脂肪代谢有一定的影响，使其血浆TP、LDL、CHOL含量显著降低。

② 饲粮中添加YC可显著提高热应激绵羊胴体重，屠宰率有所增加，对饲料利用率和体增重的影响不大。