2. 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所, 杭州 310021;
3. 温州科技职业学院动物科学学院, 温州 325000;
4. 浙江省亚热带作物研究所, 温州市虫生真菌资源研究与开发重点实验室, 温州 325005
2. Animal Husbandry and Veterinary Institute, Zhejiang Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou 310021, China;
3. College of Animal Science, Wenzhou Vocational College of Science and Technology, Wenzhou 325000, China;
4. Key Laboratory of Entomogenous Fungus Resources Research and Development of Wenzhou, Zhejiang Institute of Subtropical Crops, Wenzhou 325005, China
随着抗生素在养殖过程的滥用带来的负面作用,以及人们对畜产品品质的要求提高,寻找代替抗生素的饲料添加剂成为亟待解决的问题。蝉花作为我国古老的中药材,属于虫生真菌,早在《雷公炮炙论》中就有记载。蝉花含有的多糖成分,具有提高生长性能[1]、调节免疫[2]、抗肿瘤[3]等作用。目前关于蝉花多糖在鸡上的研究少有报道,研究主要集中在其对小鼠免疫、改善睡眠等上。本课题组前期研究了蝉花多糖具有改善肉鸡生长性能、增强免疫力等多方面作用[1, 4]。植物提取物由于其安全性和有效的抗菌行为、提高机体营养吸收率、支持宿主免疫等优点已被确定为合适的饲料添加剂[5]。当前,蝉花多糖、植物提取物联合使用对鸡生长性能和免疫功能的影响还未有报道。因此,本试验通过研究添加蝉花多糖、植物提取物及其复合物对雁荡麻鸡生长性能和免疫功能的影响,旨在为安全无公害的养鸡生产提供参考。
1 材料与方法 1.1 试验材料试验用蝉花多糖由浙江省亚热带作物研究所提供,首先将实验室培养的蝉花虫草子实体经过烘干、提取、沉淀、干燥等制备方法得到蝉花虫草粗多糖粉末,最后通过去蛋白法(Sevag法)和大孔树脂法最后得到试验用蝉花多糖[6]。植物提取物由广东某科技集团提供,由黄莲、肉桂、丁香、藿香等复方后提炼,由肉桂醛、桉叶油以及植物复方提取物组合而成(植物精油复方提取物主要有:肉桂提取物≥6%,香芹酚≥0.2%,桉叶油≥0.5%,植物复方提取物≥30%)。杆菌肽锌(生产批号:P181013)购自绿康生化有限公司。鸡新城疫活疫苗La Sota株,购自博美莱生物制品有限公司。
1.2 试验设计在浙江绿雁有限公司选取同一批次的1日龄体重相近、健康状况良好的雁荡麻鸡315只,随机分为7组,包括空白对照组(A组)、免疫对照组(B组)、抗生素对照组(C组)、蝉花多糖组(D组)、蝉花多糖植物提取物低剂量复合组(E组)、蝉花多糖植物提取物高剂量复合组(F组)、植物提取物组(G组),每组3个重复,每个重复15只,公母比例一致,以每个重复为单位单笼饲养。试验鸡饲喂无抗基础饲粮,由温州正泰农牧有限公司提供,基础饲粮组成及营养水平见表 1。在11~17日龄、25~31日龄每天14:00对每只试验鸡灌服1次,添加剂量以各组试验鸡平均体重为单位进行计算,按照表 2方案进行灌服。
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表 1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) |
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表 2 试验鸡添加剂成分及剂量 Table 2 Composition and dosage of additives for experimental chickens |
试验在温州种子种苗科技园进行。试验鸡采用双层立体笼养,饲养条件保持一致,自由采食粉末状饲粮,自由饮水,自然光照和通风,常规消毒。在14、28日龄对除A组以外各组试验鸡进行新城疫弱毒疫苗点眼免疫,A组试验鸡使用同样的方法用等量生理盐水替代疫苗操作。试验从1日龄开始,42日龄结束,共42 d。试验过程观察鸡只健康状况并做详细记录。
1.4 测定指标及方法 1.4.1 生长性能测定试验期间每天记录各组的采食量。分别于10、28、42日龄的13:00对全部鸡进行称重,计算试验期10~28日龄、29~42日龄的平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。
1.4.2 免疫指标测定42日龄,每个重复随机抽取6只鸡,每组18只(禁食18 h,自由饮水),空腹称重,并翅静脉采血,室温下静置,3 000 r/min离心15 min,取上清液用离心管分装并放置-20 ℃保存备用。
血清免疫指标:血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、补体3(C3)、补体4(C4)含量的测定均采用北京华英生物技术研究所的比色试剂盒,并采用全自动生化仪(迈瑞BS-420)测定。
细胞因子:血清中干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)含量的测定均采用北京华英生物技术研究所的酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒,并采用酶标分析仪(华为德朗DR-200BS)测定。
采血后迅速屠宰,无菌采取试验鸡的脾脏和法氏囊,去除多余脂肪、血水进行称重,计算免疫器官指数。
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试验数据采用SPSS 26.0进行单因素方差分析和LSD多重比较,P<0.05为差异显著性标志,计算结果均以“平均值±标准差”表示。
2 结果与分析 2.1 蝉花多糖和植物提取物对雁荡麻鸡生长性能的影响由表 3可知,10~28日龄,D~G组雁荡麻鸡ADG均有所升高,且与B组相比存在显著差异(P<0.05);与B组、C组相比,G组F/G有所降低(P>0.05)。29~42日龄,与B组、C组相比,D组、F组雁荡麻鸡ADG均显著提高(P<0.05),D组、G组F/G在各组之间有所下降,但并无显著差异(P>0.05)。10日龄,E组、F组雁荡麻鸡体重显著高于A组(P<0.05);28日龄,D~G组雁荡麻鸡体重显著高于A组、B组(P<0.05),且F组与A~C组存在显著差异(P<0.05),C组雁荡麻鸡体重高于A组、B组,但无显著差异(P>0.05);42日龄,与B组相比,D~G组雁荡麻鸡体重均有所升高,其中D组、E组存在显著差异(P<0.05)。
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表 3 蝉花多糖和植物提取物对雁荡麻鸡生长性能的影响 Table 3 Effects of Cordyceps cicadae polysaccharide and plant extract on growth performance of Yandang Ma-chicken |
由表 4可知,与A~C组相比,E组和F组雁荡麻鸡脾脏指数有所提高,但差异不显著(P>0.05);与A~C组相比,F组雁荡麻鸡法氏囊指数有所提高,但差异不显著(P>0.05)。
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表 4 蝉花多糖和植物提取物对雁荡麻鸡免疫器官指数的影响 Table 4 Effects of Cordyceps cicadae polysaccharide and plant extract on immune organ indices of Yandang Ma-chicken |
由表 5可知,与B组相比,F组、G组雁荡麻鸡血清IgA含量有所提高,但差异不显著(P>0.05);与C组相比,F组、G组雁荡麻鸡血清IgA含量分别提高了20.09%、16.44%,存在显著差异(P<0.05);与A~C组相比,F组雁荡麻鸡血清IgG含量显著提高(P<0.05),与C组相比,D~G组雁荡麻鸡血清IgG含量均显著提高(P<0.05);与C组相比,D组、F组雁荡麻鸡血清C3含量显著提高(P<0.05);雁荡麻鸡血清C4含量以F组最高,C组最低,但各组间差异不显著(P>0.05)。
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表 5 蝉花多糖和植物提取物对雁荡麻鸡血清免疫球蛋白和补体含量的影响 Table 5 Effects of Cordyceps cicadae polysaccharide and plant extract on serum contents of immunoglobulin and complement of Yandang Ma-chicken |
由表 6可知,与A组、B组相比,E组、G组雁荡麻鸡血清IFN-γ、TNF-α和IL-2含量均显著提高(P<0.05);与A~C组相比,D组、F组雁荡麻鸡血清IL-4含量显著提高(P<0.05)。
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表 6 蝉花多糖和植物提取物对雁荡麻鸡血清细胞因子含量的影响 Table 6 Effects of Cordyceps cicadae polysaccharide and plant extract on serum cytokine content of Yandang Ma-chicken |
部分植物提取物和中药复方多糖能促进肠道消化分泌物的产生,促进营养吸收,增强禽类的免疫,从而达到提高禽类生长性能的目的[7-8]。Zhu等[9]研究表明,植物提取物能减轻肠道内致病菌导致的应激,增强消化酶分泌,改善营养吸收从而提高肉鸡生长性能。复合微生态制剂和复合植物提取物联合使用能提高育肥猪ADG,降低F/G[10]。本试验中,添加蝉花多糖、蝉花多糖植物提取物复合物以及植物提取物均能提高10~28日龄试验鸡的ADG,蝉花多糖、蝉花多糖植物提取物高剂量复合物能提高29~42日龄试验鸡的ADG,同时,添加蝉花多糖、蝉花多糖植物提取物复合物和植物提取物能提高试验鸡的体重。对照吴春琴等[11]对雁荡麻鸡遗传资源的分析,本试验中未灌服饲料添加剂的空白对照组(A组)、免疫对照组(B组)试验鸡28日龄的体重与其试验中28日龄生长期平均体重差异不显著,而添加蝉花多糖、蝉花多糖植物提取物复合物和植物提取物对试验鸡生长性能有积极影响。可以推测,随着试验周期的延长,蝉花多糖植物提取物高剂量复合组(F组)试验鸡的ADG可能出现显著上升,这与杜泓明等[12]研究相似,其试验在饲粮中添加酵母乳酸复合物的断奶仔猪生长性能远超抗生素组,且随着试验周期推进其生长性能逐步递增。本试验中,抗生素对照组(C组)试验鸡42日龄试验鸡体重显著高于免疫对照组(B组),但与空白对照组(A组)无显著差异,可能是免疫对照组的试验鸡生长性能受到了免疫应激的影响。42 d的生长周期表明,蝉花多糖植物提取物高剂量复合物更有效地提升了雁荡麻鸡的ADG,但对F/G无显著的改善作用。马铁华等[13]研究发现,植物提取物在提升肉鸡F/G中效果和抗生素相比相差无异,这与本试验研究结果一致。
3.2 蝉花多糖和植物提取物对雁荡麻鸡免疫功能的影响 3.2.1 蝉花多糖对雁荡麻鸡免疫器官指数的影响机体细胞的生长分裂决定了免疫器官的发育,因此在很大程度上免疫器官重量能反映机体免疫能力[14]。此次研究中,添加蝉花多糖植物提取物高剂量复合组试验鸡脾脏、法氏囊指数均有所提升,但没有显著差异,可能存在试验组鸡只个体增长较快,免疫器官并没有出现突出生长的情况;也可能因为饲养时间太短,添加剂对免疫器官还未产生明显的影响。研究表明,添加黄芪多糖益生菌合生元能促进免疫器官发育[15],复合微生态制剂与黄芪多糖可提高肉鸡免疫器官指数[16]。中药多糖和微生态制剂联合使用理念正与本试验中草药多糖和植物提取物复方的理念相似,每一种化学成分都有其自身特性,二者在替抗上有共通之处,并且可能达到更理想的协同作用。
3.2.2 蝉花多糖和植物提取物对雁荡麻鸡血清免疫球蛋白和补体含量的影响白术多糖联合枯草芽孢杆菌使用在蛋鸡的生长中提高了其血清中IgA和IgG含量[17]。研究表明,饲粮中添加植物精油能够提高动物血清中IgA、IgG、C3和C4的含量[18]。王兰等[19]研究表明,饲粮添加植物精油能促进肉鸡血清IgG等含量提升,改善肉鸡免疫机能。本试验中,添加蝉花多糖植物提取物高剂量复合物能使雁荡麻鸡血清IgA、IgG、C3和C4含量得到有效升高,另外添加植物提取物的试验组也使血清IgA含量有显著提升,添加蝉花多糖能使血清C3含量有所提高;而免疫对照组试验鸡血清IgA、IgG、C3和C4含量高于抗生素对照组,其中血清IgG含量显著高于抗生素对照组。此试验结果表明,与免疫对照组相比,饲喂抗生素对试验鸡的血清免疫水平有消极影响。试验表明,蝉花多糖植物提取物高剂量复合物能够提高鸡血清免疫水平并且显著优于添加抗生素,蝉花多糖植物提取物高剂量复合物提高机体免疫力的潜在机制尚不清晰,但有可能是复合物添加剂进入动物体后,激活辅助型T细胞2(Th2)类细胞产生细胞因子,且辅助B细胞活化,激发IgA、IgG和IL-4等体液免疫,通过体内淋巴细胞的再循环从而活化全身免疫系统[20],使蝉花多糖植物提取物高剂量复合物添加剂能有效增强鸡的免疫力。
3.2.3 蝉花多糖和植物提取物对雁荡麻鸡血清细胞因子含量的影响机体血清中IL-2[21]、IL-4[22]、TNF-α[22]、IFN-γ[23]含量的高低能作为机体免疫功能强弱的指标。多糖能显著提高机体外周血淋巴细胞转换率和诱生IL-2、IFN-γ和TNF等分泌[24]。刘宽辉等[25]研究发现,大蒜多糖-硒化党参多糖可显著提升鸡血清IL-2、IFN-γ含量。本试验中,抗生素对照组雁荡麻鸡血清IFN-γ、TNF-α、IL-2含量显著高于空白对照组、免疫对照组和其余各组,表明添加抗生素能增强机体内细胞因子水平的活性。除抗生素对照组外,植物提取物组试验鸡血清IFN-γ、TNF-α、IL-2含量显著高于其余各组,蝉花多糖植物提取物高剂量复合组试验鸡血清IL-4含量显著高于其他组。IL-4作为免疫活性调节因子影响机体体液免疫,通过促进B细胞和杀伤性T细胞的增殖分化来达到一定的增强免疫力作用[26]。结果表明,蝉花多糖植物提取物高剂量复合物、植物提取物能不同程度地提升鸡血清细胞因子含量,由此来提高鸡的免疫力。
4 结论添加蝉花多糖、蝉花多糖植物提取物复合物、植物提取物对雁荡麻鸡ADG均有一定的促进作用,并可以提高血清免疫和细胞因子水平,从而增强机体免疫力。本试验条件下,蝉花多糖(50 mg/kg)+植物提取物(125 mg/kg)高剂量复合组效果最佳。
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