铜元素作为动物生长必需的微量元素之一，能够增强动物体的造血功能、促进有机物的代谢和生长繁殖、维护动物的毛发正常生长和色泽、增强机体抵抗力^[1]，在毛皮动物饲粮中添加一定量的铜可以提高其生长性能和毛皮品质^[2-3]。饲粮中添加适宜水平的铜有利于提高动物的生长性能和营养物质消化率，并且不同铜源的促生长效果存在差异^[4-5]。目前，在动物生产中铜的添加形式主要有无机铜、有机铜2种。无机铜是饲粮中铜元素的主要添加形式，但是由于无机铜的吸收利用率低，导致高剂量添加铜成为畜禽养殖中的普遍现象^[6]。高剂量的铜不但危害动物自身健康，而且最终会沉积到畜禽产品中，过量的铜还会随排泄物进入土壤和水源，对生态环境造成极大破坏^[7-8]。有机铜以蛋氨酸铜应用较为广泛，其具有利用率高、稳定性好的特点，转运吸收不需要额外的配位反应，节省了小肠的载体蛋白，减少了与锌、铁等离子的竞争拮抗反应，减少能量的损耗^[9-10]。我国农业农村部发布的第2625号公告《饲料添加剂安全使用规范》已经对动物饲粮中铜的添加量作出进一步限制，其中规定肉兔配合饲料或全混合日粮中，铜的最高限量为25 mg/kg(包含饲料原料本底值)。蛋氨酸铜在畜禽饲粮中的应用研究已经比较广泛，但其在长毛兔饲粮中的应用研究较少且研究结论不尽相同。因此，本试验在长毛兔饲粮中添加不同水平的蛋氨酸铜，研究其对2~4月龄长毛兔生产性能、血清生化指标、血清含铜酶活性及内脏发育情况的影响，探讨2~4月龄长毛兔对蛋氨酸铜形式铜的需要量，旨在为我国长毛兔饲养中蛋氨酸铜的应用提供参考依据。

1 材料与方法 1.1 试验动物及分组

选用180只刚剪完胎毛的2月龄蒙阴长毛兔，随机分为6组，每组10个重复，每个重复3只试验兔。试验兔要求体重差异不显著(P>0.05)、公母各1/2、健康状况良好，并采取驱虫保健、疫苗接种等必要的抗病防疫措施。试验兔舍自然通风、采光，于每天06:00、18:00饲喂，自由采食，自由饮水。预试期7 d，正试期53 d。

1.2 试验饲粮及试验设计

基础饲粮参照中华人民共和国标准(审定稿1994)安哥拉毛兔饲养标准配制，其组成及营养水平见表 1。以蛋氨酸铜(蛋氨酸铜中铜含量为17.1%，蛋氨酸含量为78.5%)为铜源，在基础饲粮中分别添加0、10、20、40、80及160 mg/kg铜，配制6种试验饲粮，试验饲粮中铜含量的实测值分别为2.65、12.53、21.38、41.82、83.11及159.37 mg/kg。用环模制粒机将饲粮压成直径4 mm的颗粒饲料，通风避光处保存备用。

1.3 样品的采集与制备

正试期结束后，试验兔空腹称重记为宰前活重。每组随机抽取6只试验兔，心脏采血10 mL，离心机以3 000 r/min离心10 min，分离所得血清分装于离心管中，置于-20 ℃冷冻保存，用于血清生化指标、血清含铜酶活性以及钙、磷含量的测定。

1.4 测定指标与方法 1.4.1 生产性能指标

记录试验正式开始时试验兔体重和试验结束时试验兔的体重，统计试验期间(不包括预试期)的喂料量，计算平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

试验结束后，对长毛兔剪毛，称取实际剪毛的重量，并记录为产毛量。兔毛直径采用光学纤维直径分析仪和纤维投影仪进行测定。

将试验兔用颈椎错位法致死、屠宰，剥离内脏器官并称重。剥离皮张，用于测定皮张面积，量取肩部、腰部、臀部长度，取平均值为皮张宽度，量取颈部中间至尾根长度，为皮张长度，计算皮张面积。

1.4.2 血清生化指标

血清总蛋白(total protein，TP)、白蛋白(albumin，ALB)、球蛋白(globulin，GLB)、尿素氮(urea nitrogen，UN)含量采用日本和光纯药工业株式会社提供的试剂盒，在日立7180型全自动生化仪上进行测定，白球比(albumin/globulin ratio，A/G)为ALB与GLB含量的比值。

1.4.3 血清含铜酶活性

血清铜锌超氧化物歧化酶(copper/zinc-superoxide dismutase，Cu-Zn SOD)和铜蓝蛋白(ceruloplasmin，CP)活性采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒，在UV762型紫外分光光度计上测定吸光度值后，按照试剂盒说明计算得出。

1.4.4 血清钙、磷含量

血清钙、磷含量采用日立7180型全自动生化分析仪进行测定。

1.4.5 内脏器官发育

试验结束后，空腹称量试验兔体重，为宰前活重；剥离肝脏、心脏、肾脏、脾脏并称重，并根据以下公式计算内脏器官指数：

1.5 数据处理与分析

采用SPSS 13.0软件的单因素方差分析程序对试验数据进行方差分析，并采用Duncan氏法进行多重比较检验，试验数据用平均值±标准误表示，P < 0.05表示组间差异显著。

2 结果与分析 2.1 蛋氨酸铜对2~4月龄长毛兔生产性能的影响

由表 2可知，各组试验兔的初始体重无显著差异(P>0.05)。铜添加量对试验兔的ADFI无显著影响(P>0.05)。铜添加量为40 mg/kg时ADG最高，F/G最低，但与铜添加量为20、80 mg/kg时无显著差异(P>0.05)。铜添加量对试验兔的产毛量、毛直径、皮张面积均无显著影响(P>0.05)。随铜添加量的增加，产毛量、皮张面积呈现先升高后降低的趋势。

2.2 蛋氨酸铜对2~4月龄长毛兔血清生化指标的影响

由表 3可知，铜添加量对对2~4月龄长毛兔血清TP、ALB、GLB、UN含量及A/G均无显著影响(P>0.05)。随着铜添加量的增加，血清GLB呈含量先升高后降低的趋势。

2.3 蛋氨酸铜对2~4月龄长毛兔血清含铜酶活性的影响

由表 4可知，铜添加量对血清Cu-Zn SOD活性的影响显著(P < 0.05)，铜添加量为20 mg/kg时血清Cu-Zn SOD活性最高，为69.33 U/mL，显著高于铜添加量为0和10 mg/kg时(P < 0.05)，与铜添加量为40、80和160 mg/kg时差异不显著(P>0.05)。铜添加量对血清CP活性的影响显著(P < 0.05)。铜添加量为20 mg/kg时血清CP活性最高，为227.30 U/L，显著高于铜添加量为0、40和80 mg/kg时，与铜添加量为10、160 mg/kg时差异不显著(P>0.05)。

2.4 蛋氨酸铜对2~4月龄长毛兔血清钙、磷含量的影响

由表 5可知，铜添加量对2~4月龄长毛兔血清钙、磷含量无显著影响(P>0.05)。

2.5 蛋氨酸铜对2~4月龄长毛兔内脏器官发育的影响

由表 6可知，铜添加量对2~4月龄长毛兔肝脏指数、肾脏指数、心脏指数、脾脏指数均无显著影响(P>0.05)。

3 讨论 3.1 蛋氨酸铜对2~4月龄长毛兔生产性能的影响

一般来讲，有机微量元素的吸收利用率要高于无机微量元素。Mcdowell^[11]研究指出，动物对饲粮中不同铜源的吸收率有差异。晏家友等^[12]研究表明，饲粮中添加甘氨酸铜可提高肉兔的ADG，较对照组提高15.63%。对于毛皮动物，在水貂^[13]、蓝狐^[14]、银狐^[15-16]的研究中发现，与硫酸铜相比，氨基酸铜的相对利用率分别为113.41%、127.91%、116.46%，氨基酸铜能更好地被动物吸收利用。本试验表明，以蛋氨酸铜为铜源，长毛兔饲粮中添加量为20 mg/kg时，ADG比对照组提高54.78%，比10 mg/kg组提高19.37%，与上述研究基本一致。

白玉妍等^[17]研究表明，蛋氨酸酮对乌苏里貉对针毛、绒毛长度和细度无显著影响，但0号皮和Ⅰ级皮的数量要比对照组分别高出9.24%和4.06%，说明在乌苏里貉饲粮中添加蛋氨酸铜可提高毛皮质量。本试验中，蛋氨酸铜对2~4月龄长毛兔的产毛量、毛直径、皮张面积均无显著影响，与上述研究结果一致。其原因可能是因为铜元素作为酪氨酸酶的合成酶，影响黑色素的形成^[18]，铜元素主要在加深毛色方面起着重要作用，而在毛直径、产毛量方面的影响较小。随着铜添加量的增加，产毛量先提高后降低，其原因是铜添加量增加后长毛兔的体重及皮张面积增大，所以产毛量有所提高；但随铜添加量继续提高，长毛兔体重降低，皮张面积减少，产毛量降低。

3.2 蛋氨酸铜对2~4月龄长毛兔血清生化指标的影响

血液中的TP由ALB和GLB组成。本试验中试验兔血清TP、ALB、GLB含量都与正常值接近，提示饲粮中营养成分充足，长毛兔的免疫力较强，铜添加量对免疫性能的影响不大。血液中的尿素是蛋白质分解的最终产物^[19]，通过鸟氨酸循环合成，是反映蛋白质代谢的重要指标，在饲粮蛋白质含量稳定的情况下，血清中UN含量也比较稳定。本试验结果表明，铜添加量对血清UN含量无显著影响，说明在长毛兔的蛋白质代谢过程中铜对蛋白质的利用率并无促进作用。

3.3 蛋氨酸铜对2~4月龄长毛兔血清含铜酶活性的影响

含铜蛋白和含铜酶广泛存在于自然界中。含铜蛋白和含铜酶涉及生物体内的电子传递、氧化还原、氧分子的运送及活化等过程。Cu-Zn SOD可以有效地除去超氧负离子，是一种很好的抗氧化剂，从而起到防止老化、抑制肿瘤发生等作用。在貂、狐等动物的研究中发现，血清中Cu-Zn SOD和CP的活性与饲粮中铜含量相关，随着饲粮中铜含量的升高，血清中Cu-Zn SOD和CP的活性呈现先升高后降低的趋势^[20-23]。本试验研究表明，铜添加量显著影响血清Cu-Zn SOD和CP活性，且血清Cu-Zn SOD和CP活性均以铜添加量为20 mg/kg时最高，随后呈现降低趋势，与上述毛皮动物中的研究结果一致。

3.4 蛋氨酸铜对2~4月龄长毛兔血清钙、磷含量的影响

动物生长需要多种维生素和矿物元素，这些矿物元素之间可能存在拮抗的现象。郝贵增^[24]研究表明，饲粮中添加125和250 mg/kg蛋氨酸铜，可使血清锌含量显著下降，而对血清铁含量则无显著影响。铜添加量对血清钙、磷含量影响的报道较少。本试验中，铜添加量对血清钙、磷含量无显著影响，说明在饲粮中添加蛋氨酸铜时，可不考虑钙、磷添加量的问题。

3.5 蛋氨酸铜对2~4月龄长毛兔内脏器官发育的影响

动物的内脏器官重量和指数在一定程度上反映了动物机体的机能状况，对于理论研究和生产实践有重要的意义^[25-26]。本试验中，各组试验兔的肝脏指数、肾脏指数、心脏指数、脾脏指数均无显著影响，该结果表明，在以蛋氨酸铜为铜源时，20~160 mg/kg的铜添加量并不会对2~4月龄长毛兔内脏器官造成不良影响。

4 结论

本试验条件下，以蛋氨酸铜为铜源，饲粮中添加20~40 mg/kg铜时长毛兔有较高的ADG和血清含铜酶活性；综合本试验结果并考虑环保要求，推荐2~4月龄长毛兔饲粮中铜添加量为20 mg/kg。