幼兔断奶应激是目前养兔业面临的严重问题，断奶前幼兔所需的主要营养物质和免疫蛋白来自于母乳，断奶后幼兔失去母乳的被动免疫且幼兔处于生长阶段，自身的消化机能和免疫系统发育不完善，体内消化酶和胃酸分泌不足，极易引起断奶幼兔腹泻甚至死亡^[1]。因此，改善幼兔断奶应激是当前养兔生产中迫在眉睫的问题。酸化剂具有调节胃肠道菌群、提高消化道酶活、改善免疫功能、促进营养物质吸收和调节胃肠道pH等功能^[2-6]。国内研究发现，饲粮中添加0.1%复合酸化剂(二甲酸钾和磷酸复合)可显著增加商品肉兔平均日增重，降低料重比，并显著提高养分表观消化率，改善肉兔生长性能^[7]。国外研究发现，饲粮中添加2%柠檬酸可显著提高肉兔的末重和平均日采食量，降低料重比，提高饲料转化率，增加体内淋巴细胞数量，增强肉兔免疫能力^[8]。不过，复合酸化剂在兔生产中的应用较少，且其对肝脏抗氧化能力及作用机制鲜有报道。同时，复合酸化剂的有效成分不同，其对试验结果的影响也有差异。因此，本试验使用小分子有机酸(甲酸和丙酸)组成的复合酸化剂来探究其对伊拉兔生长性能、免疫和抗氧化功能以及空肠形态的影响，以筛选出较为合适的添加剂量，为酸化剂在伊拉兔中的生产应用提供理论依据和实践指导。

1 材料与方法 1.1 试验设计

试验选取192只(35±2)日龄健康、体重接近的断奶商品伊拉兔公兔，随机分为4个组，每组6个重复，每个重复8只。对照组饲喂基础饲粮，参照山东省地方标准《肉兔饲养标准》(DB 37/T 1835—2011)营养需要配制，为颗粒料，其组成及营养水平见表 1；抗生素组饲喂在基础饲粮中添加60 mg/kg盐霉素的饲粮；试验组饲喂在基础饲粮中分别添加0.1%(试验Ⅰ组)和0.2%复合酸化剂(试验Ⅱ组)的饲粮。复合酸化剂由漳州某生物科技有限公司提供，其中含29%甲酸、6%丙酸、30%木质磺酸盐以及35%二氧化硅载体。试验期28 d，期间试验兔自由采食，充足饮水，按正常免疫程序进行免疫接种。

1.2 样品采集

试验第27天21：00禁食不禁水，试验第28天09：00开始对试验兔进行空腹称重，记录宰前活重。从各组的每个重复中分别选择1只接近平均体重的试验兔，耳缘静脉采血，颈部放血处死，打开腹腔，将肝脏、空肠取出，取适当大小肝脏组织，-80 ℃保存，取3 cm左右的空肠中段，用生理盐水冲洗干净，于4%多聚甲醛中固定。

1.3 检测指标及方法 1.3.1 生长性能

试验期间，每天17：00记录各组试验兔采食量和余料量，计算平均日采食量、平均日增重和料重比；观察每天每只试验兔的腹泻情况，统计腹泻率。计算公式如下：

1.3.2 免疫器官指数

试验兔屠宰后，切开颈部和腹腔，分离并摘取胸腺、脾脏、圆小囊和蚓突，剔除脂肪组织，用滤纸吸干血水后准确称重，计算免疫器官指数。计算公式如下：

1.3.3 血清免疫指标

试验兔耳缘静脉采血约5 mL，注入不含抗凝剂的真空采血管中，室温静置30 min后，3 000 r/min离心15 min；将上清液收集于EP管中，-20 ℃保存。血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量采用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒(南京建成生物工程研究所)进行测定，严格按照试验盒说明书进行操作。

1.3.4 肝脏抗氧化指标

试验兔屠宰后，取肝脏组织，于-80 ℃保存。肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px)活性、总抗氧能力(T-AOC)以及丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量和GSH/GSSG值，采用ELISA试剂盒(南京建成生物工程研究所)进行测定，严格按照试验盒说明书进行操作。

1.3.5 空肠形态

空肠组织经过固定、脱水、包埋、切片、染色和封片等处理，在光学显微镜观察并测量其绒毛高度、隐窝深度，并计算绒毛高度/隐窝深度(V/C)值。

1.4 数据统计分析

试验数据用Excel 2021整理后，采用SPSS 26.0统计软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，并采用Duncan氏法进行多重比较检验，结果以“平均值±标准差”表示，以P＜0.05为差异显著，0.05＜P < 0.10为差异有显著趋势。

2 结果与分析 2.1 复合酸化剂对伊拉兔生长性能的影响

由表 2可知，与对照组相比，试验Ⅰ组伊拉兔平均日采食量显著提高(P < 0.05)，平均日增重有提高趋势(P=0.076)；抗生素组和试验Ⅰ组腹泻率显著降低(P < 0.05)。各组料重比之间均无显著差异(P>0.05)。

2.2 复合酸化剂对伊拉兔免疫器官指数的影响

由表 3可知，各组伊拉兔免疫器官指数之间均无显著差异(P>0.05)。

2.3 复合酸化剂对伊拉兔血清免疫指标的影响

由表 4可知，与对照组相比，抗生素组和试验Ⅰ组伊拉兔血清IL-6含量显著降低(P < 0.05)，抗生素组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组血清TNF-α含量显著降低(P < 0.05)。各组血清IL-1β和IL-10含量之间均无显著差异(P>0.05)。

2.4 复合酸化剂对伊拉兔肝脏抗氧化指标的影响

由表 5可知，与对照组相比，试验Ⅰ组伊拉兔肝脏MDA含量有降低趋势(P=0.084)。各组其他肝脏抗氧化指标之间均无显著差异(P>0.05)。

2.5 复合酸化剂对伊拉兔空肠形态的影响

由表 6可知，与对照组相比，抗生素组、试验组Ⅰ组和试验Ⅱ组伊拉兔空肠绒毛高度和V/C值显著提高(P < 0.05)。各组空肠隐窝深度之间均无显著差异(P>0.05)。由图 1可以看出，如红色箭头所指，在100×放大下，对照组空肠肠绒毛顶端微绒毛较多出现脱落和断裂，肠绒毛排列相对不整齐、疏松，肠绒毛相对较短；抗生素组和试验Ⅰ组空肠肠绒毛整体结构完整，肠微绒毛未见明显脱落，肠绒毛排列相对整齐、紧密，肠绒毛相对较长；试验Ⅱ组空肠肠绒毛顶端也出现了部分脱落、断裂，但明显较对照组少，肠绒毛排列相对整齐、紧密，肠绒毛明显比对照组长。

3 讨论 3.1 复合酸化剂对伊拉兔生长性能的影响

断奶幼兔易发生腹泻，从而影响其生长发育。酸化剂可以调节肠道菌群，增强消化酶活性，提高机体免疫力，并促进机体对营养物质的消化吸收，从而改善断奶幼兔的生长性能^[9]。本研究结果发现，与对照组相比，饲粮添加0.1%复合酸化剂可以显著提高伊拉兔平均日采食量，且有提高平均日增重的趋势。Luise等^[10]研究发现，饲粮添加甲酸可显著提高断奶仔猪平均日增重，有降低平均日采食量和料重比的趋势。费洪标等^[11]研究发现，饲粮添加0.1%复合酸化剂可显著提高断奶獭兔平均日增重。这些研究与本试验研究结果基本一致。其主要原因可能是：1)甲酸具有良好的酸化作用，能够调节肠道菌群的平衡，促进动物肠道内营养物质的吸收^[12]；2)丙酸经畜禽吸收后，可通过糖异生途径转化为葡萄糖，从而促进机体发育^[13]。本研究结果还发现，饲粮添加复合酸化剂对伊拉兔料重比无显著影响，这与Debi等^[8]的研究结果基本一致；但Long等^[14]和Bosi等^[15]研究表明，饲粮添加酸化剂可以显著降低料重比，改善饲料报酬。造成这种差异的原因可能与复合酸化剂的组成成分、添加剂量、饲养动物以及饲养环境等不同有关。吴秋玉等^[16]研究发现，饲粮添加1%有机酸可显著降低断奶仔猪腹泻率，有效预防仔猪腹泻。本试验结果显示，饲粮添加复合酸化剂可显著降低幼兔腹泻率，其原理可能是酸化剂通过降低肠道pH，改变菌群最适pH，调节肠道菌群平衡，从而降低腹泻率。

3.2 复合酸化剂对伊拉兔免疫功能的影响

免疫器官是机体防御系统的重要组成部分，其生长发育状况会影响机体的免疫能力。本试验结果显示，饲粮添加复合酸化剂对伊拉兔免疫器官指数无不良影响，这与冯国亮等^[17]的研究结果基本一致；但李万军^[18]研究显示，饲粮添加复合酸化剂可显著提高肉鸡免疫器官指数。结果的差异性可能是不同畜禽对酸化剂的利用能力不同，以及复合酸化剂的组成成分对畜禽的影响也不同。

免疫反应和炎症反应是机体的保护性防御反应，正常情况下机体免疫系统处于平衡状态，当免疫失衡时，免疫系统会产生大量炎症反应，并可能诱导疾病产生^[19]。炎症因子含量的变化可以间接说明机体炎症反应的强弱，并反映机体的健康状态。Wang等^[20]研究发现，饲粮添加复合酸化剂可以显著降低断奶仔猪血清TNF-α含量，显著提高血清免疫球蛋白G(IgG)含量，增强断奶仔猪免疫能力。程远之等^[21]研究发现，饲粮添加0.2%乳酸型酸化剂可显著提高断奶仔猪血清IgG和免疫球蛋白M(IgM)含量，并显著提高十二指肠和空肠免疫因子的表达，增强断奶仔猪免疫能力。Kuang等^[22]研究发现，饲粮添加复合有机酸可抑制断奶仔猪空肠促炎细胞因子的表达。本试验结果发现，与对照组相比，饲粮添加复合酸化剂可以显著降低伊拉兔血清促炎因子IL-6和TNF-α含量，增强断奶幼兔免疫能力。这与Han等^[23]和汪晶晶^[24]的研究结果基本一致。酸化剂增强机体免疫能力的原因可能是：1)部分酸化剂如延胡索酸等参与了机体三羧酸循环，能够产生ATP维持机体供能，从而提高免疫力^[25]；2)部分酸化剂如丙酸等可以通过糖异生等途径合成葡萄糖，保证机体正常营养需求和物质代谢^[13]；3)有机酸具有杀菌和调节pH的功能，能够促进机体消化吸收营养物质，从而增强机体免疫能力，提高抗病力^[26]。

3.3 复合酸化剂对伊拉兔肝脏抗氧化功能的影响

抗氧化是机体健康状况的重要指标之一。机体产生过多氧自由基会引起氧化损伤，正常情况下，机体通过维持抗氧化系统的平衡状态来保持氧自由基的平衡。刘新泽等^[27]研究表明，饲粮添加0.1%复合酸化剂可以显著提高肉鸡血清T-AOC，显著降低血清MDA含量，增强肉鸡抗氧化能力，改善肉鸡健康状况。秦枫等^[28]研究表明，饲粮添加延胡索酸能够提高幼兔血清T-AOC和SOD活性，降低血清MDA含量，增强机体抗氧化能力，维持机体健康。王铭洋等^[29]研究表明，饮水型酸化剂可显著降低蛋鸡肝脏MDA含量，显著提高肝脏T-AOC。酸化剂增强机体抗氧化能力的原因可能是：1)部分有机酸参与机体三羧酸循环，为机体供能，从而提高机体清除自由基的能力^[25]；2)部分有机酸可作为GSH-Px合成的原料，提高机体抗氧化能力^[30]。本试验结果显示，饲粮添加复合酸化剂有降低伊拉兔肝脏MDA含量的趋势，这与前人结果基本一致。本试验中，各组其他抗氧化指标之间均无显著差异，其原因可能是复合酸化剂的组成成分不同、饲养动物不同以及饲养环境差异等因素导致。

3.4 复合酸化剂对伊拉兔空肠形态的影响

肠道是机体最大的免疫器官，肠道形态尤其是绒毛高度和隐窝深度是机体肠道健康的重要指标。肠道绒毛边缘可分泌多种消化酶，所以绒毛高度越高，机体消化吸收能力越强；隐窝深度代表肠细胞生产率，隐窝越浅，细胞成熟度越高，分泌功能越强^[31]。周嘉鑫等^[32]研究表明，饲粮中添加0.09%甲酸+0.06%木质磺酸混合制品可显著提高黄羽肉鸡空肠绒毛高度和V/C值，改善肉鸡肠道形态。Chen等^[33]研究表明，饲粮添加苯甲酸可显著降低断奶仔猪空肠隐窝深度，提高空肠V/C值，促进肠道营养物质吸收。何博等^[34]研究发现，饲粮添加甲酸和二甲酸钾可显著提高肉鸡回肠绒毛高度和V/C值，促进肠细胞增殖，改善肠道形态。以上研究表明，饲粮添加酸化剂可以改善肠道形态，促进肠道发育。本试验结果显示，与对照组相比，饲粮添加复合酸化剂可以显著提高伊拉兔空肠绒毛高度和V/C值，这与前人研究结果基本一致。其原因可能是：1)酸化剂可以降低肠道pH，调节肠道微生物平衡，促进肠道发育^[35]；2)甲酸对大肠杆菌、沙门氏菌等病原菌具有很强的抑制作用，能降低病原菌的生长与增殖，缓解肠道黏膜炎症反应，增强绒毛高度和分泌功能^[34]。

4 结论

①   在本试验条件下，饲粮添加复合酸化剂可以增强伊拉兔免疫功能，改善空肠形态，提高平均日采食量，降低腹泻率。

②   综合本试验结果，以添加0.1%复合酸化剂效果较好。