2. 宁夏中宁文茂生态饲料有限公司, 中宁 755100;
3. 宁夏农牧厅, 银川 750001
2. Zhongning Wenmao Ecological Feed Limited Liability Company of Ningxia, Zhongning 755100, China;
3. Department of Agriculture and Animal Husbandry of Ningxia, Yinchuan 750001, China
枸杞(Lycium barbarum)为宁夏“五宝”之首，其已有500多年的栽培历史。枸杞渣是枸杞采摘后晒干、过筛和分选枸杞干果后剩下的残渣，主要包括残余果实、果柄、碎叶和枝条等。枸杞渣除了可以为动物提供较丰富的常规营养物质和能量外[1-2]，还含有大量微量元素以及活性成分如多糖、多酚类化合物、生物碱、类胡萝卜素等[3-5]，可以有效提高机体抗氧化能力和改善免疫调节功能[6-8]，并具有抗菌抗炎、细胞保护、抑制肿瘤活性和逆转睾丸功能障碍等作用[9-11]。王启菊等[12]研究显示，饲粮中添加枸杞对羔羊血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白M(IgM)含量均具有明显的提高作用，同时血清中总胆固醇含量显著降低，起到保护心脑血管的作用。也有研究指出，枸杞渣能够显著降低牛奶体细胞数，有效缓解奶牛乳房炎的发生[13]。马宁等[14]研究发现，以颗粒饲料方式饲喂时滩羊的干物质(DM)、粗蛋白质(CP)、酸性洗涤纤维(ADF)、中性洗涤纤维(NDF)表观消化率高于其他饲喂方式。王亚妮等[15]给育肥滩羊饲喂含枸杞渣全混合颗粒饲料时其养分表观消化率高于饲喂粉料时。据此，本试验拟在饲粮中添加不同水平的枸杞渣，并制成颗粒型全混合日粮(TMR)，研究其对育肥滩羊消化代谢、抗氧化能力和免疫功能的影响，以期为合理开发利用枸杞渣饲料提供理论依据和饲喂量。
1 材料与方法 1.1 试验材料本试验所用枸杞渣果实含量为38.41%，其营养成分含量见表 1。
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表 1 枸杞渣营养成分含量(干物质基础) Table 1 Nutritional component contents of Lycium barbarum residue (DM basis) |
饲养试验在宁夏中宁文茂生态草源饲料有限公司进行。选用3月龄、体重[(23.01±0.69) kg] 的健康滩羊公羔32只，编号并随机分成4组，每组2个重复(圈)，每个重复4只羊。4组试验羊分别饲喂添加0(对照组)、2%(试验Ⅰ组)、5%(试验Ⅱ组)、8%(试验Ⅲ组)枸杞渣的试验饲粮。各组饲粮营养水平相近。预试期20 d，正试期80 d。试验饲粮分为育肥前、中、后期3个阶段，参照我国《肉羊饲养标准》(NY/T 816—2004)并结合实际生产配制，其组成及营养水平见表 2至表 4。试验羊统一编号，进行布病检测，防驱虫防疫，定期对羊舍进行消毒，保持羊圈干净整洁。每天分别于07:00和17:00以颗粒型全混合日粮的形式等量饲喂，自由饮水。
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表 2 育肥前期试验饲粮组成及营养水平(干物质基础) Table 2 Composition and nutrient levels of experimental diets during early fattening stage (DM basis) |
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表 3 育肥中期试验饲粮组成及营养水平(干物质基础) Table 3 Composition and nutrient levels of experimental diets during middle fattening stage (DM basis) |
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表 4 育肥后期试验饲粮组成及营养水平(干物质基础) Table 4 Composition and nutrient levels of experimental diets during late fattening stage (DM basis) |
消化代谢试验于正试期第45天开始，至试验第57天结束。每组选择体重相近的3只试验羊于代谢笼中独笼饲喂。预试期7 d，正试期6 d，采用全收粪收尿法，在每天的07:00和17:00饲喂并收集粪、尿样品。
1.3 饲养管理羔羊在入舍前对整个羊舍和食槽进行彻底消毒，并对羊只进行驱虫。每天饲喂2次(07:00和17:00)，自由饮水。
1.4 测定指标与方法 1.4.1 生长性能指标的测定试验开始和结束时对试验羊空腹称重，分别作为试验羊的初始体重和终末体重。每天定时清理料槽，记录投料量和剩料量，用于计算干物质采食量(DMI)、总增重(TG)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。计算公式如下：
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消化代谢试验期间，记录每只羊每天的采食量、剩料量和粪、尿排出量。每天收集的粪、尿混匀后按总排出量的10%留样，其中一份粪、尿样不做任何处理，另一份加入10%H2SO4固氮，于-20 ℃保存待测。饲粮、粪样中DM、CP、NDF、ADF、粗灰分(Ash)以及尿氮(UN)含量参照《饲料分析及饲料质量检测技术》测定。饲粮、粪样和尿样总能用XRY-1B型氧热量计(上海昌吉地质仪器有限公司)进行测定。
养分表观消化率、氮代谢和能量代谢计算公式如下：
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分别于试验开始后的第1、20、40、60和第80天对试验羊进行颈静脉采血10 mL，在离心管中静置30 min后用离心机于3 000 r/min离心10 min，取上清液在-20 ℃的条件下保存供实验室分析用。按照相应试剂盒(购于南京建成生物工程研究所)说明书，使用酶标仪(SYNER GY H11，Bio Tek，美国)测定血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性与总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量。
1.4.4 血清免疫指标的测定血液采集和血清制备同抗氧化指标。按照相应试剂盒(购于南京建成生物工程研究所)说明书，使用酶标仪(SYNER GY H11，Bio Tek，美国)测定血清IgA、IgG和IgM含量。
1.5 数据统计与分析试验数据用Excel 2010进行初步整理，用SAS 9.4软件的one-way ANOVA程序对数据进行单因素方差分析，用LSD法进行多重比较，P < 0.05表示差异显著。
2 结果与分析 2.1 枸杞渣对育肥滩羊生长性能的影响枸杞渣对育肥滩羊生长性能的影响见表 5。在初始体重差异不显著(P＞0.05)的情况下，各组试验羊终末体重、TG和ADG的差异均不显著(P＞0.05)，但试验Ⅱ组在数值上均高于其他各组。对于TG和ADG，试验Ⅱ组比对照组分别提高了28.00%和27.99%，试验Ⅰ组也较对照组分别提高了17.83%和17.79%，但试验Ⅲ组却比对照组分别降低了5.27%和5.26%，这说明饲粮中添加适宜水平的枸杞渣可以在一定程度上提高育肥滩羊的增重。DMI表现为试验Ⅱ组极显著高于其他各组(P < 0.01)，试验Ⅰ组与试验Ⅲ组间差异不显著(P＞0.05)，但均极显著高于对照组(P < 0.01)。各组间F/G差异不显著(P＞0.05)，但以试验Ⅱ组的F/G最低。
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表 5 枸杞渣对育肥滩羊生长性能的影响 Table 5 Effects of Lycium barbarum residue on growth performance of fattening Tan sheep |
枸杞渣对育肥滩羊养分表观消化率的影响见表 6。饲粮中添加不同水平枸杞渣对育肥滩羊的DM、Ash、ADF和NDF表观消化率均无显著影响(P＞0.05)。CP表观消化率表现为试验Ⅰ组与试验Ⅱ组显著高于对照组(P < 0.05)，而试验Ⅲ组与对照组无显著差异(P＞0.05)。
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表 6 枸杞渣对育肥滩羊养分表观消化率的影响 Table 6 Effects of Lycium barbarum residue on nutrient apparent digestibility of fattening Tan sheep |
枸杞渣对育肥滩羊氮代谢的影响见表 7。粪氮和总排泄氮各组之间无显著差异(P>0.05)，但试验Ⅱ组总排泄氮与其他组相比降低了5.01%~12.61%，试验Ⅰ组总排泄氮却比对照组提高了8.71%；进食氮、消化氮和氮消化率均表现为3个试验组极显著高于对照组(P＜0.01)，试验Ⅱ组最高，试验Ⅰ组次之，但试验Ⅰ组与试验Ⅲ组之间无显著差异(P>0.05)；3个试验组的尿氮均极显著高于对照组(P＜0.01)，同时试验Ⅰ组与试验Ⅲ组还极显著高于试验Ⅱ组(P＜0.01)；沉积氮各组之间差异极显著(P＜0.01)，表现为试验Ⅱ组＞试验Ⅰ组＞试验Ⅲ组＞对照组；试验Ⅰ组和试验Ⅱ组氮的利用率极显著高于对照组和试验Ⅲ组(P＜0.01)，但试验Ⅰ组与试验Ⅱ组、对照组与试验Ⅲ组之间无显著差异(P>0.05)；氮的生物学价值表现为试验Ⅱ组极显著高于其他各组(P＜0.01)。
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表 7 枸杞渣对育肥滩羊氮代谢的影响 Table 7 Effects of Lycium barbarum residue on nitrogen metabolism of fattening Tan sheep |
枸杞渣对育肥滩羊能量代谢的影响见表 8。在育肥滩羊饲粮中添加不同水平枸杞渣后，粪能、总能消化率无显著变化(P>0.05)，但试验Ⅱ组总能消化率最高，分别达到61.58%和54.33%；各试验组食入总能均高于对照组，且试验Ⅱ组极显著高于对照组和试验Ⅲ组(P＜0.01)，与试验Ⅰ组差异不显著(P>0.05)；尿能表现为对照组极显著低于各试验组(P＜0.01)，而各试验组之间均无显著差异(P>0.05)；试验Ⅱ组消化能最高，达14.16 MJ/d，显著高于其他各组(P＜0.01)，试验Ⅰ组与试验Ⅲ组之间无显著差异(P>0.05)，但均极显著高于对照组(P＜0.01)。
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表 8 枸杞渣对育肥滩羊能量代谢的影响 Table 8 Effects of Lycium barbarum residue on energy metabolism of fattening Tan sheep |
枸杞渣对育肥滩羊血清抗氧化指标的影响见表 9。饲粮中添加不同水平枸杞渣对育肥滩羊各时间阶段的血清MDA含量、T-AOC和GSH-Px活性均无显著影响(P>0.05)，但MDA含量各试验组均低于对照组，T-AOC和GSH-Px活性随枸杞渣添加水平的升高整体呈先上升后降低的趋势。在试验第20天时，血清T-SOD活性随枸杞渣添加水平的升高呈上升趋势，试验Ⅱ组和试验Ⅲ组显著高于对照组和试验Ⅰ组(P＜0.05)；在试验第80天时，试验Ⅱ组血清T-SOD活性显著高于其他各组(P＜0.05)，而其他各组之间无显著差异(P>0.05)。
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表 9 枸杞渣对育肥滩羊血清抗氧化指标的影响 Table 9 Effects of Lycium barbarum residue on serum antioxidant indexes of fattening Tan sheep |
枸杞渣对育肥滩羊血清免疫指标的影响见表 10。血清IgA含量试验第80天时表现为试验组显著高于对照组(P＜0.05)，但各试验组之间无显著差异(P＞0.05)；血清IgG含量在试验第60天时表现为试验Ⅱ组和试验Ⅲ组显著高于对照组(P＜0.05)，在试验第80天时表现为试验Ⅱ组和试验Ⅲ组极显著高于对照组和试验Ⅰ组(P＜0.01)；血清IgM含量在试验第80天时表现为试验Ⅲ组最高，极显著高于其他各组(P＜0.01)，试验Ⅱ组次之，对照组最低。
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表 10 枸杞渣对育肥滩羊血清免疫指标的影响 Table 10 Effects of Lycium barbarum residue on serum immune indexes of fattening Tan sheep |
枸杞渣富含蛋白质和各种活性成分，对畜禽生长性能具有积极作用[16]。研究显示，饲粮添加枸杞多糖免疫增效剂组滩寒杂交代羔羊终末体重和ADG均显著高于未添加枸杞多糖免疫增效剂组[17]。黄红卫等[2]研究报道，饲粮中添加适量的枸杞渣可以改善饲粮的适口性，提高动物的DMI。本试验中，饲粮添加5%枸杞渣组育肥滩羊的DMI高于其他试验组，与黄卫红等[2]的报道一致，可能原因是添加枸杞渣改变了饲粮的适口性，增加了其在滩羊肠道内的流通速率，进而提高了采食量。孙国虎等[18]通过小尾寒羊试验发现，饲粮添加枸杞中草药渣组肉羊的ADG比对照组增加了33.23 g，增重效益明显。本试验中，添加5%枸杞渣组育肥滩羊的TG和ADG比对照组分别提高了28.00%和27.99%，增重明显，与上述报道相符。综上可知，饲粮中添加5%枸杞渣时育肥滩羊的生长性能较优。
3.2 枸杞渣对育肥滩羊消化代谢的影响 3.2.1 枸杞渣对育肥滩羊养分表观消化率的影响饲粮中养分的表观消化率是影响动物生长性能的重要因素，也是动物消化能力的直接反映[19]。研究表明，在饲粮中添加枸杞多糖提高了獭兔的CP表观消化率[20]；饲粮中添加2%枸杞组藏羊的CP表观消化率比未添加枸杞组提高6.18%[12]。本试验中，饲粮添加5%枸杞渣组滩羊的CP表观消化率显著高于对照组，且DM、Ash、ADF和NDF表观消化率较于其他组高，说明饲粮中添加5%枸杞渣可以提高营养物质的利用率。这可能因为在枸杞青果及叶片中含有较高的蛋白质、多糖及黄酮，且枸杞青果中含大量类胡萝卜素、多酚、精油、甜菜碱等活性物质有关，其丰富了滩羊饲粮原料，提高其饲喂价值[21]。本试验结果表明，饲粮中添加5%枸杞渣时育肥滩羊的养分表观消化率较高。
3.2.2 枸杞渣对育肥滩羊氮代谢的影响饲粮中的蛋白质在动物体内通过消化、吸收等代谢过程，最终以粪氮和尿氮形式排出体外，其是造成养殖污染的主要原因之一[22]。粪氮主要受饲粮蛋白质水平的影响，而尿氮主要受饲粮氨基酸平衡的影响。在饲粮中添加枸杞多糖可以提高獭兔的氮沉积量，氮沉积量提高了0.15~0.27 g/d[23]。本试验中，饲粮中添加5%枸杞渣组滩羊的沉积氮比其他试验组高，与上述研究结果相似。有研究表明，甜菜碱是存在于枸杞果实、叶片、果柄中的主要生物碱之一，其具有提供甲基供体的功能，可以作为饲料添加剂节省部分蛋氨酸，保证蛋氨酸循环及卵磷脂的正常合成[24]。蛋氨酸可以改善滩羊小肠氨基酸的平衡，减少尿氮排出量，提高氮的沉积率，增加氮的利用率，提高氮的生物学价值[25]。Ren等[26]研究发现，枸杞多糖可促进大鼠肠道对蛋白质的吸收，提高营养物质利用率。尹业鑫等[27]研究显示，在饲粮中添加枸杞多糖在一定程度上可以改善断奶大鼠肠道形态结构的完整性，增强其肠道物理屏障功能，进而提高肠道对营养物质的吸收。本试验中，饲粮中添加枸杞渣提高了育肥滩羊的氮代谢能力及生物学价值可能与上述原因有关。
3.2.3 枸杞渣对育肥滩羊能量代谢的影响能量是动物体内一切代谢活动的基础，而饲粮能量水平是决定动物采食量的重要因素。反刍动物饲粮能量的主要来源是碳水化合物，其在常用植物性饲料中含量最高。动物采食饲粮后，在体内经过一系列反应产生ATP，释放出能量[28]。李宇敏等[23]通过给獭兔饲喂添加0.2%枸杞多糖的饲粮发现獭兔总能消化率提高了3.95%。本试验中，添加5%枸杞渣组滩羊总能消化率达到61.58%，总能高达14.16 MJ/d，极显著高于其他各组。试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组的总能消化率分别比对照组提高了4.25%、7.83%和1.14%，呈现出先升高后降低的趋势。由此得出，饲粮中添加枸杞渣对滩羊能量代谢有积极影响。有研究表明，枸杞中富含脂肪酸(棕榈酸、亚油酸和肉豆蔻酸)、氨基酸(脯氨酸、甜菜碱和牛磺酸)，还富含类胡萝卜素、玉米黄质、维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素C和多糖等[29]。添加枸杞渣可丰富饲粮的营养价值，提高养分的利用率，提升能量的消化率，但超过一定的水平后能量的消化率会降低。本试验中试验Ⅲ组的总能消化率出现降低，可能是因为添加8%枸杞渣的颗粒型全混合日粮所提供的养分超出了试验羊的需要量，造成氨基酸代谢失衡而使得不能被消化利用的其他氨基酸通过糖异生途径生成糖类物质，参与能量代谢，降低了能量利用率，最终导致试验Ⅲ组的总能表观消化率下降。
3.3 枸杞渣对育肥滩羊抗氧化能力的影响在羊只饲养过程中由于受各种因素的影响，动物体内不断地产生大量氧自由基，其进一步诱导生物膜上的多不饱和脂肪酸过氧化产生脂质过氧化产物MDA，因此，MDA含量直接反映机体内脂质过氧化的程度，间接反映细胞损伤的程度[30]。抗氧化酶可有效地清除代谢过程中所产生的自由基，GSH-Px和超氧化物歧化酶(SOD)作为自由基清除系统的抗氧化酶存在于所有有氧代谢的细胞内，使细胞免受自由基损害，并为被氧化的细胞膜提供修复机制[31]。Ma等[32]研究发现，枸杞的抗氧化能力较高，可减轻氧化应激，防止自由基破坏DNA、脂质和蛋白质。在断奶大鼠饲粮中添加4 g/kg的枸杞多糖后血清中T-AOC与GSH-Px活性分别提高了52.8%和67.5%，MDA含量降低了31.7%，由此得出枸杞多糖可以提高大鼠的抗氧化能力[27]。本试验中，各试验组滩羊血清MDA含量均低于对照组，T-AOC和GSH-Px活性总体呈现上升趋势，说明各试验组滩羊的抗氧化能力较对照组强。此外，在试验第80天时，添加5%枸杞渣组血清T-SOD活性显著高于其他各组，由此说明，饲粮中添加5%枸杞渣时育肥滩羊的抗氧化能力较高。
3.4 枸杞渣对育肥滩羊免疫功能的影响血清抗体水平是体液免疫的重要指标。IgA、IgG和IgM是血清中主要的免疫球蛋白，也是所有哺乳动物体液免疫的关键组成部分[33]。Li等[34]研究发现，补充植物提取的天然多糖可以改善宿主的免疫功能。枸杞营养丰富，富含多种生物活性成分，如枸杞多糖、甜菜碱、黄酮等。在其生物活性成分中，枸杞多糖占枸杞干的5%~8%。枸杞多糖是一种水溶性复合物碳水化合物链和蛋白质，其碳水化合物链主要由6种糖组成，包括半乳糖、甘露糖、葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖和木糖，约占所有糖类的70%[35]。枸杞多糖可对机体肠道免疫系统发育、淋巴细胞反应等产生影响，通过调节肠道菌群多样性和结构发挥对机体免疫功能的调节作用[36]。Long等[6]研究发现，在肉仔鸡饲粮中添加枸杞多糖，随饲粮中枸杞多糖添加水平的升高，血清中IgA、IgG、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-6(IL-6)含量升高，说明添加枸杞多糖可以增强免疫功能。马吉锋等[37]研究发现，在育肥架子牛饲粮中添加500 g/d枸杞多糖免疫增效剂，IgA和IgG含量极显著增高。王秀琴等[17]研究发现，滩寒杂交羔羊饲喂5%枸杞多糖免疫增效剂后，随饲喂时间的延长，添加5%枸杞多糖免疫增效剂组血清中IgA、IgM、IgG含量呈先增加后降低的趋势。而本试验中，饲粮添加5%枸杞渣组滩羊血清IgA和IgG含量显著高于其他各组，且在试验第80天时最高，血清IgM含量则是添加8%枸杞渣组显著高于其他各组。造成这种差异产生的原因可能是与试验羊品种和饲粮组成不同等有关。本试验结果显示，饲粮中添加5%枸杞渣时育肥滩羊的免疫功能较强。
4 结论颗粒型全混合日粮中添加枸杞渣可以提高育肥滩羊的养分表观消化率，增强抗氧化能力和免疫功能，本试验条件下，以添加水平为5%时效果最佳。
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