2. 广东省水禽健康养殖重点实验室, 广州 510225;
3. 广州海关技术中心, 广州 510000
2. Guangdong Province Key Laboratory of Waterfowl Healthy Breeding, Guangzhou 510225, China;
3. Guangzhou Customs Technical Center, Guangzhou 510000, China
在畜禽生产过程中，抗生素可以减少致病菌的数量、预防或治疗疾病以及促进畜禽机体生长[1]。然而，大量、长期地使用抗生素造成了抗生素在环境中的蓄积以及超级耐药菌的产生，造成环境污染及公共卫生隐患[2]。为了解决这些问题，需找到合适的绿色饲料添加剂来提高饲料的利用率以及提升畜禽的生长性能，并同时提升畜禽免疫机能以减少抗生素的使用。近年来，越来越多的研究发现，植物多糖能够有效地提高饲料利用率，在提升动物生长性能方面发挥着重要作用。Ma等[3]证明了酵母多糖可以增强肥育猪抗氧化能力并提升免疫机能，同时还可以降低肥育猪的背脂厚、板油重，改善猪肉肉色、系水力，提高肌内脂肪含量，改善肉品质。小刺猴头多糖也被发现可以促进肉鸡生长，降低料重比(F/G)，提高机体抗氧化能力及免疫功能[4]。此外，相比较于传统饲料添加剂和抗生素，植物多糖具有无毒、高效、无残留的优点，使得植物多糖可以在畜禽养殖过程中有着更广泛的应用。
白术多糖(polysaccharide of Atractylodes macrocephala Koidz，PAMK)作为白术的主要活性成分，拥有抗菌消炎、抗癌、抗氧化等作用[5]。除此之外，田允波等[6]通过给“杜×长×大”三元杂交仔猪饲喂白术多糖，发现白术多糖能提高仔猪平均日增重(ADG)，降低F/G，增强机体抵抗力，促进生长。但是目前还没有白术多糖对岭南黄鸡生长性能和屠宰性能影响的研究。因此，本试验旨在研究饲粮中添加不同水平的白术多糖对岭南黄鸡生长性能、屠宰性能和免疫器官发育的影响，以期为白术多糖作为无残留、无毒性的绿色功能性饲料添加剂的开发提供理论依据。
1 材料与方法 1.1 试验材料岭南黄鸡购于广东省农业科学院。白术多糖(含量为95%)购于西安市某生物制剂公司。
1.2 试验设计及饲养管理将240只1日龄岭南黄鸡随机分成4组，每组6个重复，每个重复10只鸡(公母各占1/2)，各重复之间体重无显著差异(P < 0.05)。对照组饲喂基础饲粮，试验组在基础饲粮中分别添加100(PAMK100组)、400(PAMK400组)、800 mg/kg(PAMK800组)的白术多糖。试验期35 d。参照《肉鸡饲养标准》(NY/T 33—2004)配制成颗粒配合饲料，试验饲粮组成及营养水平见表 1。采用笼养方式饲养于同一舍内，饲养密度根据雏鸡生长情况酌情进行安排。自由饮水，采取勤添少喂的方法。试验期间定时定量给料，舍内保持适宜温度、湿度及通风，保持鸡舍内的卫生。肉鸡按常规免疫程序进行疫苗接种。
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表 1 试验饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry-basis) |
根据总增重、平均日采食量(ADFI)、ADG和F/G评估生长性能。分别在21和35日龄时，每天11:00测量每只鸡的体重，并以每个重复为单位记录饲料耗料量，然后计算ADG、ADFI和F/G。
1.4 屠宰性能指标检测在35日龄时，分别在每个重复中选取1只岭南黄鸡记录体重，然后颈部放血处死，按《家禽生产性能名词术语和度量统计方法》(NY/T 823—2004)测定屠宰率、半净膛率、全净膛率、胸肌率、腿肌率。
1.5 免疫器官指数测定在35日龄时，分别在每个重复中选取1只岭南黄鸡，颈部放血处死后摘取肝脏、胸腺、脾脏及法氏囊，称重记录，按公式计算免疫器官指数：
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肝脏、胸腺、脾脏及法氏囊的组织学检测采用石蜡组织切片法，具体步骤参照何书海等[7]的方法进行操作。
1.7 数据统计与分析试验数据采用SPSS 20.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)和Duncan氏法多重比较，结果以“平均值+标准差”表示，P < 0.05表示差异显著。
2 结果 2.1 白术多糖对岭南黄鸡生长性能的影响如表 2所示，与对照组相比，PAMK400组岭南黄鸡1~21日龄和1~35日龄的总增重和ADG均有所升高，但是差异不显著(P>0.05)。PAMK400组岭南黄鸡1~21日龄和1~35日龄的ADFI均显著低于对照组(P < 0.05)。PAMK400组岭南黄鸡1~21日龄和1~35日龄的F/G均显著低于对照组(P < 0.05)。与对照组相比，PAMK100和PAMK800组岭南黄鸡1~21日龄、22~35日龄和1~35日龄的总增重、ADG均无显著差异(P>0.05)。PAMK100和PAMK800组岭南黄鸡1~21日龄的ADFI和F/G均显著低于对照组(P < 0.05)，PAMK100和PAMK800组岭南黄鸡1~35日龄的ADFI和F/G仅有所降低，与对照组没有显著差异(P>0.05)。
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表 2 白术多糖对岭南黄鸡生长性能的影响 Table 2 Effects of PAMK on growth performance of Lingnan yellow chickens |
如表 3所示，35日龄时，与对照组相比，PAMK100、PAMK400和PAMK800组岭南黄鸡的屠宰率、半净膛率和全净膛率均显著升高(P < 0.05)，但是胸肌率和腿肌率均无显著差异(P>0.05)。
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表 3 白术多糖对岭南黄鸡屠宰性能的影响 Table 3 Effects of PAMK on slaughter performance of Lingnan yellow chickens |
如表 4所示，与对照组相比，PAMK100、PAMK400和PAMK800组岭南黄鸡21和42日龄的胸腺指数均有所升高，但是差异不显著(P>0.05)。与对照组相比，PAMK100组岭南黄鸡21日龄的脾脏指数显著降低(P < 0.05)，PAMK100、PAMK400和PAMK800组岭南黄鸡42日龄的脾脏指数无显著差异(P>0.05)。与对照组相比，PAMK100和PAMK400组21日龄的法氏囊指数显著升高(P < 0.05)，PAMK100和PAMK400组42日龄的法氏囊指数有所升高，但是差异不显著(P>0.05)。
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表 4 白术多糖对岭南黄鸡免疫器官指数的影响 Table 4 Effects of PAMK on immune organ indexes of Lingnan yellow chickens |
如图 1所示，21和42日龄时，岭南黄鸡肝脏组织发育良好，肝索结构清晰，肝血窦内可见库普弗细胞、淋巴细胞等，汇管区(门管区)小叶间胆管上皮细胞形态良好。21日龄时，PAMK800组岭南黄鸡的肝血窦间隙较大，肝细胞胞浆变少，着色较浅，双核肝细胞数量较其余试验组明显减少；35日龄时，PAMK800组肝细胞形态恢复正常，但双核肝细胞数量仍然较少。相比较而言，PAMK400组在21和35日龄时的肝脏组织结构及肝细胞的形态最好，双核肝细胞的数量也最多。
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CV：中央静脉；▲：汇管区；↓：肝血窦；⇓：小叶间胆管。 CV: central vein; ▲: manifold area; ↓: sinusoids; ⇓: interlobular bile duct. 图 1 白术多糖对岭南黄鸡肝脏组织结构的影响 Fig. 1 Effects of PAMK on liver tissue structure of Lingnan yellow chickens (400×) |
如图 2所示，21日龄时，各试验组岭南黄鸡胸腺发育良好，胸腺小叶髓质区中胸腺小体较多见，髓质区面积较小；35日龄时，各试验组髓质区面积明显增大，可见较多胸腺上皮细胞、成熟的胸腺细胞等，但胸腺小体数量较21日龄时少。其中，PAMK400组胸腺在21和35日龄时发育最好，髓质中可见的成熟胸腺细胞数量最多，皮髓分界明显。
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★：皮质；▲：髓质；⇓：胸腺小体；⇩：成熟的胸腺细胞团。 ★: cortex; ▲: medulla; ⇓: thymic corpuscle; ⇩: mature thymocyte mass. 图 2 白术多糖对岭南黄鸡胸腺组织结构的影响 Fig. 2 Effects of PAMK on thymus tissue structure of Lingnan yellow chickens (400×) |
如图 3所示，各试验组岭南黄鸡脾小结及动脉周围淋巴鞘内淋巴细胞排列密集有序，细胞染色正常，形态良好，随着日龄的增长，35日龄时岭南黄鸡脾小结直径增大，动脉周围淋巴鞘增厚，饲粮中添加不同水平的白术多糖均能够很好地促进脾脏的发育，没有不良影响。
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CA：中央动脉；RP：红髓；SN：脾小结；PALS：动脉周围淋巴鞘。 CA: central arteriole; RP: red pulp; SN: splenic nodule; PALS: periarterial lymphatic sheath. 图 3 白术多糖对岭南黄鸡脾脏组织结构的影响 Fig. 3 Effects of PAMK on spleen tissue structure of Lingnan yellow chickens (400×) |
如图 4所示，21日龄时，各试验组岭南黄鸡法氏囊发育良好，黏膜皱襞内的淋巴滤泡排列整齐，多为不规则形状，其中，PAMK400和PAMK800组中长椭圆形的大淋巴滤泡数量明显高于对照组和PAMK100组，滤泡排列也更加紧密；淋巴滤泡中皮质和髓质分界清晰，皮质层厚度相差不大。35日龄时，淋巴滤泡内皮髓分界更加明显，淋巴细胞数量和皮质区厚度较21日龄时都有所增加，其中，PAMK400组的皮质层最厚，发育最好。
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★：皮质；▲：髓质；↓：中间层上皮网状细胞。 ★: cortex; ▲: medulla; ↓: intermediate epithelial reticular cells. 图 4 白术多糖对岭南黄鸡法氏囊组织结构的影响 Fig. 4 Effects of PAMK on bursa of Fabricius tissue structure of Lingnan yellow chickens (400×) |
植物多糖在畜牧生产上有着较为广泛的应用，饲料配方中也常采用添加适量植物多糖以提高畜禽的生长性能。Wu等[8]在饲粮中添加了1 g/kg的黄芪多糖后提升了仔鸡淀粉酶、脂肪酶等相关消化酶的活性，有效改善了仔鸡的生长性能。黄芪多糖在联合蝇蛆粉后著提高了黄羽肉鸡的饲料转化率、蛋白质代谢率，改善了半净膛率、胸肌率等屠宰性能指标，促进了黄羽肉鸡生长发育[9]。孙波等[10]在饲粮中添加黄芪多糖，经检测发现饲喂黄芪多糖提高了肉鸡的ADG，并且降低了F/G。张才等[11]研究发现，甘草多糖能够提高22~42日龄肉鸡的ADG，并且能够显著降低F/G。也有研究表明，白术多糖能促进血清生长激素、环腺苷酸等相关生长激素的分泌，促进断奶仔猪DNA、蛋白质的合成，提高机体的新陈代谢，有效对抗脂肪沉积，阻遏脂肪合成，促进断奶仔猪的生长发育[12]。赵淑珍[13]也证明了白术多糖能够提高鹌鹑的ADG，降低F/G，对鹌鹑的生长性能具有正向调控作用。研究发现，苜蓿多糖对肉鸡的屠宰率没有显著影响，但是提高了全净膛率，并且提高了肉鸡的胸肌率[14]。李娜等[15]研究发现，西瓜皮多糖能够提高21日龄岭南黄鸡的胸肌率，并且在降低腹脂率方面也发挥了很大作用。本试验结果与之前的研究类似，饲粮中添加400 mg/kg的白术多糖显著降低了岭南黄鸡的ADFI和F/G，有提高总增重和ADG的趋势；PAMK400组岭南黄鸡的屠宰率、半净膛率和全净膛率与对照组相比均显著提高，但是胸肌率和腿肌率与对照组相比均无显著差异。
3.2 白术多糖对岭南黄鸡免疫器官发育的影响畜禽机体免疫功能的增强可以提高机体的抗病能力，抵抗病原体的入侵，减少机体的患病率，保证机体的器官、组织功能正常，维持机体的内环境平衡，为机体的生长发育提供良好的生理生化环境。机体免疫力的大小在一定程度上受到免疫器官大小的影响。免疫器官的重量的增长通常代表会有更多的免疫细胞聚集，从而提升自身的免疫机能。张嘉琪等[9]在饲粮中添加了黄芪多糖和蝇蛆粉后可以显著提高黄羽肉鸡的免疫器官指数，增强动物机体免疫力。耿兵等[16]在饲粮中添加桑叶多糖后，可以显著提高雏鸡免疫器官指数，改善雏鸡的免疫机能。也有研究证明了大蒜多糖可以显著提高肉鸡的胸腺指数、法氏囊指数，提高机体抗病力[17]。Xiang等[18]研究证明，白术多糖可以提高小鼠的脾脏指数，并且能够改善由环磷酰胺造成的脾脏指数下降。本试验的结果与上述研究类似，饲粮中添加400 mg/kg的白术多糖后，岭南黄鸡的脾脏指数和法氏囊指数显著增加；胸腺指数呈上升趋势，但是没有显著差异。PAMK100组岭南黄鸡的免疫器官指数的改变没有PAMK400组明显，这可能是因为白术多糖的添加水平不够，达不到相应的效果。而PAMK800组岭南黄鸡的免疫器官指数的改变也没有PAMK400组明显，可能是因为白术多糖添加水平过高，反而对岭南黄鸡的免疫器官有一定的损害。
李婉雁[19]研究发现，饲粮中添加400 mg/kg白术多糖可以维持马岗鹅雏鹅的胸腺、脾脏和法氏囊的正常组织形态和超显微结构。进一步的研究证明，当环磷酰胺造成马岗鹅胸腺和脾脏结构异常之后，白术多糖能够有效缓解损伤使之恢复到正常水平[18, 20]。Guo等[5]研究表明，饲喂白术多糖之后，小鼠肝脏肝小叶完整，肝索排列整齐，肝细胞的形态和结构正常，细胞质保存完好，核仁清晰，并且白术多糖可以缓解脂多糖(LPS)介导的肝细胞肿胀、炎性细胞浸润及肝索结构紊乱。本研究结果与之前研究结果类似，饲粮添加白术多糖之后，岭南黄鸡各个组织器官的结构形态良好。肝索结构清晰，肝血窦内可见库普弗细胞、淋巴细胞等，肝脏双核细胞数量增多，各种类型细胞型态良好；各试验组胸腺髓质区面积显著增大，胸腺中成熟胸腺细胞数量增多，皮髓分界明显；脾脏中淋巴细胞排列密集有序，形态良好；法氏囊中大淋巴滤泡数量增多，滤泡排列也更加紧密，淋巴滤泡内皮髓分界更加明显。
4 结论饲粮中添加400 mg/kg白术多糖能够显著降低岭南黄鸡的ADFI和F/G，并且显著提高屠宰率、半净膛率和全净膛率；同时能够提高胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数，促进各免疫器官淋巴细胞的分裂分化，提高免疫活性，加强机体的免疫屏障。
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