2. 云南三江并流农业科技股份有限公司, 昆明 650403
2. Three Parallel Rivers Agricultural Science and Technology Co., Ltd., Kunming 650403, China
围产期(perinatal period),又称为过渡期(transition period),一般指母牛分娩前后3周这段时间,是母牛生产周期中最为重要的时期[1-2]。在这个时期,母牛经历了妊娠、分娩、泌乳等生理和代谢状态变化,直接或间接导致了母牛采食量减少且能量需求量迅速提高。有研究表明,奶牛产后2 d时的能量需要约为产前2 d时的2倍;奶牛产后4 d时,其对葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的需求量分别是干奶前期时的3、2和5倍[3-4]。这一矛盾导致母牛进入能量负平衡(NEB)的营养应激状态。体脂动员是产后奶牛在葡萄糖(GLU)严重不足时补充能量的重要形式,围产期奶牛若长期处于NEB状态将导致奶牛体脂的大量动员进而诱发奶牛酮病和脂肪肝等疾病[5]。
提高围产期母牛的能量摄入量是解决围产期NEB的主要措施。NRC(2001)[6]奶牛营养需要标准推荐提高围产前期奶牛饲粮能量水平,认为产前高能饲粮能有效缓解奶牛产后的NEB,减少体重损失和营养代谢病的发生。有学者在研究中分别使用150%、100%和80%能量需要量饲喂围产前期奶牛,研究发现围产期低能饲粮有利于提高产后奶牛的食欲,干物质采食量(DMI)恢复更快,更有利于缓解产后NEB[7-8]。肉牛不同于奶牛之处在于肉牛以产犊为主要生产指标,具有泌乳量少、泌乳时长短、饲养管理较奶牛粗放等特点。而泌乳量和泌乳时长则是影响母牛围产期NEB的重要因素[9]。初产母牛不但体重尚未达到成年体重,还需要面临分娩、泌乳和自身进一步生长发育等问题,因此,初产母牛的围产期营养研究是国际上近年来的热点课题。本研究选择体重和体况相近的妊娠9月龄西门塔尔杂交牛初产母牛为试验动物,探究饲粮能量水平对围产期初产肉牛营养物质表观消化率和血清生化指标的影响,旨在为提高我国围产期肉牛饲养管理水平、完善肉牛母子一体化培育技术提供数据支撑和试验依据。
1 材料与方法 1.1 试验动物和试验设计本试验采用完全随机试验设计,选取21头体重[(335.7±21.6) kg]和体况相近的妊娠后期健康西门塔尔杂交牛(西门塔尔公牛×云南本地黄牛母牛)初产母牛,分为3组,每组7个重复,每个重复1头牛,分别饲喂不同能量水平饲粮。试验包括预试期和正试期。预试期为产前45 d至产前30 d,共计15 d;正试期为产前30 d至产后30 d,共计60 d。在产前7~5 d和产后0(当天)~2 d进行消化代谢试验。
1.2 试验饲粮试验饲粮参照肉牛NRC(1996)推荐公式,按照350 kg、妊娠9月肉牛营养需要量进行配制,3组饲粮按照等氮不等能原则,分别配制0.94×NRC(低能组)、1.00×NRC(中能组)和1.06×NRC(高能组)推荐能量水平饲粮。试验期间各组均按照精粗比40 : 60投喂全混合日粮,粗料为全株玉米青贮和干稻草。饲粮组成及营养水平见表 1。
本试验于2018年9—12月在云南省昆明市富民县散旦镇三江并流农业科技股份有限公司养殖基地进行。试验前对试验牛进行统一编号,试验前对圈舍进行消毒。试验牛单栏饲养,每个栏位配有独立食槽和饮水碗,试验期间每天09:00和16:00进行饲喂,自由采食和饮水。
1.4 样品采集与指标测定 1.4.1 母牛体重和采食量测定在产前30 d、产前1 d、产后30 d晨饲前对母牛进行空腹称重并记录,母牛分娩后立即称重并记录为产后0 d体重,计算母牛产犊失重和产后30 d失重,计算公式如下:
试验期间根据母牛体重预估采食量,饲喂时记录每日每头母牛的饲粮饲喂量,并在第2天晨饲前对余料进行清理、称重和记录,计算各组母牛的平均干物质采食量(ADMI),计算公式如下:
分别计算各组试验牛围产前期、围产后期的每日平均单位代谢体重营养物质摄入量,计算公式如下:
在产前7~5 d和产后0~2 d每天每6 h收集1次粪便,采集完成后,混合均匀缩样为2份500 g粪样[10],按照样品总重5%加入浓度为10%的稀硫酸,装入无菌样品袋,混匀后-20 ℃保存。按四分法收集各组饲粮和饲料原料。参照张丽英[11]的方法测定各组饲粮及粪便中有机物(OM)、粗蛋白质(CP)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)、粗脂肪(EE)、钙(Ca)和磷(P)的含量;用氧弹式热量计测定总能(GE)。使用盐酸不溶灰分(AIA)法测定各组营养物质表观消化率。计算公式如下:
分别于产前21、14、7 d,产后7、14、21 d晨饲前以及分娩后1 h内用一次性真空采血管于颈静脉各采集血样10 mL,静置后3 500 r/min,离心10 min分离血清,并分装于1.5 mL的EP管中,于-20 ℃中冷藏待测。
血清中的总蛋白(TP)、GLU、甘油三酯(TG)、非酯化脂肪酸(NEFA)、尿素氮(UN)、β-羟基丁酸(BHBA)、钙(Ca)和磷(P)含量使用全自动生化分析仪(Cobas8000 C702型)进行测定。血清中极低密度脂蛋白(VLDL)含量采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定,所需试剂盒购于南京建成生物工程研究所。检测时,严格按照试剂盒说明书中的方法进行。
1.5 数据分析体重、采食量、营养物质摄入量和表观消化率等试验数据用Excel 2016初步计算和整理后,用SPSS 22.0统计软件进行one-way ANOVA方差分析,并以Duncan氏法进行多重比较,结果以平均值±标准误表示,P≤0.05为差异显著。
血清生化指标数据在整理后,用SPSS 22.0统计软件对饲粮能量水平和重复采样时间点进行双因素重复测量方差分析,在不同组间进行多重比较,结果以平均值±标准误表示,P≤0.05为差异显著。
2 结果与分析 2.1 饲粮能量水平对围产期肉牛体重变化的影响如表 2所示,3组间初体重、产前1 d体重、产后0 d体重和末体重均无显著差异(P>0.05)。高能组母牛产犊失重显著高于低能组和中能组(P<0.05)。高能组母牛产后30 d失重显著低于中能组和低能组(P<0.05),中能组和低能组间不存在显著差异(P>0.05)。
如表 3所示,产前21~8 d,各组母牛ADMI随饲粮能量水平上升而显著下降(P=0.05);产前7 d至分娩,低能组母牛ADMI显著高于中能组和高能组(P<0.05),高能组和中能组母牛ADMI无显著差异(P>0.05)。分娩至产后7 d,低能组和中能组母牛ADMI显著高于高能组(P<0.05);产后8~21 d,低能组ADMI最高,且各组母牛ADMI随饲粮能量水平上升而显著下降(P=0.05)。
如表 4所示,在产前,低能组母牛单位代谢体重代谢能摄入量显著低于高能组(P<0.05),中能组处于二者之间但和其他2组差异不显著(P>0.05)。3组母牛单位代谢体重NDF和ADF摄入量随着饲粮能量水平的提高而显著降低(P<0.05)。高能组母牛单位代谢体重CP、Ca和P摄入量显著低于低能组(P<0.05)。
在产后,3组间母牛单位代谢体重代谢能摄入量不存在显著差异(P>0.05),但随着饲粮能量水平的提高,单位代谢体重代谢能摄入量逐渐提高。3组母牛单位代谢体重NDF、ADF和P摄入量随着饲粮能量水平的提高而显著降低(P<0.05)。低能组母牛单位代谢体重Ca摄入量显著高于中能组和高能组(P<0.05),中能组和高能组母牛单位代谢体重Ca摄入量差异不显著(P>0.05)。
2.3 饲粮能量水平对围产期肉牛营养物质表观消化率的影响如表 5所示,在产前,各组间母牛的CP和EE表观消化率并没有显著差异(P>0.05);低能组母牛的NDF表观消化率显著低于高能组(P<0.05),中能组母牛的NDF表观消化率和其他2组间差异并不显著(P>0.05)。低能组母牛的ADF表观消化率显著低于中能组和高能组(P<0.05)。低能组母牛的Ca表观消化率显著低于中能组和高能组(P<0.05),中能组和高能组母牛Ca表观消化率差异不显著(P>0.05)。高能组母牛P表观消化率显著高于低能组和中能组(P<0.05),中能组和低能组母牛Ca表观消化率差异不显著(P>0.05)。在产后,EE、Ca和P表观消化率相对产前有所提高,而NDF和ADF表观消化率相对产前有所下降。各组间母牛的营养物质消化率差异并不显著(P>0.05)。
如表 6所示,在产前,围产期3组间母牛血清GLU含量差异不显著(P>0.05),受时间影响显著(P<0.05)。3组间母牛血清PA含量差异不显著(P>0.05),血清PA含量变化有受饲粮能量水平影响的趋势(P=0.07)。3组间母牛血清TG含量差异不显著(P>0.05),血清TG含量变化受时间影响显著(P<0.05)。高能组母牛血清NEFA含量显著低于低能组和中能组(P<0.05),其变化受饲粮能量水平影响显著(P<0.05)。3组间母牛血清BHBA含量差异不显著(P>0.05),血清BHBA含量变化受时间影响显著(P<0.05)。3组间母牛血清VLDL含量差异不显著(P>0.05),血清VLDL含量变化受时间影响显著(P<0.05)。3组间母牛血清TP含量差异未达到显著水平(P>0.05)。3组间母牛血清UN含量差异未达到显著水平(P>0.05)。
在产后,高能组母牛血清PA含量显著低于低能组和中能组(P<0.05),低能组和中能组母牛血清PA含量差异不显著(P>0.05),产后其含量变化受饲粮能量水平影响显著(P<0.05)。高能组母牛血清TG含量显著高于低能组和中能组(P<0.05),低能组和中能组母牛血清TG含量差异不显著(P>0.05),其含量在产后的变化受饲粮能量水平影响显著(P<0.05)。高能组母牛血清NEFA和BHBA含量显著低于低能组和中能组(P<0.05),低能组和中能组母牛血清NEFA和BHBA含量差异不显著(P>0.05),二者的含量在产后的变化受饲粮能量水平影响显著(P<0.05)。3组母牛血清VLDL含量差异未达到显著水平(P>0.05),血清VLDL含量随时间影响显著变化(P<0.05)。低能组母牛血清TP含量显著高于中能组和高能组(P<0.05),中能组和高能组差异不显著(P>0.05);3组母牛血清UN含量随着饲粮能量水平的提高而显著降低(P<0.05)。3组母牛血清TP和UN含量受饲粮能量水平影响显著(P<0.05)。
3 讨 论 3.1 饲粮能量水平对围产期肉牛体重变化的影响围产后期的母牛由于泌乳量迅速提高和产后DMI不足,因此极易出现NEB。在围产后期,体重下降越多代表NEB越严重[12]。同时,初产母牛体重一般只有成年体重的65%左右,当其处于围产期时将面临既要满足自身增重的需要,也要满足泌乳和尽快恢复体况进入下一个情期的需要。为了满足这些需要,母牛在围产期需大量动员体储。因此,提高有效能量的摄入显得更为重要。本试验结果表明,提高饲粮能量水平,有助于提高单位代谢体重代谢能摄入,虽然增加了产犊失重,但是减少了产后30 d失重并在围产后期获得了增重。Rabelo等[13]报道,产前低能饲喂的初产母牛相对于高能饲喂,产后体重下降幅度更高。这与本文的研究结果相同。本试验中,低能组和中能组母牛产后30 d失重分别为8.5和7.5 kg,而高能组母牛产后30 d失重则为-5.4 kg,即该组母牛在产后0~30 d平均增重5.4 kg。这提示了产后高能组母牛相对中能组和低能组有更好的能量平衡状态。在近年的研究中,奶牛整个围产后期的平均失重分别是20、28和68 kg[14-16],平均失重占体重比分别为2.9%、4.1%和10.8%,对比本试验中母牛产后30 d平均失重3.5 kg,平均失重占体重比为1%。这也提示了肉牛产后因哺乳动员的体储较奶牛少,围产期能量平衡情况优于奶牛,这与肉牛母牛较低的泌乳量有关。
3.2 饲粮能量水平对围产期肉牛平均干物质采食量和营养物质摄入量的影响前人的研究已经证明,围产期饲粮的原料和营养物质结构对围产期母牛的DMI、体重变化、泌乳性能和能量平衡等具有显著的影响[13]。本试验中,低能组母牛ADMI在各个时期均显著高于高能组。在产后0~7 d,低能组母牛的ADMI相较于高能组提高了13.5%,产后8~14 d低能组母牛的ADMI相较于高能组提高了10.8%。该结果提示了围产期低能饲喂,其ADMI更高、产后恢复更快且提升的幅度更高。Kunz等[17]报道称,产前低能饲喂母牛产后DMI恢复更快。这也与本试验的结果相一致。
围产期母牛的营养物质摄入量受到了DMI、饲粮营养物质含量和体重等因素的影响[18]。在本试验中,高能组母牛的围产期单位代谢体重代谢能摄入量相对于中能组和低能组分别提高了0.4和0.8 MJ/(kg·d),而高能组母牛的产后单位代谢体重其他营养物质摄入量相对于中能组和低能组均显著减少,这主要受到了等氮不等能的各组饲粮中营养物质组分不同和低能组母牛较高的ADMI的影响。据《肉牛饲养标准》[19]推荐,300 kg、每天9 kg标准乳的肉牛母牛CP需要量约为1 100 g/d。在本试验中,根据试验饲粮中CP含量和3组母牛产后ADMI推算,试验母牛的平均CP摄入量远超过1 100 g/d。而实际生产中,肉牛母牛的泌乳量远远低于9 kg标准乳,因此3组母牛的CP摄入量均能满足泌乳的需要量。而低能组和中能组摄入的更多CP可能主要参与糖异生活动生成GLU参与供能,以满足低能组和中能组母牛乳腺对能量和GLU更多的需求。
3.3 饲粮能量水平对围产期肉牛营养物质表观消化率的影响本试验以盐酸不溶灰分作为内源指示剂测定了产前、产后2个时期3组母牛的营养物质表观消化率后发现:在产前,高能组母牛的NDF、ADF、Ca和P表观消化率相对于低能组均有显著的提高。研究表明,在适宜的饲养水平上,随着DMI的增加,食糜在消化道中的停留时间变短,营养物质表观消化率将会下降[20]。而在产后,各组间营养物质表观消化率差异并不显著。导致这种情况发生的原因尚需要进一步研究。
3.4 饲粮能量水平对围产期肉牛血清生化指标的影响牛代谢所需的GLU主要来自于瘤胃发酵产生的PA经糖异生活动生成,仅有少量GLU来自于肠道吸收。在围产期,由于初乳的分泌和母牛产后泌乳量的快速提升,乳腺对于GLU的需求量迅速提升,而仅仅依靠摄入饲粮难以满足其对于GLU的需求,故产后母牛的血清GLU含量往往处于较低水平,需通过脂肪酸和氨基酸参与糖异生活动来弥补GLU的不足[21-22]。本试验中,产前3组母牛血清GLU含量随着分娩的来临缓慢下降,且各组间差异不显著;血清GLU含量在分娩时达到峰值,之后缓缓下降,在产后,3组母牛血清GLU含量同样不存在显著差异。血清GLU含量随时间变化的趋势与前人研究结果[15]相似。
血清NEFA含量升高是奶牛NEB和体脂动员的重要标志[23]。脂肪酸在肝脏的代谢过程中产生的酮体包括乙酰乙酸、BHBA和丙酮。BHBA也是一个监测NEB和体脂动员公认的敏感指标[24]。VLDL主要由肝脏合成,主要功能是向血液运输肝脏利用酮体等合成的内源性TG[25]。在本试验中,3组产前的血清NEFA、VLDL和BHBA含量均较低,随着母牛分娩发动,产后的血清NEFA、VLDL和BHBA含量迅速攀升,且低能组的3项指标均显著高于高能组。这说明产后低能组和中能组母牛NEB情况较严重,对于体脂的动员明显强于高能组。与产后3组母牛血清TG含量显著降低,低能组的血清TG含量显著低于高能组的试验结果相吻合。
对于处于NEB状态中的动物,血清中的TP和UN是评价蛋白质代谢的常用指标。Chikhou等[26]指出,UN是反映动物蛋白质平衡状态指标。奶牛血清UN含量最低,泌乳早期较高,随后在泌乳期间较高[27]。也有研究指出,母牛分娩后血清UN含量的增加与采食量的增加有关[28]。在本试验中,3组母牛血清TP和UN含量在产前不存在显著差异,在产后,低能组母牛血清TP和UN含量显著高于高能组。这提示了低能组母牛的蛋白质动员更为剧烈。
4 结 论本试验中,高能饲粮显著提高产前营养物质表观消化率和能量摄入量,减少肉牛产后30 d失重,降低血清NEFA和BHBA含量。因此,提高围产期饲粮能量水平(1.06×NRC)缓解了肉牛产后NEB,有利于初产母牛的产后增重和体况恢复。
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