研究论文
陈果, 武倩羽, 刘琛, 李吉琴, 陈诗宇, 林秋叶, 毛爱国, 李杰, 徐乐, 曹振辉
本试验旨在筛选鉴定优良犬源芽孢杆菌,为犬用新型微生态制剂的研发提供菌株资源和理论依据。采集公安部昆明警犬基地狼青品系和草黄品系犬的新鲜粪便,通过TSB与TSA培养基对菌种进行分离纯化,测定其模拟胃肠道耐受性、抗生素敏感性、抑菌活性、肠道黏附能力以及抗炎能力,综合评估其益生潜力。对益生特性较好的芽孢杆菌进行16S rDNA测序鉴定,并进行小鼠急性经口毒性试验。选取12只6周龄SPF级昆明小鼠,按照雌雄各半、体重接近的原则随机分为对照组和试验组,每组6只,单笼饲养。对照组小鼠每日灌胃200 μL生理盐水,试验组小鼠每日灌胃200 μL筛选出的菌株E2菌液(2×108 CFU/mL),每日定时灌胃1次,连续灌胃7 d,对该菌株进行安全性评价。结果表明:从昆明犬新鲜粪便中共分离得到23株芽孢杆菌,通过综合评价其模拟胃肠道耐受性、抗生素敏感性以及抑菌活性,筛选出5株具有益生潜力的芽孢杆菌(A3、B7、B10、E2以及E5)进行肠道黏附能力以及抗炎能力测定,其中菌株B10和E2对HT-29细胞具有较强黏附能力,且菌株E2能极显著抑制脂多糖(LPS)诱导的HT-29细胞中白细胞介素-8(IL-8)基因的表达(P<0.01)。基于16S rDNA序列构建系统发育树可知菌株E2为贝莱斯芽孢杆菌,选取菌株E2进行小鼠急性经口毒性试验,发现与对照组相比,灌胃菌株E2对小鼠平均日增重和平均日采食量均无显著负面影响(P>0.05),剖检后小鼠脏器无病理变化,脏器指数无显著差异(P>0.05),且空肠、回肠黏膜结构完整。综上所述,贝莱斯芽孢杆菌E2具有优良的益生特性及安全性,可为警犬专用微生态制剂的研发奠定基础。